其中皂苷对固醇的比例为至少1 : 2(w/w)，或1 : 5(w/w)。在其他实施方 案中，皂苷相对于固醇而言为过量，并使用的皂苷对固醇的比例为约5 :l(w/w)。ISC0M及 ISCOMATRIX可自IsconovaAB(瑞典）购得。
[0053] 优选地，所述猪伪狂犬疫苗QuilA的量为0. 05mg/头份-0. 2mg/头份，优选 0?lmg/ 头份。
[0054] 作为本发明的一种实施方式，疫苗中含有纯化的猪伪狂犬病毒抗原，免疫刺激物 和铝胶。
[0055] 优选地，所述铝胶用量为所述铝胶为用量为10% -20% (v/v)。
[0056] 作为本发明的一种实施方式，所述疫苗组合物进一步包括免疫量的其他抗原成 分，所述抗原包括猪瘟抗原、猪繁殖与呼吸综合征病毒抗原、副猪嗜血杆菌抗原、猪圆环病 毒抗原、猪肺炎支原体抗原、猪流感病毒抗原、猪萎缩性鼻炎抗原中的一种或多种。
[0057] 本发明所用术语"丙烯酸或甲基丙烯酸的聚合物"优选为交联的丙烯酸或甲基 丙烯酸聚合物，尤其是与糖（sugar)的聚链烯基醚或聚醇交联，这些化合物已知被称为 卡波姆（Carbomer，商品名Carbopol)(Phameuropa, 1996,8(2))。本领域技术人员还可参 见美国专利US2909462,其描述了这类丙烯酸聚合物，其与聚羟基化的化合物交联，所述 化合物具有至少3个羟基，优选不超过8个，其中至少3个羟基的氢原子被具有至少2个 碳原子的不饱和脂径基（aliphaticradical)取代。优选的基团是那些含有2-4个碳 原子的基团，例如乙稀基、稀丙基和其它稀属不饱和基团（ethylenicallyunsaturated group)。所述不饱和基团自身可包含其它取代基，如甲基。这些产品以卡波普的名义出 售，（BFGoodrich,Ohio,USA)特别合适。它们与稀丙基鹿糖或与稀丙基季戊四醇（allyl pentaerythritol)交联。这其中可提及卡波普974P、934P和971P，最优选使用卡波普971P。
[0058] 本发明所用术语"顺丁烯二酸酐和链烯基衍生物的共聚物"也可考虑顺丁烯二酸 酐与乙烯的共聚物EMA(Monsanto)，这些聚合物在水中溶解产生酸性溶液，经中和，优选中 和至生理pH，以便产生佐剂溶液，能向其中掺入免疫原性、致免疫性或疫苗性组合物本身。
[0059] 本发明的另一方面为所述的疫苗组合物在预防和治疗猪伪狂犬病毒相关疾病中 的应用。
[0060] 本发明具有以下突出的优点：
[0061] (1)本发明制备的疫苗组合物除去引起过敏的蛋白、内毒素等，疫苗更安全。
[0062] (2)本发明的制备方法制备的组合物能对猪伪狂犬病毒变异株有更好的保护作 用。
[0063] (3)本发明的疫苗组合物可以用来稀释猪瘟、猪繁殖与呼吸系统综合症等活疫苗。
【具体实施方式】
[0064] 下面结合具体实施例来进一步描述本发明，本发明的优点和特点将会随着描述更 为清楚。但这些实施例仅是范例性的，并不对本发明的范围构成任何限制。本领域技术人 员应该理解的是，在不偏离本发明的精神和范围下可以对本发明技术方案的细节和形式进 行修改或替换，但这些修改和替换均落入本发明的保护范围内。
[0065] 本发明所用术语"预防和/或治疗"在涉及猪伪狂犬感染时是指抑制猪伪狂犬的 复制、抑制猪伪狂犬的传播或防止猪伪狂犬在其宿主体内定居，以及减轻猪伪狂犬感染的 疾病或病症的症状。若细菌荷载量减少、肺部感染减轻和/或摄食量和/或生长增加，那么 就可以认为所述治疗达到了治疗效果。
[0066] 本发明所用术语"猪"是指任何属于猪科（Suidae)成员的动物。
[0067] 术语"抗原"是指可在动物中产生抗体或T细胞反应或者二者都有的化合物、组合 物或免疫原性物质。
[0068] 本文定义疫苗或免疫组合物是指包含至少一种抗原的物质的组合物，该抗原在对 所能引起免疫反应。
[0069] 本实施例中伪狂犬变异株的基因缺失株为中国申请CN103923884A公开缺失gE 基因的猪伪狂犬HN1201株。其中猪伪狂犬病毒HN1201株（Pseudorabiesvirus，strain HN1201)，保藏号为CCTCCNO.V 201311;保藏于中国典型培养物保藏中心；保藏地址为湖 北省武汉武汉大学，保藏日期为2013年5月20日
