本申请要求2012年11月29日提交的系列号为61/731,463的美国临时申请的优先权，该申请通过引用整体并入本文。
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不适用。
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附后。
发明背景
本发明涉及抑制SDF-1趋化因子(也称为CXCL12趋化因子)或I-TAC(也称为CXCL11)结合到趋化因子受体CXCR7的新化合物和药物组合物。这些化合物用于预防肿瘤细胞增殖，肿瘤形成，肿瘤血管生成、转移、炎性疾病包括但不限于关节炎，肾脏炎性疾病和多发性硬化症，不当血管化病症包括但不限于创伤愈合，HIV感染性的治疗，干细胞分化的治疗，以及活动障碍(也见，共同未决的USSN 10/912638、11/407,729和11/050,345)。
趋化因子是小的、细胞因子样蛋白的超家族，诱导细胞骨架重排，牢固粘附于内皮细胞和定向迁移，并且还可以影响细胞活化和增殖。趋化因子以协调方式与细胞表面蛋白作用以引导各种子集的细胞特定归巢到特定解剖部位。
一些团体的早期研究努力已经示出趋化因子受体CXCR4在转移和肿瘤生长中的作用。Muller等,“乳腺癌转移中趋化因子受体的参与”，(Involvement of Chemokine Receptors in Breast Cancer Metastasis)Nature,410:50-56(2001)表明乳腺肿瘤细胞在转移过程中使用趋化因子介导机制，如调节白细胞募集的那些。肿瘤细胞表达独特的、非随机模式的功能活跃的趋化因子受体。通过CXCR4的信号转导介导乳腺癌细胞内肌动蛋白聚合和伪足形成，并诱导趋化性和侵入性响应。此外，代表乳腺癌转移主要部位的器官(如淋巴结，骨髓和肺)是CXCR4受体的配体的最丰富来源。
使用免疫缺陷小鼠，Muller和同事们成功地通过采用已知结合CXCR4的抗体处理小鼠而减少了注射的人乳腺癌细胞的转移。他们的发现表明可以通过用CXCR4拮抗剂治疗患者来减少乳腺癌转移。
Bertolini等,“CXCR4中和,非霍奇金淋巴瘤的新治疗方法”(CXCR4Neutralization,a Novel Therapeutic Approach for Non-Hodgkin’s Lymphoma),Cancer Research,62:3106-3112(2002)表现出采用抗CXCR4抗体处理注射了人淋巴瘤细胞的免疫缺陷小鼠的肿瘤体积减小以及生存时间延长。他们解释他们的发现意味着可以通过采用CXCR4拮抗剂治疗患者来减小肿瘤体积。
最近的研究表明，另一趋化因子受体，CXCR7，也可能是治疗癌症的靶标。与正常细胞相比，CXCR7优先在转化的细胞内表达，在许多人类癌症中具有可检测的表达。体外研究表明CXCR7表达细胞的增殖可以通过CXCR7拮抗剂来抑制。小鼠体内研究表明，CXCR7拮抗剂能抑制肿瘤形成和肿瘤生长。
Bertolini和同事们观察到的肿瘤体积的减少的另一种解释说明了CXCR7的潜在重要性。这种减少可以清楚地是抗体介导的清除的结果，而不是如最初认为的抗CXCR4抗体的结果。在抗体介导的清除中，识别淋巴瘤细胞细胞表面上的蛋白的任何抗体将具有与归因于抗CXCR4抗体相同的效果。不幸的是，Bertolini和同事们的研究对观测到的肿瘤反应是否是由于抗体介导的清除或与CXCR4相互作用尚无定论。
但是现在已经知道，Bertolini和同事们采用的淋巴瘤细胞表达CXCR4和CXCR7两者。SDF-1是CXCR4的唯一配体。SDF-1和I-TAC均结合CXCR7。使用抗SDF-1抗体，已表明CXCR7的拮抗剂负责减少肿瘤负荷和增加存活率。因为SDF-1是CXCR4的唯一配体，人们预期采用抗SDF-1抗体中和SDF-1将相当于采用抗CXCR4抗体中和CXCR4。然而，用抗SDF-1抗体的实验证实仅部分减少肿瘤负荷和增加存活率。其结果是，CXCR7是可能的目标，因持续的活性似乎是由于第二配位体，I-TAC，与CXCR7的相互作用。
直到最近，CXCR7在肿瘤细胞增殖，肿瘤生长和转移中可能的重要性是未知的。现在，有证据指出某些CXCR7拮抗剂能够阻止癌症生长和扩散，并且表达模式表明CXCR7受体有限的组织分布，关联到肿瘤发生。
此外，已经发现CXCR7可作为某些遗传变异的人类免疫缺陷病毒(HIV)和猿免疫缺陷病毒(SIV)的共同受体，特别是对HIV-2-ROD，X4嗜性(tropic)分离物(Shimizu,N.等,J.Virol.,(2000)74:619-626；Balabanian,K.等J.Biol.Chem.,出版中；原稿M508234200于2005年8月17日出版)。
更进一步地，已经描述SDF-1在源自包括骨髓的特定造血组织的造血祖细胞和干细胞的动员中有作用，特别是带有CXCR4受体的那些细胞的动员(Hattori,K.等,Blood,(2000)97:3354-3360；WO 2005/000333,其公开的内容通过引用并入本文)。最近的研究表明，CXCR7受体也可在干细胞动员过程中起作用。
综上，显然，能够特异性结合CXCR7受体的化合物可用于治疗可能会从这样的相互作用中受益的疾病和其它生物学病症。本发明提供这样的化合物以及药物组合物和用于治疗的相关方法。
