C0PD)来说肺的炎症是重要的特征， 故观察了炎症细胞中的中性粒细胞的数量增加。C0PD诱发群与正常对照群对比，观察了支 气管肺泡灌洗液内总炎症细胞数的增加，并且炎症细胞中的中性粒细胞的数量显著增加 了。相反，用药群的EC-18 30mg/kg给药群中总炎症细胞数被抑制了 15.1 %，中性粒细胞的 数量没有明显的变化。EC-18 60mg/kg给药群中总炎症细胞数被抑制了44.8 % (P〈0.05)，中 性粒细胞的数量也被抑制了42 % (P〈0.05)。
[0075] 实施例5:通过流式细胞术测定⑶栌和中性粒细胞(Neutrophils Gr-Q细胞数 [0076] 将众多分离的BAL细胞调整到5X105细胞后，在4°C温度进行了免疫荧光染色 (immunofluorescence staining) 〇分别放入PE-anti_CD4(553047，BD PharmingenWPPE-anti-Gr-l(553128，BDPharmingen)后用30分钟时间在冰上进行反应。反应后3次以上用磷 酸盐缓冲生理盐水水洗后使用流式细胞仪(flow cytometer)的配套软件(Cell Quest)程 序（643274，BDBiosciences)将CD4+和Gr-1+Neutrophi Γ细胞频率以百分比（％ )分析后，采 用总细胞数(total cells)算出各组织中的绝对总细胞数(absolute number)。
[0077]【表5】
[0078]
[
[0080] 其结果如上述表5所示，Coro诱发群是CD4+和中性粒细胞(Neutrophils+Gr-r)细 胞数与正常对照群相比都大幅度增加了。相反，EC-18 30mg/kg给药群中比起⑶PD诱发群， CD4+细胞数被抑制了 39 · 6 %、中性粒细胞(Neutrophi ls+Gr-Γ)细胞数被抑制了40 · 9 % (P〈 0 · 05); 60mg/kg给药群中，CD4+细胞数被抑制了70 · 0 %、Neutrophi 1 s+Gr-Γ细胞数被抑制了 62·7%(Ρ〈0·05)。
[0081 ] 实施例6:按ELI SA方法肺泡灌洗液内的CXCL-1，TNF-α和ΜΙΡ-2的表达量测定
[0082] 小鼠中分离的肺泡灌洗液中将CXCL-1、TNF_a以及MIP-2标准用应用酶联免疫吸附 法（enzyme-1 inked immuno-sorbent assay，ELISA)来测定。CXCL-1、TNF_a以及MIP-2的各 抗体(antibody)用包被(coating)缓冲液(291195,R&D System)稀释后涂覆(coating)微孔 (microwell)后在4°C温度下过了一夜(overnight)。各孔用洗涤(washing)缓冲液洗涤3次 后分别分注100成血清(稀释10倍）。在室温放置1小时候用洗涤(washing)缓冲液洗涤2次 后处理抗体(antibody)Avidin-HRP conjugeted(DY998，R&D System)100 成，在室温放置 1 小时后再次洗涤。分别分注1〇〇減的TMB基质在暗室放置30分钟后，将50成的停止液（stop solution)处理后测定了ELISA reader(Emax,Molecular Devices)450nm处的吸光度，计算 表达抑制率的结果如下述表6所示。
[0083] 【表6】
[0085]~如上述表6所示，C0PD诱发群在支气管肺泡灌洗液内CXCL-1的生成比起正常对照 群显著增加。但是，用药群的EC-18给药群比起C0PD诱发群，在30mg/kg给药群中被抑制了 15·4%，60mg/kg给药群中被抑制了54·3%(Ρ〈0·01)。
[0086]【表7】 Γηη〇7?
