刺甘草査尔酮的新用图
【技术领域】
[0001] 本发明涉及刺甘草査尔酮的新用途。
【背景技术】
[0002] Nrf2是II相解毒或抗氧化酶核心调节因子，能保护细胞避免发生氧化损伤。Nrf2 的激活可以增强机体抗氧化能力和机体排毒能力。Nrf2激动剂的使用被证明在多种疾病 上都能起到不同程度的保护作用。例如，SFN是一种从西兰花、圆白菜中提取的化合物。诸 多文献报道了 SFN对糖尿病、心血管疾病和神经退行性疾病的保护作用。有研究表明，Nrf2 缺失会加重多种疾病的严重程度。例如，相较于对照组，小鼠胰岛β细胞株ΜΙΝ6β细胞中 Nrf2敲除后，过氧化氢带来的各项损伤包括细胞活力、细胞形态及凋亡等生物指标都明显 加强。因此，Nrf2激动剂的发现和应用是十分必要的。
[0003] Nrf2在决定生物体寿命中发挥重要的作用。衰老是一个不可避免的过程，氧化损 伤会加速整个进程。Nrf2激动剂可以激活ARE下游的抗氧化基因转录，减轻细胞的氧化损 伤，延缓衰老的进程。目前研究表明二甲双胍可以通过激活Nrf2及AMPK信号通路，延长线 虫的寿命。另外，微囊蛋白-1抑制Nrf2信号通路，促进氧化胁迫诱导的细胞衰老。
[0004] 肝脏是腹腔内最大的实质性器官，担负人体的重要生理功能。许多物质可通过胃 肠道门静脉或体循环进入肝脏进行转化，因此肝脏容易受到毒性物质损伤。肝损伤在临床 上较为常见，一直是医学科学重点研究的对象之一。引起肝损伤的因素很多，包括药物（化 疗药、解热镇痛药、抗病毒药等），大自然和人类工业生产过程中的化学物质（黄曲霉毒素、 四氯化碳、二甲基甲酰胺等），病毒（甲型肝炎病毒、乙型肝炎病毒等）以及酒精等。肝损伤 的长期存在往往会导致肝脏不同程度的肝细胞坏死、脂肪变性、肝硬化甚至肝癌。因此，预 防和治疗肝损伤是临床上肝病治疗的重要环节之一，是抑制肝纤维化、肝坏死、肝硬化以及 肝癌等疾病发生和发展的基础。临床上各种保肝药物种类繁多，但大多价格昂贵，或具有较 大的毒副作用，从而使它们的使用受到限制。因此，发现有效的新型保肝药物仍然具有重要 的现实意义和良好的应用前景。
[0005] 刺甘草查尔酮（echinatin)，CAS号为34221-41-5,分子式为C16H 1404,分子量为 270。以前的文献研究表明刺甘草查尔酮具有显著的抗肿瘤活性（Shibata，S.等，Stem Cell 1994, 12, 44-52 ;Iwata, S.等，Biol. Pharm. Bull. 1995, 18, 1710-1713)以及治疗牛皮癣的 作用[欧洲专利公开号EP0998939 (Al)]。
【发明内容】
[0006] 本发明的目的是提供刺甘草査尔酮的新用途。
[0007] 本发明提供的式I所示化合物（刺甘草査尔酮）和其医学上可接受的盐、酯、溶剂 化物、立体异构体、互变异构体、前药中的至少一种在制备具有如下（1)-(7)中至少一种功 能的产品中的应用：
[0008]
[0009] ⑴激活Nrf2和/或AMPK信号通路；
[0010] ⑵增强Nrf2、抗氧化酶和/或代谢解毒酶的表达；
[0011] (3)抑制氧化造成的细胞损伤、组织损伤；
[0012] ⑷抗衰老；
[0013] (5)保护肝损伤；
[0014] (6)保护化学性肝损伤或保护氧化性肝损伤；
[0015] (7)用于抗皮肤细胞恶性转化。
[0016] 上述的应用中，所述抗氧化酶具体可为H0-1和/或NQ0-1 ;所述代谢解毒酶具体 可为谷胱甘肽；所述表达为mRNA水平和/或蛋白水平，即所述增强Nrf2、抗氧化酶和/或 代谢解毒酶的表达为增加 mRNA水平和/或蛋白水平。
[0017] 本发明的另一个目的是提供一种用于上述新用途的以刺甘草査尔酮为活性成分 的产品。
[0018] 本发明提供的一种Nrf2和/或AMPK信号激动剂，其活性成分为式I所示化合物 和其医学上可接受的盐、酯、溶剂化物、立体异构体、互变异构体、前药中的至少一种。
[0019] 本发明提供的一种抗氧化酶和/或代谢解毒酶诱导剂，其活性成分为式I所示化 合物和其医学上可接受的盐、酯、溶剂化物、立体异构体、互变异构体、前药中的至少一种。
[0020] 本发明提供的一种用于抗衰老和/或保护化学性肝损伤产品，其活性成分为式I 所示化合物（刺甘草査尔酮）和其医学上可接受的盐、酯、溶剂化物、立体异构体、互变异构 体、前药中的至少一种。