发明概要
在一个方面，本发明提供式I所示的化合物，
或其药学上可接受的盐、水合物或N-氧化物。在“发明详述”中描述了各种基团(如R1、R2、R3、R4、Z、Xa、Xb、Xc和下标n)。
本文提供的化合物用于结合CXCR7并治疗疾病，所述疾病至少部分依赖于CXCR7活性。因此，在其他方面本发明提供组合物，所述组合物包含混合有药学上可接受的赋形剂的一或多种上述化合物。
在其他方面，本发明提供治疗各种疾病的方法，本文进一步讨论，包括向有需要该治疗的对象给予治疗有效量的上述通式化合物一段足以治疗疾病的时间。
在另一方面，本发明提供诊断个体疾病的方法。在这些方法中，本文提供的化合物以标记的形式给予对象，随后诊断性成像以确定CXCR7存在与否。在相关方面，通过用本发明提供的标记的化合物与组织或血液样本接触并测定样本中CXCR7的存在与否或CXCR7的量来实施诊断疾病的方法。
在一些实施方式中，在给予本发明化合物之前或之后将一定量的化疗试剂或辐射给予对象，或者一定量的化疗试剂或辐射与本发明化合物联合施用。在一些实施方式中，当化疗试剂或辐射单独施用时，所述的量是亚治疗的(sub-therapeutic)。
附图说明
不适用
发明详述
I.缩写和定义
除非另作说明，术语"烷基"，本身或作为另一取代基的部分，是指具有指定碳原子数(即C1-8指1-8个碳)的直链或支链烃基。烷基的实例包括甲基、乙基、n-丙基、异丙基、n-丁基、t-丁基、异丁基、仲丁基、n-戊基、n-己基、n-庚基、n-辛基等。术语"烯基"指具有一个或多个双键的不饱和烷基。同样，术语"炔基"指具有一个或多个三键的不饱和烷基。该不饱和烷基的实例包括乙烯基、2-丙烯基、巴豆基、2-异戊烯基、2-(丁二烯基)、2,4-戊二烯基、3-(1,4-戊二烯基)、乙炔基、1-和3-丙炔基、3-丁炔基和更高级的同系物和同分异构体。术语"环烷基"指具有指定环原子数的烃环(例如C3-6环烷基)，是完全饱和的或在环顶点之间具有不多于一个双键。"环烷基"也指双环和多环烃环，例如，二环[2.2.1]庚烷、二环[2.2.2]辛烷等。术语"环烯基"指在环顶点之间具有至少一个双键的环烷基。环烯基的例子是环戊烯基和环己烯基。术语"螺环烷基"是指其中单环顶点连接到分子的两个其他非氢部分的环烷基。螺环烷基取代基是其中的亚烃基链(典型地，亚烃基链的末端)的两碳原子连接到分子剩余部分的相同碳原子的一类。术语"杂环烷基"指包含选自N、O或S的一至五个杂原子的环烷基，其中，氮和硫原子任选被氧化，并且氮原子任选地被季铵化。杂环烷基可以是单环、双环或多环环系统。杂环烷基非限制实例包括吡咯烷、咪唑烷、吡唑烷、丁内酰胺、戊内酰胺、咪唑烷酮、乙内酰脲、二氧戊环、苯邻二甲酰亚胺、哌啶、1,4-二氧六环、吗啉、硫代吗啉、硫代吗啉-S-氧化物、硫代吗啉-S,S-氧化物、哌嗪、吡喃、吡啶酮、3-吡咯啉、噻喃、吡喃酮、四氢呋喃、四氢噻吩、奎宁环等。杂环烷基可以通过环碳或杂原子连接到分子的其余部分。
术语"亚烷基"本身或作为另一取代基的部分，指衍生自链烷的二价基团，例如-CH2CH2CH2CH2-。通常，烷基(或亚烷基)具有1-24个碳原子，本发明优选具有10个或更少碳原子的那些基团。"低级烷基"或"低级亚烷基"是较短链烷基或亚烷基，通常具有4个或更少碳原子。同样地，"亚烯基"和"亚炔基"分别指具有双键或三键的不饱和形式的"亚烷基"。
如本文所用，与本发明描述的任何化学结构中单键、双键或三键相交的波浪线，表示单键、双键或三键到分子剩余部分的连接点。
术语"烷氧基"、"烷基氨基"和"烷硫基"(或硫代烷氧基)以它们常规含义使用，分别指通过氧原子、氨基或硫原子连接到分子的其余部分的那些烷基。另外，对于二烷基氨基，烷基部分可以相同或不同，也可以与各自连接的氮原子结合从而形成3-7元环。因此，-NRaRb所示的基团是包括哌啶基、吡咯烷基、吗啉基、氮杂环丁基等。
除非另作说明，术语"卤代"或"卤素"，本身或作为另一取代基的部分，是指氟、氯、溴或碘原子。此外，术语如"卤代烷基"是指包括单卤代烷基和多卤代烷基。例如，术语"C1-4卤代烷基"是指包括三氟甲基、2,2,2-三氟乙基、4-氯丁基、3-溴丙基等。
除非另作说明，术语"芳基"是指多不饱和的，通常是芳香的烃基，可以是单环或稠合在一起或共价连接的多环(至多三环)。术语"杂芳基"是指包含选自N、O或S的1-5个杂原子的芳基(或环)，其中氮和硫原子任选被氧化，并且氮原子任选地被季铵化。杂芳基可以通过杂原子连接到分子的其余部分。芳基非限制实例包括苯基、萘基和联苯基，而杂芳基非限制实例包括吡啶基、哒嗪基、吡嗪基、嘧啶基、三嗪基、喹啉基、喹喔啉基、喹唑啉基、噌啉基、2,3-二氮杂萘基、苯并三嗪基、嘌呤基、苯并咪唑基、苯并吡唑基、苯并三唑基、苯并异噁唑基、异苯并呋喃基、异吲哚基、中氮茚基、苯并三嗪基、噻吩并吡啶基、噻吩并嘧啶基、吡唑并嘧啶基、咪唑并吡啶、苯并噻唑基、苯并呋喃基、苯并噻吩基、吲哚基、喹啉基、异喹啉基、异噻唑基、吡唑基、吲唑基、蝶啶基、咪唑基、三唑基、四唑基、噁唑基、异噁唑基、噻二唑基、吡咯基、噻唑基、呋喃基、噻吩基等。上述各芳基和杂芳基环系统各自的取代基选自下述的可接受取代基的组。
