速：1. OmL ? mirT1;
[0038] 检测波长：240nm ;柱温：30°C ;进样量10 y L。
[0039] 对用10批不同产地、批次竹节参制备的提取物进行分析，建立指纹图谱进行匹 配，结果1~10号峰在10批样品色谱图中均出现。因此标定10个峰为共有指纹峰，据此 建立该提取物的HPLC指纹图谱。HPLC图见图1。
[0040] 实施例3 :竹节参提取物药理试验
[0041] 1、材料与试剂：新西兰大耳白兔，雄性，体重1. 6~2. 5kg。凝血酶和纤维蛋白原 (临用前配制）为上海生物制品研宄所产品。
[0042] 2、样品的制备：按照实施例1制备竹节参提取物，取10. 80mg提取物加10%乙醇 溶液稀释成不同质量浓度。
[0043] 3、体外抗凝血作用：
[0044] (1)对家兔血浆复钙时间的影响。家兔耳缘静脉取血4. 5mL，加至含有38g/L枸 橡酸钠〇. 5mL的10mL离心管中，混勾，1000r/min离心10min，取上清液备用。另取96孔 板1个，实验组每孔加入混合血浆〇. lmL及不同质量浓度竹节参提取物（0. 216、0. 108、 0. 054mg/mL)各0. lmL，对照组加入混合血浆0. lmL及10 %乙醇溶液0. lmL，于37°C温育 lmin后分别向每孔加入2. 775g/LCaCl2溶液0. lmL，计时，直到检测到纤维蛋白丝时停止计 时，重复10次，求平均值，即为血浆复钙时间。
[0045] (2)对凝血酶时间的影响。同上制备混合血浆，在96孔板加入混合血浆和不同质 量浓度竹节参提取物（〇. 216、0. 108、0. 054mg/mL)各0. lmL，37°C温育3min，再加入已预温 的1X104U/L凝血酶0. lmL，混勾，记录血浆凝固所需时间。以10%乙醇溶液为对照，每组 重复10次，取平均值。
[0046] 4、体外抗血栓作用：
[0047] (1)溶栓作用。家兔耳缘静脉采血置试管中，按体积比1 : 9加入质量浓度为38g/ L枸橼酸钠溶液，然后依次加入纤维蛋白原溶液（质量分数为0. 5% )、CaCl2溶液（55. 5g/ L)和凝血酶溶液（1. OX 105U/L)，加入量为每毫升血中加入纤维蛋白原溶液20 y L、CaClj§ 液10 y L和凝血酶溶液20 y L。混匀，注入到内径为8mm的玻璃试管中，37°C水浴20min后 取出血栓，切成5mm的小段，放入装有不同质量浓度竹节参提取物（0. 216、0. 108、0. 054mg/ mL)和10%乙醇溶液各2mL的试管中，37°C温育，于0、4、12、24、48h分别测定剩余血栓段的 质量，计算血栓溶解率，重复测定10次。
[0048]
[0049] (2)对全血凝块的溶解作用。家兔心脏采血20mL置于表面皿中，2h后自然凝固 后切成0.3cm 3的小块，用生理盐水淋洗3遍待用。将不同质量浓度竹节参提取物（0.216、 0. 108、0.054mg/mL)及10%乙醇溶液各2mL加入不同西林瓶中，每组5小瓶，再向各瓶中随 机加入2个血块，37°C水浴保温，观察血块溶解情况，分别于0、12、24、48h分别测血块的质 量，计算全血凝块溶解率。
[0050]
[0051] 5、结果：不同质量浓度的竹节参提取物均能显著延长家兔血浆复钙时间和凝血酶 时间（见表1);与对照组比较，竹节参提取物在不同时间点均显示出较强的溶解全血凝块 的作用，且随着给药时间的延长，全血凝块溶解率增加（表2)。
[0052] 表1竹节参提取物对家兔血浆复钙时间和凝血酶时间的影响
[0053]
[0054] 备注：与10%乙醇组比较，各给药组P< 0. 01
[0055] 表2竹节参提取物对体外血栓与全血凝块的溶解作用
[0056]
[0057] 备注：与10%乙醇组比较，各给药组P< 0. 01
[0058] 实施例4 :片剂的制备
[0059] 按实施例1方法先制得提取物，按其与赋形剂重量比为1 : 8的比例加入赋形剂， 制粒压片。
[0060] 实施例5 : 口服液的制备
[0061] 按实施例1方法先制得提取物，按常规口服液制法制成口服液。
[0062] 实施例6 :胶囊剂或颗粒剂的制备
[0063] 按实施例1方法先制得提取物，按其与赋形剂重量比为1 : 9的比例加入赋形剂， 制成胶囊或颗粒剂。
[0064] 实施例7 :注射液的制备
[0065] 按实施例1方法制得提取物，加注射用水，精滤，灌封灭菌制成注射液。
[0066] 实施例8 :无菌粉针的制备
[0067] 按实施例1方法先制得提取物，溶于无菌注射用水中，搅拌使溶，用无菌抽滤漏斗 过滤，再无菌精滤，分装于安瓿，低温冷冻干燥后无菌熔封得粉针剂。
【主权项】
1. 一种竹节参提取物，其特征在于所述提取物由以下方法制备： 步骤一：竹节参晒干，粉碎； 步骤二：用95%乙醇热回流提取，合并提取液，浓缩至无醇味得到浓缩液； 步骤三：对步骤二浓缩液依次用石油醚、乙酸乙酯和水饱和的正丁醇萃取，分别得到石 油醚萃取物、乙酸乙酯萃取物和正丁醇萃取物； 步骤四：正丁醇萃取物用DlOl大孔树脂富集，先用10%乙醇冲洗10个柱体积除去多 糖，再用70%乙醇洗脱8个柱体积，收集70%洗脱液，减压浓缩，喷雾干燥。2. 根据权利要求1所述的竹节参提取物，其特征在于：所述提取物的液相分析方法 为： 色谱柱：Agilent TC C18 柱（4.6mmX250mm，5iim); 流动相：A为甲醇，B为0. 1%甲酸溶液(三乙胺调节pH值至6. 0); 梯度洗脱程序：〇~5min，A 35% ;5~40min，A 35% - 70% ;40~57min，A 70% - 95% ; 57~65min，A 95% ; 流动相流速：1. OmL ? mirT1; 检测波长：240nm ;柱温：30°C ; 进样量：10 yL。3. 药物制剂，其特征在于：所述制剂含有治疗有效量的权利要求1所述的竹节参提取 物和药学上可接受的载体。4. 如权利要求1所述的竹节参提取物在制备治疗血瘀疾病药物中的应用。5. 如权利要求3所述的药物制剂在制备治疗血瘀疾病药物中的应用。
【专利摘要】本发明公开了一种竹节参提取物及其医药用途，属于中药领域，具体涉及一种竹节参提取物及含有该提取物的药物制剂，可以用来制备治疗血瘀疾病的药物。本发明通过对竹节参的乙醇提取物采用液萃取初步富集、大孔树脂除杂后进一步富集的方法得到活性组分富集的提取物，具有显著的抗凝血和抗血栓活性。本发明提供的液相分析方法可以用于建立该提取物的指纹图谱，以控制不同批次提取物的批间一致性。
【IPC分类】A61K36/258, A61P7/02
【公开号】CN104958333
【申请号】CN201510310430
【发明人】徐蒙蒙
【申请人】徐蒙蒙
【公开日】2015年10月7日
【申请日】2015年6月9日