[0070] 本发明中所用的pH7. 2PBS液配方为：1000mL蒸馏水中加入NaCl9g、 Na2HP04 ? 12H20 6g、NaH2P04 ? 2H20 0. 4g，本发明中所用到的化学试剂均为分析纯，购自国药 集团。
[0071]BHK-21细胞培养基为CellventoTMBHK-200无血清细胞培养基（默克，FC00408)。 按照说明书配制BHK-21悬浮细胞用培养基，在容器中加入注射用水至总体积的90%，将 一袋培养基（2. 16g)全部倒入容器中，轻微搅拌溶解，按照2g/L的重量体积比加入碳酸氢 钠，轻微搅拌后加注射用水至1L，用lmol/L的氢氧化钠或lmol/L的盐酸调pH值至7. 2,用 0.lum滤膜正压过滤除菌。
[0072]QuilA储备溶液：将QuilA(Superf〇s)溶解在水中，制备50毫克/毫升的储备 溶液。将胆固醇利用0.2微米滤器过滤。
[0073] 胆固醇储备溶液：胆固醇储备溶液（溶解在乙醇中，制备18毫克/毫升的储备溶 液。然后，利用0.2微米滤器过滤胆固醇储备溶液。
[0074] 卡波姆溶液：将卡波姆溶解在去离子水中，制备0.75%的储备溶液。
[0075] 错胶佐剂：货号：VAC-ALU-250 厂商：invivogen
[0076] 为使本发明更加容易理解，下面结合具体实施例，进一步阐述本发明。应理解，这 些实施例仅用于本发明而不用于限制本发明的范围。本发明所述的实验方法，若无特殊说 明，均为常规方法；所述的生物材料，若无特殊说明，均可从商业途径获得。
[0077] 实施例1猪伪狂犬抗原的制备
[0078] 1. 1用转瓶制备工艺制备猪伪狂犬抗原
[0079] 猪伪狂犬病病毒gE缺失株接种于PK-15细胞培养物先形成种子批，然后按病毒培 养液量的1% (V/V)接入形成单层的PK细胞培养物中，置37°C旋转培养，当病变达到80% 时，收获含毒细胞培养液，经2次冻融后，收毒，测定毒价为108 7TCID5(l/ml。病毒液中加入 10% (v/v)甲醛溶液使甲醛的终浓度为0. 2% (V/V)，37°C灭活18小时，每4小时搅拌1次， 每次搅拌l〇min。
[0080] 1.2用悬浮培养法制备猪伪狂犬抗原
[0081] 复苏液氮中冻存的BHK-21传代细胞系于底面积为75cm2的方瓶中静止培养， BHK-21悬浮细胞用培养基添加量为20ml。培养3d后收集液体中漂浮的活细胞于100ml摇 瓶中培养，在37°C，5%CO2,llOrpm的摇床中培养待摇瓶中BHK-21细胞浓度达4X106个/ ml左右时，加入新鲜培养基对摇瓶中细胞进行稀释，并转移到其他摇瓶中，使细胞终浓度为 1X106个/ml，收集摇瓶中培养72h的悬浮BHK-21细胞，使细胞总数在3X10 1(1个左右，将细 胞转移至NBS51040L生物反应器，然后添加新鲜培养基至30L，使细胞终浓度为1X106个 /ml。生物反应器培养参数为pH7. 2,温度为37°C，溶氧（Do)为60%，搅拌速度为80rpm， 细胞在生物反应器培养48h后按照M. 0.I0. 5接种伪狂犬病毒，病毒接种后观察细胞病变， 当CPE至80%以上时开始收获病毒液。对收获的病毒液进行病毒含量测定（半数组织感染 量），病毒含量为lOi^TCID^/ml，毒液中加入10% (v/v)甲醛溶液使甲醛的终浓度为0. 2% (V/V)，37°C灭活18小时，每4小时搅拌1次，每次搅拌10min。
[0082] 实施例2纯化猪伪狂犬病毒
[0083] 2. 1猪伪狂犬纯化抗原的制备：将实施例1. 2制备的猪伪狂犬灭活的抗原物100ml 加入体积比为1. 0% (体积比）TritonXI14混匀；放至于0°C-5°C混匀60分钟，放在到 37°C+0. 5°C离心分离出TritonX114和病毒粒子。上清液即为纯化的伪狂犬病毒抗原，纯 化后猪伪狂犬病毒纯化抗原的抗原用牛血清白蛋白做标准曲线，在长280nm和260nm波长 计算蛋白含量纯化后的蛋白含量为53yg/ml。
[0084] 2. 2猪伪狂犬纯化抗原的制备：将1. 2制备的猪伪狂犬灭活的培养物100ml加入 体积比为2. 0% (体积比）NP-40混匀；放在0°C_5°C混匀60分钟，放在到37°C+0. 5°C离 心分离出N