术语"芳烷基"是指包括其中的芳基连接到烷基的那些基团(如苄基、苯乙基等)。类似地，术语"杂芳烷基"是指包括其中的杂芳基连接到烷基的那些基团(如吡啶甲基、噻唑乙基等)。
在一些实施方式中，以上术语(如"烷基"、"芳基"和"杂芳基")将包括所指基团的取代和未取代形式。以下提供各类型基团的优选取代基。
烷基(包括通常称为亚烷基、烯基、炔基和环烷基的那些基团)上的取代基可以是选自下组的各种不同的基团：-卤素、-OR’、-NR’R”、-SR’、-SiR’R”R”’、-OC(O)R’、-C(O)R’、-CO2R’、-CONR’R”、-OC(O)NR’R”、-NR”C(O)R’、-NR’-C(O)NR”R”’、-NR”C(O)2R’、-NH-C(NH2)＝NH、-NR’C(NH2)＝NH、-NH-C(NH2)＝NR’、-S(O)R’、-S(O)2R’、-S(O)2NR’R”、-NR’S(O)2R”、-CN和-NO2，数量从0到(2m’+1)，其中m’是该烷基(包括通常称为亚烷基、烯基、炔基和环烷基的那些基团)内的碳原子总数。R’、R”和R”’各自独立为氢、未取代的C1-8烷基、未取代的芳基、1-3个卤素取代的芳基、未取代的C1-8烷基、C1-8烷氧基或C1-8硫代烷氧基或未取代的芳基-C1-4烷基。当R’和R”连接到同一氮原子时，它们可以与氮原子组合从而形成3-、4-、5-、6-或7-元环。例如，-NR’R”是指包括1-吡咯烷基和4-吗啉基。
类似地，芳基和杂芳基上的取代基是各种各样的，通常选自下组：-卤素、-OR’、-OC(O)R’、-NR’R”、-SR’、-R’、-CN、-NO2、-CO2R’、-CONR’R”、-C(O)R’、-OC(O)NR’R”、-NR”C(O)R’、-NR”C(O)2R’、-NR’-C(O)NR”R”’、-NH-C(NH2)＝NH、-NR’C(NH2)＝NH、-NH-C(NH2)＝NR’、-S(O)R’、-S(O)2R’、-S(O)2NR’R”、-NR’S(O)2R”、-N3、全氟(C1-C4)烷氧基和全氟(C1-C4)烷基，数量从0到芳香环系统上开放化学价的总数，其中，R’、R”和R”’独立选自氢、C1-8烷基、C1-8卤代烷基、C3-6环烷基、C2-8烯基、C2-8炔基、未取代的芳基和杂芳基、(未取代的芳基)-C1-4烷基和未取代的芳氧基-C1-4烷基。其他合适的取代基包括以上各芳基取代基通过1-4个碳原子的亚烷基链连接到环原子。
芳基或杂芳基环相邻原子上的取代基中的两个可以任选被式-T-C(O)-(CH2)q-U-的取代基替代，其中T和U独立为-NH-、-O-、-CH2-或单键，且q是0-2的整数。或者，芳基或杂芳基环相邻原子上的取代基中的两个可以任选被式-A-(CH2)r-B-取代基替代，其中A和B独立为-CH2-、-O-、-NH-、-S-、-S(O)-、-S(O)2-、-S(O)2NR’-或单键，且r是1-3的整数。这样形成的新环的单键之一可以任选被双键替代。或者，芳基或杂芳基环相邻原子上的取代基中的两个可以任选被式-(CH2)s-X-(CH2)t-取代基替代，其中s和t独立为0-3的整数，且X是-O-、-NR’-、-S-、-S(O)-、-S(O)2-或-S(O)2NR’-。-NR’-和-S(O)2NR’-中的取代基R’选自氢或未取代的C1-6烷基。
如本文所用，术语"杂原子"是指包括氧(O)、氮(N)、硫(S)和硅(Si)。
如本文所用，术语“祖细胞”和“干细胞”互换使用。“祖细胞”和“干细胞”指细胞，响应某些刺激，可以形成分化的细胞谱系，包括但不限于造血、间充质、上皮细胞、神经元，肾或骨髓细胞。祖/干细胞的存在可以通过样品中的细胞形成不同类型的集落形成单位的能力进行评估，包括，例如，CFU-GM(集落形成单位，粒细胞-巨噬细胞)、CFU-GEMM(集落形成单位，多潜能)、BFU-E(突发形成单位，红细胞系)、HPP-CFC(高增殖潜能集落形成细胞)，或者可以使用已知的方案在培养物中获得的其它类型的分化集落。造血祖/干细胞常常为CD34阳性。但是一些干细胞不含此标记。这些CD34+细胞可通过荧光激活的细胞分选(FACS)进行检测，并因此可以使用该技术测定样品中它们的存在。或者，可通过FACS检测这些细胞的c-kit受体(CD117)的存在、谱系特异性标记(例如，小鼠CD2，CD3，CD4，CD5，CD8，NK1.1，B220，TER-119和Gr-1，以及人CD3，CD14，CD16，CD19，CD20和CD56)的缺失。
术语"药学上可接受的盐"是指包括活性化合物的盐，根据本文描述的化合物上特定的取代基，采用相对无毒的酸或碱制备。当本发明的化合物包含相对酸性的官能团，可以通过将中性形式的该化合物与足量的所需碱或直接或在合适的惰性溶剂中接触以获得碱加成盐。衍生自药学上可接受的无机碱的盐的实例包括铝，铵，钙，铜，铁，亚铁，锂，镁，锰，亚锰，钾，钠，锌等。衍生自药学上可接受的有机碱的盐包括伯、仲和叔胺的盐，包括取代的胺、环胺、天然存在的胺等，如精氨酸、甜菜碱、咖啡因、胆碱、N,N’-二苄基乙二胺、二乙胺、2-二乙氨基乙醇、2-二甲氨基乙醇、乙醇胺、乙二胺、N-乙基吗啉、N-乙基哌啶、葡糖胺、氨基葡萄糖、组氨酸、哈胺(hydrabamine)、异丙胺、赖氨酸、甲基葡糖胺、吗啉、哌嗪、哌啶、聚胺树脂、普鲁卡因、嘌呤、可可碱、三乙胺、三甲胺、三丙胺、氨丁三醇等。