一种光甘草定冻干脂质体及其制备方法
【技术领域】
[0001] 本发明属于生物医药领域，尤其是一种透皮性能优良的光甘草定冻干脂质体的制 备方法。
【背景技术】
[0002] 随着科学技术、仪器和方法学的迅速发展，人们对于自身的认识越来越深刻，对于 皮肤生理病理的研究已经深入到基因和分子生物学水平，对相关生物医药产业的发展产生 了巨大的推动作用，许多具有生物活性的动植物成分和生物高分子成分已经应用到生物医 药行业，取得了巨大的社会和经济效益。
[0003] 但是，如何将这些具有生物活性的成分应用到生物医药领域中，面临着许多难题， 主要表现在以下方面：1、这些生物活性物质的稳定性问题，除了由其自身的结构和空间构 象决定外，外界环境因素的影响也不容小视，例如表皮活性因子溶液，在外界环境中的活性 持续时间有短短的数小时，在其被皮肤吸收发挥作用之前就基本失活了，根本不能发挥其 应有的作用和效果。2、高分子成分难于被人体皮肤吸收的问题，通常来说，活性物分子量越 小，越容易透过皮肤，一旦分子量大于600,活性物就很难被皮肤吸收了，而近年来应用的具 有特定皮肤活性功能的物质大多数是肽类等高分子物质，其分子量少则数千，多则数十万， 这就决定了它们很难透过皮肤从而被有效吸收。3、生物活性物质的可溶性问题，大部分有 效成分不能溶于水被皮肤表层吸收，很难发挥其作用。
[0004] 光甘草定能够加速血液流动，促使排汗，带走体内多余的热量，具有排毒、养颜、减 肥的作用，但是由于上述原因，很难被皮肤吸收，难以发挥其应有的作用。
【发明内容】
[0005] 本发明的目的在于克服现有技术的不足，提供一种设计合理、透皮性能优良的光 甘草定冻干脂质体的制备方法。
[0006] 本发明解决其技术问题是采取以下技术方案实现的： 一种光甘草定冻干脂质体，其构成组分及其组分的重量份数为：大豆磷脂65~70份、 胆固醇30~35份、光甘草定0. 5~30份、无水乙醇1000~1500份、磷酸盐缓冲液70~ 120 份。
[0007] 而且，所述的磷酸盐缓冲液的pH值为7. 2~7. 5。
[0008] -种光甘草定冻干脂质体的制备方法，包括以下步骤： ⑴称取大豆磷脂、胆固醇置于茄形瓶中，加入相当于大豆磷脂和胆固醇总体积6~10 倍的无水乙醇使大豆磷脂和胆固醇完全溶解； ⑵将茄形瓶置于旋转蒸发仪上，48~50°C减压蒸发溶剂，在茄形瓶中形成一层薄膜， 然后中空干燥使溶剂除尽； ⑶将光甘草定与无水乙醇按体积比1 :5混合使光甘草定完全溶解，制得光甘草定溶液 备用； ⑷将磷酸盐缓冲液加入到光甘草定溶液中形成光甘草定磷酸盐溶液； (5) 将占0. 05~0. 14倍大豆磷脂和胆固醇总质量的光甘草定磷酸盐溶液加到步骤⑵ 含薄膜的茄形瓶中，35~40°C恒温震荡至薄膜脱落，然后放置2~3h水化，水化液分别经 0. 80Mm、0. 45Mm、0. 22Mm滤膜高压挤出，制得光甘草定冻干脂质体混悬液； (6) 采用冻干法制备光甘草定冻干脂质体：取光甘草定冻干脂质体混悬液置于烧瓶中， 浸入低温浴器内，缓慢旋转40~60min，直到冷冻成膜状； (7) 将烧瓶连于冷冻干燥仪上，抽真空5~lOmin，使水分完全升华，制备出光甘草定冻 干脂质体。
[0009] -种光甘草定冻干脂质体，其构成组分及其组分的重量份数为：大豆磷脂65~70 份、胆固醇30~35份、光甘草定0. 5~30份、无水乙醇1000~1500份、冻干保护剂0. 5~ 3份，磷酸盐缓冲液70~120份。
[0010] 而且，所述的冻干保护剂为低浓度甘氨酸。
