下采集1分钟样本在蓝色通道（B695/40)上所检 测到的荧光珠粒来分析血液样本。
[0142] 发现
[0143] CSFl-Fc和部分肝切除
[0144] 在部分肝切除以及CSFl-Fc处理之后第2天，整个肝脏的基因分析揭示与吞噬作 用相关联的基因 MSR 1(巨噬细胞清除剂受体1)和MARCO(具有胶原结构的巨噬细胞受体） 的上调。CSFl受体阻断引起这些基因的表达的互反减少。
[0145] 如由从荧光胶乳微珠循环的清除率所评估的，在部分肝切除之后用CSFl-Fc处理 显著增强肝脏的吞噬能力（图B)。整个肝脏的荧光成像揭示与存在增强的吞噬作用相符的 增加的肝脏荧光强度（图C)。其他器官的荧光成像揭示肝脏是珠粒吸收的主要位点。
[0146] CSFl-Fc和扑热息痛中毒
[0147] 在扑热息痛中毒之后第2天，整个肝脏的基因分析揭示与吞噬作用相关联的基因 MSR 1(巨噬细胞清除剂受体1)和MARCO (具有胶原结构的巨噬细胞受体）的上调。
[0148] 在扑热息痛中毒模型中的肝组织损失与部分肝切除相比较显著地较不严重，并且 与此相符，我们在扑热息痛模型中并未注意到增强的来自循环中的胶乳微珠的清除率。然 而，我们确实见到在离体成像之后肝荧光的明显增加，暗示增加的吞噬能力。
[0149] 结论
[0150] 这些发现表明在肝损伤之后，肝脏的吞噬能力可以通过用CSFl-Fc处理来增强。
[0151] 实例 9
[0152] 如下评估部分肝切除和血清CSFl水平在人类中的作用。
[0153] 方法
[0154] 在进行部分肝切除的55名患者的同期组群中使用MSD?电化学发光平台来评 估血清巨噬细胞集落刺激（CSFl)。在手术前以及手术后第1天和第3天取得血清样本。
[0155] 发现
[0156] 在人类中，在部分肝切除之后，在第1天可见血清CSFl水平的明显降低，并且CSFl 水平在第3天后续增加（图21A)。最大增加见于最大数目的区段被去除（超过5个区段， 与小于3个相比较）的患者中（图21B)。在整个同期组群中，2名患者出现手术后肝脏衰 竭。这些患者的CSFl水平处于最低的四分之一（图21C)。
[0157] 贯穿本说明书的描述和权利要求中，词语"包含"和""含有"以及它们的变化形式 意味着"包括但不限于"，并且它们并不希望（并且并不）排除其他部分、添加剂、组分、完整 的事物或步骤。贯穿本说明书的描述和权利要求中，除非上下文另有要求，否则单数涵盖复 数。具体地说，当使用不定冠词时，除非上下文另有要求，否则本说明书应被理解为考虑到 复数以及单数。
[0158] 结合本发明的具体方面、实施例或者实例一起描述的特征、完整的事物、特性、化 合物、化学部分或基团应被理解为可适用于在此所描述的任何其他方面、实施例或实例，除 非与之不相容。在本说明书中所披露的所有特征（包括任何所附权利要求书、摘要以及附 图）和/或如此披露的任何方法或过程的所有步骤可以按任何组合的形式组合，这类特征 和/或步骤中的至少一些相互排斥的组合除外。本发明并不限于任何前述实施例的细节。 本发明扩展到本说明书（包括任何所附权利要求书、摘要以及附图）中所披露的特征的任 何新颖特征或任何新颖组合，或扩展到如此披露的任何方法或过程的步骤的任何新颖步骤 或任何新颖组合。
[0159] 读者的关注点是针对与本说明书同时或在本说明书之前与本申请结合提交并且 与本说明书一起开放以供公众检验的所有论文和文献，并且所有这类论文和文献的内容以 引用的方式结合在此。
[0160] 参考文献
[0161] 1.卡纳莱斯（Canalese)，J.等人，爆发性肝衰竭中的网状内皮系统和肝细胞功 會泛（Reticuloendothelial system and hepatocytic function in fulminant hepatic failure)《肠道》（Gut)，1982. 23(4):第 265-9 页。