当本发明的化合物包含相对碱性的官能团，可以通过将中性形式的该化合物与足量所需酸或直接或在合适的惰性溶剂中接触以获得酸加成盐。药学上可接受的酸加成盐的实例包括衍生自无机酸的那些，如盐酸、氢溴酸、硝酸、碳酸、一氢碳酸、磷酸、一氢磷酸、二氢磷酸、硫酸、一氢硫酸、氢碘酸或亚磷酸等，和衍生自相对无毒的有机酸的盐，像乙酸、丙酸、异丁酸、丙二酸、苯甲酸、琥珀酸、辛二酸、富马酸、扁桃酸、邻苯二甲酸、苯磺酸、对-甲苯磺酸、柠檬酸、酒石酸、甲基磺酸等。还包括氨基酸如精氨酸等的盐，和有机酸像葡萄醛酸或半乳糖醛酸等的盐(参见例如,Berge、S.M.等,“药用盐”,Journal of Pharmaceutical Science,1977,66,1-19)。本发明的某些特定化合物同时包含碱性和酸性官能团，使得化合物能够转化成碱或酸加成盐。
通过盐与碱或酸接触并以常规方法分离母体化合物可以再生中性形式的化合物。化合物的母体形式在某些物理性质上不同于各种盐形式，如在极性溶剂中的溶解度，但除此之外，对于本发明的目的，盐等同于母体形式的化合物。
除了盐形式，本发明提供前药形式的化合物。本文描述的化合物的前药是在生理条件下易经历化学变化以提供本发明化合物的那些。此外，前药在离体环境中可通过化学或生化方法转化为本发明化合物。例如，当与合适的酶或化学试剂一起放置在透皮贴剂内时，前药可以缓慢转化为本发明化合物。
本发明的某些化合物可以以非溶剂化形式和包括水合形式在内的溶剂化形式存在。通常，溶剂化形式等同于非溶剂化形式，且包含在本发明范围内。本发明的某些化合物可以存在多晶型或无定形形式。通常，对于本发明预期的应用来说，所有的物理形式是等同的，且包含在本发明范围内。
本发明的某些化合物具有不对称碳原子(光学中心)或双键；外消旋体，非对映体，几何异构体，区域异构体和单个异构体(例如，不同的对映体)都包含在本发明范围内。在一些实施方式中，本发明化合物以对映体富集形式存在，其中对于特定对映异构体，对映体过量的量通过已知方法计算。对映体富集形式的制备也是本领域已知的，可以使用，例如通过色谱或通过手性盐形式的手性拆分来完成。此外，不同的构象异构体以及不同的旋转异构体涵盖在本发明中。构象异构体是能够通过旋转相差约一个或多个σ键的构象异构体。旋转异构体是过旋转相差约仅仅单个σ键的构象异构体。更进一步地，本发明的化合物还可以在构成这些化合物的一个或多个原子处含有非天然比例的原子同位素。因此，在一些实施方式中，本发明的化合物以同位素富集形式存在。非天然比例的同位素可以定义为自然界中发现的量到构成100％所讨论原子的量。例如，该化合物可以掺入放射性同位素，例如氚(3H)，碘-125(125I)或碳-14(14C)或非放射性同位素，如氘(2H)或碳-13(13C)。这种同位素的变化可以为本申请别处描述的那些提供其他效用。例如，本发明化合物的同位素变体可以发现额外的用途，包括但不限于，作为诊断剂和/或成像剂，或作为细胞毒性剂/放射毒性治疗剂。另外，本发明化合物的同位素变体可以具有在治疗期间可以增强安全性、耐受性或功效的改变的药动学和药效学特征。本发明化合物的所有同位素变体，无论是否是放射性的，旨在包含于本发明范围内。
"CXCR7"也称为"RDC1"或"CCXCKR2"，是指七跨膜结构域推定G-蛋白偶合受体(GPCR)。CXCR7狗直系同源物最初鉴定于1991年。参见,Libert等.Science 244:569-572(1989)中确定。狗序列在Libert等,Nuc.Acids Res.18(7):1917(1990)中描述。小鼠序列在例如Heesen等.,Immunogenetics 47:364-370(1998)中描述。人序列在如Sreedharan等,Proc.Natl.Acad.Sci.USA 88:4986-4990(1991)中描述，其错误地描述该蛋白为血管活性肠肽的受体。"CXCR7"包括与以下序列实质相似的序列或以下序列的保守修饰的变体：SEQ ID NO:1、SEQ ID NO:2、SEQ ID NO:3、SEQ ID NO:4、SEQ ID NO:5、SEQ ID NO:6、SEQ ID NO:7、SEQ ID NO:8、SEQ ID NO:9或SEQ ID NO:10。
II.概括
本发明的化合物可以抑制配体结合到CXCR7受体，且在各种疾病，包括癌症，
特别是实体瘤癌症和淋巴瘤的治疗中是有用的。最近，注意到抑制配体结合到CXCR7减少了动物模型中类风湿关节炎的严重性。
本领域技术人员将理解，调节CCX-CKR2活性(CXCR7活性)的试剂可在治疗方案中与其他抗血管生成剂和/或与化疗剂或辐射和/或其它抗关节炎剂联用。在一些情况下，如果不与抗血管生成剂联用，化疗剂或辐射的量将是亚治疗的量。本领域技术人员将理解，“联用”可以涉及治疗中联用(即，两种或多种药物可以作为混合物施用，或者至少同时或至少在不同时间导入至对象，然而使得两者同时在对象的血流中)。此外，本发明的组合物可在第二治疗方案之前或之后给药，例如在化疗或辐射剂量之前或之后。
III.发明实施方式
A.化合物
在一个方面，本发明提供式I所示的化合物，
