诱发的鸢尾科植物细胞在治疗敏感性皮肤中的应用
【技术领域】
[0001] 本发明涉及敏感性皮肤和与降钙素来源的肽（被称为降钙素基因相关肽或CGRP) 的过度合成和/或释放相关的病症的美容治疗或药物治疗。
【背景技术】
[0002] CGRP是由神经末梢产生并释放的一种多肽化学物质。由于CGRP的定位对于敏感 神经纤维（C纤维）是特异性的，所以多个器官或组织，诸如唾液腺、胃、胰腺、肠、心血管系 统、甲状腺或皮肤，接收传入神经元，从而接收CGRP。
[0003] 由于CGRP的普遍分布，所以，许多病症与CGRP的过度合成和/或释放相关。具体 地，呼吸和炎性疾病、过敏性疾病和皮肤病（诸如包括湿疹，痒疹或红斑痤疮的皮肤病症） 就是这样的情况。
[0004] CGRP拮抗剂的用途是有效地治疗在上文提及的所有疾病。
[0005] 此外，申请人已经证实，敏感性皮肤的本质特征之一与CGRP的释放有关联。因此， CGRP拮抗剂的用途也可被用于得到敏感性皮肤的预防性和/或治疗性治疗。
[0006] 在本文中，"CGRP拮抗剂"是指能够部分抑制或甚至完全抑制CGRP的生物学作用 的任何化合物。
[0007] 可提及的已知的CGRP拮抗剂例如为CGRP 8-37 (CGRP的N-端部分的8至37位的 氨基酸序列）或抗-CGRP抗体。
[0008] 此外，申请人已经证实，在申请FR 2738486中，至少一种鸢尾科的提取物能够降 低由辣椒素和/或逆向电刺激（施加到传入神经元）诱导的血管舒张，和/或致使抑制由 敏感神经纤维引起的CGRP释放，和/或致使抑制由CGRP诱导的输精管平滑肌收缩，并且因 此可以用作CGRP拮抗剂，尤其用于治疗敏感性皮肤和上述提及的疾病。
[0009] 然而，该提取物并不能够抑制CGRP，而是达到约70 %的部分抑制。
[0010] 因此，仍然存在对具有更显著CGRP拮抗剂活性的组合物的显著需求。
[0011] 此外，在申请FR 2738486中描述的提取物可能含有对于CGRP的拮抗剂活性有害 的化合物，并且培养基中未分泌出产生该拮抗剂活性的分子，从而降低了培养物的产率。
[0012] 因此，仍然存在对能够以高产率得到的、具有CGRP拮抗剂活性的组合物的显著需 求。
【发明内容】
[0013] 本发明的结果来自于发明人的意外发现：德氏乳酸杆菌属乳酸菌Lactobacillus delbrueckii spp Iactis的提取物对鸾尾属（Iris)植物细胞起到诱发因子的作用。事 实上，当德氏乳酸杆菌属乳酸菌被加入至鸢尾属去分化细胞的培养物中时，该提取物使得 CGRP拮抗剂活性在鸢尾属细胞的细胞内和细胞外过度表达，诱导对CGRP的最大抑制（约 100% )。此外，在外部环境中，产生该拮抗剂活性的分子的分泌使得能够显著提高培养物的 产率。
[0014] 因此，本发明涉及德氏乳酸杆菌诱发鸢尾科的植物细胞的应用。
[0015] 本发明还涉及德氏乳酸杆菌通过鸢尾科的植物细胞诱导产生CGRP的拮抗剂的应 用。
[0016] 本发明还涉及诱发鸢尾科的植物细胞的方法，所述方法包括：在适用于诱导CGRP 拮抗剂活性表达的条件下，使鸢尾科的植物细胞与德氏乳酸杆菌接触。
[0017] 本发明还涉及一种具有CGRP拮抗剂活性的组合物的制备方法，所述方法包括以 下步骤：
[0018] a)在适用于诱导CGRP拮抗剂活性表达的条件下，在培养基中，使鸢尾科的植物细 胞与德氏乳酸杆菌接触；
[0019] b)可选地，从培养基中分离在步骤a)中培养的植物细胞）；以及
[0020] c)回收具有CGRP拮抗剂活性的组合物。
[0021] 本发明还涉及一种具有CGRP拮抗剂活性的组合物，该组合物能够通过该制备方 法来得到。
[0022] 本发明的一个目的为一种化妆品组合物，该化妆品组合物包括可通过该制备方法 得到的具有CGRP拮抗剂活性的组合物，以及化妆品上可接受的载体。
[0023] 本发明的另一个目的涉及该化妆品组合物在治疗敏感性皮肤或去头肩治疗中的 应用。
[0024] 本发明进一步涉及通过上文所述的制备方法得到的具有CGRP拮抗剂活性的组合 物在治疗与CGRP的过度合成和/或释放相关的病症中的应用。
【具体实施方式】
[0025] CGRP拮抗剂活性
[0026] 在本发明的上下文中，术语"降钙素肽衍生物"、"降钙素基因相关肽"或"CGRP" 是指在中枢神经元和外周神经元中产生的降钙素家族的肽成员，并且在人类中以两种形式 (a-CGRP和P-CGRP)存在。CGRP经由异聚受体和蛋白质发挥作用，其中，该异聚受体包括 连接至G蛋白的受体，被称为"降钙素受体样受体"或CALCRL，该蛋白质改变受体或RAMP的 活性。