[0162] 2.辛德尔（Schindl)，M. J.等人，网状内皮系统对人类中大部分肝脏切除的适应 性口向应（The adaptive response of the reticuloendothelial system to major liver resection in humans)《外科年鉴》（Ann Surg)，2006. 243(4):第 507-14 页。
[0163] 人类CSF-I序列 [0164]全长（残基 1-554):
[0165] MTAPGAAGRCPPTTWLGSLLLLVCLLASRSITEEVSEYCSHMIGSGHLQSLQRLIDSQME
[0166] TSCQITFEFVDQEQLKDPVCYLKKAFLLVQDIMEDTMRFRDNTPNAIAIVQLQELSLRLK
[0167] SCFTKDYEEHDKACVRTFYETPLQLLEKVKNVFNETKNLLDKDWNIFSKNCNNSFAECSS
[0168] QDVVTKPDCNCLYPKAIPSSDPASVSPHQPLAPSMAPVAGLTWEDSEGTEGSSLLPGEQP
[0169] LHTVDPGSAKQRPPRSTCQSFEPPETPVVKDSTIGGSPQPRPSVGAFNPGMEDILDSAMG
[0170] TNWVPEEASGEASEIPVPQGTELSPSRPGGGSMQTEPARPSNFLSASSPLPASAKGQQPA
[0171] DVTGTALPRVGPVRPTGQDWNHTPQKTDHPSALLRDPPEPGSPRISSLRPQGLSNPSTLS
[0172] AQPQLSRSHSSGSVLPLGELEGRRSTRDRRSPAEPEGGPASEGAARPLPRFNSVPLTDTG
[0173] HERQSEGSFSPQLQESVFHLLVPSVILVLLAVGGLLFYRWRRRSHQEPQRADSPLEQPEG SPLTQDDRQVELPV(SEQ ID NO:3)
[0174] 具有信号肽去除的序列（残基33-554):
[0175] EEVSEYCSHMIGSGHLQSLQRLIDSQMETSCQITFEFVDQEQLKDPVCYLKKAFLLVQDI
[0176] MEDTMRFRDNTPNAIAIVQLQELSLRLKSCFTKDYEEHDKACVRTFYETPLQLLEKVKNV
[0177] FNETKNLLDKDWNIFSKNCNNSFAECSSQDVVTKPDCNCLYPKAIPSSDPASVSPHQPLA
[0178] PSMAPVAGLTWEDSEGTEGSSLLPGEQPLHTVDPGSAKQRPPRSTCQSFEPPETPVVKDS
[0179] TIGGSPQPRPSVGAFNPGMEDILDSAMGTNWVPEEASGEASEIPVPQGTELSPSRPGGGS
[0180] MQTEPARPSNFLSASSPLPASAKGQQPADVTGTALPRVGPVRPTGQDWNHTPQKTDHPSA
[0181] LLRDPPEPGSPRISSLRPQGLSNPSTLSAQPQLSRSHSSGSVLPLGELEGRRSTRDRRSP
[0182] AEPEGGPASEGAARPLPRFNSVPLTDTGHERQSEGSFSPQLQESVFHLLVPSVILVLLAV GGLLFYRff RRRSHQEPQRADSPLEQPEGSPLTQDDRQVELPV(SEQID NO:4)
[0183] 活性片段，即残基33-182 :
[0184] EEVSEYCSHMIGSGHLQSLQRLIDSQMETSCQITFEFVDQEQLKDPVCYLKKAFLLVQDI
[0185] MEDTMRFRDNTPNAIAIVQLQELSLRLKSCFTKDYEEHDKACVRTFYETPLQLLEKVKNV FNETKNLL DKDffNlFSKNCNNSFAECSSQD(SEQ ID NO:5)
【主权项】
