一种利用响应面法优化沉香叶茶多酚的提取工艺的制作方法
【技术领域】
[0001] 本发明设及一种沉香叶茶多酪的提取工艺，尤其设及一种利用响应面法优化沉香 叶茶多酪的提取工艺。
【背景技术】
[0002] 沉香为瑞香科植物白木香Aquilariasinensis(Lour. )Gilg含有树脂的木材，是 我国名贵中草药材，具有行气止痛，溫中止呕，纳气平喘等功效，用于胸腹胀闷疼痛、胃寒呕 吐呢逆、肾虚气逆喘急。如今对沉香的利用情况仅限在只有含树脂的沉香木材，其可作为药 用，其他部位如叶、种子、树枝、不含树脂的木材均被作为废物处理，造成资源的大量浪费。 沉香叶为白木香的非药用部位，其相关研究还很少。
[0003] 茶多酪是茶叶中的有效成分，具有较强的生理活性和抗氧化性能。另外，茶多酪还 具有抗癌治病、防衰老、降血糖等一系列特殊的药理功能，对食品的色和味有重要的作用。
[0004] 响应面法是利用试验设计并通过实验得到一定量的数据，借助多元二次回归方程 拟合因素与响应值之间的函数关系，对回归方程进行分析W得到最优工艺参数，是解决多 变量问题的一种统计方法。
【发明内容】
[0005] 本发明的目的在于提供一种工艺简单、易于工业化生产的利用响应面法优化沉香 叶中茶多酪的提取工艺。
[0006] 本发明是通过如下技术方案实现的：
[0007] -种利用响应面法优化沉香叶茶多酪的提取工艺，包括如下步骤：
[000引 1)供试液的制备
[0009] 将沉香叶粉碎，用包装袋装好备用；准确称取粉碎的沉香叶2.Og,用体积分数为 30-70%的乙醇溶液进行水浴浸提，浸提时间为10-50min，液料比为20-40血，g1，浸提溫度 为50-90°C;将粗提取液W转速3500r/min离屯、6min后，取上清液并加入与上清液等体积 的氯仿混匀脱色，在黑暗条件中静置Ih后取上层清液即茶多酪母液；移取Iml茶多酪母液 于100mL容量瓶，用去离子水定容至刻度，摇匀，待测；
[0010] 2)提取液中茶多酪含量测定
[0011] ①沉香叶样品中干物质的含量测定
[0012] 按照GB/T8302-2013的方法进行沉香叶的精准取样，称取5g(精确至0.OOlg)样 品于烘皿中，置于120°C干燥箱中，加热Ih后加盖取出，于干燥器内冷却至室溫，称量（精确 至0.OOlg)，干物质含量为：
[0013]
[0014] 式中：m。:试样的原始质量，单位为克（g)
[0015] mi:干燥后的试样质量，单位为克（g)
[001引②制备测试液
[0017] 曰、配制10%福林酪试剂（现配）
[0018] 将25ml福林酪试剂转移到250ml容量瓶中，用水定容至刻度线，摇匀。
[0019]b、配制质量分数为7. 5%的碳酸钢溶液
[0020] 称取37. 50g胞2〇)3,用适量水溶解后移至500ml容量瓶中，用水定容至刻度线，摇 匀。
[0021] C、配制没食子酸标准储备液（现配）
[0022] 称取0.IlOOg没食子酸，用适量水溶解后移至100mL容量瓶中，用水定容至刻度 线，摇匀。
[0023] t配制没食子酸工作液
[0024]分别移取 0. 5、1. 0、1. 5、2. 0、2. 5、3. 0、3. 5、4. 0、4. 5、5. 0血的没食子酸标准储备 液于100血容量瓶中，分别定容至刻度线，摇匀。得到浓度分别为5、10、15、20、25、30、35、 40、45、50yg/mL的没食子酸工作液。
[0025] ③茶多酪含量测定及结果计算
[0026] 分别移取已配制的一系列梯度没食子酸工作液、供试液、水各1.00血于25血比 色管内，在每个比色管管内分别加入5.OmL福林酪试剂（10% )，摇匀，反应3-8分钟，加入 4.OmlNazCOs溶液（7. 5% )，加水定容后摇匀。在室溫下遮光放置60min，用紫外可见分光光 度计进行波长扫描及吸光度的测定。
[0027] 比较试样和标准工作液的吸光度，茶多献含量（％)
[0028] 式中：
[0029] A:供试液吸光度；V:样品提取液体积；d:稀释因子；SLOPEstd:没食子酸标准曲 线的斜率;M:样品中干物质的含量（％ ) ;Mi:样品质量（g)。
[0030] 3)实验设计与统计分析
[0031] ①单因素实验
[0032] 准确称取粉碎的沉香叶2.Og,选用不同的浸提时间、液料比、浸提溫度、乙醇浓度 进行水浴浸提单因素试验，每个条件设置=个平行样，反复=次浸提，并按步骤2)所述的 方法计算提取液中的茶多酪含量；
[0033] ②响应面法优化设计