或其药学上可接受的盐，水合物，N-氧化物，同位素富集物或对映异构体富集物和旋转异构体。在式I中，环顶点Xa、Xb和Xc各个独立选自：N、NH、N(R2)、O、CH和C(R2)。此外，下标n是0、1或2。字母Z表示选自下组的基团：
(i)单环或稠合双环芳基和杂芳基，其中杂芳基具有选自N，O和S的1-4个杂原子作为环成员；且其中所述芳基和杂芳基任选被1至5个R5取代基取代；
(ii)选自由环烷和杂环烷构成的组的单环四-、五-、六-或七-元环，其中杂环烷环具有选自N，O和S的1-3个杂原子作为环成员；且其中各个所述单环Z环任选被1至3个R5取代基取代。
R1选自H和C1-8烷基，其中烷基部分任选被卤素、-NRaRb、-ORa、-CO2Ra和-CONRaRb取代。
各R2独立选自：H、卤素、CN、C1-8烷基、C1-8卤代烷基、C1-8羟基烷基、-ORa、-CO2Ra、-X-CO2Ra、-NRaRb、-CONRaRb和-X-CONRaRb。
R3选自：H、C1-8烷基、C1-8卤代烷基、C1-8羟基烷基、-CO2Ra、-X-CO2Ra、-CONRaRb和-X-CONRaRb。
各R4，当存在时，独立选自：C1-8烷基、C1-8卤代烷基、C1-8羟基烷基、-ORa、-CO2Ra、-X-CO2Ra、-NRaRb、-CONRaRb和-X-CONRaRb。
各R5独立选自：卤素、CN、-X-CN、C1-8烷基、C3-8环烷基、C3-8环烯基、C3-5螺环烷基、C2-8烯基、C2-8炔基、C1-8卤代烷基、C1-8羟基烷基、-ORa、-CO2Ra、-X-CO2Ra、-NRaRb、-CONRaRb、-X-CONRaRb、芳基、5-或6-元杂芳基和3-、4-、5-或6-元杂环基，其中存在于杂芳基和杂环环顶点的杂原子选自N、O和S，且其中R5的芳基、杂芳基和杂环部分任选再被1-3个Ra取代。
各Ra和Rb独立选自：氢、羟基、卤素、氰基、C1-8烷基、C1-8烷氧基、C1-8卤代烷基、C3-6环烷基、C3-6环烷基烷基、氨基、C1-8烷基氨基、二C1-8烷基氨基、氨甲酰基、羧基C1-4烷基酯、羧酸和-SO2-C1-8烷基。
各X为C1-4烯基连接基团或具有下式的连接基团：-(CH2)mO(CH2)p-，其中下标m和p是0-5的整数，且m+p为0-6，其中X的任何亚甲基部分任选被一个或两个甲基取代。在一组实施方式中，各X独立选自：-OCH2-、-OCH2CH2-、-OCH2CH2CH2-、-OC(CH3)2-、-OCH2C(CH3)2-、-OCH2CH2C(CH3)2-、-CH2-、-C(CH3)2-和-CH2CH2-。在另一组实施方式中，各X选自：–O-、-CH2-、-OCH2-、-OCH2CH2-、-C(CH3)2-和-CH2CH2-。
本发明提供多个实施方式。
(A)在一组实施方式中，Z为单环或稠合双环杂芳基，具有1-3个选自N，O和S的杂原子作为环成员；且其中所述杂芳基任选被1-5个R5取代基取代。
(B)在另一组实施方式中，Z为单环或稠合双环杂芳基，选自下组：咪唑，吡唑，1,2,3-三唑，1,2,4-三唑，四唑，噻唑，噁唑，噁二唑，嘧啶，吡嗪，哒嗪和喹唑啉，各个任选被1-2个R5取代基取代。
(C)在还有的另一组实施方式中，Z为一个R5基团取代的5-元杂芳基，R5选自任选取代的芳基、杂芳基、环烷基或杂环烷基环，且任选具有至多两个选自卤素、C1-4烷基、C1-4卤代烷基和CH2CN的额外的R5基团。
(D)在其他实施方式中，Z选自：
其中，R5具有为上式I中提供的含义。
(E)在还有的另一组实施方式中，式I所示的化合物是其中Z为的那些，其中各Q独立选自：N、CH和C(R5)，且R5具有为上式I中提供的含义。
其它选择的实施方式在(A)-(E)提供的或与式I相关的任何实施方式内。
(1)在一组实施方式中，n为0。
(2)在另一组实施方式中，R1为H。
在另一组实施方式中，式I所示的化合物由下式表示：
式Ia选择的实施方式包括(A)-(E)确定的Z的各实施方式。
在式I或Ia的一组特定实施方式中，
(F)具有Xa、Xb和Xc作为环顶点的双环部分选自：
在式Ia的另一组特定实施方式中，
(G)具有Xa、Xb和Xc作为环顶点的双环部分选自：
在式Ia的还有的另一组特定实施方式中，
(H)具有Xa、Xb和Xc作为环顶点的双环部分选自：
在式Ia的一组特定实施方式中，
(I)具有Xa、Xb和Xc作为环顶点的双环部分选自：
在式Ia的另一组特定实施方式中，
(J)具有Xa、Xb和Xc作为环顶点的双环部分选自：
在某些选定的实施方案中，式Ia所示的化合物，以及(F)、(G)、(H)、(I)和(J)确认的实施方式是其中Z选自以上(A)到(E)确定的实施方式的化合物，特别是那些Z为一个R5基团取代的5-元杂芳基，R5选自任选取代的芳基、杂芳基、环烷基或杂环烷基环，且任选具有至多两个选自卤素、C1-4烷基、C1-4卤代烷基和CH2CN的额外的R5基团。
在还有的另一特定组实施方式中，对于式I或Ia，以及(F)、(G)、(H)、(I)和(J)确认的实施方式，Z选自下组：
其中，R5具有为上式I中提供的含义。
在还有的另一组特定实施方式中，关于式I或Ia，以及(F)、(G)、(H)、(I)和(J)确认的实施方式，Z具有下式：
其中各Q独立选自：N、CH和C(R5)。
在一组特定实施方式中，化合物具有式：
其中Ra和各R2具有为式I中提供的含义。
