益生元类囊体组合物的制作方法【专利说明】益生元类囊体组合物发明领域[0001]本发明涉及益生元（prebiotics)领域，并且特别涉及刺激哺乳动物消化系统中益生细菌（probioticbacteria)、典型地是乳酸细菌的生长和/或活性的组合物。[0002]背景[0003]益生细菌在本领域中是公知的，并且其健康益处也记载于文献中。为了增加益生细菌的益处，它们可以补充有促进细菌的益生元物质。益生元是对微生物群（microbiota)具有有益效果的非细菌产物。它们作用为结肠微生物群的肥料，由此增强有益的共生生物体，如双歧杆菌属（Bifidobacterium)和乳杆菌属（Lactobacillus)的生长。益生元典型地是选择性发酵的成分，其允许对宿主舒适和健康有益的胃肠微生物群（也称为肠道微生物群或共生菌群）的组成和/或活性中的特定变化。[0004]促进益生细菌，如典型地乳酸细菌，例如，乳杆菌属和双歧杆菌属，可以对于紊乱的肠道微生物群有关的疾病的治疗有益。例如，抗生素相关的腹泻、旅行者腹泻、小儿腹泻和肠易激综合征（irritablebowelsyndrome)是已知与紊乱的肠道微生物群相关的病症。此外，益生元试剂的使用已经与减少的结肠直肠癌的危险有关。此外，共生菌群的紊乱可能由于多种其他因素而发生，包括，但不限于，放射疗法或偶然辐射，抗生素和其他影响细菌生长的药剂的应用，肠道疾病，如谷蛋白不耐受性。此类不需要的变化可能引起疾病和紊乱的免疫功能，并且可以通过使用益生元而进行调整，以便能够获得共生菌群和宿主二者的正常生理学生长和功能。[0005]因此，可以通过促进益生细菌而治疗或预防有益肠道细菌群紊乱的病症。[0006]存在庞大种类的潜在的益生元物质。例如，EP1056358Bl中描述了口服摄入在益生元食品中的特定的单糖刺激人结肠中有益细菌的生长。然而，需要发现易于制备并且安全摄入的具有附加益处的新的改善的益生元物质。[0007]概述[0008]因此，本发明优选地寻找克服上文指出的本领域中的单个或任意组合的缺点，并且通过提供易于制备并且安全摄入的具有附加益处的新的改善的益生元组合物而至少解决上文提及的问题。[0009]按照本发明的一个方面，提供给包含分离的、富集的类囊体或其部分的组合物作为益生元试剂的非治疗性应用。所述应用典型地用于促进哺乳动物肠道（如回肠和盲肠）中的乳酸细菌，如乳杆菌和双歧杆菌。[0010]按照本发明的另一个方面，提供用于治疗或预防与紊乱肠道微生物群相关的病症的包含分离的、富集的类囊体或其部分的组合物，其中所述应用包括对哺乳动物，如人口服给药，以促进所述哺乳动物肠道（如回肠和盲肠，例如回肠）中的乳酸细菌，如乳杆菌和双歧杆菌。[0011]按照本发明的另一个方面，提供包含分离的、富集的类囊体或其部分和益生细菌的组合物。[0012]按照本发明的另一个方面，提供治疗哺乳动物中与紊乱的肠道微生物群相关的病症的方法，通过口服施用包含分离的、富集的类囊体或其部分的组合物进行。[0013]本发明的其他有利特征在从属权利要求中定义。另外，在本文公开的实施方案中详细描述本发明的有利特征。[0014]附图简述[0015]通过下述本发明的实施方案的描述，参考附图，本发明能够具有的这些和其他方面、特征和优点将是清楚的，并得以阐明，在所述附图中，[0016]图1是显示按照本发明的实施方案的血浆胰岛素的浓度（pM)的图表；[0017]图2和3是显示按照本发明的实施方案的乳杆菌属存活计数（CFU/g组织）的图表；[0018]图4是显示按照实施方案的细菌存活计数（CFU/g组织）的图表；和[0019]图5和6是显示按照本发明的实施方案的T-RFLP数据的主要成分分析（PCA)的图表。[0020]详述[0021]为了使本领域技术人员能够实施本发明，以下参考附图更详细地描述本发明的一些实施方案。然而，本发明可以以多种不同的形式体现，并且不应该解释为局限于本文所述的实施方案。相反，提供这些实施方案，以使本公开内容全面和完整，并且将完全向本领域技术人员传达本发明的范围。所述实施方案不限制本发明，而是本发明仅受附上的专利权利要求的限制。此外，在附图示例的具体的实施方案的详细描述中所用的术语不意欲限制本发明。[0022]类囊体可以从绿色叶子的叶绿体膜提取，并且包含蛋白、脂质和色素（例如，叶绿素和类胡萝卜素）。在一些研宄中已经发现其在人和动物受试者中都能增加饱食感、减少饥饿信号并且促进体重减轻（参见WO2006/132586和WO2010/008333以及其它文献）。