[0034]W单因素试验结果为基础，采用SAS软件应用Box-Behnken设计方法，选择浸提时 间（A)、液料比度）、浸提溫度似、乙醇浓度做作为响应变量，编码水平为-UO和1，且W 沉香叶茶多酪含量（Y)作为响应值，采用响应曲面法对沉香叶茶多酪提取条件进行优化； 对各因素进行回归拟合之后，得到回归方程：
[0035] 茶多酪含量（％)=-17.50450-0.39913八+1.296278+0.010700〔+0.591770-0. 014800AB+9. 32500X10 3AC+3. 85000X10 3AD+ 3. 5000X10 4BC+2.IX10 化0 - 9. OOOOOX 10 4CD+1. 05917X 10 3八2- 0. 013763B 2-1. 67833X 10 3〔2- 8. 90333X 10化2;
[0036] 4)实验结果分析与优化
[0037] 通过Design-Expert. 8. 05软件对回归方程进行计算，得到浸提沉香叶茶多酪最 佳工艺条件。
[0038] 本发明优点如下：
[0039] 1)W乙醇作为溶剂提取沉香叶中的茶多酪，工艺简单，提取率高，易于实现工业化 生产；
[0040] 2)通过响应面法探究和优化沉香叶中茶多酪的提取工艺，对于积极开展沉香叶的 利用研究，实现沉香资源的综合利用，提高沉香的经济价值具有积极的现实意义。
【附图说明】
[0041] 图1为浸提时间对沉香叶茶多酪含量提取的影响图。
[0042] 图2为液料比对沉香叶茶多酪含量提取的影响图。
[0043] 图3为浸提溫度对沉香叶茶多酪含量提取的影响图。
[0044] 图4为乙醇浓度对沉香叶茶多酪含量提取的影响图。 具体实施例
[0045] 实施例1 : 一种利用响应面法优化沉香叶茶多酪的提取工艺，包括如下步骤：
[0046] 1)供试液的制备
[0047] 将沉香叶粉碎，用包装袋装好备用；准确称取粉碎的沉香叶2.Og,用体积分数为 30-70%的乙醇溶液进行水浴浸提，浸提时间为10-50min，液料比为20-40血，g1，浸提溫度 为50-90°C;将粗提取液W转速3500r/min离屯、6min后，取上清液并加入与上清液等体积 的氯仿混匀脱色，在黑暗条件中静置Ih后取上层清液即茶多酪母液；移取Iml茶多酪母液 于100mL容量瓶，用去离子水定容至刻度，摇匀，待测；
[0048] 2)提取液中茶多酪含量测定
[0049] ①沉香叶样品中干物质的含量测定
[0050] 按照GB/T8302-2013的方法进行沉香叶的精准取样，称取5g(精确至0.OOlg)样 品于烘皿中，置于120°C干燥箱中，加热比后加盖取出，于干燥器内冷却至室溫，称量（精确 至0.OOlg),干物质含量为：
[0051]
[00閲式中：m。:试样的原始质量，单位为克（g)
[0053] mi:干燥后的试样质量，单位为克（g)
[0054] ②制备测试液
[0055] a、配制10 %福林酪试剂（现配）
[0056] 将25ml福林酪试剂转移到250ml容量瓶中，用水定容至刻度线，摇匀。
[0057] b、配制质量分数为7. 5%的碳酸钢溶液
[0058] 称取37. 50g胞2〇)3,用适量水溶解后移至500ml容量瓶中，用水定容至刻度线，摇 匀。
[0059]C、配制没食子酸标准储备液（现配）
[0060] 称取0.IlOOg没食子酸，用适量水溶解后移至100mL容量瓶中，用水定容至刻度 线，摇匀。
[0061] t配制没食子酸工作液
[0062] 分别移取 0. 5、1. 0、1. 5、2. 0、2. 5、3. 0、3. 5、4. 0、4. 5、5. 0血的没食子酸标准储备 液于100血容量瓶中，分别定容至刻度线，摇匀。得到浓度分别为5、10、15、20、25、30、35、 40、45、50yg/mL的没食子酸工作液。
[0063] ③茶多酪含量测定及结果计算
[0064] 分别移取已配制的一系列梯度没食子酸工作液、供试液、水各1. 00血于25血比 色管内，在每个比色管管内分别加入5.OmL福林酪试剂（10% )，摇匀，反应3-8分钟，加入 4.OmlNazCOs溶液（7. 5% )，加水定容后摇匀。在室溫下遮光放置60min，用紫外可见分光光 度计进行波长扫描及吸光度的测定。
[0065] 比较试样和标准工作液的吸光度，茶多龄含量（％)
[0066] 式中：
[0067] A:供试液吸光度；V:样品提取液体积；d:稀释因子；SLOPEstd:没食子酸标准曲 线的斜率;M:样品中干物质的含量（％ ) ;Mi:样品质量（g)。
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