桑葚多糖提取物在制备药物或保健品中的应用
【技术领域】
[0001] 本发明设及一种桑甚多糖提取物的新用途，特别是在制备预防或抑制化学性肝损 伤的药物或保健品中的应用，属于中药技术领域。
【背景技术】
[0002] 桑甚（化UC化SMori)又名桑要、桑果、甚子、乌甚等，是桑科桑属多年生落叶乔木 桑树的成熟果穗的统称，原产于中国中部约有四千年的栽培史，品种较多栽培范围广泛，资 源较为丰富。新鲜桑甚不但有甘美的滋味，并且含有大量的维生素、氨基酸、矿物元素、微 量元素、无机盐类、果胶、黄酬、生物碱、酪类及糖类等多种营养成分，又具有食用和医疗保 健的作用，因而被广大人群所喜爱。桑甚是被国家卫生部列为首批"既是食品又是药品"的 农产品之一。我国许多中医名著如《本草纲目》、《中药大辞典》等，认为桑甚性寒，具有滋阴 养血、镇静安神、补肝益肾、养颜益智、乌发明目、生津止渴、延年桂斑、降压消渴和解酒的功 效，还可W用于治疗肝肾阳虚、屯、惇失眠、肠燥便秘、须发早白等症。随着现代医学对桑甚 进行药理、药效毒理测试的研究，发现桑甚具有促进造血细胞的生长，提高动物体内酶的活 性，抗诱变，抗菌，抗病毒，抗福射，抑制肿瘤及有害物质的生成，增强免疫力、抗寒功能及耐 劳能力，抗氧化，延缓细胞衰老，防止血管硬化，调节血糖和血脂，护肝等功效。
[0003] 桑甚多糖提取物是从桑甚中提取出来的W桑甚多糖为主要成分的混合物，其中桑 甚多糖是由多个相同或不同的单糖W糖巧键连接而成的高聚合物，具有较为广泛的生物活 性，主要包括参与机体代谢、调节机体免疫力、延缓细胞衰老、防止血管硬化、防衰老、调节 血糖、抗菌、抗病毒、抗福射、抑制肿瘤、抗氧化等作用。
[0004] 虽然已发现桑甚有护肝功效，但现有技术中并没有桑甚护肝作用的深入研究报 道，即尚未明确具体是桑甚中的那种或哪些有效成分发挥了护肝作用，因而也尚未有桑甚 多糖提取物用于化学性肝损伤保护产品的相关报道。
【发明内容】
阳〇化]为解决现有技术的不足，本发明的目的在于提供桑甚多糖提取物在制备药物或保 健品中的应用，所得药物或保健品能有效抑制或预防化学性肝损伤。
[0006] 为了实现上述目标，本发明采用如下的技术方案：
[0007] 桑甚多糖提取物在制备预防或抑制化学性肝损伤的药物或保健品中的应用。
[0008] 桑甚多糖提取物在制备预防或抑制酒精性肝损伤的药物或保健品中的应用。
[0009] 前述桑甚多糖提取物的应用中，桑甚多糖提取物中含有多糖、糖醒酸、蛋白质和硫 酸醋，其中多糖的重量百分含量大于55%。
[0010] 前述桑甚多糖提取物的应用中，桑甚多糖提取物中糖醒酸的重量百分含量大于 12%。
[0011] 前述桑甚多糖提取物的应用中，按照重量百分数计，桑甚多糖提取物中含有多糖 65%~70%、糖醒酸16%~21 %、蛋白质1 %~2%和硫酸醋5%~7%。
[0012] 前述桑甚多糖提取物的应用中，多糖由质量比为1.8~2.4 : 0.3~1 : 1.9~ 2. 5 : 60~61 : 2. 8~3.4 : 18~18. 8 : 12. 2~13的鼠李糖残基、岩藻糖残基、木糖 残基、甘露糖残基、半乳糖残基、半乳糖醒酸残基和葡萄糖残基组成。
[0013] 前述桑甚多糖提取物的应用中，桑甚多糖提取物是由桑甚的干燥果穗经脱脂、脱 色、生物酶酶解和超声提取之后浓缩、醇沉得到的。
[0014] 具体地，前述桑甚多糖提取物的应用中，桑甚多糖提取物是按W下方法步骤制得 的：
[001引 （1)除杂：将桑甚原料进行水洗，干燥，粉碎，备用；
[0016] (2)脱脂、脱色：将步骤（1)所得原料置于容器中，先后加入乙醇、乙酸进行回流， 回流完毕后，惊干，备用；
[0017] (3)将步骤（2)所得产物置于容器中，加入水，调节抑值，保溫，加入葡萄糖氧化酶 进行酶解；
[0018] (4)将步骤（3)中酶解产物进行超声处理，得提取液；
[0019] (5)将提取液趁热过滤，得滤液，将滤液浓缩，醇沉两次，离屯、，收集沉淀物，沉淀物 用无水乙醇反复洗涂，干燥，即得。
[0020] 进一步地，前述桑甚多糖提取物的应用中，桑甚多糖提取物是按W下方法步骤制 得的：
[OOW(1)除杂：将桑甚原料进行水洗，干燥，粉碎，备用； 阳0巧 似脱脂、脱色：将步骤（1)所得原料置于容器中，先加入75%~100%乙醇回流 两次，再加入90%~100%乙酸回流两次，每次回流60~150分钟，回流完毕后，惊干，备 用；