还有其它选择的实施方式在(A)-(J)提供的任何实施方式以及为组合的实施方式(例如，(A)和(F)、(B)和(G)、(A)和(H)等)内。
(a)其中下标n为0；
(b)其中n为0且R1为H或甲基；
(c)其中n为0，R1为H或甲基，R2为H或C1-8烷基且R3为氢；
(d)其中n为0且R2和R3各为氢；
(e)其中n为0，各R2为氢，且R3选自下组：甲基、乙基、-CONH2和-CH2OH；
(f)其中各R2为氢。
本领域技术人员将理解本发明具体实施方式是式I或Ia所示的化合物，其中化合物的特征通过实施方式的组合进一步限定，包括(A)+(F)、(A)+(G)、(A)+(H)、(A)+(I)和(A)+(J)；其中每一个，在其它选择的实施方式中，独立地与选择的实施方式(a)-(f)中的各个组合。类似地，选择的式I或Ia所示的化合物是化合物的特征进一步被实施方式的组合限定的那些，包括(B)+(F)、(B)+(G)、(B)+(H)、(B)+(I)和(B)+(J)；其中每一个，在其它选择的实施方式中，独立地与选择的实施方式(a)-(f)中的各个组合。还有的其他选择的式I或Ia所示的化合物是化合物的特征进一步被实施方式的组合限定的那些，包括(C)+(F)、(C)+(G)、(C)+(H)、(C)+(I)和(C)+(J)；其中每一个，在其它选择的实施方式中，独立地与选择的实施方式(a)-(f)中的各个组合。其他选择的式I或Ia所示的化合物是化合物的特征进一步被实施方式的组合限定的那些，包括(D)+(F)、(D)+(G)、(D)+(H)、(D)+(I)和(D)+(J)；其中每一个，在其它选择的实施方式中，独立地与选择的实施方式(a)-(f)中的各个组合。还有的其他选择的式I或Ia所示的化合物是化合物的特征进一步被实施方式的组合限定的那些，包括(E)+(F)、(E)+(G)、(E)+(H)、(E)+(I)和(E)+(J)；其中每一个，在其它选择的实施方式中，独立地与选择的实施方式(a)-(f)中的各个组合。
在选择的一组实施方式中，化合物选自：以下实施例或表1中提供的那些。
在各选择的实施方式中，所述化合物可以药学上可接受的盐或水合物形式存在。
另外，对于上述没有显示立体化学的那些化合物，本发明还涉及各化合物的手性形式，以及所述化合物的对映异构体富集形式。可根据本领域中实践公知的方法使用手性色谱制备对映异构体富集形式，或例如，通过采用手性盐形式的手性拆分。在一些实施方式中，对映异构体富集形式的对映体过量至少10％、20％、30％、40％、50％、60％或更多。在还有的其他实施方式中，提供的对映异构体富集形式是至少70％、80％、90％、95％或更多。
化合物制备
可以根据本文实施例部分描述的方法制备本发明的某些化合物。此外，用于制备本发明化合物的某些中间体化合物的合成也被描述。
B.组合物
除了以上提供的化合物，用于调节人和动物CXCR7活性的组合物将通常包含药用载体或稀释剂。
如本文所用，术语"组合物"意在包括包含特定含量的特定成分的产品，和直接或间接由特定含量的特定成分的组合构成的任何产品。“药学上可接受”是指载体、稀释剂或赋形剂必须与制剂的其他组分相容并且对其接受者无害。
为施用本发明化合物的药物组合物可以方便地以单位剂型存在，并可以通过药剂学和药物递送领域任何已知方法制备。所有方法均包括使活性成分与构成一种或多种辅助成分的载体结合的步骤。通常，通过均匀地和紧密地将活性成分与液体载体或细碎的固体载体或两者结合制备药物组合物，然后，如果需要的话，使产物成形为所需制剂。活性目标化合物以根据疾病的进展或病症足够产生所需效果的量包含在药物组合物内。
含有活性成分的药物组合物可以是适于口服使用的形式，例如作为片剂，糖锭剂，锭剂，水性或油性悬浮液，可分散粉末或颗粒，美国专利申请2002-0012680中所描述的乳剂和自乳化剂，硬或软胶囊，糖浆剂，酏剂，溶液，口腔贴剂，口服凝胶剂，口香糖，咀嚼片剂，泡腾粉末和泡腾片剂。可以根据本领域已知的制备药物组合物的任何方法制备用于口服使用的组合物，为提供药学上美观和可口的制剂，该组合物可以包含一种或多种选自下组的药剂：甜味剂，调味剂，着色剂，抗氧化剂和防腐剂。片剂包含活性成分，与适合片剂制备的无毒的药学上可接受的赋形剂混合。这些赋形剂可以是，例如，惰性稀释剂，如纤维素，二氧化硅，氧化铝，碳酸钙，碳酸钠，葡萄糖，甘露醇，山梨醇，乳糖，磷酸钙或磷酸钠；造粒剂和崩解剂，例如，玉米淀粉或海藻酸；结合剂，例如PVP，纤维素，PEG，淀粉，明胶或阿拉伯胶；和润滑剂，例如硬脂酸镁，硬脂酸或滑石。片剂可以是未包衣或它们可以通过已知技术被包衣，肠溶或以其它方式，以延迟在胃肠道中崩解和吸收，从而提供较长时期的持续作用。例如，可以使用时间延迟材料如单硬脂酸甘油酯或二硬脂酸甘油酯。它们也可以通过美国专利号4,256,108、4,166,452和4,265,874中描述的方法进行包衣从而形成用于控制释放的渗透治疗片剂。
口服使用的制剂还可以呈现为硬明胶胶囊，其中活性成分与惰性固体稀释剂混合，例如，碳酸钙，磷酸钙或高岭土，或者呈现为软明胶胶囊，其中活性成分与水混合或油介质，例如花生油，液体石蜡或橄榄油。另外，乳剂可以用非水的可混溶的成分如油来制备，并采用表面活性剂如单-二甘油酯，聚乙二醇酯等进行稳定。
