经修饰的肽,cb受体的配体,用于评估与cb受体结合的试剂盒、体外方法,用于调节cb受体 ...的制作方法
【技术领域】
[0001] 本发明涉及药学、医学、化学和生物技术领域。更具体而言，本发明描述了一种新 型的经修饰的肽，其作为大麻素（CB)受体（特别是CBl和CB2)的配体和/或其活性的调 节剂发挥作用；其还描述了用于评估与CB受体结合的试剂盒和体外方法，用于调节CB受体 活性的药物组合物和用途。
【背景技术】
[0002] 大麻素系统（包括大麻素受体（CB)--CBl和CB2及其内源性配体）在食物的摄 入控制和能量代谢中发挥作用，并且在大脑（包括皮质、海马、扁桃体、脑垂体和下丘脑）中 广泛表达。CB受体（特别是CB1)已经在若干外周器官和组织中被鉴定到，包括甲状腺、肾 上腺、生殖器官、脂肪组织、肝、肌肉和胃肠道。
[0003] 在本领域中，几种化合物已被检测到具有CB受体的调节活性，并且，其中尤其是 化合物利莫那班（Rimonabant)--用来减肥瘦腰的药物并且被广泛用于制药市场。但是， 此化合物随后被与人类中的精神疾病的发病联系在一起（主要通过穿过血脑层），然后退 出全球市场。血脑屏障是高度选择性的保护大脑的屏障，其阻止潜在有害物质通过所述系 统循环进入中枢神经系统。因此，在本领域中，需要获得新型化合物，其可调节大麻素受体 (优选CBl和/或CB2受体）的活性，但是不会穿过血脑屏障。
[0004] 本发明描述了一种新型非天然肽，其在活性、特别是在调节大麻素受体的用途和/ 或活性方面表现出令人吃惊的结果。本发明的肽还在调节所述CB受体活性和治疗代谢障 碍（例如减少肥胖）方面具有特别有用的优势，具有不穿过血脑屏障的额外优势，如本发明 人所进行的研究结果所示。
[0005] 对记录公开文献的检索表明其仅部分与本发明相关。下文描述了此类文献，将其 置于此处的目的仅是为了提供本领域当前状态的基础，因为其既未预期也未暗示本发明的 任一目的。
[0006] 文献US 2007/213302显示化合物与CBl受体的相互作用，此化合物由吡唑和其可 药用的盐组成，作为CBl受体的拮抗剂或反向激动剂。本发明不同于所述文献之处主要在 于示出了一种不包括吡唑或其盐的新型非天然肽，并且所述结果令人吃惊，特别是在与大 麻素受体相互作用的方面，这些事实在所述文献中既未被描述也未被暗示。
[0007] 文献WO 2011/011847公开了使用血加压素（hemopressin)在受试者中治疗肥胖， 还公开了血加压素是有效结合于所述CBl受体并且不穿过血脑屏障的化合物。本发明不同 于所述文献之处主要在于示出了一种衍生自血管紧张素转换酶的新型非天然肽。但是，本 发明的肽与血加压素并不相似。此外，由本发明人进行的测试结果令人吃惊，特别是在与大 麻素受体相互作用的方面，这些事实在所述文献中既未被描述也未被暗示。
[0008] 本发明人在 Novel Natural Peptide Substrates for Endopeptidase24. 15Neu rolysin, and Angiotensin-converting Enzyme(Vanessa Rioli, Fabio C.Gozzo, Andrea S.Heimann, Alessandra Linardi,Jose E.Krieger,Claudio S. Shida,Paulo C. Almeida, Stephen Hyslop, Marcos N.Eberlin, Emer S. Ferro ;7de MargO de 2003)中 所示的一些研究证明了一种"筛选"新型肽的有效技术，其被用在本发明中以检测具有用于 特异性蛋白调控的天然序列的肽。但是，没有发现此天然肽可以用于大麻素系统。本发明 不同于所述文献之处主要在于示出了一种新型非天然肽，其结果令人吃惊，特别是在与大 麻素受体相互作用的方面，这些事实在任何现有技术的文献中既未被描述也未被引用。
