微孔板的各孔中。然后，对于上述各孔，用酶标仪测定来源于AGEs的荧光（激发波长370nm、 检测波长440nm)。同时，作为对照，制备不添加上述提取样品的反应液，同样地进行测定。 然后，将测定值换算成以5 y g/mL硫酸奎宁溶液的荧光值为1000时的相对值，由下述式算 出OPH的AGEs分解活性增强率（％ )。由下述式算出的AGEs分解活性增强率表示实施例 (添加提取样品；以下表示为S)的分解活性相对于对照（未添加提取样品；以下表示为C) 的OPH的分解活性的增强率。
[0095] OPH 的 AGEs 分解活性增强率（％ ) = [I- (S/C) ] X 100
[0096] [表 1]
[0097](反应液组成）
[0099] 将这些结果示于下述表2中。如下述表2所示，添加有上述提取样品的实施例显 示出比对照更优良的OPH的活性增强，特别优选菱提取物显示出显著的活性增强。这样，利 用各植物提取物，能够增强OPH的活性，因此，可以说由此能够促进AGE化蛋白质的分解除 去。
[0100] [表 2]
[0101]
[0102] [实施例2]
[0103] 本例中，以AGE化人血清白蛋白作为指标，评价超滤后的各植物提取物对OPH活性 的影响。
[0104] (1)植物的提取样品的制备
[0105] 制备以下所示的植物的干燥样品，与上述实施例1同样地进行提取处理，然后，通 过离心分离回收上清。然后，将上述上清用分级分子量IOkDa的超滤过滤器（商品名7 S 3 卜7 (Amicon Ultra)-0.5离心式过滤器单元，安装有卜7七；P (Ultracel)-IO 膜，力P夕公司（力P夕S y示7事业本部）制）进行超滤，回收分子量小于IOkDa的低分 子量级分，作为提取样品。
[0106] 菱：种皮 [0107] 甜菊：叶
[0108] 迷迭香：叶
[0109] 百里香：叶
[0110] 菊（食用菊）：花瓣
[0111] 香薄荷：叶和花穗
[0112] 留兰香：叶
[0113] (2)利用OPH的AGEs分解活性的测定
[0114] 使用上述实施例1的AGE化人血清白蛋白（AGE-HSA)作为OPH的分解活性测定 用的基质。然后，制备下述组成的四种反应液（A~D)(n = 3)。在反应液中，各成分以 Tri s-HCl、提取样品、OPH、AGE-HAS的顺序进行添加。
[0115] [表 3]
[0116]
[0117] 将上述反应液混合后，在37°C下孵育18小时。孵育后，添加7%高氯酸（PCA)水 溶液100 y L，进行20分钟冰冷后，在4°C下进行离心分离，回收沉淀物。将上述沉淀物用 200mmol/L Tris-HCl (pH7. 4) 350 y L溶解，将所得到的溶液以每孔200 y L添加到96孔黑色 微孔板的各孔中。然后，对于上述各孔，用酶标仪测定来源于AGEs的荧光（激发波长370nm、 检测波长440nm)。然后，将测定值换算成以5 y g/mL硫酸奎宁溶液的荧光值为1000时的相 对值，由下述式算出OPH的AGEs分解活性增强率（％)。
[0118] OPH 的 AGEs 分解活性增强率（％) = [I- (A-C-D) AB-C) ] X 100
[0119] A :反应液A的相对值
[0120] B :反应液B的相对值
[0121] C :反应液C的相对值
[0122] D :反应液D的相对值
[0123] 将这些结果示于下述表4中。如下述表4所示，添加有通过超滤以低分子量级分 回收的上述样品的实施例显示出比对照更优良的OPH的活性增强，特别是百里香显示出显 著的活性增强。这样，利用各植物提取物，能够增强OPH的活性，因此，可以说由此能够促进 AGE化蛋白质的分解除去。
[0124] [表 4]
[0125]
[0126] [实施例3]
[0127] 本例中，以AGE化胶原作为指标，评价各植物提取物对OPH活性的影响。
[0128] (1)植物的提取样品的制备
