巨核祖细胞冻存液及其应用
【技术领域】
[0001 ]本发明涉及生物工程领域，具体地，涉及巨核祖细胞冻存液及其应用，更具体地， 涉及巨核祖细胞冻存液、用于冻存巨核祖细胞的试剂盒和冻存巨核祖细胞的方法。
【背景技术】
[0002] 近年来肿瘤发病率呈上升趋势，肿瘤放化疗患者血液检查常出现血小板减少，临 床上以输注机采血小板作为治疗手段。由于血源紧张且需要反复输注血小板，因此寻找新 的血小板来源十分必要。脐血造血干/祖细胞能够分化为巨核祖细胞，并进一步发育成熟产 生血小板，因此有望通过体外回输巨核祖细胞以提高血液中血小板的数量，缓解或替代血 源紧张造成的血小板缺乏。
[0003] 目前临床用的血小板产品体外保存时间较短，而巨核祖细胞作为有核细胞可以在 体外进行长期冻存，如果能够对体外诱导分化的巨核祖细胞长期的保存，并在复苏后保持 其祖细胞特性，将更有利于临床治疗应用。但是对于巨核祖细胞这一特定的细胞类型尚缺 乏冻存方面相关研究。
【发明内容】
[0004] 本发明旨在至少解决现有技术中存在的技术问题之一。为此，本发明的一个目的 在于提出一种用于巨核祖细胞长期保存，并能够在复苏后保持其祖细胞特性的冻存液。
[0005] 根据本发明的一个方面，本发明提供了一种巨核祖细胞冻存液。根据本发明的实 施例，该巨核祖细胞冻存液包括:DMS0;和血浆。发明人惊奇的发现，该冻存液能够有效用于 冻存巨核祖细胞，细胞复苏后存活率和回收率高。
[0006] 另外，根据本发明上述实施例的巨核祖细胞冻存液还可以具有如下附加的技术特 征：
[0007] 根据本发明的实施例，所述DMS0的浓度为(5-15)体积％，优选地，为10体积％。 [0008]根据本发明的实施例，所述血浆的浓度为(30-90)体积％，优选地，为80体积％。
[0009] 根据本发明的实施例，该巨核祖细胞冻存液进一步包括泊洛沙姆。
[0010] 根据本发明的实施例，所述泊洛沙姆为泊洛沙姆188(P188)或泊洛沙姆407 (P407)〇
[0011] 根据本发明的实施例，所述泊洛沙姆188的浓度为0.2-lmg/ml，优选地，为0.5mg/ ml〇
[0012] 根据本发明的实施例，所述泊洛沙姆407的浓度为0.2-lmg/ml，优选地，为0.5mg/ ml〇
[0013] 根据本发明的实施例，当所述DMS0和血浆的体积百分数之和小于1时，所述巨核祖 细胞冻存液进一步包含剩余体积的頂DM或Stemspan培养基。
[0014] 根据本发明的实施例，所述血浆为自体血浆。
[0015] 根据本发明的另一方面，本发明提供了一种用于冻存巨核祖细胞的试剂盒。根据 本发明的实施例，该试剂盒包含前述的巨核祖细胞冻存液。发明人惊奇的发现，该试剂盒能 够有效用于冻存巨核祖细胞，细胞复苏后存活率和回收率高。
[0016] 根据本发明的又一方面，本发明提供了一种冻存巨核祖细胞的方法。根据本发明 的实施例，利用前述的巨核祖细胞冻存液或者前述的试剂盒，冻存所述巨核祖细胞。根据本 发明实施例的冻存巨核祖细胞的方法，该方法能够有效用于冻存巨核祖细胞，细胞复苏后 回收率高。
[0017] 根据本发明的实施例，每1〇5-1〇7个巨核祖细胞采用1ml所述巨核祖细胞冻存液，优 选地，每10 6个巨核祖细胞采用lml所述巨核祖细胞冻存液。
[0018] 根据本发明的实施例，于液氮中进行所述冻存。
[0019] 本发明的附加方面和优点将在下面的描述中部分给出，部分将从下面的描述中变 得明显，或通过本发明的实践了解到。
