一种银杏叶酊剂及其制备方法
【技术领域】
[0001] 本发明涉及一种银杏叶酊剂及其制备方法，属于中药合成技术领域。
【背景技术】
[0002] 银杏叶为银杏科植物银杏的干燥叶，银杏叶提取物是经现代提取工艺从银杏叶中 提取的活性物质的富集产品，可用于阿尔茨海默病、抑郁症、糖尿病、神经疾病、阳痿、记忆 障碍、外周血管疾病、间歇性跛行、脑转耳鸣等疾病的治疗。其主要活性成分为黄酮类和萜 类。黄酮类成分包括单黄酮、黄酮醇苷、乙酰化黄酮醇苷、双黄酮、黄烷-3-醇类以及原花色 素等。萜类银杏内酯有银杏内酯A、B、C、J、M及白果内酯。
[0003] 目前国家食品药品监督管理总局(CFDA)批准了数十种银杏叶提取物剂型，包括银 杏叶片、胶囊、颗粒、软胶囊、分散片、丸、酊、滴剂、口服液、银杏叶提取物注射液等，其成药 形式均是将银杏叶提取物与其它辅料混合形成，银杏叶酊就是将银杏叶提取物溶解在一定 深度的乙醇中形成的一种剂型。具有抑制血小板聚集、降低血液黏滞度、改善微循环的作 用，并能通过加强心肌组织代谢，抑制心肌纤维化，通过舒张血管、改善微循环等，来保持营 养成分及氧气的供给，阻止心肌功能哀退，同时能减少氧自由基，提尚对缺氧的耐受力，调 节血官功能，增强组织能量代谢，降低血清总胆固醇和低密度脂蛋白胆固醇，升高高密度脂 蛋白胆固醇，减少脑梗死及其他心脑血管疾病的危险因素等作用。主要用于治疗用于瘀血 阻络引起的胸痹心痛、中风、半身不遂、舌强语謇;冠心病稳定型心绞痛、脑梗死等疾病。众 所周知，银杏叶提取物是一个非常复杂的化合物富集产品，除上述主要的活性成分，其含有 从无机物到有机物、从极性到非极性、从小分子到生物大分子的各种成分，据不完全统计银 杏叶中含有240多个化学成分。受技术发展的制约，目前银杏叶提取物中各化学成分并没有 完全被确认，且有效成份、作用机制、药代动力学及不良反应也并没有完全探究清楚。而具 有本领域公知常识的技术人员均知悉，上述提到的作用机制、药代动力学及不良反应均与 成药中的化学成分有着必然的联系。因此，进一步明确银杏叶提取物中的有效成分，并进一 步精确有效成分的含量，提尚银杏叶提取物的药效，减少不良反应，对于提尚患者健康及其 用药安全具有重要的意义。
【发明内容】
[0004] 本发明的目的在于提供一种有效成分及含量更加明确的银杏叶酊剂，并进一步的 提供该提取物的制备方法。
[0005] 为此，本申请采取的技术方案为，
[0006] -种银杏叶酊剂，包括由银杏叶提取物形成的中药组合物和用于溶解所述中药组 合物的乙醇水溶液，以占所述中药组合物的质量百分比计，所述中药组合物包括，24-40% 的银杏总黄酮，6-16%的银杏内酯，银杏酸小于5ppm。
[0007] 上述的银杏叶酊剂中，所述中药组合物中包括，2.08-3.46 %的山奈酚-3-0-对香 豆酰基葡萄糖鼠李糖苷，2.11-3.53%的槲皮素-3-0-2"，6" -二鼠李糖基葡萄糖苷。
[0008] 上述的银杏叶酊剂中，所述中药组合物中包括，1.4-3 %的银杏内酯A，0.9-1.8 % 的银杏内酯B和1.2-1.3%的银杏内酯C。
[0009] 上述的银杏叶酊剂中，所述中药组合物中还包括白果内酯和芦丁。
[0010] 上述的银杏叶酊剂中，所述中药组合物的制备方法包括，
[0011] Sl山奈酚-3-0-对香豆酰基葡萄糖鼠李糖苷的制备方法，
[0012] (1)将银杏叶提取物溶于体积浓度为40-80%的乙醇-水溶液中，制备得到银杏叶 提取物的浓度为10-1 〇〇〇mg/mL的提取物溶液；
[0013] (2)对所述步骤（1)得到的提取物溶液进行一维液相色谱分离，得到一维粗产品， 本步骤中一维液相色谱分离的条件为，色谱柱采用以硅胶为基质的亲水型色谱填料;流动 相中的有机相为乙醇或甲醇，水相为水;洗脱条件以〇_15min有机相95%降至90%梯度进行 或等度进行；收集保留时间为15~20min的组分和剩余组分，将收集到的保留时间为15~ 20min的组分去除溶剂干燥得到所述山奈酚-3-0-对香豆酰基葡萄糖鼠李糖苷的一维粗产 品；
