缩:取滤液WS效真空浓缩器浓缩,其中一效真空度0.025Mpa,溫度78°C ;二效 真空度0.045M化溫度70°C; S效真空度0.06MPa溫度60°C,浓缩至60°C时测相对密度为1.25 的稠膏;
[0044] 干燥:将提取的浸膏置不诱钢盘中,每盘厚度为5cm,干燥时间9小时,置减压干燥 箱中,75°C干燥,真空度0.055Mpa,蒸汽压力含0.3Mpa,待干后取出,将干膏装入洁净的塑料 袋中,存放备用;
[0045] 粉碎:将上述干膏及维生素 C进行粉碎,过筛,细度为100目,粉碎后的细粉封装,称 重,存放备用;
[0046] 混合:将粉碎后的混合粉,加入混合机中混合60分钟,取出,装入二层塑料袋中,存 放备用;
[0047] (S)配料、制粒、整粒、总混、压片
[004引 W混料机将混合粉及辅料混合25分钟后,加入90 %的乙醇适量作润湿剂,揽拌15 分钟,用16目尼龙筛网制粒,于热风循环烘箱55°C吹干3小时,铺盘厚度不宜超过2cm,并应 每隔20分钟翻动一次,W摇摆式制粒机16目尼龙筛网整粒,直至全部通过,取颗粒加入适量 的硬脂酸儀作润滑剂,WV型混合机混合30分钟,同时将薄荷脑用适量乙醇溶解均匀喷入其 中,取合格的颗粒,W全自动压片机压片,每隔15分钟检查一次片重差异,素片于惊片室室 溫惊置8小时。
[0049] 实施例3
[0050] 由下列重量份的原料组成:
[0化1]人参150份、金银花200份、桑甚150份、白砂糖1500份、维生素 C 5份、薄荷脑0.2份。 [0052]本发明的生产方法是包括下列步骤:
[0化3]( - )原药材的整理
[0054] 挑选达到质量标准要求的人参、金银花、桑甚,准确称量;将人参、金银花、桑甚投 入洗药机内,用30°C的饮用水分别清洗5分钟,将清洗后的人参、金银花、桑甚分别用粉碎机 粉碎成粗粉,分别投入带式干燥机中进行干燥,干燥溫度为80°C,干燥后的净药材装入洁净 塑料袋中,备用;
[0055] (二)提取、浓缩
[0056] 水煎煮:将称量物料W多功能提取罐,加水煎煮二次,加水量分别为8倍、6倍;浸泡 时间为2小时,煎煮时间分别为3小时、2小时,合并提取液,静置24小时、上清液过滤;
[0057] 浓缩:取滤液WS效真空浓缩器浓缩,其中一效真空度0.03Mpa,溫度80°C;二效真 空度0.05M化溫度75°C; S效真空度0.07M化溫度65°C,浓缩至60°C时测相对密度为1.30的 稠膏;
[0058] 干燥:将提取的浸膏置不诱钢盘中,每盘厚度为6cm,干燥时间10小时,置减压干燥 箱中,80°C干燥,真空度0.06Mpa,蒸汽压力<0.3Mpa,待干后取出,将干膏装入洁净的塑料 袋中,存放备用;
[0059] 粉碎:将上述干膏及维生素 C进行粉碎,过筛,细度为100目,粉碎后的细粉封装,称 重,存放备用;
[0060] 混合:将粉碎后的混合粉,加入混合机中混合60分钟,取出,装入二层塑料袋中,存 放备用;
[006。(立)配料、制粒、整粒、总混、压片
[0062] W混料机将混合粉及辅料混合30分钟后,加入95 %的乙醇适量作润湿剂,揽拌20 分钟,用16目尼龙筛网制粒,于热风循环烘箱60°C吹干4小时,铺盘厚度不宜超过2cm,并应 每隔20分钟翻动一次,W摇摆式制粒机16目尼龙筛网整粒,直至全部通过,取颗粒加入适量 的硬脂酸儀作润滑剂,WV型混合机混合30分钟,同时将薄荷脑用适量乙醇溶解均匀喷入其 中,取合格的颗粒,W全自动压片机压片,每隔15分钟检查一次片重差异,素片于惊片室室 溫惊置8小时。
[0063] 下面通过增强免疫力功能试验来进一步说明本发明的效果。
[0064] 1材料和方法
[0(?日]1.1样品:人参金银花片
[0066] 1.2实验动物:选用吉林大学白求恩医学院动物实验中屯、提供的ICR清洁级雄性小 鼠,体重18-22g。