1. 一种CSF-I蛋白生物活性片段或其同系物或变体或衍生物，用于增强肝脏再生和/ 或恢复肝脏功能和/或调节肝脏内稳态。2. -种核酸，该核酸编码如权利要求1所述的CSF-I蛋白生物活性片段或其同系物或 变体或衍生物。3. -种融合蛋白，该融合蛋白包含： (i) CSF-I生物活性片段或其同系物或变体或衍生物；和 (ii) 生物活性抗体片段。4. 根据权利要求3所述的融合蛋白，其中，该CSF-I蛋白生物活性片段是人类CSF-I的 残基33-182或其生物活性部分、或来自任何哺乳动物物种的CSF-I生物学等效片段。5. 如或者权利要求3或者权利要求4所述的融合蛋白，其中该CSF-I蛋白生物活性片 段或其同系物或变体或衍生物或者是天然/天然存在的或者是重组的。6. 如权利要求3到5中任一项所述的融合蛋白，其中，该抗体是选自下组的免疫球蛋 白，该组包括IgA、IgD、IgE、IgG以及IgM。7. 根据权利要求6所述的融合蛋白，其中该免疫球蛋白是IgG。8. 如权利要求3到7中任一项所述的融合蛋白，其中，该抗体片段选自下组，该组包括 F (ab，）2、Fab'、Fab、Fv、Fc 以及 rlgG。9. 根据权利要求8所述的融合蛋白，其中该片段是FC片段。10. 根据权利要求3到9中任一项所述的融合蛋白，其中，该融合蛋白的该CSF-I生物 活性片段或其同系物或变体或衍生物与该生物活性抗体片段直接或经由连接子部分共价 连接。11. 一种经分离核酸，该核酸编码根据以上任何一项权利要求所述的融合蛋白。12. -种载体，该载体包含如权利要求11所述的经分离核酸。13. -种宿主细胞，该宿主细胞包含如权利要求12所述的载体。14. 一种制造本发明第一方面的融合蛋白的方法，该方法包括： (i) 培养如权利要求13所述的宿主细胞；并且 (ii) 从所述培养物中收集该融合蛋白。15. -种组合物，该组合物包含： (a) 至少一种融合蛋白，该融合蛋白包含（i)CSF-l生物活性片段或其同系物或变体或 衍生物；和（ii)生物活性抗体片段；和 (b) 药学上可接受的载体、赋形剂或稀释剂。16. 根据权利要求15所述的组合物，该组合物进一步包括如权利要求4到10所述的特 征中的任何一种或多种。17. -种组合物，该组合物包含或者如权利要求11所述的核酸或者如权利要求12所述 的载体（vector)、药学上可接受的载体（carrier)、赋形剂或稀释剂。18. -种融合蛋白的用途，该融合蛋白包含： (i) CSF-I生物活性片段或其同系物或变体或衍生物；和 (ii) 生物活性抗体片段 用于增强肝脏再生和/或恢复肝脏功能和/或调节肝脏内稳态。19. 一种根据权利要求3到10中任一项所述的融合蛋白或如权利要求11所述的核酸 或如权利要求12所述的载体的用途，用于制造用于增强肝脏再生和/或恢复肝脏功能和/ 或调节肝脏内稳态的药剂。20. -种治疗患有肝癌并且将进行手术的个体的方法，该方法包括在手术程序之前、期 间或之后给予根据权利要求3到10中任一项所述的融合蛋白或如权利要求11所述的核酸 或如权利要求12所述的载体。21. 根据本发明的又另一个方面，提供一种治疗将进行肝脏移植手术的个体的方法，该 方法包括在手术程序之前、期间或之后给予根据权利要求3到10中任一项所述的融合蛋白 或如权利要求11所述的核酸或如权利要求12所述的载体。22. -种试剂盒，该试剂盒包括一个或多个具有药物剂量单元的容器，这些药物剂量单 元包含有效量的本发明的融合蛋白或核酸或载体，其中该容器包装有任选的用于使用它的 说明书。
【专利摘要】本发明提供包含CSF-1融合蛋白的物质组合物以及在增强受损肝脏再生或恢复其功能中使用该物质组合物的方法。这些物质组合物有用于治疗肝病，例如用于预防和/或治疗肝脏疾病以及改善在肝脏手术之后的结果。
【IPC分类】A61K38/19
【公开号】CN105142659
【申请号】CN201480017323
【发明人】斯图尔特·福布斯, 戴维·休姆, 本·斯图奇菲尔德, 黛博拉·高, 格雷姆·班布里奇, 希欧多尔·奥利芬特, 托马斯·L·威尔逊
【申请人】爱丁堡大学董事会
【公开日】2015年12月9日
【申请日】2014年2月28日
【公告号】CA2901368A1, WO2014132072A1