水性悬浮液含有活性物质，混合有适于制备水性悬浮液的赋形剂。这样的赋形剂是悬浮剂，例如羧甲基纤维素钠，甲基纤维素，羟丙基纤维素，海藻酸钠，聚乙烯吡咯烷酮，黄蓍树胶和阿拉伯树胶：分散剂或湿润剂可以是天然存在的磷脂，例如卵磷脂，或环氧烷与脂肪酸的缩合产物，例如聚氧乙烯硬脂酸酯，或环氧乙烷与长链脂族醇的缩合产物，例如十七乙烯氧基十六醇，或环氧乙烷与由脂肪酸和己糖醇衍生的偏酯的缩合产物，如聚氧乙烯山梨糖醇单油酸酯，或环氧乙烷与由脂肪酸和己糖醇酐衍生的偏酯的缩合产物，例如聚乙烯山梨糖醇酐单油酸酯。水性悬浮液也可含有一种或多种防腐剂，例如对羟基苯甲酸乙酯或正丙酯，一种或多种着色剂，一种或多种调味剂，和一种或多种甜味剂，如蔗糖或糖精。
油性悬浮液可通过将活性成分悬浮在植物油，例如花生油，橄榄油，芝麻油或椰子油，或在矿物油如液体石蜡来配制。油性悬浮液可含有增稠剂，例如蜂蜡，硬石蜡或鲸蜡醇。可加入甜味剂，如上面列出的那些，和调味剂以提供可口的口服制剂。这些组合物可以通过加入抗氧化剂，例如抗坏血酸来保存。
适合通过加入水制备水性悬浮液的分散粉末和颗粒提供活性成分与分散剂或润湿剂，悬浮剂和一种或多种防腐剂的混合。合适的分散或润湿剂和悬浮剂由上文已提及的举例说明。也可以存在另外的赋形剂，例如甜味剂，调味剂和着色剂。
本发明的药物组合物也可以是水包油乳剂形式。油相可以是植物油，例如橄榄油或花生油，或矿物油，例如液体石蜡或这些的混合物。合适的乳化剂可以是天然存在的树胶，例如阿拉伯树胶或黄蓍树胶，天然存在的磷脂，例如大豆，卵磷脂和由脂肪酸和己糖醇酐衍生的酯或偏酯，例如一油酸山梨糖醇酐酯，所述偏酯与环氧乙烷的缩合产物，例如聚氧乙烯山梨糖醇酐单油酸酯。乳剂也可含有甜味剂和调味剂。
糖浆剂和酏剂可以用甜味剂配制，例如甘油，丙二醇，山梨醇或蔗糖。这样的制剂还可以含有缓和剂，防腐剂和调味剂和着色剂。口服溶液可与例如，环糊精，PEG和表面活性剂组合来制备。
药物组合物可以是无菌可注射水性或油性悬浮液的形式。这种悬浮液可以根据已知技术使用那些适宜的如上所述的分散剂或润湿剂和悬浮剂剂来配制。无菌注射制剂还可以是在无毒的胃肠外可接受的稀释剂或溶剂中的无菌可注射溶液或悬浮液，例如在1,3-丁二醇中的溶液。可以使用的可接受的媒介物和溶剂是水，林格氏溶液和等渗氯化钠溶液。此外，无菌不挥发性油通常用作溶剂或悬浮介质。为此目的，任何温和的固定油都可以使用，包括合成的单-或双酐酯。此外，脂肪酸如油酸也可用于注射剂的制备。
本发明的化合物也可以栓剂形式用于直肠给药。这些组合物可以通过将药物与合适的无刺激性的赋形剂混合进行制备，该赋形剂在常温下是固体，但在直肠温度下是液体，因此将在直肠中融化以释放药物。这样的材料包括可可脂和聚乙二醇。此外，该化合物可以溶液或软膏方式通过眼递送给药。更进一步地，可通过离子电渗贴剂等来实现本发明化合物的经皮递送。对于局部使用，使用含有本发明的化合物的霜剂，软膏剂，凝胶剂，溶液或悬浮液等。如本文所使用的，局部应用还意在包括使用漱口剂和含漱剂。
本发明的化合物还可以连接至载体，其是作为靶向药物载体的合适聚合物。这类聚合物可包括聚乙烯吡咯烷酮，吡喃共聚物，聚羟丙基-甲基丙烯酰胺-苯酚，聚羟乙基-天冬酰胺-苯酚或棕榈酰残基取代的聚环氧乙烷-聚赖氨酸。此外，本发明的化合物可连接到载体，其是一类可生物降解的聚合物，在实现药物的控制释放中是有用的，例如聚乳酸，聚乙醇酸，聚乳酸和聚乙醇酸的共聚物，聚ε-己内酯，聚羟基丁酸，聚正酯，聚缩醛，聚二氢吡喃，聚氰基丙烯酸酯和水凝胶的交联或两亲嵌段共聚物。聚合物和半渗透聚合物基质可以加工成成型制品，如瓣膜，支架，导管，假体等。
C.使用方法
虽然不希望受任何特定理论的束缚，但认为本发明化合物和组合物通过抑制SDF-1和/或I-TAC结合到CXCR7受体从而提供治疗效果。因此，本发明的化合物和组合物可用于治疗或预防哺乳动物疾病或病症，在所述疾病或病症中抑制SDF-1和/或I-TAC到CXCR7受体的结合将提供治疗效果。
在一实施方式中，抑制趋化因子SDF-1和/或I-TAC到CXCR7受体的结合的优选方法包括用一或多个前面提到的化合物与表达CXCR7受体的细胞接触足以抑制这些趋化因子结合到CXCR7受体的时间。
在一些实施方式中，本发明化合物和组合物给予患有癌症的对象。在一些情况下，给予CXCR7调节剂来治疗癌症，例如癌(carcinomas)，神经胶质瘤，间皮瘤，黑素瘤，淋巴瘤，白血病(包括急性淋巴细胞性白血病)，腺癌，乳腺癌，卵巢癌，子宫颈癌，成胶质细胞瘤，白血病，淋巴瘤，前列腺癌和伯基特(Burkitt’s)淋巴瘤，头和颈癌，结肠癌，结肠直肠癌，非小细胞肺癌，小细胞肺癌，食道癌，胃癌，胰腺癌，肝胆癌，胆囊癌，小肠癌，直肠癌，肾肿瘤，肾癌，膀胱癌，前列腺癌，阴茎癌，尿道癌，睾丸癌，子宫颈癌，阴道癌，子宫癌，卵巢癌，甲状腺癌，甲状旁腺癌，肾上腺癌，胰内分泌癌，类癌，骨癌，皮肤癌，视网膜母细胞瘤，霍奇金淋巴瘤，非何杰金氏淋巴瘤(对于其他癌症，参见《癌症：原理与实践》(DeVita,V.T.等编辑1997))；以及脑和神经元功能紊乱，如阿尔茨海默氏症，多发性硬化症和脱髓鞘疾病；高血压病症如肺动脉高压；肾功能紊乱(kidney disfunction)；肾功能紊乱(renal disfunction)；类风湿关节炎；移植排斥反应；动脉粥样硬化(和升高的胆固醇水平)；哮喘；肾小球肾炎；接触性皮炎；炎性肠病；结肠炎；牛皮癣；再灌注损伤；以及本文中描述的其他病症和疾病。在一些实施方式中，受试者没有卡波济氏肉瘤，多中心型卡斯尔曼(Castleman’s)病或爱滋病相关的原发性渗出性淋巴瘤。