[0009] 本发明提供了一种新型非天然肽--其功能和用途之一是作为CB受体的配体且 不具有因为与所述血脑层的相互作用导致的不利因素，还提供了若干有用的技术效果。具 体而言，本发明中公开的是一种新型非天然肽，其具有序列SeqID: 1和/或具有与SeqID: 1 有至少70%相似性的序列。本发明的非天然肽特别适用于作为大麻素受体的配体和/或所 述CB受体活性的调节剂。本发明的非天然肽除了优于本领域中已知的配体之外，还不会与 血脑屏障相互作用，因此在哺乳动物治疗用途上提供了额外优势。
[0010] 根据所述研究文献可以看出，未发现预期或建议本发明的教导的文献，因此本发 明人认为，本文所提出的技术方案相对于现有技术而言具有新颖性和创造性。
【发明内容】
[0011] 本发明解决了本领域现有技术中已知的许多问题，例如提供了：一种新型非天然 肽；一种大麻素受体的配体；用于评估与大麻素受体结合的试剂盒和体外方法；一种提供 了上述技术效果而不通过血脑屏障的分子实体；还提供了用于治疗代谢障碍和/或肥胖的 新型替代疗法。本发明还公开了所述非天然肽用于制备药物的用途；以及用于调节CB受体 活性，从而可用于治疗代谢障碍和/或促进减肥的药物组合物。
[0012] 但是，本发明的目的之一是一种经修饰的非天然肽，其包含与肽AA1-Asp-AA 2-AA2-Ala-Asp-Asp-AA3-AA^有至少70%相似性的序列，其中：
[0013] AA1是具有0-10个氨基酸的尾部；
[0014] 八4是疏水氨基酸；
[0015] AA3是荷电氨基酸；
[0016] AA4是具有0-13个氨基酸的尾部；
[0017] 在一个优选的实施方案中，所述修饰肽包含与氨基酸序列SeqID: 1(或者也被称 为P印19)至少90%的相似性。
[0018] 在一个优选的实施方案中，所述氨基酸尾部八八1是功能化的尾部。在一个优选的 实施方案中，所述尾部是具有10个氨基酸的尾部TAT。
[0019] 在一个优选的实施方案中，所述疏水氨基酸AA2选自丙氨酸、异亮氨酸、亮氨酸、苯 丙氨酸、缬氨酸、脯氨酸、甘氨酸或它们的组合。
[0020] 在一个优选的实施方案中，所述荷电氨基酸AA3选自精氨酸、赖氨酸、天冬氨酸、谷 氨酸或它们的组合。
[0021] 在一个优选的实施方案中，所述氨基酸尾部八?没有氨基酸或所述氨基酸尾部AA 4 包含具有脯氨酸、亮氨酸和/或苏氨酸的序列。
[0022] 在一个特别优选的实施方案中，所述肽选自SeqID: I、SeqID: 2、SeqID: 3、SeqID: 4、 SeqID: 5、SeqID: 6或它们的组合。
[0023] 在另一个优选的实施方案中，所述环状肽以氨基酸序列SeqID:l、SeqID:2、 SeqID:3、SeqID:4、SeqID:5 和 / 或 SeqID:6 的环状形式示出。
[0024] 本发明的另一目的是提供了 CB受体的配体，所述配体由至少一个非天然肽组成， 此非天然肽包含与肽AA1-Asp-AA2-AA 2-Ala-Asp-Asp-AA3-AA4至少70%的相似性，其中：
[0025] AA1是具有0-10个氨基酸的尾部；
[0026] 八4是疏水氨基酸；
[0027] AA3是荷电氨基酸；
[0028] AA4是具有0-13个氨基酸的尾部；
[0029] 在一个优选的实施方案中，所述配体是CB的激动剂、拮抗剂或反向激动剂。
[0030] 在一个优选的实施方案中，所述配体是CBl的激动剂、拮抗剂或反向激动剂，和/ 或CB2的激动剂、拮抗剂或反向激动剂。
[0031] 在一个特别优选的实施方案中，所述配体选自SeqID:l、SeqID:2、SeqID:3、 SeqID:4、SeqID:5、SeqID:6、或其环状形式和/或它们的组合。
[0032] 本发明的其他目的是：用于评估与CB受体的结合的试剂盒和体外方法。所述方法 包括至少一个以下步骤：使具有CB受体的生物样品与至少一种非天然肽接触，所述非天然 肽包含与肽44 148?444441&48?48?^^444至少70%的相似性，其中 ：
[0033] AA1是具有0-10个氨基酸的尾部；
[0034] 八4是疏水氨基酸；
[0035] AA3是荷电氨基酸；
[0036] AA4是具有0-13个氨基酸的尾部；
[0037] 在一个优选的实施方案中，所述试剂盒或本发明方法中的非天然肽和/或配体是 经过化学修饰的，以便于检测/定位CB受体。在一个优选的实施方案