(例如Dicer酶)将较长的dsRNA转化成21-23个核苷酸的双链siRNA片段。在一些实施方案 中，RNAi寡核苷酸被设计成靶向融合蛋白的连接区。化学合成的siRNA变成对于在培养的体 细胞中哺乳动物基因功能的全基因组分析有效的试剂。超过它们用于验证基因功能的价 值，s i RNA也具有作为基因特异性治疗剂的巨大潜力（参见例如，Tus ch 1和Borkhar d t，Mo / ecu/ar Intervent · 2002; 2(3): 158-67，通过引用并入本文）。
[0115] siRNA转柒到动物细胞中导致有效的、持久的特定基因的转录后沉默(Caplen等 人，Proc Natl Acad Sci US.A.2001;98:9742-47;Elbashir等人，Nature.2001;411:494-98;Elbashir等人，Genes Dev.2001; 15:188-200;和Elbashir等人，ΕΜΒ0 J.2001;20:6877-88,其均通过引用并入本文）。用siRNA进行RNAi的方法和组合物描述于例如美国专利6， 506，559，通过引用并入本文。
[0116] siRNA特别有效地降低靶向的RNA的量及其蛋白产物，通常至检测不到的水平。沉 默效应可持续数月，并且极其特异-目标RNA与siRNA的中心区域之间的一个核苷酸错配常 常足以防止沉默（Brummelkamp等人，Science 2002; 296:550-53;和Holen等人，Nucleic AcidsRes · 2002; 30:1757-66，其均通过引用并入本文）。
[0117] 设计siRNA中的重要因素是存在用于siRNA结合的可及位点。Bahoia等人， (J.Biol.Chem.，2003;278:15991-97,通过引用并入本文)描述了使用称为扫描阵列的一种 DNA阵列以寻找mRNA中用于设计有效的s i RNA的可及位点。这些阵列包括寡核苷酸，该寡核 苷酸的尺寸范围从单体至某个最大值，通常共聚体(Co-mer)，其通过逐步加入序列中的每 个碱基使用物理屏障(掩模)合成。因此，阵列代表目标基因区域的完全寡核苷酸互补序列。 目标mRNA与这些阵列的杂交提供了该目标mRNA区域的详尽可及性特征。这种数据可用于设 计反义寡核苷酸（范围为7聚体到25聚体），其中重要的是达到寡核苷酸长度与结合亲和力 之间的折中，例如以保留效力和目标特异性（Sohail等人，Nucleic AcidsRes .，2001; 29 (10) : 2041-45)。用于选择siRNA的其它方法和关注描述于例如WO 05054270、 W005038054A1、W003070966A2，J Mol Biol.2005年5月13日；348(4):883-93，J Mol Biol .2005年5月 13 日；348(4) :871-81，和Nucleic Acids Res .2003年8月 1 日；31( 15): 4417-24,其各自通过引用整体并入本文。此外，软件(例如MWG在线siMAX siRNA设计工具） 是商业或公共可获得的，用于选择和设计的siRNA和RNAi试剂。
[0118] 在一些实施方案中，本发明利用包括平端的siRNA(参见例如US20080200420，通过 引用整体并入本文），突出端(参见例如US20080269147A1，通过引用整体并入本文）、锁核酸 (参见例如W02008/006369、W02008/043753和W02008/051306,其各自通过引用整体并入本 文）。在一些实施方案中，siRNA经由基因表达或使用细菌来递送（参见例如Xiang等人， Nature 24:6(2006)和W006066048,其各自通过引用整体并入本文）。
[0119] 在其它实施方案中，利用shRNA技术(参见例如20080025958,通过引用整体并入本 文）。小发夹RNA或短发夹RNA(shRNA)是紧密发夹环的RNA的序列，其可用于通过RNA干扰来 沉默基因表达。shRNA使用引入细胞中的载体并且利用U6启动子以确保总是表达shRNA。该 载体通常被传递到子代细胞，使基因沉默能够遗传。shRNA发夹结构通过细胞机器切割成 siRNA，其随后结合到RNA诱导的沉默复合物(RISC)。该复合物结合并切割匹配siRNA且与其 结合的mRNA。shRNA通过RNA聚合酶III转录。
[0120] 本发明还包括包含如下所述的本发明的RNAi化合物的药物组合物和制剂。
