大吴风总黄酮微波辅助双水相萃取工艺及其应用
【技术领域】
[0001] 本发明涉及一种植物有效成分提取工艺，具体涉及大吴风总黄酮微波辅助双水相 萃取工艺及响应面优化方法。
【背景技术】
[0002] 大吴风草Farfugiumjaponicum(L.f.)Kitam.为菊科管状花亚科千里光族款冬亚 族大吴风草属，多年生草本植物，全株入药。别名莲蓬草（《福建民间草药》)、独脚莲（《质问 本草》)、野金瓜（《浙江民间常用草药》）。大吴风草的嫩叶和茎可作为蔬菜食用，"辛、温、无 毒，性凉、味苦"，并具有退热、解毒、活血之功效。民间广泛用于治疗湿疹、咳嗽、支气管炎、 淋巴腺炎、痢疾等疾病。大吴风草作为药食两用的资源植物具有较高的开发价值。黄酮类 物质具有抗癌、抗病毒，调节免疫力、治疗心脑血管疾病、骨质疏松和糖尿病并发症等多种 生理活性药用作用。研究表明黄酮类物质具有很强的抗氧化作用，能清除人体中有害的超 氧自由基团，具有抗衰老、增强机体免疫力等生理活性。但是目前针对于大吴风总黄酮的提 取方法和抑菌活性方面研究的资料非常少，究其主要原因是利用现有的萃取技术很难获得 纯度较高的大吴风总黄酮，因此在开展相关研究时收到局限。
[0003] 有鉴于此，需要发明一种大吴风总黄酮的高纯度提取工艺，并开展其药理研究。
【发明内容】
[0004] 本发明的目的在于克服现有技术的缺陷，提供一种方法简单、提取纯度高的大吴 风总黄酮微波辅助双水相萃取工艺，并同时提供其抗菌应用。
[0005] 为了实现上述目的，本发明采取的技术方案如下： 本发明一方面提供了一种大吴风总黄酮微波辅助双水相萃取工艺，其关键技术点在 于，包括如下步骤： 1) 大吴风粗提液的提取 选取大吴风，粉碎，称取大吴风粉末，按1:30-35(g:mL)料液比，加入提取剂体积分数 为60%-70%的乙醇溶液，20-30°C下，对混合液微波处理20-25min，然后置于60°C恒温水浴 锅中浸提1-1. 5h，离心，取上清液，得到粗提液； 2) 双水相萃取 将步骤1)得到的粗提液，加入C2H5OH- (NH4) 2S04形成的双水相体系，所述C2H50H的质量 分数为20%-28%，所述（NH4)2SO4的质量分数为16%-24%，加入质量分数为1. 5%-3%的NaCl， 调节pH值为6-8,混勾，分相； 3) 减压蒸馏、干燥 取出富含大吴风总黄酮的乙醇上相，进行减压蒸馏、浓缩溶液，然后将浓缩液进行真空 干燥，得到大吴风总黄酮。
[0006] 作为本发明进一步的改进，所述步骤2)中包含有质量分数为0. 3%-0. 5%的羟丙 基-(6-环糊精。
[0007] 作为本发明进一步的改进，所述大吴风粗提液在双水相体系中的质量分数为 10%-19%〇
[0008] 作为本发明进一步的改进，所述分相温度为15_35°C，分相时间为2-4小时。
[0009] 作为本发明进一步的改进，所述的真空干燥的温度为60_80°C。
[0010] 本发明另一方面，提供了一种上述方法得到的大吴风总黄酮在制备抑菌产品中的 应用。
[0011] 本发明中"加入质量分数为1. 5%-3%的NaCl"，是指加入双水相中NaCl的质量分 数为L5%-3%。
[0012] 本发明中"质量分数为0. 3%_0. 5%的羟丙基-P-环糊精"是指双水相中羟丙 基-0 -环糊精的质量分数为〇. 3%_0. 5%。
[0013] 基于黄酮的多种优良药用性能以及植物源食药同补的广泛认可，植物中黄酮的提 取和合理使用，已经成为业内研发的热点。不同的植物黄酮存在不同的药理活性，为了得到 高纯度的大吴风总黄酮，并开发其药用价值，发明人进行了大量的研究工作。发明人尝试 了利用不同相的双水相萃取法进行大吴风总黄酮的萃取，大吴风总黄酮的分配系数和萃取 率均不理想。原因可能为微波提取时，粗提液中掺杂了较多的杂质成分，致使在双水相萃取 时，较多的杂质混合大吴风总黄酮进入了上相，使其纯度和萃取率受到影响。发明人放弃了 微波辅助提取法，采用常规的固液浸提的方法进行粗提，虽然筛选双水相条件可以获得纯 度满意的大吴风总黄酮，但是其提取率偏低，无法满足工业生产要求，并造成了资源浪费， 并不可取。发明人将关注点放到如何优选双水相萃取步骤的研究，经过大量的试验和创造 性的劳动，惊喜的发现，在双水相体系中加入羟丙基P环糊精可以达到良好的萃取分离效 果。分析其原因是羟丙基0环糊精将杂质物质选择性的进行了包裹，由于羟丙基0环糊 精的水溶性大，将杂质滞留在下相中，达到了和大吴风黄酮的分离。本发明人对提取工艺各 条件参数进行了充分深入的研究，形成了本发明。