[0129] 准备以下所示的植物的干燥样品，与上述实施例1同样地进行提取处理，制备提 取样品。
[0130] 菱：种皮
[0131] 甜菊：叶
[0132] 迷迭香：叶
[0133] 百里香：叶
[0134] 菊（食用菊）：花瓣
[0135] 香薄荷：叶和花穗
[0136] 艾草：叶
[0137] 栗：外皮或内皮
[0138] 留兰香：叶
[0139] 马郁兰：叶
[0140] 胡椒薄荷：叶
[0141 ] 香蜂草：叶
[0142] (2)利用OPH的AGEs分解活性的测定
[0143] 使用胶原（I型胶原，来源于牛真皮（胃蛋白酶可溶），二7匕°公司制造）来制备 AGE化胶原，将其作为OPH的分解活性测定用的基质使用。使用胶原来代替上述人血清白蛋 白，在AGE化胶原的制备方法中将孵育时间的40小时设定为10天，除此以外，与上述实施 例1同样地进行AGEs分解活性的测定。
[0144] 将这些结果示于下述表5中。如下述表5所示，添加有上述提取样品的实施例显 示出比对照更优良的OPH的活性增强，特别优选迷迭香的提取物和栗（内皮）的提取物显 示出显著的活性增强。这样，利用各植物提取物，能够增强OPH的活性，因此，可以说由此能 够促进AGE化蛋白质的分解除去。
[0145] [表 5]
[0146]
[0147] 以上，参考实施方式对本申请发明进行了说明，但本申请发明不限于上述实施方 式。本申请发明的构成和细节中，可以在本申请发明的范围内进行本领域技术人员能够理 解的各种变更。
[0148] 本申请要求以2013年2月18日提出的日本专利申请2013-029339为基础的优先 权，将其全部公开内容都并入本说明书中。
[0149] 产业上的可利用性
[0150] 根据本发明，能够实现OPH活性的增强。因此，本发明能够利用于氧化蛋白和糖化 蛋白等伤害蛋白的分解促进，也能够利用于生物体内生成的伤害蛋白所导致的疾病、组织 的衰老和组织的功能降低的治疗和预防。另外，本发明利用自古以来利用的植物的提取物， 因此安全性优良，上述植物提取物能够大量获得，因此生产率也优良。本发明能够应用于工 业制品、食品、药物等宽泛的领域。
【主权项】
1. 一种氧化蛋白分解酶活性增强剂，其特征在于，含有选自由菱、甜菊、迷迭香、百里 香、菊、香薄荷、艾草、栗、留兰香、马郁兰、胡椒薄荷、香蜂草、多香果、紫苏、罗勒和葛缕子组 成的组中的至少一种植物的提取物。2. 如权利要求1所述的氧化蛋白分解酶活性增强剂，其中，含有两种以上的上述植物 的提取物。3. -种氧化蛋白分解酶活性增强方法，其特征在于，包括： 通过将权利要求1或2所述的氧化蛋白分解酶活性增强剂添加到试样中而增加上述试 样中的氧化蛋白分解酶的活性的步骤。4. 一种蛋白质分解促进方法，其特征在于，包括： 通过将权利要求1或2所述的氧化蛋白分解酶活性增强剂添加到试样中而促进利用上 述试样中的氧化蛋白分解酶的氧化蛋白或糖化蛋白的分解的步骤。5. -种药物组合物，其特征在于，含有权利要求1或2所述的氧化蛋白分解酶活性增强 剂。
【专利摘要】本发明提供氧化蛋白分解酶的新的活性增强剂。本发明的氧化蛋白分解酶活性增强剂的特征在于，含有选自由菱、甜菊、迷迭香、百里香、菊、香薄荷、艾草、栗、留兰香、马郁兰、胡椒薄荷、香蜂草、多香果、紫苏、罗勒和葛缕子组成的组中的至少一种植物的提取物。
【IPC分类】A61K36/00, A61P19/10, A61K36/18, A61P19/02, A61P29/00, A61K36/28, A61P9/10, A61P43/00, A61P27/12, A61K36/53, A61P25/28
【公开号】CN105101981
【申请号】CN201480009285
【发明人】八木雅之, 米井嘉一, 高山圣史, 河合博成
【申请人】爱科来株式会社, 学校法人同志社
【公开日】2015年11月25日
【申请日】2014年2月14日
【公告号】EP2957289A1, WO2014126199A1