【具体实施方式】
[0020] 需要说明的是，术语"第一"、"第二"仅用于描述目的，而不能理解为指示或暗示相 对重要性或者隐含指明所指示的技术特征的数量。由此，限定有"第一"、"第二"的特征可以 明示或者隐含地包括一个或者更多个该特征。进一步地，在本发明的描述中，除非另有说 明，"多个"的含义是两个或两个以上。
[0021]
[0022]
[0023]根据本发明的一个方面，本发明提供了一种巨核祖细胞冻存液。根据本发明实施 例，该细胞冻存液冻存的细胞种类不受特别的限制，只要冻存液能用于长期保存细胞即可， 优选地，为巨核祖细胞。根据本发明的实施例，该巨核祖细胞冻存液包括:DMS0;和血浆。发 明人惊奇的发现，该冻存液能够有效用于冻存巨核祖细胞，冻存的细胞复苏后，细胞的存活 率和回收率高。
[0024]根据本发明的实施例，DMS0的浓度为（5-15)体积％。由此，细胞的冻存效果好。根 据本发明的优选示例，DMS0的浓度为10体积％。由此，细胞的冻存效果突出。
[0025]根据本发明的实施例，血浆的浓度为(30-90)体积％。血浆中含有血清及多种营养 成分，对细胞有良好的保护作用，当血浆的浓度为(30-90)体积％时，例如，血浆浓度为40体 积％，50体积％、60体积％、70体积％、或80体积％，冻存液对细胞的保护作用好，细胞复苏 后的存活率高。根据本发明的优选实施例，当血浆的浓度为80体积％时，对细胞的保护作用 突出，细胞复苏后的存活率高。根据本发明的实施例，所述血浆为自体血浆。其中，需要说明 的是，在本文中所使用的术语"自体血浆"是指与待冻存的巨核祖细胞具有同一来源的血 浆。换言之，即该血浆与要利用冻存液冻存的巨核祖细胞取自同一个体。由此，对自体的巨 核祖细胞排异作用小，有利于冻存细胞的保护。
[0026]根据本发明的实施例，该巨核祖细胞冻存液进一步包括泊洛沙姆。泊洛沙姆一种 非离子型高分子表面活性剂，在药物制剂中主要用作乳化剂和增溶剂。发明人研究发现，泊 洛沙姆能够促进造血干祖细胞增殖和/或巨核分化，当冻存液中添加泊洛沙姆后，细胞的回 收率显著提高。根据本发明的实施例，所述泊洛沙姆为泊洛沙姆188或泊洛沙姆407。由此， 对细胞的回收率的提高作用更佳。根据本发明的实施例，泊洛沙姆188的浓度为0.2-lmg/ ml。由此，细胞复苏后回收率高。根据本发明的一些优选实施例，泊洛沙姆188的浓度为 0.5mg/ml。由此，细胞复苏后回收率更高。根据本发明的实施例，泊洛沙姆407的浓度为0.2-lmg/ml。由此，细胞复苏后回收率高。根据本发明的一些优选实施例，泊洛沙姆407的浓度为 0.5mg/ml。由此，细胞复苏回收率更高。
[0027]根据本发明的实施例，当所述DMS0和血浆的体积百分数之和小于1时，所述巨核祖 细胞冻存液进一步包含剩余体积的頂DM或stemspan培养基。例如，在所述巨核祖细胞冻存 液中，当所述DMS0的浓度为10体积％、所述血浆的浓度为90%体积时，所述巨核祖细胞冻存 液不包含頂DM或stemspan培养基；当所述DMS0的浓度为10体积％，所述血浆的浓度为80% 体积时，所述巨核祖细胞冻存液包含10%体积的頂01或^6111叩 &11培养基；当所述0150的浓 度为5体积％，所述血浆的浓度为70 %体积时，所述巨核祖细胞冻存液包含25%体积的頂DM 或stemspan培养基。
[0028] 根据本发明的另一方面，本发明提供了一种用于冻存巨核祖细胞的试