[0014] (3)将步骤(2)得到的一维粗产品溶解在体积浓度为40-80%的甲醇-水溶液或乙 醇-水溶液中，得到所述一维粗产品的浓度为20-200mg/mL的粗产品溶液；
[0015] (4)对所述步骤(3)得到的粗产品溶液进行二维液相色谱制备，得到山奈酚-3-0-对香豆酰基葡萄糖鼠李糖苷，其中二维液相色谱条件为，色谱柱采用以硅胶为基质键合C18 反相填料;流动相中的有机相为乙醇或甲醇，水相为水;洗脱条件以0-60min有机相15%增 至80%梯度进行或等度进行;收集保留时间为50-55min的组分，干燥得到山奈酚-3-0-对香 豆酰基葡萄糖鼠李糖苷；
[0016] S2所述槲皮素-3-0-2"，6"_二鼠李糖基葡萄糖苷的制备方法，
[0017] (a)将银杏叶提取物溶于体积浓度为40-80%的乙醇-水溶液中，制备得到银杏叶 提取物的浓度为10-1 〇〇〇mg/mL的提取物溶液；
[0018] (b)对所述步骤(a)得到的提取物溶液进行一维液相色谱分离，得到一维粗产品； 本步骤中一维液相色谱分离的条件为，色谱柱采用以硅胶为基质的亲水型色谱填料;流动 相中的有机相为乙醇或乙腈，水相为水;洗脱条件以〇_15min有机相95%降至90%梯度进行 或等度进行；收集保留时间为28-32min的组分和残余组分，将保留时间为28-32min的组分 去除溶剂干燥得到含有槲皮素-3-0-2"，6"_二鼠李糖基葡萄糖苷的一维粗产品；
[0019] (c)将步骤(b)得到的一维粗产品溶解在体积浓度为40-80%的甲醇-水溶液或乙 醇-水溶液中，得到所述一维粗产品的浓度为20-200mg/mL的粗产品溶液；
[0020] (d)对所述步骤(c)得到的粗产品溶液进行二维液相色谱制备，得到槲皮素-3-0-2"，6"_二鼠李糖基葡萄糖苷；
[0021 ] S3由银杏叶提取物形成的中药组合物的制备方法
[0022]将所述残余组分和和所述剩余组分去除容积后混合，并干燥得到辅助品，将所述 辅助品、所述山奈酚-3-0-对香豆酰基葡萄糖鼠李糖苷和所述槲皮素-3-0-2"，6"_二鼠李糖 基葡萄糖苷混合得到所述由银杏叶提取物形成的中药组合物。
[0023]上述的银杏叶酊剂中，
[0024]所述步骤(d)中二维液相色谱条件为，色谱柱采用以硅胶为基质键合C18反相填 料;流动相中的有机相为乙醇或乙腈，水相为水;0-60min内等度洗脱，洗脱时有机相的体积 浓度为15-25% ;收集保留时间为40-45min的组分，干燥得到槲皮素-3-0-2"，6"-二鼠李糖 基葡萄糖苷。
[0025] 上述的银杏叶酊剂中，所述步骤(2)中一维液相色谱分离，有机相还含有甲酸，甲 酸体积浓度为〇. 1 % ;水相中还含有甲酸，甲酸体积浓度为〇. 1 % ;
[0026] 所述步骤(4)二维液相色谱制备，流动相中还含有甲酸，甲酸体积浓度为0.1%;水 相中还含有甲酸，甲酸体积浓度为0.1 %。
[0027] 上述的银杏叶酊剂中，所述步骤(c)中一维液相色谱分离，有机相还含有甲酸，甲 酸体积浓度为〇. 1 % ;水相中还含有甲酸，甲酸体积浓度为〇. 1 % ;
[0028] 所述步骤(d)二维液相色谱制备，流动相中还含有甲酸，甲酸体积浓度为0.1%;水 相中还含有甲酸，甲酸体积浓度为0.1 %。
[0029] 本申请还提供了一种上述任一银杏叶酊剂的制备方法，包括，取所述银杏叶提取 物形成的中药组合物溶解于体积浓度为60%的乙醇水溶液中，即得，其中所述中药组合物 与所述乙醇水溶液的质量体积比为0.4g/10ml。
