造工艺的说明
[0102]该水凝胶是从下文所列成分表而被制造的。制造工艺是如根据专利EP1100555B1和EP 110556B1的，其通过引用而整体并入本文。
[0103]将各种成分分散到适宜的混合容器中(分配是由重量控制的)并且搅拌过夜。一旦混合，该液体溶液的一部分以所需涂层的重量被分配到移动衬底上(清洁的聚氨酯膜，Inspire 2304)。然后由聚丙烯制成的网布(RKW 20g/m2)被放置到液体制剂的顶部，然后其暴露于UV光下并且固化。第二层以所需涂层的重量被涂覆第一层顶部，并且暴露于UV光下，从而形成一个网布在中间的“三明治”。
[0104]该水凝胶切成所需的大小并且装袋，密封和灭菌。完成的产品是通过伽马辐照灭菌的。
[0105]水凝胶成分的成分是:
[0106]单体，2-丙烯酰胺-2-甲基丙磺酸钠(SodiumAMPS) 2405A(在水中58%的溶液)(Lubrizol)
[0107]单体，丙烯酸(BASF)
[0108]甘油BP，EP(H.Fosters)
[0109]Darocur 1173，2_轻基_2_甲基苯丙酮(BASF)
[0110]SR 344，聚(乙二醇)二丙稀酸酯(Sartomer)
[0111]网布，梳理非织造20gsm (RKW-Group)
[0112]Inspire 2304，聚氨酯膜(Exopack)
[ΟΙ13] 70微米，低密度聚乙稀，娃化(Adcoat)
[0114]‘NeoCarta，’可剥离层(Safta)
[0115]亚硝酸盐层的成分是:
[0116]网布，梳理非织造20gsm(RKW-Group)
[0117]‘NeoCarta，’可剥离层(Safta)
[0118]亚硝酸钠，特纯，欧洲药典，美国药典(Merck)
[0119]去离子水(FirstWater Ltd)
[0120]实施例2-糖尿病足部溃疡的治疗
[0121]用根据本发明的敷料治疗一名患有糖尿病足部溃疡的患者。该患者是一名62岁的长期患有糖尿病的老太太，她的左脚背上的溃疡已经存在一年。该溃疡已部分愈合，但是仍然存在，并且溃疡周围的皮肤肿胀和质量差。
[0122]在使用NOx敷料I小时后，在时间点O，20分钟和60分钟进行血流量的测量。为了比较，在同一时间点，也在对侧脚中测量血流量。
[0123]在对侧脚中，血流量在测试期间保持不变。通过比较，在治疗过的脚中的血流量在20分钟内增加了超过500 %，并且在I小时保持在基准之上几乎300 % (图2)。此外，在I小时有一个非常显着的效果。在对侧脚中的血流量维持在低水平和迟缓的。然而，在治疗过的脚中的血流量不仅在体积上增加，而且获得了 “脉冲”形式。这是血管舒缩，并且也是在健康皮肤中完全正常的。这是心跳和呼吸效应的组合，心跳也是用NOx敷料治疗后在痕迹上可以被清晰看到的。
[0124]实施例3-创伤辅料的酸化作用
[0125]虽然正常皮肤是酸性的，但是创伤是碱性环境。在本发明的创伤敷料中发生的化学反应依赖于酸与亚硝酸盐的反应。因此进行试验以确保该敷料将在通常的碱性创伤环境中是有效的。
[0126]首先，进行研究以在静态皮肤创伤模型上测试该敷料。在这个实验中，在NOx敷料施用到浸泡在Hanks溶液(pH 7.1-7.5)的纤维素垫上，其反映了pH上的变化。在五分钟内，在滤纸上的溶液的pH值已经下降到5.65(3-Sigma，5.41-5.89)。在15分钟内，过滤垫的pH值已经下降到5.08(3-Sigma，4.62-5.54)。在实验的时间框架期间内，对照组的pH保持在7_8(从7.04-7.62至7.27-7.85)之间。该Hanks溶液中含有酚红，其在pH<6.8时是黄色，在6.8-
8.2时是红色以及在>8.2时是紫色。用凝胶形式放置在其上面的两个样品在五分钟内之内变成黄色;对照组仍然是红色。
