一种抑制微管蛋白的钓樟烷类化合物及其制备方法和应用
【技术领域】
[0001] 本发明涉及化学技术领域，具体是一种抑制微管蛋白的钓樟烷类化合物及其制备 方法和应用。
【背景技术】
[0002] 微管蛋白是细胞内微管的基本结构单位，它具有α和β两种类型，具有维持细胞形 态、分裂细胞、信号转导及物质转运等多种细胞功能。其主要作用是细胞分裂期形成纺锤 体，因此，为阻止肿瘤细胞的过度分裂增殖，微管蛋白抑制剂成为一类重要的抗肿瘤治疗药 物。以其为靶点开发的抗肿瘤药物更是种类繁多，如:秋水仙碱、鬼白毒素、长春花碱、紫杉 醇等。这些药物在微管蛋白的活性域有效地与微管蛋白结合，阻止微管蛋白的正常功能，进 而阻止了肿瘤细胞的生长，达到抗肿瘤的目的。
[0003] 抗微管药物己经成为一类主要的化疗药物，广泛用于临床各类肿瘤的治疗中。微 管蛋白抑制剂通过与微管蛋白上的特定位点结合，影响和干扰微管蛋白的聚合和解聚的动 力学，进而阻断Μ期纺锤体的形成，使肿瘤细胞生长停滞于G2/M期。目前，临床上应用的微管 抑制剂主要有以紫杉醇为代表的抑制微管蛋白解聚药物和以长春碱类为代表的抑制微管 聚合药物。然而，上述药物结构复杂，合成难度大等问题，寻找新型、高效的微管抑制剂己成 为当今抗肿瘤药物研究的一个热点。
【发明内容】
[0004] 本发明的目的在于提供一种制备方法简单、易操作的抑制微管蛋白的钓樟烷类化 合物及其制备方法和应用，以解决上述【背景技术】中提出的问题。
[0005] 为实现上述目的，本发明提供如下技术方案：
[0006] -种抑制微管蛋白的钓樟烷类化合物，该钓樟烷类化合物的结构式如（1)所示：
[0008] (1)，（ 1)中办、R3为烷烃基、烯烃基、炔烃基，R2、R4为Η、羟基、烷氧基、胺基或卤基。
[0009] -种抑制微管蛋白的钓樟烷类化合物，该钓樟烷类化合物的结构式如(2)所示：
[0011] (2)0
[0012] 所述钓樟烷类化合物的制备方法，包括以下步骤：
[0013] 1)氯仿部位粗提物的制备
[0014] 多穗金粟兰地下部分在阴凉处风干后粉碎，得到药材粗粉，用提取溶剂并在提取 罐60-80°C加热加压提取，提取至提取液颜色为浅色，合并提取液，用旋转蒸发仪减压回收 提取溶剂，于50-70°C烘箱干燥，得到浸膏，用水把浸膏溶解分散，超声波助溶后，将分散得 到的混悬液置于分液漏斗中，用等体积的石油醚萃取后，再用氯仿萃取，用旋转蒸发仪减压 回收有机溶剂，制得氯仿部位粗提物；
[0015] 2)氯仿萃取浸膏的分离
[0016]取氯仿部位粗提物用丙酮溶解，再用同等质量的100-200目硅胶拌样，于45-55Γ 烘箱挥发完丙酮，并研磨至完全均匀，用初始梯度洗脱剂石油醚浸泡200-300目硅胶，200-300目硅胶用量为氯仿部位粗提物质量的13-18倍，湿法装柱，干法上样;硅胶柱经石油醚： 丙酮梯度洗脱，其中石油醚:丙酮的质量比为1-2:0-1，每个梯度用4-5个柱体积的洗脱剂洗 脱，流出液用收集瓶收集，旋转蒸发仪浓缩回收溶剂，薄层检识，再用质量浓度为5%的硫酸 乙醇香草醛溶液显色，合并相同流分得单体化合物的混合物；
[0017] 3)单体化合物的分离
[0018] 将单体化合物的混合物分别湿法装柱湿法上样，经反相碳18硅胶柱梯度洗脱合 并，再分别经S印hadex LH-20、0DS反相碳18制备液相分离得到钓樟烷类化合物。
[0019] 作为本发明进一步的方案:提取溶剂为体积分数为95 %的乙醇。
[0020]作为本发明进一步的方案:提取罐中的温度为70°C。
[0021]作为本发明进一步的方案:200-300目硅胶用量为氯仿部位粗提物质量的15倍。 [0022]所述钓樟烷类化合物在制备微管蛋白抑制剂中的应用。
[0023] 所述钓樟烷类化合物在制备抗肿瘤药物中的应用。