[0030] 上述银杏叶酊剂的制备方法中，还包括加入辅料的步骤。
[0031 ]与现有技术相比，本发明具有如下优点，
[0032] (1)本发明的银杏叶酊中，将其中的银杏叶提取物中银杏总黄酮的含量明确到24-40 %，银杏内酯的含量明确到6-16 %，同时明确了两种对其药物具有重要影响的山奈酚ΙΟ-对香豆酰基葡萄糖鼠李糖苷和槲皮素-3-0-2" ，6"_ 二鼠李糖基葡萄糖苷，并进一步的将 其含量精确限定为2.08-3.46 %和2.11-3.53 %，进一步的，清楚的界定其银杏内酯Al. 4-3%，银杏内酯BO. 9-1.8%和银杏内酯Cl. 2-1.3%。通过对银杏叶提取物中有效成分含量的 进一步精确，及有效成分的进一步认定，提尚了银杏叶提取物的药效，进而提尚了由其制备 得到的酊剂的药效。
[0033] (2)本发明的银杏叶酊中，通过对银杏叶提取物进行精制和提纯，得到具有确切含 量的组合物，在提高银杏叶提取物药效的同时，通过上述操作过程减少了杂质，从而减少了 酊剂的不良反应。
[0034] (3)本申请从银杏叶提取物中采用二维液相色谱法分离出明确的药用化合物山奈 酚-3-0-对香豆酰基葡萄糖鼠李糖苷和槲皮素-3-0-2"，6" -二鼠李糖基葡萄糖苷，其制备方 法简单，分离操作方便，利于银杏叶提取物药品质量的提高。
【附图说明】
[0035] 为了使本发明的内容更容易被清楚的理解，下面根据本发明的具体实施例并结合 附图，对本发明作进一步详细的说明，其中
[0036] 图1本发明实施例1中制备得到的山奈酚-3-0-对香豆酰基葡萄糖鼠李糖苷的质 谱；
[0037] 图2本发明实施例1中制备得到的山奈酚-3-0-对香豆酰基葡萄糖鼠李糖苷的H谱；
[0038] 图3本发明实施例1中制备得到的山奈酚-3-0-对香豆酰基葡萄糖鼠李糖苷的C谱；
[0039] 图4本发明实施例1中制备得到的槲皮素-3-0-2"，6"_二鼠李糖基葡萄糖苷的质 谱；
[0040] 图5本发明实施例1中制备得到的槲皮素-3-0-2"，6"_二鼠李糖基葡萄糖苷的H谱；
[0041] 图6本发明实施例1中制备得到的槲皮素-3-0-2"，6"_二鼠李糖基葡萄糖苷的C谱。
【具体实施方式】
[0042] 本发明实施例中出现的百分数％，如无特殊说明表示的是体积百分数，例如， "40%的乙醇一水溶液"表示乙醇的水溶液其中乙醇的体积百分数为40%;
[0043] "40%的甲醇一水溶液"表示甲醇的水溶液其中甲醇的体积百分数为40% ;
[0044] "乙醇（含0.1 %甲酸）"表示乙醇与甲酸的混合溶液其中甲酸的体积百分数为 0.1 % ; "7K(含〇. 1 %甲酸)"表示水与甲酸的混合溶液其中甲酸的体积百分数为〇. 1 %。
[0045] 本申请的银杏叶提取物适用于采用现有提取工艺从银杏叶中提取得到的提取物， 为便于比较，本申请实施例中采用的银杏叶提取物由北京双鹤高科天然药物有限责任公司 提供。
[0046] 实施例1
[0047] 山奈酚-3-0-对香豆酰基葡萄糖鼠李糖苷的制备
[0048] 称取银杏叶提取物IOg，溶于50mL 40%的乙醇一水溶液，制得银杏叶提取物溶液， 浓度为200mg/mL，过0.45μηι微孔滤膜，进行一维液相色谱分离。一维液相色谱采用以硅胶为 基质的亲水型色谱填料50 X 250mm，ΙΟμπι(华谱新创科技有限公司），流动相采用含0.1 %体 积浓度甲酸的甲醇为有机相，含〇. 1%体积浓度甲酸的水为水相，梯度洗脱方式:〇-15min有 机相浓度从95%降至90%台阶梯度进行。采用DAD紫外检测器360nm选择吸收波长，制备温 度为室温，进样量为500yL/针，流动相流速为90mL/min，收集15~20分钟的馏分和剩余组 分，将收集到的15~20分钟的馏分进行旋转蒸发浓缩至干，为一维制备山奈酚