[0127]使用纤维素垫的该实验是静态试验。在活体应用的情况下，创伤会不断渗出碱性pH值的液体。因此该敷料必须能够持续地改变当碱性液体注入时的环境。为了对此进行评估，该NOx凝胶敷料被放置在一个动态创伤模型中(“DWM”，WRAP模型(外科材料测试实验室，英国(Surgical Materials Testing Laboratory，UK)))。在一段指定期限内，DffM模型被不断注入Hanks溶液到创面(二纤维素滤纸)上的创伤。5公斤重量的敷料放置其上以模拟加压包扎。在起初的6小时内检测监测pH值(图3)
[0128]敷料在创伤模型上保留72小时，并且在不同的时间点测量“创面”的pH值(图4)。输注率为0.7ml/hr，这意味着总量50ml的碱性溶液被递送至敷料。
[0129]这些结果是重要的，因为它们显示虽然在创伤的碱性环境，该敷料提供了酸化作用。
[0130]实施例4-糖尿病足部溃疡创面内血流量的增加
[0131]如使用激光多普勒血流计(LDF)测定的，在不存在还原剂时使用2部分的一氧化氮生成敷料，糖尿病足部溃疡创面内的血流量从基线显著增加。
[0132]6位糖尿病足部溃疡患者均同意参加临床研究，其足部溃疡至少25mm2并且已经存在6周以上。在受控环境中，使用MoorVMS LDF2在创伤中心和创面周围监测灌注单位，所述灌注单位是所接受的血流量测量。在受影响脚和在对侧脚的相同位点上，在基线上进行测量。如在实施例1中所描述的第一层和第二水凝顶层被应用在创伤上。30分钟后除去敷料，测定创面内和创面周围和在对侧脚位点的血流量。在被去除之前再次施用敷料另外的30分钟，并且再次测定创面内和创面周围和在对侧脚位点的血流量。
[0133]血流量单位的平均增长是74.8PU(p = 0.012)，但是在研究的受试者中血流量基线的范围是从24.6至294.9。它也是相关的报告，血流量的平均百分比增加是82.8% (P =0.016)。全方位的增加可以在图5中看出。
[0134]实施例5-糖尿病足部溃疡愈合的促进
[0135]2层无还原剂的一氧化氮生成敷料在临床研究中刺激糖尿病足部溃疡的愈合。
[0136]在一个正在进行的随机，对照临床研究中，该研究是探讨具有轻度或中度缺血的大于25平方毫米溃疡区域愈合的，在招募初期4名患者已经显示出通过面积减少而测量到的显著响应。使用SilhouetteStar?摄像头和软件测量在基线上的患者的溃疡，所述摄像头和软件可以精确测量溃疡的周长和面积。使用如实施例1中描述的敷料系统的第一层和第二水凝胶顶层治疗患者。至少每48小时更换该敷料系统。患者在第一个月的每周和此后每2周进行复查。在每次复查中使用Si lhouetteStar?摄像头进行成像和测量。
[0137]初步结果是:
[0138]溃疡I，一名58岁年长患者，在治疗之前溃疡已经存在6周。在基线上，溃疡是
0.9cm2。溃疡在开始使用一氧化氮敷料治疗5周之内完全愈合。
[0139]溃疡2，一名58岁年长患者，在治疗之前溃疡已经存在22周。在基线上，溃疡是4.3cm2。在使用一氧化氮敷料12周之后，溃疡仍然愈合和测量是0.3cm2(7%的原溃疡面积)。
[0140]溃疡3，一名45岁年长患者，在治疗之前溃疡已经存在12周。在基线上，溃疡是0.3cm2。溃疡在开始使用一氧化氮敷料治疗4周之内完全愈合。
[0141]溃疡4，一名75岁年长患者，在治疗之前溃疡已经存在12个月。在基线上，溃疡是
0.3cm2。溃疡在开始使用一氧化氮敷料治疗9周之内完全愈合。
[0142]图6显示出创伤随时间的愈合。
[0143]实施例6-源自本发明敷料系统的一氧化氮生产
[0144]通过经由与臭氧反应的化学发光而检测从敷料系统释放出的气体，测定通过敷料系统生成的一氧化氮的数量O用NOx分析仪(Thermo Scientif ic，UK)测定一氧化氮的浓度。
[0145]第一层:创伤接触网布(含0.1M亚硝酸钠)
[0146]网布是聚丙烯网布(RKff-Group)，吸入0.1M亚硝酸钠溶液，来自欧洲药典、美国默克药典的特纯亚硝酸钠和去离子水。
[0147]制造工艺的说明
[0148]称量亚硝酸钠到一个适宜大小的容器中，然后小心地转移到已知体积的去离子水中，随后搅拌直至完全溶解以获得适当浓度的溶液(0.1M)。在这个实施方案中，亚硝酸钠溶液被分散到网布中(25cm2)，然后在最短时间内被放置到每个培养皿中以