>[0028] -具有12-24个碳原子的脂肪酸与磷脂酰乙醇胺的酯或酰胺，和
[0029] -聚（环氧丙烷），和
[0030] -至少一个亲水基团，其含有至少一个选自以下的阳离子基团：
[0031] -具有1-12个碳原子的直链或支链烷基，且被至少一个阳离子基团打断和/或取 代，和
[0032] -亲水聚合基团，含有至少一个阳离子基团，和
[0033] -10-55mol %的助表面活性剂，其含有至少一个聚（环氧乙烷）链，所述聚（环氧 乙烷）链至少具有25个环氧乙烷单元；
[0034] -增溶脂质，其含有至少一种脂肪酸甘油酯；
[0035] -任选的辅助脂质；
[0036] 其中两性脂质、阳离子表面活性剂和助表面活性剂的摩尔百分比为相对于整体 (两性脂质/阳离子表面活性剂/助表面活性剂/任选的辅助脂质）而言。
[0037] 如下所述，该两性脂质/阳离子表面活性剂/助表面活性剂/任选的辅助脂质是 "预混物"制剂中液滴结构冠部的主要组分。
[0038] 因此，所述乳液为水包油型乳液。其可为单一型或多重型，尤其是在分散相中含有 第二水相时。优选为单一型。
[0039] 本发明所基于的意外发现在于，上述的制剂可用作转染剂和/或用于体外和/或 体内递送可调节RNA干扰内源性机制的核苷酸序列。所述制剂有利地表现出良好的生物利 用度且能够限制可调节RNA干扰内源性机制的核苷酸序列的降解（常见于其它递送系统）， 尤其是蛋白引起的降解。
[0040] 此外，所述制剂具有稳定的优势；其可储存数小时而观察不到任何降解。
[0041] ?阳离子表而活件齐Il
[0042] 本发明制剂含有一阳离子表面活性剂，包含：
[0043] -至少一种亲脂性基团，选自：
[0044] -R基，其代表了具有11-23个碳原子的线形烃链；
[0045]-具有12-24个碳原子的脂肪酸和磷脂酰乙醇胺的酯或酰胺，例如二硬脂酰磷脂 酰乙醇胺（DSPE);和
[0046]-聚（环氧丙烷），和
[0047] -至少一个亲水基团，其含有至少一个阳离子基团，选自：
[0048] -具有1-12个碳原子的直链或支链烷基，且被至少一个阳离子基团打断和/或取 代，和
[0049] -亲水性聚合基团，其含有至少一个阳离子基团，所述的聚合基团尤其选自：
[0050] -典型地含有3-500个环氧乙烷单元，优选20-200个环氧乙烷单元的聚（环氧乙 烷），且含有至少一个阳离子基团，
[0051] -多糖，例如右旋糖酐、纤维素或壳聚糖，尤其是分子量在0. 5和20kDa之间的，例 如在1和12kDa之间的。
[0052] -聚胺，例如壳聚糖或聚赖氨酸，尤其是分子量在0. 5和20kDa之间，例如在1和 12kDa之间的。
[0053] "具有12-24个碳原子的脂肪酸和磷脂酰乙醇胺的酯或酰胺"指的是下式的基团：
[0054]
[0055] 其中，
【主权项】
1. 一种纳米乳剂形式的制剂，包含一连续水相和至少一分散相，其含有： -至少5mol %的两性脂质； -15-70mol %的至少一种阳离子表面活性剂，其含有； -至少一个亲脂性基团，选自： -R或R-(C = 0)-基，其中R为具有11-23个碳原子的线形姪链， -具有12-24个碳原子脂肪酸和磯脂酷己醇胺的醋或酷胺，和 -聚（环氧丙烷），和 -至少一个亲水基团，其含有至少一个阳离子基团，选自： -具有1-12个碳原子的直链或支链烷基，且被至少一个阳离子基团打断和/或取代，和 -亲水聚合基团，含有至少一个阳离子基团，和 -10-55mol%的助表面活性剂，其含有至少一个聚（环氧己烧）链，所述聚（环氧己烧） 链至少含有25个环氧己烧单元； -增溶脂质， -任选的辅助脂质； 其中两性脂质、阳离子表面活性剂和助表面活性剂的摩尔百分比为相对于整体（两性 脂质/阳离子表面活性剂/助表面活性剂/任选的辅助脂质）而言。
