-N-U-甲基-5-[ (4-甲基赃嗦-1-基）甲基]-IH-化挫-3-基}喀晚-2-胺(化合物E: 168mg)。
[0140] MS化SI+):490[(M+H)+].
[0141] Mffi(DMS0-d6):2.14(3H，s)，2.18-2.53(W，m)，3.45(2H，s)，3.67(3H，s)，3.87 (6H,s),5.15(2H,s),6.46(lH,s),7.06(lH,t J = 8.4Hz),8.26(2H,s),9.42(lH,s).
[0142] 本发明的医药组合物的药理效果通过W下实施例来确认。
[0143] 试验例1FGFR4酶活性检测
[0144] 酶活性检测使用人重组FGFR4(力瓜十八斗才公司，产品目录编号：08CBS-0716C)。 测定法的概要如下所示。
[0145] 用二甲基亚讽(DMSO)溶解被验化合物，W使得DMSO浓度成为2%的方式用反应缓 冲液（100nMHEPES(pH7.5)、0.003%化iji-35、0.004%Tween20、0.5mMDTT、10mM MgCl 2)稀释，制备化合物溶液。向384孔板Iwel 1中，
[0146] (1)添加化合物溶液化L，
[0147] (2)添加化L用反应稀释液稀释过的FGFR4酶(3ngAiL)，
[014引 （3)20分钟后添加巧光底物肤水溶液（组成为IOOmM HEPES(pH 7.5)、0.003% Brij-35、0.004%Tween 20、0.5mM DTT、10mM MgCl2、3.75]iM substrate-FX-peptide 30 (Perkin Elmer产品编号760430)、750tiM ATP)4化，
[0149] (4)于室溫下使之反应30分钟(检测时的被验化合物终浓度为lOnM)。
[01加](5)加入15化/well的20mM抓TA溶液使反应停止后，用LabChip EZ Reader (Perkin Elmer)测定通过FGFR4的激酶反应而生成的憐酸化底物肤量。
[0151] 将未添加被验化合物(仅加入DMSO)的well的测定值设为0%抑制，将未添加 FGFR4 酶的we 11的测定值设为100 %抑制，算出各化合物在1 OnM下的FGFR4酶抑制率。即，FGFR^I 抑制率通过<FGFR4酶抑制率（％)〉= [ I-K添加被验化合物的well的测定值〉-<未添加 FGFR4酶的we 11的测定值〉} / {<未添加被验化合物(仅添加 DMSO)的wel 1的测定值〉-<未添加 FGFR4酶的well的测定值〉}]X100算出。其结果示于表1。
[0152] [表 1]
[0153] 各被验化合物（1 OnM)的FGFR4激酶活性抑制率
[0155] 由W上结果可W确认，作为本发明的医药组合物的有效成分的化合物A、化合物B、 化合物C、化合物D和化合物巧巧制了 FGFR4的激酶活性。
[0156] 试验例2FGFR19基因扩增阳性肝癌细胞化地-7)的增殖检测
[0157] 化H-7细胞为报告了FGF19基因扩增的肝实质细胞癌细胞株(Cancer cell. 2011， 19(3):347-58)。
[015引将化H-7细胞（购自t二一7シ哥^工シス研究資源パシ夕，JCRB0403)W500细 胞/9化L/well逐一接种到96孔聚苯乙締制平底板上，第二天添加被验化合物溶液（I^L) (被验化合物溶液的最终浓度为37nM，DMS0的最终浓度为0.1 % )。添加被验化合物溶液五天 后，使用CellTiter-Glo Luminescent Cell Viability Assay(Promega)通过ARV0X3 (Perkin Elmer)测定化H-7细胞的细胞数。将未添加被验化合物(仅加入DMSO)的well的测 定值设为0 %抑制，将未接种细胞(仅培养基）的wel 1的测定值设为100 %抑制，算出各被验 化合物在37nM下的增殖抑制率。即，通过<増殖抑制率（％ )〉=[ I-K添加被验化合物的well 的测定值〉-< 未接种细胞（仅培养基）的well的测定值〉}/{<未添加被验化合物（仅添加 DMSO)的well的测定值〉-<未接种细胞(仅培养基)的well的测定值〉}] X 100算出。将其结果 示于表2。
[0159] [表 2]
[0160] 各被验化合物(37nM)的化H-7细胞增殖抑制率
[0162] 从W上结果可W确认，作为本发明的医药组合物的有效成分的化合物A、化合物B、 化合物C、化合物D及化合物巧巧制了 FGFl 9基因扩增的肝癌细胞的增殖。
[0163] 试验例3FGF19基因扩增阳性肝癌细胞化地-7)皮下移植小鼠模型抗肿瘤试验