[0027]在本文中，"CGRP拮抗剂"是指能够部分或甚至完全抑制CGRP的生物学作用的任 何化合物。优选地，根据本发明的CGRP的拮抗剂或具有CGRP拮抗剂活性的化合物能够产 生对CGRP的受体结合的抑制，或通过神经感觉纤维对抑制CGRP的合成和/或释放产生影 响。特别优选地，根据本发明的CGRP的拮抗剂或具有CGRP拮抗剂活性的化合物能够产生 对CGRP的受体结合的抑制。甚至更优选地，根据本发明的CGRP的拮抗剂或具有CGRP拮抗 剂活性的化合物对CGRP受体具有亲和力。
[0028] 德氏乳酸杆菌的提取物
[0029]在本文中，"德氏乳酸杆菌（Lactobacillus delbrueckii) "是指乳酸杆菌 属（Lactobacillus)的非移动的、能够在厌氧条件下使碳水化合物底物发酵成为乳酸 的革兰氏阳性菌。本领域技术人员所熟知的是，德氏乳酸杆菌包括4个亚种：德氏乳酸 杆菌保加利亚菌（Lactobacillus delbrueckii spp bulgaricus)，德氏乳酸杆菌乳酸 菌（Lactobacillus delbrueckii spp Iactis)，德氏乳酸杆菌德氏菌（Lactobacillus delbrueckii delbrueckii)和 Lactobacillus delbrueckii indicus。
[0030] 优选地，用作本发明一部分的德氏乳酸杆菌的亚种为德氏乳酸杆菌属乳酸菌 (Lactobacillus delbrueckii Iactis)。德氏乳酸杆菌乳酸亚种尤其包括菌株ATCC 4797、 DSM 20076、NCDO 299、NCIB 7854、DSM 7290和NCC 88。优选地，在本发明的上下文中使用 的德氏乳酸杆菌乳酸菌亚种的菌株为菌株ATCC 4797。
[0031] 在本发明的框架中所使用的细菌德氏乳酸杆菌可以活的、半活性的、灭活的或死 亡的形式使用。优选地，细菌德氏乳酸杆菌以灭活的或死亡的形式使用。
[0032] 从本发明的意义上说，"灭活的"微生物是在培养基中暂时或永久地不再能够形成 菌落的微生物。
[0033] 从本发明的意义上说，"死亡的"微生物是在培养基中永久地不再能够形成菌落的 微生物。死亡的或灭活的微生物可具有完整的或破裂的细胞膜。因此，术语"灭活的"也表 示如下详述的微生物提取物和裂解物。死亡的或灭活的微生物可通过本领域技术人员已知 的任何方法来得到。
[0034] 根据有利的实施方式，根据本发明所采用的细菌德氏乳酸杆菌为至少部分灭活的 或死亡的。
[0035] 至少部分灭活的"德氏乳酸杆菌"是指根据本发明的德氏乳酸杆菌细菌的制剂，包 括：相对于在经受灭活方法之前，在初始制剂中含有的活的、未灭活的所有细菌德氏乳酸杆 菌，至少80 %、特别是至少85 %、更特别是至少90 %或至少95 %、或至少99 %的灭活的细菌 德氏乳酸杆菌（以菌落形成单元（Cfu)表示）。所得到的灭活率取决于灭活方法的施加条 件，本领域技术人员根据待得到的灭活率来调整该灭活方法。根据一个实施方式，本发明包 括含有100 %灭活的德氏乳酸杆菌细菌的制剂。
[0036] 适用于本发明的德氏乳酸杆菌灭活细菌可通过对德氏乳酸杆菌细菌的制剂进行 辐射、热灭活或冻干来制备。这些方法是本领域技术人员所已知的。
[0037] 根据本发明的德氏乳酸杆菌细菌可以以完整的形式（即基本上以其天然形式）使 用，或者以包括这些细菌的碎片和/或代谢物的提取物或裂解物的形式使用。
[0038] 在本发明的意义中，术语"碎片"涉及类似于所述完整细菌的、具有有效诱发作用 的所述细菌的片段。
[0039] 从本发明的意义上说，术语"代谢物"表示来源于细菌的新陈代谢的任何物质，尤 其是根据本发明所研究的细菌所分泌的以及还具有有效诱发作用的任何物质。
[0040] 适用于本发明的提取物或裂解物可利用生长阶段结束时的细菌来制备。
[0041] 根据优选的实施方式，适用于本发明的细菌德氏乳酸杆菌可以以提取物的形式来 制备。
[0042] 从本发明的意义上说，提取物通常是指如下所得到的材料：通过被称为细胞裂解 的现象来破坏或溶解生物细胞，从而引起所研究的微生物细胞中天然含有的细胞内生物组 分的释放。在本发明的意义上说，术语"提取物"