[0024] 所述肿瘤为肝癌、前列腺癌、子宫颈癌、乳腺癌和白血病。
[0025] -种抗肿瘤的药物制剂，含有结构式如（1)的钓樟烷类化合物。
[0026] 与现有技术相比，本发明的有益效果是：
[0027] 本发明的钓樟烷类化合物可与放射性标记的秋水仙碱竞争结合位点，抑制其与微 管蛋白结合，其作用呈剂量依赖性方式。钓樟烷类化合物和秋水仙碱均可抑制微管蛋白聚 合，钓樟烷类化合物具有强效的抗微管聚合作用。钓樟烷类化合物的制备方法简单、易操 作，可用于制各治疗肿瘤药物。
【附图说明】
[0028] 图1是化合物对放射性标记的秋水仙碱和微管蛋白结合能力的影响图。
[0029] 图2化合物微管蛋白聚合实验。
【具体实施方式】
[0030] 下面将结合本发明实施例，对本发明实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述， 显然，所描述的实施例仅仅是本发明一部分实施例，而不是全部的实施例。基于本发明中的 实施例，本领域普通技术人员在没有做出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例，都 属于本发明保护的范围。
[0031] 实施例1
[0032]本发明实施例中，一种抑制微管蛋白的钓樟烷类化合物，该钓樟烷类化合物的结 构式如（1)所示：
[0034] (1)，（ 1)中办、R3为烷烃基、烯烃基、炔烃基，R2、R4为Η、羟基、烷氧基、胺基或卤基。
[0035] 所述钓樟烷类化合物的制备方法，包括以下步骤：
[0036] 1)氯仿部位粗提物的制备
[0037]多穗金粟兰地下部分在阴凉处风干后，粉碎，得到药材粗粉，以体积分数为95%的 乙醇为提取溶剂、提取罐70°C加热加压提取，提取至提取液颜色为浅色，合并提取液，用旋 转蒸发仪减压回收提取溶剂，于60°C烘箱干燥，得到浸膏，将浸膏用尽量少的水把浸膏溶解 分散，超声波助溶，将分散得到的混悬液置于5L分液漏斗中，用等体积的石油醚萃取后，再 用氯仿萃取，用旋转蒸发仪减压回收有机溶剂，制得氯仿部位粗提物。
[0038] 2)氯仿萃取浸膏的分离
[0039]取氯仿部位粗提物260g用少量丙酮溶解，用同等质量的硅胶（100-200目）拌样，于 50°C烘箱挥发完丙酮，并研磨至完全均匀，用初始梯度洗脱剂石油醚浸泡硅胶（200-300 目），硅胶(200-300目）用量为取氯仿部位粗提物质量的15倍，湿法装柱，干法上样。硅胶柱 经石油醚：丙酮（1-2:0-1)梯度洗脱，每个梯度用4-5个柱体积的洗脱剂洗脱，流出液用 1 OOOnl收集瓶收集，用旋转蒸发仪浓缩回收溶剂，薄层检识，5 %的硫酸乙醇香草醛溶液显 色，合并相同流分得25个组分fr. 1~fr25。
[0040] 3)单体化合物的分离
[0041] 将25个组分分别湿法装柱湿法上样，经反相碳18硅胶柱（甲醇30%~100%)梯度 洗脱合并得到5个流分，再分别经Sephadex LH-20(甲醇）、0DS反相碳18制备液相分离得到 系列钓樟烷类化合物，经NMR、MS、0RD、CD、X-ray等波谱、光谱技术结合理化性质进行结构鉴 定。
[0042]试验:将钓樟烷类化合物作用于秋水仙碱位点，具体描述如下所述。
[0043] 1.秋水仙碱-微管蛋白竞争结合试验
[0044] ΙμΜ放射性标记的[3H]秋水仙碱，1 %DMS0和不同浓度的待测药物均溶于50μ1 G-ΡΕΜ缓冲液中，与1 μΜ微管蛋白共同孵育1小时，经DEAE-纤维素柱层析，采用液体闪烁法 (Perkin-Elmer)测定滤液中放射性强度。使用GraphPadPrism对数据进行非线性回归分析。
[0045] 2.微管蛋白聚合实验
[0046] 按照试剂盒生产公司提供的说明书进行，将微管蛋白溶于G-P