于茄形瓶中，加入相当于大豆磷脂和胆固醇总 体积6~10倍的无水乙醇使大豆磷脂和胆固醇完全溶解。
[0025] (2)将茄形瓶置于旋转蒸发仪上，48~50°C减压蒸发溶剂，在茄形瓶中形成一层 薄膜，然后中空干燥过夜，使溶剂除尽。
[0026] (3)按光甘草定与无水乙醇按体积比1 :5混合使光甘草定完全溶解，制得光甘草 定溶液备用。
[0027] (4)按比例将磷酸盐缓冲液（PBSpH7. 2~7. 5)及冻干保护剂(低浓度甘氨酸)加 入到步骤（3)制得的光甘草定溶液中形成光甘草定磷酸盐溶液。
[0028] (5)将占0. 05~0. 14倍大豆磷脂和胆固醇总质量的光甘草定磷酸盐溶液加到上 述含薄膜的茄形瓶中，35~40°C恒温震荡至薄膜脱落，然后放置2~3h水化，水化液分别 经0. 80Mm、0. 45Mm、0. 22Mm滤膜高压挤出，制得光甘草定冻干脂质体混悬液。
[0029] (6)采用冻干法制备光甘草定冻干脂质体：取光甘草定冻干脂质体混悬液置于磨 口圆底烧瓶中，浸入低温浴器内，缓慢旋转40~60min，直到冷冻成膜状。
[0030] (7)将烧瓶连于冷冻干燥仪上，抽真空5~lOmin，使水分完全升华，制备出光甘草 定冻干脂质体。
[0031] 下面对光甘草定冻干脂质体（光甘草定冻干脂质体）的理化性质说明： (1)外观性质。
[0032]目测：光甘草定冻干脂质体混悬液为均匀淡黄色；光甘草定冻干脂质体(未加冻 干保护剂）为淡黄色海绵状松散粉末或块状；光甘草定冻干脂质体（加入冻干保护剂）为 流动性良好的白色粉末。
[0033] 在电镜下观察：制备的脂质体为小多室脂质体；扫描电镜下，未加冻干保护剂的 脂质体为白色蜡块状，加冻干保护剂的脂质体为白色球状。
[0034] (2) -般理化性质（pH、粒径和表面电荷）：光甘草定冻干脂质体的pH为7. 08,粒 径70. 16nm，Zeta电位为-63. 9mV(阳离子表面吸附的缓冲液中的阴离子的表现)。
[0035] 下面通过HPLC方法对光甘草定冻干脂质体的光甘草定含量进行检测： 样品处理：精密量取样品500W，加入100W10%TritonX-100,涡旋混合2min，1000 Orpm离心4min，取上清液20M1进样，在色谱条件下分析，记录峰面积，用外标法计算 光甘草定含量。
[0036]色谱固定相：Waters SYMMETRYC18 5Mm色谱柱（250_X4.6mm);流动相：甲 醇-水（58:42V/V)，流速lml/min;检测波长205nm;柱温35°C;进样量20耵。光甘草定保 留时间约为8. 8min。
[0037] 特异性：空白脂质体+10%TritonX-100、光甘草定对照品+10%TritonX-100分别进 样，发现脂质成分和TritonX-IOO对光甘草定检测无干扰，本方法具有良好的特异性。
[0038] 精密度：在空白脂质体中加入不同量的光甘草定配置成低、中、高（30、200、 700.OPg/ml)不同浓度PBS(1-10)溶液，每个浓度各6个样品，按上述分别测定日内、日间 变异，结果见表1。
[0039] 表IHPLC测定空白脂质体PBS(1-10)溶液中光甘草定的精密度
【主权项】
1. 一种光甘草定冻干脂质体，其特征在于：其构成组分及其组分的重量份数为：大豆 磷脂65~70份、胆固醇30~35份、光甘草定0. 5~30份、无水乙醇1000~1500份、磷 酸盐缓冲液70~120份。
2. 根据权利要求1所述的一种光甘草定冻干脂质体，其特征在于：所述的磷酸盐缓冲 液的pH值为7. 2~7. 5。