[0021 ] 上述的产品中，所述产品可为药品或保健食品。
[0022] 本发明提供的一种用于抗皮肤细胞恶性转化的产品，其活性成分为式I所示化合 物（刺甘草査尔酮）和其医学上可接受的盐、酯、溶剂化物、立体异构体、互变异构体、前药 中的至少一种。
[0023] 上述的产品中，所述产品可为药品、保健品或皮肤护理剂。
[0024] 上述的产品为药品时，所述药品包括：
[0025] 1)式I所示化合物（刺甘草査尔酮）和其医学上可接受的盐、酯、溶剂化物、立体 异构体、互变异构体、前药中的至少一种；和
[0026] 2)药学上可接受的载体。
[0027] 上述药学上可接受的载体包括药学领域常规的稀释剂、赋形剂、填充剂、粘合剂、 湿润剂、崩解剂、吸收促进剂、表面活性剂、吸附载体、润滑剂等，各种剂型的药物均可以按 照药学领域的常规方法制备得到。
[0028] 所述药品的剂型包括但不限于：散剂、片剂、颗粒剂、胶囊剂、溶液剂、乳剂、混悬 剂、注射剂、气雾剂、膏剂或滴剂。
[0029] 上述的产品为保健食品时，所述保健食品包括：
[0030] 1)式I所示化合物（刺甘草査尔酮）和其医学上可接受的盐、酯、溶剂化物、立体 异构体、互变异构体、前药中的至少一种；和
[0031] 2)保健食品中可接受的载体。
[0032] 上述的产品为皮肤护理剂时，所述皮肤护理剂泛指用于皮肤护理的产品，其形式 包括但不限于膜、霜、乳、液、水、喷雾等形式。
[0033] 本发明具有如下有益效果：
[0034] (1)刺甘草查尔酮能够剂量依赖性激活Nrf2/ARE萤光素酶报告基因的活性，并 且剂量和时间依赖地增加 MEFs细胞中Nrf2和p-AMPK蛋白水平，以及Nrf2下游抗氧化酶 H0-1和NQ0-1的mRNA水平和蛋白水平。同时，刺甘草查尔酮的毒性较低，仅在40 μ Μ时表 现出轻微的细胞毒性。刺甘草查尔酮在氧化胁迫诱导细胞衰老中起保护作用，但在Nrf2 敲除的MEFs细胞中，它的保护作用就消失了。在线虫中，我们也观察到了相同的实验结 果。刺甘草查尔酮可以增强线虫对于过氧化氢的抵抗，并延长线虫的寿命，这种保护作用在 skn-l(zul35)和aak2(ok524)突变的线虫上也是缺失的。以上结果表明刺甘草查尔酮可用 于制备抗衰老药物或保健品。
[0035] (2)刺甘草查尔酮在JB6P+中剂量依赖性地升高Nrf2蛋白水平，以及Nrf2下游抗 氧化酶H0-1和NQ0-1的mRNA水平和蛋白水平。刺甘草查尔酮可以抑制TPA诱导的皮肤癌 转化，并且这个作用是依赖于Nrf2的。以上结果表明刺甘草查尔酮可用于制备抗皮肤细胞 恶性转化的药物、保健品或皮肤护理用品。
[0036] (3)刺甘草查尔酮能够剂量依赖性地增加 HepG2细胞中的Nrf2蛋白水平，以及 Nrf2下游抗氧化酶H0-1和NQ0-1的mRNA水平和蛋白水平。在腹腔注射刺甘草查尔酮之 后，该化合物能够显著提升小鼠肝脏组织中Nrf2的蛋白水平，以及Nrf2下游抗氧化酶H0-1 和NQ0-1的mRNA水平和蛋白水平。采用经典的四氯化碳模型，在腹腔注射刺甘草查尔酮之 后，该化合物能够显著降低四氯化碳所致肝损伤小鼠血清的ALT和AST水平，增加肝脏组织 中的GSH水平，同时，从肝组织病理切片发现治疗组的肝坏死面积相对于模型组显著减小， 表明刺甘草查尔酮对于四氯化碳所致的小鼠肝损伤具有明显的治疗作用。以上结果表明刺 甘草查尔酮可用于制备化学性肝损伤保护药物或保健品。
[0037] (4)刺甘草查尔酮可以在多种细胞中激活Nrf2信号通路，并且在小鼠体内也能显 著提升Nrf2下游抗氧化酶H0-1和NQ0-1的mRNA水平和蛋白水平。该化合物还可增加小 鼠肝脏的GSH水平，以及在MEFs中显著升高过氧化氢所致的GSH水平降低。以上结果说明 刺甘草查尔酮可用于制备Nrf2激动剂及抗氧化和代谢解毒酶诱导剂。
【附图说明】
[0038] 图1为刺甘草查尔酮的核磁共振氢谱NMR)。
[0039] 图2为刺甘草查尔酮的核磁共振碳谱（13C NMR)。
[0040] 图3为刺甘草查尔酮激活Η印G2细胞内Nrf2报告基因活性的实验结果。
[0041] 图4为刺甘草查尔酮抑制HepG2细胞活力的MTS实验结果。
[0042] 图5为刺甘草查尔酮激活MEFs细胞中Nrf2信号及下游基因的实验结果。其中图 5 (A)、图 5 (B)、图 5 (C)、图 5 (D)为 qPCR 结果，图 5 (E)、图 5 (F)为