一种治疗糖尿病的活性物质及其制备方法和药物的制作方法
【技术领域】
[0001] 本发明属于药物技术领域，具体涉及一种治疗糖尿病的活性物质及其制备方法和 药物，特别是2型糖尿病。
【背景技术】
[0002] 糖尿病是导致死亡的主要原因之一，在美国的糖尿病患者人数已急剧增加，预计 在全世界范围内将达到3. 66亿。其中2型糖尿病影响超过90%的糖尿病患者，它被认为与 氧化应激有关，其特征是胰岛素抵抗。由于抗糖尿病药物的副作用，一直存在着对安全和有 效的降血糖药物的强烈需求。
[0003] 2, 3, 5,4'-二苯乙烯2-0-B-吡喃葡糖苷（二苯乙烯苷，简称SG)的化学结构为 C2DH2209，分子量406. 39,为白色无定形粉末，易溶于水、甲醇和乙醇。它在水溶液中稳定，但 高温（>80°C)可能会影响其稳定性；它在酸中非常不稳定。SG是PM的主要活性化合物，且 在PM根中的浓度可以达到3% -6%。二苯乙烯苷有顺式2, 3, 5,4'-二苯乙烯2-0-B-吡喃 葡糖苷（简称顺式-SG)和反式2,3,5,4' -二苯乙烯2-0-B-吡喃葡糖苷（简称反式-SG) 之分。二苯乙烯苷被鉴定为一种植物抗毒素，是由植物在真菌感染、紫外线照射、机械损伤 等不利条件下产生的。研究发现，二苯乙烯苷具有多种生理活性与药用价值，已在降血脂、 抗衰老、抑制肿瘤等方面显示出功能性，这在当今日趋老龄化的社会中凸现其重要的研究 和开发价值。何首乌（PM) -直被用来作为中国传统医学的滋补品。PM的药用效果被认为 是通过其强大的抗氧化活性进行调节的，但是目前还没用发现其用在糖尿病中的报道，尤 其是2型糖尿病。
【发明内容】
[0004] 为了解决上述问题，本发明的目的在于提供一种治疗糖尿病的活性物质。
[0005] 本发明的目的之二是提供了所述活性物质的提取方法。
[0006] 本发明的目的之三是提供了使用所述活性物质的药物。
[0007] 本发明是通过以下技术方案来实现的：
[0008] -种治疗糖尿病的活性物质，所述活性物质为二苯乙烯苷。
[0009] 较佳地，所述二苯乙稀苷为顺式二苯乙稀苷和反式二苯乙稀苷的混合物。
[0010] 较佳地，所述二苯乙烯苷由何首乌提取制得。
[0011] 较佳地，所述二苯乙烯苷为何首乌提取得到的顺式二苯乙烯苷和反式二苯乙烯苷 的混合物。
[0012] 较佳地，所述反式二苯乙烯苷和顺式二苯乙烯苷的重量百分比比为0~ 99% :100%~1%〇
[0013] 其中，所述顺式二苯乙烯苷是由反式二苯乙烯苷通过紫外诱导而得。
[0014] 制备所述活性物质的方法，具体：
[0015]A、所述反式二苯乙烯苷的制备：
[0016] 先将何首乌（PM)的干根粉碎，在室温下放置2天；
[0017] 接着用60%乙醇提取，固液比为1:10;植物材料滤出后，将乙醇萃取液合并，并用 旋转蒸发器减压浓缩；
[0018] 再将所得到的干提取物用填充有孔树脂的开柱层析（CC)进行分离，乙醇逐步洗 脱，得到含水乙醇馏分在减压下用旋转蒸发器浓缩，得到的粉末；
[0019] 最后用HPLC对二苯乙烯苷进行量化提取得到反式二苯乙烯苷；
[0020] B、顺式二苯乙烯苷的制备：
[0021] 先将步骤A制得的所述反式二苯乙烯苷溶解在水中，放置在紫外光下过夜；然后 将溶液浓缩过滤后用制备性HPLC对溶液进行分离；
[0022] 接着用HYPERSIL_Cls柱洗脱，合并浓缩、冷冻干燥机干燥制得纯顺式二苯乙烯苷。
[0023] 较佳地，所述用HYPERSIL_Cls柱洗脱的条件是流动相的梯度为15分钟内，乙腈浓 度从40 %升至65 %，流速保持在8毫升/分钟。
[0024]PM溶液，或萃取液，可以不经过提纯分离而直接进行紫外照射。
[0025] 这一步，紫外光照射后可以分离，也可以不分离，直接用混合物作为抗糖尿病药物 或保健品。
[0026] 紫外光照射的时间是0. 5小时到24小时，或者是其中任何时间段，即可以是1小 时、2小时、3小时、4小时、8小时、12小时、16小时、20小时或24小时。