2. 如权利要求1所述的制剂，其特征在于，所述阳离子表面活性剂选自： -N[l-(2, 3-二油酷氧基）丙基]-N，N，N- S甲胺， -1，2-二油酷-3- S甲胺-丙烷， -N-(2-哲己基）-N, N-二甲基-2, 3-二（十四烷基氧基-1-丙锭）， -1-巧-(油酷氧基）己基]-2-油酷基-3-(2-哲己基）咪挫咐，和 -双十八烷基酷胺基甘氨酷基精胺。
3. 如权利要求1-2任一所述的制剂，其含有辅助脂质，如1，2-二油酷-sn-甘油-3-磯 酷己醇胺。
4. 如权利要求1-3任一所述的制剂，其特征在于，所述两性脂质为磯脂。
5. 如权利要求1-4任一所述的制剂，其含有显影剂。
6. 如权利要求1-5任一所述的制剂，其含有治疗剂。
7. 如权利要求1-6任一所述的制剂，其包含连接有感兴趣分子，优选为祀向生物学配 体的助表面活性剂。
8. 如权利要求1-7任一所述的制剂，其含有能调节RNA干扰内源性机制的单链或双链 核巧酸序列，单链核巧酸序列含有少于200个碱基或双链核巧酸序列含有少于200个碱基 对。
9. 如权利要求8所述的制剂，其特征在于，所述核巧酸序列选自： -小干扰RNA ; -锁核酸讯 -合成微小RNA。
10. 如权利要求9所述的制剂，其特征在于，所述核巧酸序列是小干扰RNA。
11. 制备权利要求8-10任一所述制剂的方法，包括W下步骤： (i)制备含有增溶脂质、两性脂质、阳离子表面活性剂的油相； (ii) 制备含有助表面活性剂的水相； (iii) 在足够的剪切作用下将油相分散入水相中从而获得纳米乳剂形式的制剂，例如 权利要求1-7任一所述的；然后 (iv) 向乳剂形式的制剂，例如权利要求1-7任一所述的乳剂形式的制剂中加入能调节 RNA干扰内源性机制的单链或双链核巧酸序列，单链核巧酸序列含有少于200个碱基或双 链核巧酸序列含有少于200个碱基对；然后 (V)回收所形成的制剂。
12. 在体外向真核细胞中插入能调节RNA干扰内源性机制的单链或双链核巧酸序列的 方法，单链核巧酸序列含有少于200个碱基或双链核巧酸序列核酸含有少于200个碱基对， 所述方法包括将真核细胞与权利要求8-10任一所述制剂进行接触。
13. 权利要求8-10任一所述制剂，用于预防和/或治疗疾病。
14. 一种试剂盒，含有纳米乳剂形式的制剂，例如权利要求1-7任一所述纳米乳剂形式 的制剂，和分开的，至少一种能调节RNA干扰内源性机制的单链或双链核巧酸序列，单链核 巧酸序列含有少于200个碱基或双链核巧酸序列含有少于200个碱基对。
【专利摘要】本发明制剂涉及一种纳米乳剂形式的制剂，其含有一连续水相和至少一分散相，其可用作递送能调节内源性RNA干扰机制的核苷酸序列递送体系或作为转染剂。
【IPC分类】A61K48-00, A61K9-107, A61K9-51
【公开号】CN104684543
【申请号】CN201380051655
【发明人】Y 加西亚 F·纳瓦罗, J·布鲁尼奥克斯, X·吉迪柔, E·叙尔皮斯, I·德施亚-诺盖斯
【申请人】原子能与替代能源委员会
【公开日】2015年6月3日
【申请日】2013年8月12日
【公告号】EP2890364A1, US20150258022, WO2014032953A1