一种垂枝型墨西哥落羽杉组织培养方法
【技术领域】
[0001]本发明涉及垂枝型墨西哥落羽杉的嫩茎段离体培养方法，属于垂枝型墨西哥落羽杉的嫩茎段离体培养方法技术领域。
【背景技术】
[0002]墨西哥落羽杉是一种多用途树木，而垂枝型墨西哥落羽杉是其中的一个变种，具有原品种墨西哥落羽杉的原有特点，如生长快、树姿高大丰满、雄伟美丽、半常绿、耐湿耐盐碱耐干早及抗风推等，还具有树枝从上到下均似杨柳条状垂挂的显著优点，是其他杉科树木中没有的，可作绿化、盆栽，半常绿，观赏性特强。I月中下旬落叶，2月中下旬萌芽，适应性与观赏性强，耐零下17度低温。其种苗主要靠扦插、籽播等常规方法繁殖，但周期长且生根率低，无法满足生产用种苗之需。
【发明内容】
[0003]本发明的目的是提供一种繁殖率高、繁殖速度快的垂枝型墨西哥落羽杉的嫩茎段尚体培养方法。
[0004]为了达到上述目的，本发明提供了一种垂枝型墨西哥落羽杉组织培养方法，其特征在于，包括:
[0005]第一步:选取当年萌发的垂枝型墨西哥落羽杉新枝，剪去针状叶片，冲洗，消毒，用无菌水冲洗后用无菌滤纸吸干水份；
[0006]第二步:在超净台上将第一步得到的新枝切成0.5-1.5cm长度的茎段进行新芽诱导，接种于第一培养基上进行新芽培养，所述第一培养基是在1/2MS培养基的基础上添加了玉米素(ZT)和荼乙酸(NAA)及活性炭所得，第一培养基中玉米素的浓度为2.5-3.5mg/L，荼乙酸的浓度为0.1-0.3mg/L，活性炭的浓度为1.5-2.5g/L，待茎段萌发腋芽并长Icm以上时，将新芽切下接种至第二培养基上诱导丛生芽，所述第二培养基是在MS培养基基础上添加了细胞分裂素、激动素、荼乙酸和活性炭所得，第二培养基中细胞分裂素的浓度为0.5-1.5mg/L，激动素的浓度为0.3-0.8mg/L，荼乙酸的浓度为0.1-0.3mg/L，活性炭的浓度为 1.5-2.5g/L ;
[0007]第三步:将丛生芽切成单芽，接种至第三培养基中进行生根培养，所述第三培养基是在1/2MS培养基的基础上添加了吲哚丁酸和活性炭所得，第三培养基中吲哚丁酸和活性炭浓度分别为0.3-0.8mg/L和1.5-2.5g/L，得到生根的试管苗；
[0008]第四步:将生根的试管苗移栽至由重量比2.5-3.5: I的泥炭和珍珠岩混合而成的基质中，浇足水后用塑料薄膜覆盖保温保湿防失水萎蔫，7天后揭开薄膜炼苗，每天叶面喷水3-5次，10-20天后施肥料液，25-35天后移栽至灌满纯泥炭的塑料穴盘中，经2_4个月培养后直接移栽至土壤或容器中。
[0009]优选地，所述第一步中，当年萌发的垂枝型墨西哥落羽杉新枝为半木质化的新枝。
[0010]优选地，所述的第一步中的清洗为用洗衣粉或洗洁精冲洗三遍，置自来水龙头下冲洗2h，所述的消毒在无菌室超净台上进行，先用75vol%乙醇溶液消毒lmin，然后用0.2vol%的洁尔敏溶液消毒15min，最后用8vol %次氯酸钠溶液消毒18min。
[0011]优选地，所述的第一培养基中玉米素的浓度为3mg/L，荼乙酸的浓度为0.2mg/L，活性炭的浓度为2.0g/L，琼脂粉浓度为5.5g/L，蔗糖浓度为30g/L，pH值为5.8。
[0012]优选地，所述的第二培养基中细胞分裂素的浓度为lmg/L，激动素的浓度为0.5mg/L，荼乙酸的浓度为0.2mg/L，活性炭的浓度为2g/L。
[0013]优选地，所述的第三培养基中吲哚丁酸和活性炭的浓度分别为0.5mg/L、2.0g/L。
[0014]优选地，所述的新芽培养是在温度24°C、光照强度3000LX及每天光照时间12小时的条件下进行。
[0015]优选地，所述的诱导丛生芽是在温度24°C、光照强度3000LX及每天光照时间12小时的条件下进行。
[0016]优选地，所述第二步还包括:将所得的丛生芽切成单芽，接种至第二培养基上，经过连续继代增殖不断扩大繁殖系数，每40-45天增殖一次，增殖率为1: 3-5。
[0017]优选地，所述的生根培养是在温度24°C、光照强度3000LX及每天光照时间12小时的条件下进行。
[0018]优选地，所述的肥料液中含有0.1wt%硝酸铵、0.1wt%磷酸二氢钾、0.1wt%硫酸镁。
[0019]与现有技术相比，本发明的有益效果是:
[0020]本发明具有繁殖速度快、存活率高，繁殖率高、脱病毒及提纯复壮等优点，可在短时间内工厂化生产优质种苗。
【具体实施方式】
[0021]下面结合具体实施例，进一步阐述本发明。应理解，这些实施例仅用于说明本发明而不用于限制本发明的范围。此外应理解，在阅读了本发明讲授的内容之后，本领域技术人员可以对本发明作各种改动或修改，这些等价形式同样落于本申请所附权利要求书所限定的范围。
[0022]实施例1
[0023]一种垂枝型墨西哥落羽杉组织培养方法，具体步骤为:
[0024]第一步:选取当年萌发的半木质化的垂枝型墨西哥落羽杉新枝，剪去针状叶片，用洗衣粉冲洗三遍，置自来水龙头下冲洗2h，在无菌室超净台上进行消毒，先用75vol%乙醇溶液消毒lmin，然后用0.2vol %的洁尔敏溶液消毒15min，最后用8vol%次氯酸钠溶液消毒18min，用无菌水冲洗三遍后无菌滤纸吸干水份；
[0025]第二步:在超净台上将第一步得到的新枝切成Im长度的茎段进行新芽诱导，接种于第一培养基上进行新芽培养，所述第一培养基是在1/2MS培养基的基础上添加了玉米素(ZT)和荼乙酸(NAA)及活性炭所得，第一培养基中玉米素的浓度为3mg/L，荼乙酸的浓度为0.2mg/L，活性炭的浓度为2g/L，琼脂粉浓度为5.5g/L，蔗糖浓度为30g/L，pH值为5.8，待茎段萌发腋芽并长Icm以上时，将新芽切下接种至第二培养基上诱导丛生芽，所述第二培养基是在MS培养基基础上添加了细胞分裂素、激动素、荼乙酸和活性炭所得，第二培养基中细胞分