[0023] (3)将步骤（2)所得产物置于容器中，加入步骤（2)所得产物重量6~25倍的水， 调节抑值为3~7,保持溫度在25°C~75°C，加入步骤（2)所得产物重量0. 001~0. 006 倍的葡萄糖氧化酶进行酶解，酶解时间为15~120分钟；
[0024] (4)将步骤做中酶解产物进行超声处理，超声频率为20~lOOKHz，时间为10~ 40分钟，得提取液；
[00巧](5)将提取液趁热过滤，得滤液，将滤液浓缩至原体积的1/5~1/3,乙醇沉淀两 次，两次均加入4~6倍体积、浓度为90 %~100 %的乙醇，均放置于：TC~5°C下保持 1化~48h;醇沉后离屯、，收集沉淀物，沉淀物用无水乙醇反复洗涂，干燥，即得。
[00%] 优选地，前述桑甚多糖提取物的应用中，桑甚多糖提取物是按W下方法步骤制得 的：
[0027] (1)除杂：将桑甚原料进行水洗，干燥，粉碎，备用；
[00測 似脱脂、脱色：将步骤（1)所得原料置于容器中，先加入无水乙醇回流两次，再加 入无水乙酸回流两次，每次回流105分钟，回流完毕后，惊干，备用；
[0029] 做将步骤似所得产物置于容器中，加入步骤似所得产物重量11倍的水，调 节抑值为5,保持溫度在58°C，加入步骤（2)所得产物重量0. 003倍的葡萄糖氧化酶进行 酶解，酶解时间为38分钟；所述葡萄糖氧化酶配制成0. %~0. 4wt%的水溶液使用；
[0030] (4)将步骤做中酶解产物进行超声处理，超声频率为80KHZ，时间为20分钟，得 提取液；
[0031] (5)将提取液趁热过滤，得滤液，将滤液浓缩至原体积的1/4,乙醇沉淀两次，两次 均加入5倍体积、浓度为95%的乙醇，均放置于4°C下保持30h;醇沉后离屯、，收集沉淀物， 沉淀物用无水乙醇反复洗涂，冷冻干燥，即得。
[0032] 前述桑甚多糖提取物的应用中，所述药物或保健品可采用汤剂、混悬剂、片剂、胶 囊剂、口服液、颗粒剂、糖浆剂、乳剂、冲剂或丸剂等口服制剂形式；也可采用膜剂、凝胶剂、 喷雾剂、膏剂或海绵剂等外用制剂形式；还可W采用注射给药、局部给药形式。
[0033] 为了验证桑甚多糖提取物对化学性肝损伤抑制作用效果，申请人进行了一系列试 验研究，具体如下：
[0034] 1、桑甚多糖提取物的制备：桑甚多糖提取物经W下步骤提取得到：
[00对 （1)除杂：将桑甚原料进行水洗，干燥，粉碎，备用；
[0036] 似脱脂、脱色：将步骤（1)所得原料置于容器中，先加入75%~100%乙醇回流 两次，再加入90%~100%乙酸回流两次，每次回流60~150分钟，回流完毕后，惊干，备 用；
[0037] (3)将步骤（2)所得产物置于容器中，加入步骤（2)所得产物重量6~25倍的水， 调节抑值为3~7,保持溫度在25°C~75°C，加入步骤（2)所得产物重量0. 001~0. 006 倍的葡萄糖氧化酶进行酶解，酶解时间为15~120分钟； 阳03引 （4)将步骤做中酶解产物进行超声处理，超声频率为20~lOOKHz，时间为10~ 40分钟，得提取液；
[0039] (5)将提取液趁热过滤，得滤液，将滤液浓缩至原体积的1/5~1/3,乙醇沉淀两 次，两次均加入4~6倍体积、浓度为90 %~100 %的乙醇，均放置于：TC~5°C下保持 1化~48h;醇沉后离屯、，收集沉淀物，沉淀物用无水乙醇反复洗涂，干燥，得到桑甚多糖提 取物。
[0040] 申请人在制备桑甚多糖提取物的过程中，对提取条件进行了试验筛选，得到最佳 提取条件为：酶解时间为38分钟、酶的用量为0. 3%、水的用量为11倍、酶解溫度为58°C。
[0041] 2、桑甚多糖提取物组成成分分析
[0042] 取桑甚多糖提取物，采用苯酪-硫酸法检测，测得多糖含量在65%~70%之间。 采用化a壯ord法检测，测得蛋白质含量在1%~2%之间。采用氯化领-明胶法检测，测得 硫酸醋含量在5%~7%之间。采用间径基联苯比色法检测，测得糖醒酸的含量在16%~ 21%之间。采用斐林试验和舰化钟试验检测，发现该提取物中不含淀粉和单糖类物质。其 中一个桑甚多糖提取物样品的成分含量数据用图形表示如图1。
[0043] 采用HPLC法对上述1项提取得到的桑甚多糖提取物中多糖成分进行测定。具体 测试条件和方法如下： W44] (1)水解：取lOmg桑甚多糖提取物，加入4血的2mol/L的立氣乙酸，于120°C下水 解2小时，然后用甲醇萃取3~5次，干燥，得到水解产物；
[0045] (2)衍生化：取桑甚多糖水解产物和对照品（葡萄糖、鼠李糖、k岩藻糖、木糖、甘 露糖、半乳糖和半乳糖醒酸）适量，按照W下步骤分别衍生化：置于水解管中，加入200iiL的蒸馈水，溶解，再加入200yL的0. 50mo