[0014] 与现有技术相比，本发明取得有益效果为： 本发明针对大吴风本身，采用微波辅助双水相萃取工艺，使大吴风总黄酮的提取率变 高，杂质成分的提取率变低，使最终得到的大吴风总黄酮的纯度和收率显著提高。
[0015] 本发明在双水相萃取工艺中加入羟丙基P环糊精，可以有效提高大吴风总黄酮 的分配系数和萃取率，萃取率可以高达97%。
[0016] 本发明操作工艺简单、成本低、易操作，可以用于工业产业化生产。
【具体实施方式】
[0017] 以下结合具体实施例对本发明进行进一步详细的叙述。
[0018] 实施例1 一种大吴风总黄酮微波辅助双水相萃取工艺，包括如下步骤： 1) 大吴风粗提液的提取 准确称取〇. 5Kg大吴风粉末，加入提取剂体积分数为60%乙醇溶液15L，与大吴风粉 末混合，浸提。首先在25°C下，对混合液微波处理25min，然后置于60°C恒温水浴锅中浸提 I. 5h，离心，取上清液，得到粗提物； 2) 双水相萃取 将步骤I)得到的粗提液，加入C2H5OH- (NH4) 2S04形成的双水相体系，使粗提液在双水相 体系中的质量分数为19%，所述C2H5OH的质量分数为20%，所述（NH4) 2S04的质量分数为16%， 加入质量分数为2. 68%的NaCl，加入质量分数为0. 5%的羟丙基-P-环糊精，调节pH值为 7. 64,混勾，分相，分相温度为25°C，分相时间为2h。
[0019] 3)减压蒸馏、干燥 取出富含大吴风总黄酮的乙醇上相，进行减压蒸馏、浓缩溶液，然后将浓缩液在60°C进 行真空干燥，得到大吴风总黄酮0. 〇5Kg，UV检测含量96. 3%。
[0020] 实施例2 一种大吴风总黄酮微波辅助双水相萃取工艺，包括如下步骤： 1)大吴风粗提液的提取 准确称取〇. 5Kg大吴风粉末，加入提取剂体积分数为60%乙醇溶液15L，与大吴风粉末 混合，浸提。首先在25°C下，对混合液微波处理20min，然后置于60°C恒温水浴锅中浸提lh， 离心，取上清液，得到粗提物。
[0021] 2)双水相萃取 将步骤1)得到的粗提液，加入C2H5OH- (NH4) 2S04形成的双水相体系，使粗提液在双水相 体系中的质量分数为19%，所述C2H5OH的质量分数为28%，所述（NH4) 2S04的质量分数为24%， 加入质量分数为1. 5%的NaCl，加入质量分数为0. 3%的羟丙基-P-环糊精，调节pH值为 6,混勾，分相，分相温度为25°C，分相时间为2h。
[0022] 3)减压蒸馏、干燥 取出富含大吴风总黄酮的乙醇上相，进行减压蒸馏、浓缩溶液，然后将浓缩液在60°C进 行真空干燥，得到大吴风总黄酮0. 〇49Kg，UV检测含量96. 0%。
[0023] 实施例3 一种大吴风总黄酮微波辅助双水相萃取工艺，包括如下步骤： 1)大吴风粗提液的提取 准确称取〇. 5Kg大吴风粉末，加入提取剂体积分数为60%乙醇溶液15L，与大吴风粉末 混合，浸提。首先在25°C下，对混合液微波处理20min，然后置于60°C恒温水浴锅中浸提lh， 离心，取上清液，得到粗提物。
[0024] 2)双水相萃取 将步骤1)得到的粗提液，加入C2H5OH- (NH4) 2S04形成的双水相体系，使粗提液在双水相 体系中的质量分数为10%，所述C2H5OH的质量分数为24%，所述（NH4) 2S04的质量分数为18%， 加入质量分数为3%的NaCl，加入质量分数为0. 4%的羟丙基P环糊精，调节pH值8,混匀， 分相，分相温度为25°C，分相时间为2h。
[0025] 3)减压蒸馏、干燥 取出富含大吴风总黄酮的乙醇上相，进行减压蒸馏、浓缩溶液，然后将浓缩液在60°C进 行真空干燥，得到大吴风总黄酮0. 〇51Kg，UV检测含量为96. 1%。
[0026] 实施例4抑菌试验 采用K-B纸片扩散法，在无菌的条件下，取IOOuL菌种于MH(MullerHintonagar)培 养基内，密封并轻轻摇匀，置于摇床37°C培养18h。取适量种供试菌液于试管中，稀释成 0. 5麦氏标准浊度。将蘸取供试药溶液直径为7mm的无菌滤纸片，均匀摆放在涂有菌悬液 的MHA培养基上，每个培养皿中均摆放4个纸片，分别配置高中低3个剂量的TFF和阳性对 照药物：