[0027] 紫外光照射的频率范围，是200nm到450nm之间最佳，可以是254nm、265nm、280nm、 300nm、315nm、320nm、340nm、345nm、360nm、380nm、385nm和 400nm等。
[0028] 从反式二苯乙烯苷到顺式二苯乙烯苷的转化率为3%~100%之间，可以是3%、 5%、10%、20%、40%、60%、80%、90%、95%和100%等。用于治疗糖尿病的？]?混合物，反 式二苯乙烯苷在混合物中占的比例为0%~99%。即反式二苯乙烯苷可以为0%、2%、5%、 8%、10%、15%、20%、25%、30%、40%、50%、60%、80%、90%、95%、99% 等。
[0029] -种治疗糖尿病的药物，含有所述的活性物质（顺式-SG和反式-SG)，作为药品， 除了该活性物质，还含有其他常规组成药品的添加助剂。药物可以是不同形式的药物、片 剂、胶囊、液体□服液等。
[0030] 较佳地，所述糖尿病为2型糖尿病。
[0031]-种保健品，含有所述的活性物质（顺式-SG和反式-SG)，保健品可以是片剂、胶 囊、液体或食品添加剂。
[0032] 本发明活性物质为PM提取物二苯乙烯苷，更优为二苯乙烯苷为顺式二苯乙烯苷 和反式二苯乙烯苷的混合物。在高脂肪诱导的2型糖尿病小鼠模型中，含顺式-SG和反 式-SG的PM粗提取物表现出显著降血糖的能力。而纯的反式SG和1:20比例的粗提物则 没有此效果通过给KKCgAy/J型2型糖尿病小鼠喂取含有0. 075 %的PM提取物的饮用水， 发现7周后PM提取物处理的小鼠对比对照组有显著降低血糖水平（P〈0. 003)。
【附图说明】
[0033] 图1为本发明PM提取物的HPLC色谱，
[0034] 图2为PM提取物对肝脏样品中IL-6,IL-1β和TNF-α水平的影响；
[0035] 图3为ΡΜ提取物对胰岛素信号转导通路标记的作用；
[0036] 图4为PM提取物对KKCgAy/J小鼠的血清胰岛素水平的影响；
[0037] 图5为从Η0ΜΑ模型近似实现胰岛素抵抗（IR)和β细胞功能（β);
[0038] 图6为SG对血糖和胰岛素水平的影响一；
[0039] 图7为SG对血糖和胰岛素水平的影响二；
[0040] 图8为SG对糖耐量和胰岛素耐受的影响一；
[0041] 图9为SG对糖耐量和胰岛素耐受的影响二；
[0042] 图10为反式-SG的NMR谱；
[0043] 图11为顺式SG的NMR谱；
[0044] 图12为反式-SG的LC-MS谱；
[0045] 图13为顺式-SG的LC-MS谱；
[0046] 图14为纯反式-SG;
[0047] 图15为ΡΜ根粉60%乙醇提取物（顺式-SG与反式-SG比例大约是1 :20);
[0048] 图16为溶液Β用紫外光富集顺式-SG(顺式-SG的反式-SG的比例大约是2:3);
[0049] 图17为不同比例的反式-SG和-顺式SG的抗糖尿病作用；
[0050] 图18为12周高脂肪饮食后小鼠血清葡萄糖水平；
[0051] 图19为12周高脂肪饮食后小鼠血清胰岛素水平；
[0052] 图20为反式-SG和顺式-SG对雄性CF-1小鼠的葡萄糖耐受性的影响；
[0053] 图21为反式-SG和顺式-SG对从Η0ΜΑ模型近似胰岛素抵抗（IR)的影响；
[0054] 图22为PEPCKmRNA用β-肌动蛋白标准化后的表达。
[0055] 具体的实施方式
[0056] 下面结合【具体实施方式】对本发明作进一步的详细说明，以助于本领域技术人员理 解本发明。
[0057] 1、ΡΜ提取物的抗糖尿病效果极其机理
[0058] 1. 1材料与方法
[0059] 1. 1. 1ΡΜ的提取
[0060] ΡΜ的干根粉从河北省安国香草有限公司购买，然后按照吕丽爽的方法稍加修改提 取过程。简言之，ΡΜ的干根粉碎，在室温下放置2天用60%乙醇提取，固液比为1:10。植物 材料滤出后，将乙醇萃取液合并，并用旋转蒸发器减压浓缩。然后将所得到的干提取物用填 充有孔树脂的开柱层析（CC)进行分离。