[0164] 向裸鼠（CAnN. Cg-Foxnlnu/CrlCrl j(nu/nu):日本予中一/レスリパ一，雄性，4-5周 龄）右腹侧皮下移植3 X 106cells/0.1 mUPBS和Matrigel Wl: 1悬浮的溶液）的HuH-7细胞。 从移植开始到约3周后，按照肿瘤体积和体重实施分组。各被验化合物给予组由4或5只小鼠 构成，各组的平均肿瘤体积为147-180mm 3。将被验化合物使用0.5%甲基纤维素水溶液制成 悬浊液，每日一次连续经口给药。关于被验化合物的给予量，化合物C设为0.3mg/kg/day，化 合物A、化合物B、化合物D及化合物E设为Img/kg/day，在给药开始日（第0天)和最终测定日 (化合物E为第9天，化合物A、化合物C及化合物D为第10天，化合物B为第13天)测定肿瘤体 积。关于肿瘤体积，用游标卡尺测定短径、长径，W (肿瘤体积mm3 )=(短径mm X短径mm X长 径mm)/2算出。另外，将未添加被验化合物的组（即仅给予0.5%甲基纤维素水溶液)作为对 照组，将对照组的最终测定日设为各化合物的最终测定日的同日（关于针对化合物E的对照 组为第9天，关于针对化合物A、化合物C及化合物D的对照组为第10天，关于针对化合物B的 对照组为第13天）。各被验化合物的肿瘤增殖抑制率通过<肿瘤増殖抑制率（％ )〉= <1-(被 验化合物给予组肿瘤体积增加量/对照组肿瘤体积增加量)〉X 100算出。肿瘤体积增加量W (肿瘤体积增加量）=(各组的最终测定日的肿瘤体积)-(各组第0天的肿瘤体积)算出。其结 果在表3中不出。
[01 化][表 3]
[0166]化H-7细胞皮下移植小鼠模型中的肿瘤增殖抑制率
[0168] 从W上结果可W确认，作为本发明的医药组合物的有效成分的化合物A、化合物B、 化合物C、化合物D及化合物巧巧制了皮下移植有FGF19基因扩增阳性肝癌细胞的动物模型中 肝癌的生长。
[0169] 试验例1至3的结果示出，化合物A、化合物B、化合物C、化合物D或化合物E、或其可 药用盐抑制了 FGFR4的激酶活性，对于与FGFR4或FGF19相关的各种癌(尤其是肝癌，作为一 个方式FGF19基因扩增阳性肝癌）的增殖抑制是有用的。
[0170] 工业实用性
[0171] 作为本发明的医药组合物的有效成分的化合物A、化合物B、化合物C、化合物D或化 合物E、或其可药用盐具有FGFR4抑制作用，可用作与FGFR4相关的癌的治疗用医药组合物、 作为另一方式与FGF19相关的癌的治疗用医药组合物、作为又另一方式FGF19基因扩增阳性 肝癌治疗用医药组合物的有效成分。
【主权项】
1. 一种与FGFR4相关的癌的治疗用医药组合物，其包含5-[ (2，6-二氟-3，5-二甲氧基苄 基)氧基]-N_{3-甲氧基-4-[4-(4-甲基哌嗪-1-基)哌啶-1-基]苯基}嘧啶-2-胺、2-[4-({5_ [(2,6-二氟-3,5-二甲氧基苄基)氧基]啼啶-2-基}氨基)-1!1-吡唑-卜基]乙醇、（21〇-3-[4-({5-[(2,6-二氟-3,5-二甲氧基苄基)氧基]嘧啶-2-基}氨基)-1!1-吡唑-1-基]丙烷-1，2-二 醇、5-[(2,6_二氟-3,5-二甲氧基苄基)氧基]-N-[4-(4-甲基哌嗪-1-基)苯基]嘧啶-2-胺或 5-[ (2，6_二氟-3，5-二甲氧基苄基)氧基]-N-{ 1-甲基-5-[ (4-甲基哌嗪-1-基）甲基]-1H-吡 唑-3-基}嘧啶-2-胺或其可药用盐、以及赋形剂。2. 根据权利要求1所述的医药组合物，其中与FGFR4相关的癌为与FGF19相关的癌。3. 根据权利要求1所述的医药组合物，其中与FGFR4相关的癌为FGF19基因扩增阳性肝 癌。4. 根据权利要求1至3中任一项所述的医药组合物，其包含5-[(2,6_二氟-3,5-二甲氧 基苄基)氧基]-N-{3-甲氧基-4-[4-(4-甲基哌嗪-1-基)哌啶-1-基]苯基}嘧啶-2-胺或其可 药用盐、以及赋形剂。5.根据权利要求1至3中任一项所述的医药组合物，其包含2-[4-({5-[(2,6_二氟-3,5-二甲氧基苄基)氧基]嘧啶-2-基}氨基)-1H-吡唑-1-基]乙醇或其可药用盐、以及赋形剂。6. 根据权利要求1至3中任一项所述的医药组合物，其包含（2R)-3-[4-({5-[(2,6-二 氟-3,5-二甲氧基苄基)氧基]嘧啶-2-基}氨基)-1H-吡唑-1-基]丙烷-1，2-二醇或其可药用 盐、以及赋形剂。7. 根据权利要求1至3中任一项所述的医药组合物，其包含5-[(2,6_二氟-3,5-二甲氧 基苄基)氧基]-N-[4-(4-甲基哌嗪-1-基)苯基]嘧啶-2-胺或其可药用盐、以及赋形剂。8.根据权利要求1至3中任一项所述的医药组合物，其包含5-[(2,6_二氟-3,5-二甲氧 基苄基)氧基]-N-{1-甲基-5-[(4-甲基哌嗪-1-基）甲基]-1H-吡唑-3-基}嘧啶-2-胺或其可 药用盐、以及赋形剂。
【专利摘要】本发明提供一种与FGFR4相关的癌、与FGF19相关的癌或FGF？19基因扩增阳性肝癌的治疗用医药组合物。本发明人对具有FGFR抑制作用的化合物进行了研究，确认到特定的嘧啶化合物具有FGFR4抑制作用，含有这些化合物作为有效成分的医药组合物对于与FGFR4相关的癌、作为另一方式与FGF19相关的癌、作为又另一方式FGF？19基因扩增阳性肝癌具有治疗效果，从而完成了本发明。
【IPC分类】A61P43/00, A61K31/506, A61P1/16, A61P35/00
【公开号】CN105492009
【申请号】CN201480047119
【发明人】二见崇史, 竹下留美
【申请人】安斯泰来制药株式会社
【公开日】2016年4月13日
【申请日】2014年8月27日
【公告号】CA2922352A1, EP3040072A1, US20160199371, WO2015030021A1