[0089] 另外，如上述表7所示，C0PD诱发群在支气管肺泡灌洗液内TNF-α的生成比起正常 对照群显著增加。但是，作为用药群的EC-18给药群与C〇ro诱发群比较，30mg/kg给药群中抑 制了 36 · 0 %，60mg/kg给药群中抑制了61 · 8 % (P〈0 · 05)。
[0090] 【表8】
[0092]另外，如上述表8所示，C0PD诱发群在支气管肺泡灌洗液内MIP-2的生成比起正常 对照群显著增加。但是，作为用药群的EC-18给药群与C〇ro诱发群比较，30mg/kg给药群中抑 制了40 · 6 %，60mg/kg给药群中抑制了63 · 8 % (P〈0 · 05)。
[0093]综上所述，本发明的所属技术领域的技术人员是能够明白不变更本发明的技术思 想或者必要的特征下可以以其他具体的形态实施。与此相关，可以理解为以上的技术例在 所有的面是一种例示，并且不仅限于此。解释为比起上述详细的说明，本发明的范围包括后 述的专利权利要求范围的含义及范围，以及从其等同概念得出的所有变更或者变形的形态 都应属于本发明的范围。
【主权项】
1. 一种慢性阻塞性肺病的预防或治疗用药学组合物，其特征在于，含有W下述化学式I 表示的单乙酷基二酷基甘油化合物作为有效成分； [化学式1]所述化学式中Rl及R2分别是碳数为14至20的脂肪酸基。2. 根据权利要求1所述的慢性阻塞性肺病的预防或治疗用药学组合物，其特征在于，所 述Rl及R2分别为由栋桐酷（palmitoyl)、油酷（oleoyl)、亚油酷（Iinoleoyl)、亚麻酷 (Iinolenoyl)、硬脂酷（Stearoyl)、十四酷(myriStoyl )、花生四締酷(arachidonoyl)组成 的群中选择。3. 根据权利要求1所述的慢性阻塞性肺病的预防或治疗用药学组合物，其特征在于，所 述Rl及R2的组合(Rl/R2)由油酷/栋桐酷、栋桐酷/油酷、栋桐酷/亚油酷、栋桐酷/亚麻酷、栋 桐酷/花生四締酷、栋桐酷/硬脂酷、栋桐酷/栋桐酷、油酷/硬脂酷、亚油酷/栋桐酷、亚油酷/ 硬脂酷、硬脂酷/亚油酷、硬脂酷/油酷、十四酷/亚油酷或者十四酷/油酷组成的群中选择。4. 根据权利要求1所述的慢性阻塞性肺病的预防或治疗用药学组合物，其特征在于，所 述单乙酷基二酷基甘油化合物是W所述化学式2表示的化合物。 [化学式2]5. 根据权利要求1所述的慢性阻塞性肺病的预防或治疗用药学组合物，其特征在于，所 述单乙酷基二酷基甘油化合物是从鹿茸分离的组合物。6. 根据权利要求1所述的慢性阻塞性肺病的预防或治疗用药学组合物，其特征在于，所 述慢性阻塞性肺病是慢性支气管炎或肺气肿(Em地ysema)。7. 根据权利要求1所述的慢性阻塞性肺病的预防或治疗用药学组合物，其特征在于，所 述单乙酷基二酷基甘油化合物能够减少由IL-4，CX化-IJNF-a及MIP-2组成的群中选择的 任一一个W上的蛋白质分泌。8. 根据权利要求1所述的慢性阻塞性肺病的预防或治疗用药学组合物，其特征在于，所 述单乙酷基二酷基甘油化合物能够减少支气管或血管周围的炎症细胞的数量，或者减少 CD4+或中性粒细胞+Gr-r细胞数量。9. 根据权利要求1所述的慢性阻塞性肺病的预防或治疗用药学组合物，其特征在于，所 述组合物中W所述化学式1表示的单乙酷基二酷基甘油化合物的含有量为0.001至50重 量％;[化学式1] 所述化学式中Rl及R2分别是碳数为14至20的脂肪酸基。10. -种慢性阻塞性肺病的预防或改善用健康功能食品组合物，其特征在于，含有W下 述化学式1表示的单乙酷基二酷基甘油化合物作为有效成分； [化学式1]在所述化学式中Rl及R2分别是碳数为14至20的脂肪酸基。11. 根据权利要求10所述的慢性阻塞性肺病的预防或改善用健康功能食品组合物，其 特征在于，所述Rl及R2分别由栋桐酷(palmitoyl)、油酷(oleoyl)、亚油酷（linoleoyl)、亚 麻酷（linoIenoyl)、硬脂酷（Stearoyl)、十四酷(myristoyl)、花生四締酷(arachidonoyl) 组成的群中选择。12. 根据权利要求10所述的慢性阻塞性肺病的预防或改善用健康功能食品组合物，其 特征在于，所述Rl及R2的组合(R1/R2)由油酷/栋桐酷、栋桐酷/油酷、栋桐酷/亚油酷、栋桐 酷/亚麻酷、栋桐酷/花生四締酷、栋桐酷/硬脂酷、栋桐酷/栋桐酷、油酷/硬脂酷、亚油酷/栋 桐酷、亚油酷/硬脂酷、硬脂酷/亚油酷、硬脂酷/油酷、十四酷/亚油酷或者十四酷/油酷组成 的群中选择。13. -种慢性阻塞性肺病的预防或治疗方法，其特征在于;包括将权利要求1至9之一所 述的组合物对非人类个体给药的步骤。
【专利摘要】本发明涉及含有以单乙酰基二酰基甘油化合物作为有效成分的慢性阻塞性肺病的预防或者治疗用药学组合物，慢性阻塞性肺病的预防或改善用健康功能食品组合物。本发明的单乙酰基二酰基甘油化合物在EL-4细胞中抑制IL-4的表达，在动物模型中能够抑制支气管内炎症细胞的扩散。另外，本发明的化合物在抑制CXCL-1,TNF-α以及MIP-2的表达上有非常好的效果，所以可以克服现阶段使用的慢性阻塞性肺病治疗剂的副作用，作为无毒性且治疗效果卓越的化合物可以有益的使用为慢性阻塞性肺病的预防、治疗及改善用组合物。
【IPC分类】A61P11/00, A61K31/20, A61K31/22
【公开号】CN105592847
【申请号】CN201480053789
【发明人】吴世湸, 安境燮, 李洙义, 申寅植, 权玉京, 金升衡, 全灿美, 李太锡, 韩龙海, 孙起荣, 姜钟求, 金恩京
【申请人】Enzychem生命科学株式会社, 韩国生命工学研究院
【公开日】2016年5月18日
【申请日】2014年8月19日
【公告号】CA2921849A1, EP3037093A1, WO2015026123A1