3. -种如权利要求1或2所述光甘草定冻干脂质体的制备方法，其特征在于：包括以 下步骤： ⑴称取大豆磷脂、胆固醇置于茄形瓶中，加入相当于大豆磷脂和胆固醇总体积6~10 倍的无水乙醇使大豆磷脂和胆固醇完全溶解； ⑵将茄形瓶置于旋转蒸发仪上，48~50°C减压蒸发溶剂，在茄形瓶中形成一层薄膜， 然后中空干燥使溶剂除尽； ⑶将光甘草定与无水乙醇按体积比1 :5混合使光甘草定完全溶解，制得光甘草定溶液 备用； ⑷将磷酸盐缓冲液加入到光甘草定溶液中形成光甘草定磷酸盐溶液； (5) 将占0. 05~0. 14倍大豆磷脂和胆固醇总质量的光甘草定磷酸盐溶液加到步骤⑵ 含薄膜的茄形瓶中，35~40°C恒温震荡至薄膜脱落，然后放置2~3h水化，水化液分别经 0. 80Mm、0. 45Mm、0. 22Mm滤膜高压挤出，制得光甘草定冻干脂质体混悬液； (6) 采用冻干法制备光甘草定冻干脂质体：取光甘草定冻干脂质体混悬液置于烧瓶中， 浸入低温浴器内，缓慢旋转40~60min，直到冷冻成膜状； (7) 将烧瓶连于冷冻干燥仪上，抽真空5~lOmin，使水分完全升华，制备出光甘草定冻 干脂质体。
4. 一种光甘草定冻干脂质体，其特征在于：其构成组分及其组分的重量份数为：大豆 磷脂65~70份、胆固醇30~35份、光甘草定0. 5~30份、无水乙醇1000~1500份、冻 干保护剂〇. 5~3份，磷酸盐缓冲液70~120份。
5. 根据权利要求4所述的一种光甘草定冻干脂质体，其特征在于：所述的磷酸盐缓冲 液的pH值为7. 2~7. 5。
6. 根据权利要求4所述的一种光甘草定冻干脂质体，其特征在于：所述的冻干保护剂 为低浓度甘氨酸。
7. -种如权利要求4至6任一项所述光甘草定冻干脂质体的制备方法，其特征在于： 包括以下步骤： ⑴称取大豆磷脂、胆固醇置于茄形瓶中，加入相当于大豆磷脂和胆固醇总体积6~10 倍的无水乙醇使大豆磷脂和胆固醇完全溶解； ⑵将茄形瓶置于旋转蒸发仪上，48~50°C减压蒸发溶剂，在茄形瓶中形成一层薄膜， 然后中空干燥使溶剂除尽； ⑶将光甘草定与无水乙醇按体积比1 :5混合使光甘草定完全溶解，制得光甘草定溶液 备用； ⑷将磷酸盐缓冲液及冻干保护剂加入到光甘草定溶液中形成光甘草定磷酸盐溶液； (5)将占0. 05~0. 14倍大豆磷脂和胆固醇总质量的光甘草定磷酸盐溶液加到上述含 薄膜的茄形瓶中，35~40°C恒温震荡至薄膜脱落，然后放置2~3h水化，水化液分别经 0. 80Mm、0. 45Mm、0. 22Mm滤膜高压挤出，制得光甘草定冻干脂质体混悬液； (6) 采用冻干法制备光甘草定冻干脂质体：取光甘草定冻干脂质体混悬液置于烧瓶中， 浸入低温浴器内，缓慢旋转40~60min，直到冷冻成膜状； (7) 将烧瓶连于冷冻干燥仪上，抽真空5~lOmin，使水分完全升华，制备出光甘草定冻 干脂质体。
【专利摘要】本发明涉及一种光甘草定冻干脂质体及其制备方法，光甘草定冻干脂质体的构成组分及其组分的重量份数为：大豆磷脂65～70份、胆固醇30～35份、光甘草定0.5～30份、无水乙醇1000～1500份、磷酸盐缓冲液70～120份；其制备方法为⑴称取大豆磷脂、胆固醇置于茄形瓶中并使用无水乙醇使其溶解；⑵将茄形瓶减压蒸发溶剂；⑶制得光甘草定溶液；⑷形成光甘草定磷酸盐溶液；⑸制备光甘草定冻干脂质体混悬液；⑹采用冻干法制备光甘草定冻干脂质体；⑺通过冷冻干燥仪抽真空5～10min，使水分完全升华，制备出光甘草定冻干脂质体。本发明设计合理，制备出的光甘草定冻干脂质体具有非常强的体外透皮吸收性能，为光甘草定冻干脂质体技术应用于生物医药行业提供实验依据。
【IPC分类】A61K31-352, A61P3-04, A61K9-127, A61P17-00
【公开号】CN104721138
【申请号】CN201310715439
【发明人】李欢, 李欣
【申请人】天津芸熙生物技术有限公司
【公开日】2015年6月24日
【申请日】2013年12月23日