[0121] SCF以跨膜形式和可溶形式两者存在。从跨膜形式切割SCF可溶性结构域后，SCF从 细胞表面释放以作为c-Kit的配体起作用。因此，预期SCF活性可以通过抑制可溶性SCF从膜 结合形式的释放来改变，例如，通过抑制或降低从膜结合形式裂解可溶性结构域的蛋白酶 的活性。
[0122] 此外，预期SCF可以被化学品（例如小分子，例如药物)或者其它结合或修饰SCF的 生物试剂抑制。例如，本领域的普通技术人员可设计和产生RNA适体或其它核酸适体，它们 例如通过使用SELEX或本领域已知的其它体外进化方法来特异性地识别并结合SCF。此外， 可通过如下抑制SCF活性:特异性降低SCF或诱导SCF的改变构象，使其不能有效地与c-Kit 相互作用。在一些实施方案中，SCF抑制剂是一种"设计的锚蛋白重复蛋白"（DARPin)(参见 例如，Stumpp MT&Amstutz P，"DARPins:a true alternative to antibodies"，Curr Opin Drug Discov Devel 2007，10(2):153-59,为了所有目的通过引用并入本文）。在一些实施 方案中，SCF被小分子抑制，例如结合SCF且阻断其功能的小分子(例如抑制其结合和/或其 它与c-Kit受体的相互作用(例如活化相互作用））。
[0123] 可以预期，可通过抑制SCF的表达来影响SCF活性，例如通过抑制SCF的转录，通过 抑制SCF的翻译，通过抑制SCF mRNA的加工，通过抑制SCF多肽的加工。通过抑制SCF多肽的 折叠，通过抑制SCF在细胞内运输，或通过抑制SCF插入到质膜中。SCF活性可以通过染色质 结构或其它表观遗传调节SCF的装置的变化(例如DNA甲基化的变化)来改变。此外，SCF活性 可以通过在囊泡或其它阻碍其对c-Kit的作用的细胞隔室中特异性隔离SCF来改变。
[0124] 4.使用SCF抑制剂的疗法
[0125] 抑制SCF可用于治疗疾病的疗法。因此，本文提供了包括抑制SCF以使患有疾病的 个体获益的疗法。特别地，如本文所示，涉及纤维化和组织重塑的疾病状态表现出异常的 SCF活性。例如，分离自具有纤维化或组织重塑表型的患病个体的成纤维细胞直接响应SCF， 其导致产生更严重的表型（包括增加的胶原生成）。因此，如本文所示，抑制SCF可显著影响 包括炎症和目标组织重塑的严重疾病后果的产生。还预期的是在产生与具有动态病程或更 加可以预测的病程的急性和慢性病症相关的纤维化的期间靶向SCF的疗法。可受益于抑制 SCF的疗法的适应症包括但不限于，特发性肺纤维化、慢性阻塞性肺病、急性呼吸窘迫综合 症，囊性纤维化、支气管周围纤维化、过敏性肺炎、哮喘、硬皮病、炎症、肝硬化、肾纤维化、实 质纤维化、心内膜心肌纤维化、纵膈纤维化、结节性表皮下纤维变性、纤维组织细胞瘤、纤维 胸、肝纤维化、纤维肌痛、齿龈纤维化或辐射诱导的纤维化。
[0126] 重要的是，靶向SCF的疗法降低或消除与其它类似疗法(例如靶向c-Kit的那些疗 法)相关的毒性效应。这些不需要的毒性效应与靶向细胞内（而不是细胞外）目标以及产生 的细胞信号传导中的更广泛和一般的变化相关。尽管该疗法并不局限于它们的施用途径， 但是本文提供的技术的实施方案通过鼻内施用经气道SCF递送抑制剂。这种施用能够将治 疗剂直接递送到牵涉纤维化和组织重建的肺病中的目标组织，而不是依赖于通过口服施用 的组合物进行全身递送。
[0127] 在某些实施方案中，含有有效浓度的SCF特异性抗体的生理上适宜的溶液可通过 局部、眼内、胃肠外、口服、鼻内、静脉内、肌内、皮下、或通过任何其它有效的装置来施用。特 别地，抗体可通过鼻内施用被递送到受试者的气道中。可选地，组织可以通过用针直接注射 或通过插管或其它递送管来接收生理上适宜的组合物(例如无菌的溶液，诸如盐水或磷酸 盐缓冲溶液、悬浮液或乳液），其包含有效浓度的SCF特异性抗体。任何有效的成像装置诸如 X射线、超声波扫描图或光纤显像系统可以用于定位目标组织和引导施用。在另一个替代方 案中，包含有效浓度的SCF特异性抗体的生理上适宜的溶液可被全身施用到血液循环中以 治疗不能直接到达或解剖学上分离的组织。这类操作的共同目标是将有效浓度的SCF特异 性抗体与目标组织充分接触以实现SCF特异性抗体接触组织。
[0128] 至于向受试者施用SCF抑制剂(例如SCF特异性抗体），预期以药学有效量施用SCF 抑制剂。本领域普通技术人员认识到，药学有效量根据所用的治疗剂、受试者的年龄、状况 和性别、以及受试者的疾病的程度而变化。通常，该剂量不应大到引起不良副作用，例如高 粘滞性综合征、肺水肿、充血性心力衰竭等。该剂量也可以由各个医师或兽医调节来获得所 需的治疗目的。