[0011] -种光甘草定冻干脂质体的制备方法，包括以下步骤： ⑴称取大豆磷脂、胆固醇置于茄形瓶中，加入相当于大豆磷脂和胆固醇总体积6~10 倍的无水乙醇使大豆磷脂和胆固醇完全溶解； ⑵将茄形瓶置于旋转蒸发仪上，48~50°C减压蒸发溶剂，在茄形瓶中形成一层薄膜， 然后中空干燥使溶剂除尽； ⑶将光甘草定与无水乙醇按体积比1 :5混合使光甘草定完全溶解，制得光甘草定溶液 备用； ⑷将磷酸盐缓冲液及冻干保护剂加入到光甘草定溶液中形成光甘草定磷酸盐溶液； (5) 将占0. 05~0. 14倍大豆磷脂和胆固醇总质量的光甘草定磷酸盐溶液加到上述含 薄膜的茄形瓶中，35~40°C恒温震荡至薄膜脱落，然后放置2~3h水化，水化液分别经 0. 80Mm、0. 45Mm、0. 22Mm滤膜高压挤出，制得光甘草定冻干脂质体混悬液； (6) 采用冻干法制备光甘草定冻干脂质体：取光甘草定冻干脂质体混悬液置于烧瓶中， 浸入低温浴器内，缓慢旋转40~60min，直到冷冻成膜状； (7) 将烧瓶连于冷冻干燥仪上，抽真空5~lOmin，使水分完全升华，制备出光甘草定冻 干脂质体。
[0012] 本发明的优点和积极效果是： 本发明以光甘草定为模型成分，并以大豆磷脂、胆固醇作为脂质体原料，采用挤出-冻 干法制备出透皮性能优良的光甘草定冻干脂质体，通过光甘草定冻干脂质体的外观、pH、粒 径、表面电荷等基本数据，以及包封率和载药量检测、体外释放和透皮吸收试验表明，本发 明的光甘草定冻干脂质体具有非常强的体外透皮吸收性能，为光甘草定冻干脂质体技术应 用于生物医药行业提供实验依据。
【具体实施方式】
[0013] 以下结合实例对本发明做进一步描述。
[0014] -种光甘草定冻干脂质体，其构成组分及其组分的重量份数为：大豆磷脂65~70 份、胆固醇30~35份、光甘草定0. 5~30份、无水乙醇1000~1500份、PBS缓冲盐（pH 7. 2 ~7. 5) 70 ~120 份。
[0015] 一种光甘草定冻干脂质体的制备方法，包括以下步骤： (1)按比例精密称取大豆磷脂、胆固醇置于茄形瓶中，加入相当于大豆磷脂和胆固醇总 体积6~10倍的无水乙醇使大豆磷脂和胆固醇完全溶解。
[0016] (2)将茄形瓶置于旋转蒸发仪上，48~50°C减压蒸发溶剂，在茄形瓶中形成一层 薄膜，然后中空干燥过夜，使溶剂除尽。
[0017] (3)按光甘草定与无水乙醇按体积比1 :5混合使光甘草定完全溶解，制得光甘草 定溶液备用。
[0018] (4)将磷酸盐缓冲液（PBSpH7. 2~7. 5)加入到步骤（3)制得的光甘草定溶液中 形成光甘草定磷酸盐溶液，磷酸盐缓冲液（PBSpH7. 2~7. 5)与光甘草定溶液的体积比为 7 ~8 :0? 3 ~0? 8〇
[0019] (5)将占0. 05~0. 14倍大豆磷脂和胆固醇总质量的光甘草定磷酸盐溶液加到上 述含薄膜的茄形瓶中，35~40°C恒温震荡至薄膜脱落，然后放置2~3h水化，水化液分别 经0. 80Mm、0. 45Mm、0. 22Mm滤膜高压挤出，制得光甘草定冻干脂质体混悬液。
[0020] (6)采用冻干法制备光甘草定冻干脂质体：取光甘草定冻干脂质体混悬液置于磨 口圆底烧瓶中，浸入低温浴器内，缓慢旋转40~60min，直到冷冻成膜状。
[0021] (7)将烧瓶连于冷冻干燥仪上，抽真空5~lOmin，使水分完全升华，制备出光甘草 定冻干脂质体。
[0022] -种光甘草定冻干脂质体，其构成组分及其组分的重量份数为：大豆磷脂65~70 份、胆固醇30~35份、光甘草定0. 5~30份、无水乙醇1000~1500份、冻干保护剂0. 5~ 3份，PBS缓冲盐（pH7. 2~7. 5) 70~120份。
[0023] 光甘草定冻干脂质体与前述光甘草定冻干脂质体的区别在于加入了冻干保护剂， 该冻干保护剂采用低浓度甘氨酸，由于氨基酸离子具有酸、碱两性，可抑制磷酸缓冲盐结 晶，在冷冻干燥过程中抑制pH值的改变而阻止蛋白质药物变性。
[0024] -种光甘草定冻干脂质体的制备方法，包括以下步骤： (1)按比例精密称取大豆磷脂、胆固醇置