1^发酵培养基的三角瓶中，37°〇、12〇1·/!^!!、 pH6. 4-7. 4厌氧摇床发酵培养48h。测定多糖产量，每株重复3次，筛选出多糖产量最高的 突变株。多糖含量最高的为293. 39mg/g，较原始出发菌株提高了 94. 99% ;将该正突变株 命名为非解乳糖链球菌UN10-1，并将其送至中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物 中心保藏，地址为北京市朝阳区北辰西路1号院3号，中国科学院微生物研宄所，保藏时间 2014年04月08日，保藏号CGMCC No. 9022,分类命名为非解乳糖链球菌Streptococcus alactolyticus〇
[0023] 其中，MRS肉汤培养基购自广东环凯微生物科技有限公司，批号：201106293,其成 分为：1%蛋白胨，1 %牛肉浸膏，0. 5%酵母粉，0. 2%枸橼酸二铵，2%葡萄糖，0. 5%乙酸钠， 0.2%磷酸二氢钾，0.058%的]\%504.7!120,0.025%的]\11130 4.4!120,0.1%(￥/^)的吐温80， 用Na2COJjf初始pH值至7. 4。
[0024] 发酵培养基为：按照乳清粉：5. 158g ;蛋白胨：0. 456g ;葡萄糖：0. 12g ;酵母粉： 0. 312g ;无机盐：0. 194g ;黄芪粉：16g ;水：200mL的重量配比称量各组分，加入500ml的三 角瓶，于高压锅中121°C，20min灭菌，调整pH至7. 4备用。
[0025] 4.发酵黄芪的制备
[0026] 将非解乳糖链球菌UN10-1CGMCC No. 9022在37°C快速复苏，然后在无菌操作台内 将解冻的菌株接入灭菌MRS肉汤培养基中，37°C厌氧培养18-24h。按2%接种量将种子液 加至新的灭菌MRS肉汤培养基中，37°C厌氧培养，时间为24h，pH值6. 4~7. 4,培养3~4 代后，再按体积分数3% (菌量约4. 5X108个/mL)的接菌量接入含有IOOmL发酵培养基的 三角瓶中，37°C、120r/min、pH6. 4-7. 4厌氧摇床发酵培养48h。发酵结束后取发酵液真空冷 冻干燥，即得发酵黄芪。
[0027] 其中，MRS肉汤培养基购自广东环凯微生物科技有限公司，批号：201106293,其成 分为：1%蛋白胨，1 %牛肉浸膏，0. 5%酵母粉，0. 2%枸橼酸二铵，2%葡萄糖，0. 5%乙酸钠， 0.2%磷酸二氢钾，0.058%的]\%504.7!120,0.025%的]\11130 4.4!120,0.1%(￥/^)的吐温80， 用Na2COJjf初始pH值至7. 4。
[0028] 发酵培养基为：按照乳清粉：5. 158g ;蛋白胨：0. 456g ;葡萄糖：0. 12g ;酵母粉： 0. 312g ;无机盐：0. 194g ;黄芪粉：16g ;水：200mL的重量配比称量各组分，加入500ml的三 角瓶，于高压锅中121°C，20min灭菌，调整pH至7. 4备用。
[0029] 一、对非解乳糖链球菌UN10-1 CGMCC No. 9022的显微观察和生化鉴定结果如下：
[0030] 形态为：菌落呈圆形、扁平、表面光滑、奶白色不透明、边缘整齐，在1~2mm之间。 显微镜下：革兰氏阳性，镜检单个菌体呈圆形或卵圆形、无芽孢、无鞭毛，菌体成对，呈链状 排列。生化鉴定：出现苦杏仁苷、纤维二糖、七叶灵、果糖、半乳糖、葡萄糖、麦芽糖、甘露醇、 甘露糖、蜜二糖、棉子糖、水杨苷、蔗糖、海藻糖、核糖、乳糖和阿拉伯糖的阳性反应，乳糖、接 触酶、氧化酶、葡萄糖酸钠、松三糖、鼠李糖、山梨醇和木糖的阴性反应。
[0031] 二、非解乳糖链球菌UN10-1 CGMCC No. 9022的遗传性状稳定性试验：
[0032] 对非解乳糖链球菌UN10-1 CGMCC No. 9022进行遗传性状稳定性实验。将UN10-1 记为第0代，连续传代5次，对第1、3、5代分别进行厌氧摇瓶发酵培养，传代培养条件 和厌氧摇瓶发酵培养条件同上，测定其多糖含量。结果表明：诱变株非解乳糖链球菌 UN10-1CGMCC No. 9022连续5代的多糖产量较原始菌株平均提高了 98. 76%，具有较好的遗 传稳定性。
[0033] 表 1
【主权项】
1. 一种预防和治疗奶牛产后不食症的中药组合物，其特征在于：所述中药组合物由以 下质量份的各组分组成：六神曲30-60份、发酵黄芪30-55份、枳壳15-45份、山楂15-45份、 甘草15-45份、茯苓15-45份、牧乐维他0. 1-0. 3份。
2. 根据权利要求1所述的中药组合物，其特征在于：所述中药组合物由以下质量份的 各组分组成：六神曲60份、发酵黄芪55份、枳壳45份、山楂40份、甘草40份、茯苓45份、 牧乐维他0. 2份。
3. 根据权利要求1或2所述的中药组合物，其特征在于：所述发酵黄芪的制备方法为： 将非解乳糖链球菌CGMCC No. 9022扩大培养后，按体积分数3%的接菌量接入发酵培养基 中，37°C、120r/min、pH6. 4-7. 4厌氧摇床发酵培养48h，发酵结束后得到发酵黄芪；所述发 酵培养基中各组分的重量配比为：乳清粉：5. 158份；蛋白胨：0. 456份；葡萄糖：0. 12份； 酵母粉：0. 312份；无机盐：0. 194份；黄芪粉：16份；水：200份；pH7. 4。
4. 权利要求1或2所述的中药组合物的制备方法，其特征在于：将配方量的各组分粉 碎成细粉、过筛，混合均匀即得。
5. 权利要求1或2所述的中药组合物在预防和治疗奶牛产后不食症中的应用。
6. -种药物，其有效成分为权利要求1或2所述的中药组合物。
【专利摘要】本发明提供一种预防和治疗奶牛产后不食症的中药组合物，所述中药组合物由以下质量份的各组分组成：六神曲30-60份、发酵黄芪30-55份、枳壳15-45份、山楂15-45份、甘草15-45份、茯苓15-45份、牧乐维他0.1-0.3份。本发明的中药组合物在产前、产后施予产犊母牛可改善母牛对饲料适口性，提高其自身防御力，有效防治奶牛产后不食症及因能量负平衡引起的代谢疾病和感染性疾病的发生，促进产后正常生理功能的恢复，从而提高奶牛的生产性能。CGMCC No.422720101019CGMCC No.902220140408
【IPC分类】A61P1-14, A61K36-752
【公开号】CN104825601
【申请号】CN201510159670
【发明人】李建喜, 张景艳, 张宏, 杨志强, 王学智, 王磊, 王旭荣, 张凯, 孟嘉仁, 秦哲, 孔晓军
【申请人】中国农业科学院兰州畜牧与兽药研究所
【公开日】2015年8月12日
【申请日】2015年4月3日