1.一种罗汉果高效脱毒的组织培养方法,其特征在于,包括:
将外植体进行消毒得到无菌外植体;将所得无菌外植体接种至MS诱导培养基中进行诱导培养得到无菌试管苗;将所得无菌试管苗于MS预培养基中进行预培养得到预培养试管苗;将所得的预培养试管苗接种至MS脱毒培养基中进行脱毒培养得到试管丛生芽;选取健壮的试管丛生芽接种至1/2MS生根培养基中进行生根培养得到带根植株,最后将所得的带根植株进行练苗和移栽;
其中,所述MS诱导培养基至少包含0.5-1.0mg/L的金刚烷酮,所述MS预培养基至少包含0.5-1.0mg/L的金刚烷酮和0.1-0.6mg/L的硝酸银。
2.如权利要求1所述的罗汉果高效脱毒的组织培养方法,其特征在于,选取带病毒的罗汉果植株新萌发的嫩芽作为外植体,然后将所得的外植体剥去叶后,依次用体积分数为1-3%的洗洁精水溶液浸泡5-6min、自来水冲洗15-20min、添加了2-3滴吐温-20的100毫升体积分数为0.1-0.2%的升汞消毒8-10min、无菌水冲洗3-5次,最后用消毒滤纸除去表面水分,得到所述无菌外植体。
3.如权利要求1所述的罗汉果高效脱毒的组织培养方法,其特征在于,在接种至MS诱导培养基之前,先将无菌外植体切成带有一个腋芽的茎段。
4.如权利要求1所述的罗汉果高效脱毒的组织培养方法,其特征在于,所述MS诱导培养基包含:0.3mg/L的6-BA、0.1mg/L的IAA、0.5-1.0mg/L的金刚烷酮、30g/L蔗糖和5g/L的琼脂,pH值为5.5-6。
5.如权利要求4所述的罗汉果高效脱毒的组织培养方法,其特征在于,所述诱导培养的培养条件为:温度23-27℃,光照强度1500lux,光照时间为8-10小时/天,培养时间为30天。
6.如权利要求1所述的罗汉果高效脱毒的组织培养方法,其特征在于,所述MS预培养基包含:0.5mg/L的6-BA、0.2mg/L的IBA、0.5-1.0mg/L的金刚烷酮、0.1-0.6mg/L的硝酸银、30g/L蔗糖,pH值为5.5-6,预培养的时间为9-11天。
7.如权利要求1所述的罗汉果高效脱毒的组织培养方法,其特征在于,所述脱毒培养步骤中,从所述预培养试管苗剥取0.2-0.3mm的茎尖分生组织,将所得的茎尖分生组织接种所述脱毒培养基中,温度为23-27℃的条件下黑暗培养20天,得到所述试管丛生芽。
8.如权利要求7所述的罗汉果高效脱毒的组织培养方法,其特征在于,所述脱毒培养基包含:0.2-1.0mg/L的TDZ、0.1-0.5mg/L的ZT、0.1-1.0mg/L的IBA、30g/L蔗糖和5g/L的琼脂,pH值为5.5-6。
9.如权利要求1所述的罗汉果高效脱毒的组织培养方法,其特征在于,所述生根培养基包含:0.2-1.0mg/L的NAA、1.5g/L的AC、10/L蔗糖和5g/L的琼脂,培养基的pH值为5.8;
所述生根培养的条件为:温度为23-27℃,光照强度1500lux,光照时间为8-10小时/天,培养时间为20天。
10.如权利要求1所述的罗汉果高效脱毒的组织培养方法,其特征在于,所述练苗和移栽具体包括:将所得的带根植株使用自来水培养一周,待表面角质形成后,将幼苗取出,洗净根部,再使用完全培养液培养一个月后移栽到大田即得到罗汉果幼株。