促进饱食感的作用以两种方式解释：类囊体与饮食三酰甘油和脂肪酶/共脂肪酶复合物相互作用，并且结果引起物理阻碍（physicalhindrance)，由此延长对饮食脂肪的消化以及肠壁对营养物的摄取。[0023]类囊体由机体消化，因此可以使用它们，而没有任何毒性作用。然而，类囊体较其他细胞区室（如线粒体）消化更缓慢，这是有利的。本领域技术人员认识到，益生元试剂是允许对宿主的舒适和健康赋予益处的胃肠微生物群的组成和/或活性中的特异性变化的成分。[0024]本发明人在大鼠中研宄了类囊体对肠道微生物群的作用和葡萄糖耐量测试后的结果。他们令人惊讶地发现类囊体调节肠道微生物群（参见图2-4)，因此作为益生元试剂行使功能。此外，他们发现类囊体增加胰岛素敏感性（参见图1)。[0025]简言之，将Sprague-Dawley大鼠分成两组，分别喂饲正常大鼠食物的富含类囊体的饮食或对照饮食10天。10天后，进行葡萄糖耐量测试，与对照相比，在喂饲类囊体的大鼠中产生显著更低的胰岛素浓度（参见图1)。细菌分析表明，添加类囊体诱导了回肠中乳杆菌的显著增加，这得到了肠道样品的细菌培养和qPCR二者的证实。并且，通过qPCR分析在类囊体组中观察到显著减少量的粪便乳杆菌，这表明在补充类囊体10天后，乳杆菌可能更加粘附肠黏膜。[0026]其他细菌分析表明，与对照相比，在类囊体组中，结肠、盲肠和粪便中革兰氏阳性细菌显著减少。当比较类囊体和对照动物时，通过末端限制性片段长度多态性（T-RFLP)的主要成分分析进行的粪便微生物群分析证明独特的微生物群体。综上所述，这些发现表明类囊体可以调节肠道微生物群，由此作为一种益生元试剂行使功能。这又可能对于体重和代谢病症的调节是重要的。[0027]因此，本发明人已经发现给哺乳动物口服施用包含类囊体或其部分的组合物增强肠道益生菌群并且促进乳酸细菌。包含分离的、富集的类囊体的组合物由此可以作为益生元试剂行使功能。此外，已经表明不同益生菌菌株，特别是乳杆菌，可用于预防或治疗受损的免疫功能，以及抗生素相关的腹泻、旅行者腹泻、小儿腹泻和肠易激综合征。[0028]按照一个实施方案，由此提供包含分离的、富集的类囊体或其部分的组合物，以促进哺乳动物肠道中的乳酸细菌，如乳杆菌属和双歧杆菌属。所述哺乳动物可以是人。典型地，口服施用所述组合物，以到达肠道。通过促进肠道（尤其是回肠和盲肠，更优选是回肠）中的乳酸细菌，可以预防或治疗与紊乱的肠道微生物群相关的病症，包括，但不限于，受损的免疫功能，以及抗生素相关的腹泻、旅行者腹泻、小儿腹泻和肠易激综合征。[0029]尽管分离的、富集的类囊体或其部分可以用于调节肠道微生物群，但是，按照一个实施方案，益生细菌包含在组合物中。通过包含益生细菌，可以提高对肠道微生物群的作用，并且补充已有的益生细菌。要包含在所述组合物中的益生细菌可以是双歧杆菌属，例如，婴儿双歧杆菌（Bifidobacteriuminfantis)，和乳杆菌属，例如，胚芽乳杆菌(Lactobacillusplantarum)〇[0030]分离和富集类囊体的一般原理在本领域中是已知的（参见PCT/SE2006/000676，W0/SE2009/000327和Emek，SC，SzilagyiA，AkerlundHE，等?（2010)Alargescalemethodforpreparationofplantthylakoidsforuseinbodyweightregulation(用于制备用于体重调节的植物类囊体的大规模方法）Preparbiochem&biotech40(1)，13-27.)〇[0031]典型地，所述组合物的类囊体由绿色叶子或绿藻富集。优选地，类囊体由菠菜分离并富集。在将类囊体加入到组合物中之前，可以以某种方式浓缩类囊体，以使所述分离的、富集的类囊体的叶绿素含量为约8mg-150mg叶绿素/g。类囊体在组合物中的含量可以对应于每克组合物lmg-75mg叶绿素的叶绿素含量。[0032]用于促进肠道中的乳酸细菌，如乳杆菌属和双歧杆菌属的组合物可以是食品或药物。按照一个实施方案，所述组合物是口服的药物或营养保健组合物（nutraceuticalcomposition)，其包括含有类囊体的生理学耐受的水包油乳液。在这样的实施方案中，类囊体的量为20-30wt.%，如约25wt.%。此外，油含量可以为20-30wt.%，如约25wt.%。所用的油可以是食品级的植物油，如油菜籽油、橄榄油、葵花籽油等。[0033]由于所述组合物可以以多种形式施用，所以，要施用的类囊体的每日剂量可能不同。作为指导原则，要施用的组合物的量可以以这样的方式选择，以使剂量与2.4mg-240mg类囊体/kg哺乳动物体重的每日剂量相关。<当前第1页1 2 3 4