[0067] 1.3计量选择:成人量(60kg计),每天摄入2次,每次3片,0. Sg/片,即SOmg/kgBW d, W成人摄入量1、10、30倍设置灌胃计量,即80、800、2400mg/kg BW d,分别取800、8000、 24000mg定型产品加蒸馈水至200mL,蒸馈水作阴性对照组,各组小鼠灌胃量均为0.2mL/10g BW d,连续灌胃30d。
[0068] 1.4仪器与试剂:电子天平(0.1 g)、分析天平、洁净工作台、二氧化碳培养箱、离屯、 机、722分光光度计、恒溫水浴、酶标仪、显微镜等。
[0069] 无菌手术器械、游标卡尺、微量注射器(25微升)细胞计数器、24孔和96孔平底细胞 培养板、96孔U形细胞培养板、玻璃平皿、纱布、试管、玻片架、200目筛网、计时器、血色素吸 管、载玻片等。
[0070] 1.5实验方法:
[0071] 1.5.1脏器/体重比值测定
[0072] 小鼠称重后脱白处死,取脾脏和胸腺,去尽筋膜,用滤纸吸干脏器表面血污,称重, 计算脾脏/体重比值和胸腺/体重比值。
[0073] 1.5.2迟发型变态反应(足趾增厚法DHT)
[0074] 取羊血,生理盐水3次,小鼠用2 % (V/V) SRBC腹腔免疫,每只鼠注射0.2ml。在免疫 后4天,测量左后足趾部厚度,然后在测量部位皮下注射20% (VA)SRBC,每只鼠20化,注射 后24小时测量左后足趾部厚度,同一部位测=次,取平均值。
[0075] 1.5.3ConA诱导的小鼠淋己细胞转化实验(MTKi)
[0076] 无菌取脾,置于盛有适量无菌化nk's液的小平皿中,用綴子轻轻将脾磨碎,制成单 个细胞悬液。用4块纱布将脾磨碎,用化nk'S液洗2次,每次离屯、10min( 1000转/min)。然后将 细胞悬浮于Iml的完全培养液中,用台酪兰染色计数活细胞数(应在95% W上),调整细胞浓 度为3 X IO6个/ml。再将每一份细胞悬液分两孔加入24孔培养板中,每孔1ml,一孔加75y LConA液(相当于7.化g/mU,另一孔作为对照,置5 %、37°CC02培养箱中培养72h。培养结束 前4h,每孔轻轻吸去上清液0.7mL,加入不含小牛血清的RPMI640培养液,同时加入MTT( 5mg/ mL)5化L/孔,继续培养4h。培养结束后,每孔加入ImL酸性异丙醇,吹打混匀,使紫色结晶完 全溶解。然后将溶解液直接移入2mL比色杯中,722分光光度上在波长570nm测定OD值。
[0077] 1.5.4抗体生成细胞检测(Jerne改良玻片法)
[0078] 绵羊颈静脉取血,将羊血放入有玻璃珠的灭菌锥形瓶中,朝一个方向摇动,W脱纤 维,放入4°C冰箱保存备用,可保存2周。
[0079] 将压积SRBC用生理盐水配成2 % (V/V)的细胞悬液,每只鼠腹腔注射0.2ml。将用 SRBC免疫4-5天后的小鼠颈椎脱白处死,取脾,放入盛有化nk ' S液的小平皿,轻轻将脾磨碎, 审IJ成细胞悬液,然后经4块纱布过滤,用化扯'3液洗2次,每次离屯、(100化/111111)1〇111山最后 将脾细胞悬浮液在SmlRPMI 1640培养液中,计数细胞,并将细胞浓度调整为5 X IO6个/ml。
[0080] 将琼脂糖加热溶解后,放45°c-50°c水域保溫,与等量PH7.2-7.42倍浓度的化nk' S 液混合,分装小试管,每管0.5ml,再向管内加10 % (V/V,用SA液配制)压积SRBCSOiiL、脾细胞 悬液20化,迅速混匀后,倾倒于已刷琼脂糖薄层的玻片上,做平行片,待琼脂凝固后,将玻片 水平扣放在片架上,放入二氧化碳培养箱中溫育1.化,然后用SA缓冲液稀释的补体(1:8)加 入到玻片架凹槽内,继续溫育1.化后,计数溶血空斑数。
[0081] 1.6 结果
[0082] 1.6.1人参金银花片对小鼠体重的影响
[0083] 表1.人参金银花片对免疫一组小鼠体重影响
[00化]P:各实验组与阴性对照组比较
[0086] 由表1可见