保护剂的Tris缓冲液加入 到步骤1所得脂质体薄膜中洗膜，得粗脂质体混悬液，将所得混悬液在55°C水浴磁力搅拌 55min，然后有效超声震荡处理15min(每次有效超声5min，间隔5min)后，得β -胡萝卜素 脂质体混悬液；
[0038] 步骤3,取0. 146g低分子量壳聚糖将其溶解在146mL浓度为4% (w/v)的柠檬 酸溶液中，静置12h，使其充分溶解后得浓度为lmg/mL的壳聚糖溶液；取IOOmL步骤2制 得的β-胡萝卜素脂质体混悬液以〇. lmL/s的速度滴加到IOOmL上述壳聚糖溶液中，在 500rmp速度下搅拌55min，使其混合均勾后，将混合物在冰浴中有效超声震荡15min(每次 超声5min，间隔5min)，密封放置在4°C环境中16h，然后将其在15000rpm的转速下离心处 理30min，最后将离心处理后的沉淀物用IOOmL蒸馏水溶解，得壳聚糖-包脂质体溶液；
[0039] 步骤4,将0. 146g透明质酸钠溶，解在146mL双蒸水中，静置8h，使其充分溶 解，得浓度为lmg/mL的透明质酸溶液；取IOOmL步骤3制得的壳聚糖-包脂质体溶液以 0. lmL/s的速度滴加到IOOmL透明质酸溶液中，滴加完后继续搅拌55min，冰浴有效超声震 荡15min (每次超声5min，间隔5min)，得透明质酸-壳聚糖-脂质体混悬液，然后依次过 0. 45 μ m微滤膜和0. 22 μ m微滤膜进行整粒；将过滤得到的透明质酸-壳聚糖-脂质体混 悬液在-60 ± I °C和10 ± I °C环境条件下反复冻溶两次，分装入西林瓶中在-60 ± I °C环境条 件下预冻30h后，再在-52±2°C、真空度小于IOOmT的环境条件下冷冻干燥25h，即得脂质 体冻干粉。
[0040] 实施例2
[0041] 步骤1分别称取2. 200g蛋黄卵磷脂、0. 220g双十六烷基磷酸、0. 100gf3-胡萝卜 素晶体、0. 550g胆固醇、I. 730g吐温-80、0. 10(^￥￡及0. 100gVe溶解于30mL无水乙醇与氯仿 的混合物中，混合物中无水乙醇与氯仿的体积比为1:2,常温磁力搅拌到各药品完全溶解。 将完全溶解后溶液倒入圆底烧瓶在温度为40°C、压力为0. 008Mpa条件下在旋转蒸发器中 旋转蒸发后，得脂质体薄膜；
[0042] 步骤2,称取I. 760g甘露醇和2. 640g蔗糖溶解于150mL浓度为0. lmol/L的Tris 缓冲液中，搅拌至完全溶解，得含保护剂的Tris缓冲液；将含保护剂的Tris缓冲液加入到 上步旋转蒸发制得的脂质体薄膜中洗膜，得粗脂质体混悬液，将所得混悬液在45°C水浴磁 力搅拌60min，然后在冰水浴有效超声震荡处理15min (每次超声5min，间隔5min)后，得 胡萝卜素脂质体混悬液；
[0043] 步骤3,取0. 300g低分子量壳聚糖将其溶解在146mL浓度为4% (w/v)的柠檬酸溶 液中，静置8h，使其充分溶解后，得浓度为2. 055mg/mL的壳聚糖溶液；取IOOmL步骤2制得 的β -胡萝卜素脂质体混悬液以〇. lmL/s的速度滴加到IOOmL壳聚糖溶液中，在500rmp速 度下搅拌60min，使其混合均勾后，将混合物在冰浴中有效超声震荡15min (每次超声5min， 间隔5min)，密封放置在4°C环境中16h，然后将其在15000rpm的转速下离心处理30min，最 后将离心处理后的沉淀物用IOOmL蒸馏水溶解，得壳聚糖-包脂质体溶液；
[0044] 步骤4,将0. 300g透明质酸钠溶解在146mL双蒸水中，静置12h，使其充分溶解， 得浓度为2. 055mg/mL的透明质酸溶液；取IOOmL步骤3制得的壳聚糖-包脂质体溶液以 0. lmL/s的速度滴加到IOOmL透明质酸溶液中，滴加完后继续搅拌60min，冰浴有效超声震 荡IOmin (超声5min，间隔5min)，得透明质酸-壳聚糖-脂质体混悬液，然后依次过0. 45 μπι 微滤膜和〇. 22 μ m微滤膜进行整粒；将过滤得到的混悬液在-60 ±1°C和10 ±1°C环境条件 下反复冻溶三次后，分装入西林瓶中在-60 ± I °C环境条件下预冻30h后，再在-52 ± 2 °C、真 空度小于IOOmT的环境条件下冷冻干燥30h，即得脂质体冻干粉。
[0045] 实施例3