[0129] 如本文中使用，术语"药学有效量"所涵盖的实际量将取决于施用途径、待治疗的 受试者的类型和所考虑的特定受试者的物理特性。确定该量的这些因素及其关系是医学、 兽医和其它相关领域的熟练从业者熟知的。该量和施用方法可以经过调整来获得最佳效 力，但将取决于以下因素，诸如体重、饮食、并行的药物治疗、和本领域技术人员将认识到的 其它因素。
[0130] 在一些实施方案中，SCF抑制剂(例如SCF特异性抗体)根据本文提供的技术以药学 有效量施用。在一些实施方案中，SCF抑制剂(例如SCF特异性抗体）以治疗有效剂量施用。可 以对给药量和频率进行选择以产生有效水平且基本上没有有害作用的SCF抑制剂。当施用 时，SCF抑制剂(例如SCF特异性抗体)的剂量范围通常为0.001至10，000mg/kg/天或剂(例如 0.01至1000mg/kg/天或剂;0· 1至100mg/kg/天或剂）。
[0131] 药物组合物优选包含一种或多种本文发明化合物以及一种或多种药学上可接受 的载体、稀释剂或赋形剂。药学上可接受的载体是本领域已知的，诸如描述于例如 Remingtons Pharmaceutical Sciences,Mack Publishing Co· (A.R.Gennaro编辑，1985) 中的那些载体。
[0132] 在一些实施方案中，向受试者施用单一剂量的根据本文提供的技术的SCF抑制剂 (例如SCF特异性抗体）。在其它实施方案中，在两个或更多个由小时、天、周等隔开的时间点 施用多个剂量。在一些实施方案中，在长时间（例如长期)施用化合物，例如施用数月或数年 的时间（例如1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12或更多的月或年;例如受试者的一生）。在这些 实施方案中，化合物可以定期(例如每天、每周等)服用，且服用较长的持续时间。
[0133] 在一些实施方案中，SCF抑制剂(例如SCF特异性抗体)与另一种化合物或一种以上 其它化合物(例如2种或3种或更多种其它化合物)共施用。
[0134] 5.试剂盒
[0135] 本文的一些实施方案提供用于治疗受试者的试剂盒。在一些实施方案中，试剂盒 包括SCF抑制剂和合适的溶液和缓冲液。实施例包括所有对照和使用说明。 实施例
[0136] 材料和方法
[0137] SCF核苷酸序列和蛋白
[0138] 编码干细胞因子（SCF)的人基因也称为试剂盒配体并且具有官方标志KITLG和 HGNC 号数量 HGNC: 6343。SCF 还被称为 SF; MGF; SCF; FPH2; KL-1; Ki 11; SHEP7;和 ki t-配体。已 发现该基因的两个编码不同同工型的转录物变体。SCF(试剂盒配体）同工型b前体可以 GenBank登录号NM_000899(mRNA转录物；SEQ ID N0:3)和NP_000890(蛋白序列；SEQ ID N0: 4)可用。SCF(试剂盒配体）同工型a前体可以GenBank登录号NM_003994(mRNA转录物；SEQ ID NO:5)和NP_003985(蛋白序列；SEQ ID NO:6)可用。NCBI Reference Gene Sequence具有登 录号NG_012098(SEQ ID N〇:7)。对于这两种同工型，第一25氨基酸包括信号肽并且成熟形 式包括始于氨基酸26。成熟形式的前11个氨基酸是EGICRNRVTNN(SEQ ID N0:8)。
[0139] 博来霉素模型
[0140] 通过i . t .注射溶解于60μ1磷酸盐缓冲盐水（PBS)中的0.003U博来霉素 (Blenoxane，无菌硫酸博来霉素；Bristol-Meyers Pharmaceuticals，Evansvi 1 le，IN; 0.15U/Kg小鼠体重）在无特异性病原体（SPF)雌性CBA/J小鼠（6-8周龄；The Jackson Laboratory，Bar Harbor，ME)中诱导间质性肺纤维化。对照通过相同的途径接受60μ1的 PBS。所有程序在无菌环境中进行并且由制度动物护理和使用委员会批准。
[0141] 全肺组织学
[0142] 麻醉剂施行安乐死后，来自博来霉素攻击的小鼠的全肺用用10%福尔马林完全膨 胀，切开，并置于新鲜福尔马林中24小时。常规组织学技术用于将整个肺包埋在石蜡中，并 且5μπι全肺切片用苏木精和曙红染色。
[0143] 抗-SCF多克隆抗体的生产和施用
[0144] 抗-SCF抗体通过用重组(全蛋白）SCF对兔子进行免疫