[0046] 步骤1分别称取2. 600g蛋黄卵磷脂、0. 260g双十六烷基磷酸、0. 030g β -胡萝卜 素晶体、0. 650g胆固醇、1.0 OOg吐温-80、0. 03(^￥￡及0. 030gV。溶解于30mL无水乙醇与氯仿 的混合物中，混合物中无水乙醇与氯仿的体积比为1:2,常温磁力搅拌到各药品完全溶解。 将完全溶解后溶液倒入圆底烧瓶在温度为40°C、压力为0. 008Mpa条件下在旋转蒸发器中 旋转蒸发后，得脂质体薄膜；
[0047] 步骤2,称取2. 080g甘露醇和3. 120g蔗糖溶解于浓度为150mL浓度为0. lmol/L的 Tris缓冲液中，搅拌至完全溶解，得含保护剂的Tris缓冲液；将含保护剂的Tris缓冲液加 入到上步旋转蒸发制得的脂质体薄膜中洗膜，得粗脂质体混悬液，将所得混悬液在50°C水 浴磁力搅拌40min，然后有效超声震荡处理15min(每次超声5min，间隔5min)后，得β -胡 萝卜素脂质体混悬液；
[0048] 步骤3,取0. 100g低分子量壳聚糖将其溶解在146mL浓度为4% (w/v)的柠檬酸 溶液中，静置16h，使其充分溶解后，得浓度为0. 685mg/mL的壳聚糖溶液；取IOOmL步骤2制 得的β -胡萝卜素脂质体混悬液以〇. lmL/s的速度滴加到IOOmL壳聚糖溶液中，在500rmp 速度下搅拌lh，使其混合均匀后，将混合物在冰浴中有效超声震荡15min(每次超声5min， 间隔5min)，放置在4°C环境中16h，然后将其在15000rpm的转速下离心处理30min，最后将 离心处理后的沉淀物用蒸馏水溶解，得壳聚糖-包脂质体溶液；
[0049] 步骤4,将0. 100g透明质酸钠溶解在146mL双蒸水中，静置16h，使其充分溶解， 得浓度为〇. 685mg/mL的透明质酸溶液；取IOOmL步骤3制得的壳聚糖-包脂质体溶液以 0. lmL/s的速度滴加到IOOmL透明质酸溶液中，滴加完后继续搅拌60min，冰浴有效超声震 荡IOmin (每次超声5min，间隔5min)，得透明质酸-壳聚糖-脂质体混悬液，然后依次过 0. 45 μ m微滤膜和0. 22 μ m微滤膜进行整粒；将过滤得到的混悬液在-60 ± 1°C和10 ± 1°C 环境条件下反复冻溶三次后，分装入西林瓶中在_60±1°C环境条件下预冻30h后，再 在-52±2°C、真空度小于IOOmT的环境条件下冷冻干燥30h，即得纳米脂质体粉末。
[0050] 对比例
[0051] 步骤1，分别称取2.400g蛋黄卵磷脂、0. 240g双十六烷基磷酸、0.047gf3-胡萝卜 素晶体、0. 600g胆固醇、I. 471g吐温-80、0. 0758￥￡及0. 075gVc溶解于30mL无水乙醇与氯仿 的混合物中，混合物中无水乙醇与氯仿的体积比为1:2,常温磁力搅拌到各药品完全溶解， 将完全溶解后溶液倒入圆底烧瓶在温度为40°C、压力为0. 008Mpa条件下在旋转蒸发器中 旋转蒸发后，得脂质体薄膜；
[0052] 步骤2,称取I. 920g甘露醇和2. 880g蔗糖溶解于150mL浓度为0. lmol/L的Tris 缓冲液中，搅拌至完全溶解，得含保护剂的Tris缓冲液；将含保护剂的Tris缓冲液加入 到步骤1所得脂质体薄膜中洗膜，得粗脂质体混悬液，将所得混悬液在55°C水浴磁力搅拌 55min，然后有效超声震荡处理15min(每次有效超声5min，间隔5min)后，得β -胡萝卜素 脂质体混悬液；
[0053] 步骤3,取0. 146g低分子量壳聚糖将其溶解在146mL浓度为4% (w/v)的柠檬 酸溶液中，静置12h，使其充分溶解后得浓度为lmg/mL的壳聚糖溶液；取IOOmL步骤2制 得的β-胡萝卜素脂质体混悬液以〇. lmL/s的速度滴加到IOOmL上述壳聚糖溶液中，在 500rmp速度下搅拌55min，使其混合均勾后，将混合物在冰浴中有效超声震荡15min(每次 超声5min，间隔5min)，密封放置在4°C环境中16h，然后将其在15000rpm的转速下离心处 理30min，最后将离心处理后的沉淀物用IOOmL蒸馏水溶解，得壳聚糖-包脂质体溶液。
[0054] 图1为本发明双重修饰胡萝卜素脂质体的制备流程图，本发明双重修饰 胡萝卜素脂质体制备过程中利用有效超声震荡，过膜整粒的作用，使透明质酸-壳聚 糖-脂质体粒径大小均匀，分散性好，不易堵塞皮肤的毛孔。平均粒径为240. 45±0. 28nm， Zeta电位为-36. 3 ± 2. 5mV ;本发明实施例1所得脂质体的粒径分布图，如图2所示，所得脂 质体的粒径范围为210~270nm ;对比例是只用壳聚糖包覆的脂质体，其粒径分布图如图3 所示；图4为本发明实施例1和对比例所得脂质体体外细胞缓释图，是在pH =