本发明还包括通过给予本发明化合物和组合物减少任何有需要的对象的血管生成。例如，通过用本发明化合物与CXCR7接触降低CXCR7活性，由此减少血管生成，可用于抑制肿瘤尤其是实体瘤的形成、生长和/或转移。关于调整的CXCR7和血管生成的实施方式的描述在，例如，美国专利申请号11/050345中叙述。
涉及不想要的或有问题的血管生成的其他疾病包括类风湿性关节炎；牛皮癣；眼部血管发生疾病，例如糖尿病性视网膜病，早产儿视网膜病变，黄斑变性，角膜移植排斥，新生血管性青光眼，晶状体后纤维组织增生，虹膜红变；奥斯勒-韦伯(Osler-Webber)综合征；心肌血管新生；斑块新血管形成；毛细血管扩张；血友病患者关节；血管纤维瘤；内皮细胞过度或异常刺激疾病，包括肠粘连，克罗恩氏病，皮肤病如牛皮癣，湿疹(excema)和硬皮病，糖尿病，糖尿病性视网膜病，早产儿视网膜病变，老年性黄斑变性，动脉粥样硬化，硬皮病，伤口肉芽以及肥厚性瘢痕，即，瘢痕瘤，和具有血管生成为病理结果的疾病，如猫抓病和溃疡(幽门螺杆菌(Helicobacter pylori))，也可采用本发明的抗体治疗。血管生成抑制剂可用于防止或抑制粘连，尤其是腹膜内或盆腔粘连，例如开放或腹腔镜手术后导致的那些，和烧伤收缩(bum contractions)。使用血管生成抑制剂应该可以有益治疗的其它情况包括预防移植后瘢痕形成，肝硬化，新生儿急性呼吸窘迫综合征后肺纤维化或其他肺纤维化，植入临时假肢，以及大脑和硬脑膜之间手术后粘连。子宫内膜异位症，息肉病，心脏肥厚，以及肥胖，也可以通过抑制血管生成来治疗。这些疾病可能涉及其他类型正常组织的尺寸增加或生长，如子宫肌瘤，前列腺肥大和淀粉样变性。本发明化合物和组合物可以预防性或治疗性地用于本文描述的任何病症或疾病。
用本发明化合物和组合物降低CXCR7活性也可用于预防新血管形成从而有效治疗多种疾病。因此，例如，减少血管生成可以用作治疗血管疾病(例如，血管瘤和动脉粥样硬化斑块内毛细血管增生)、肌肉疾病(如心肌血管生成，心肌梗塞或平滑肌内血管生成)、关节(例如，关节炎，血友病关节等)和血管生成相关的其他疾病的一部分。促进血管生成还有助于加速各种生理过程和治疗需要提高血管化的疾病，如伤口愈合，骨折，和烧伤，炎性疾病，缺血心脏和周围血管疾病。本发明化合物还可以在其中正常血液流动受到限制的状况如肺高血压中提供益处。
本发明化合物和组合物也可用于促进伤口愈合。不期望将本发明限制到特定作用机理，可能是CXCR7的拮抗作用使内源性配体转而结合到较低亲和力的受体，从而触发了增强的伤口愈合。例如，SDF-1结合至CXCR7和CXCR4两者，但结合到CXCR4具有较低的亲和力。同样地，I-TAC结合CXCR3比I-TAC结合CXCR7具有较低亲和力。通过阻止这些配体结合到CXCR7，CXCR7拮抗剂可允许配体结合到其它受体，从而促进伤口愈合。因此，除通过用激动剂刺激CXCR7活性促进伤口愈合之外，促进伤口愈合的CXCR7的拮抗作用可以通过不同的机理介导。
除了治疗与新血管形成有关的疾病和症状，抑制血管生成可用于调节或防止新血管形成相关的正常生理状况的发生。因此，例如，化合物和组合物可用于节育。按照本发明，降低卵巢或子宫内膜内CXCR7活性可以减弱与排卵，胚胎着床，胎盘形成等相关的新血管形成。
血管生成抑制剂还有其他治疗用途。例如，本发明的化合物和组合物可以用于以下用途：
(a)脂肪组织消融和肥胖治疗。参见，例如，Kolonin等,Nature Medicine 10(6):625-632(2004)；
(b)子痫前期(preclampsia)治疗。参见，例如，Levine等,N.Engl.J.Med.350(7):672-683(2004)；Maynard等,J.Clin.Invest.111(5):649-658(2003)；和
(c)心血管疾病治疗。参见，例如，March等,Am.J.Physiol.Heart Circ.Physiol.287:H458-H463(2004)；Rehman等,Circulation 109:1292-1298(2004)。
治疗癌症的方法
更具体地，本发明还提供治疗癌症的方法。治疗癌症的优选方法，包括将治疗有效量的一或多种前面提到的化合物(或其盐)给予癌症患者足以治疗癌症的时间。
为治疗，本发明组合物可通过口服，肠胃外给药(例如，肌内，腹膜内，静脉内，ICV，脑池内注射或输注，皮下注射，或植入)，通过吸入喷雾，鼻，阴道，直肠，舌下或局部给药途径给药，并且可以单独或共同被配制成含有常规无毒的药学上可接受的、适合每种给药途径的载体、佐剂和媒介物的合适的剂量单位制剂。
在一些实施方式中，本发明CXCR7调节剂可与其他适当的治疗剂联用给予，包括，例如，化疗剂，辐射等。应该理解，这样的给药可以在第二治疗剂之前，之后或同时，使得与不存在CXCR7调节剂时给予第二剂相比，第二剂的治疗效果增强。用于联合疗法的合适的试剂的选择可由本领域技术人员根据常规的药物原则作出。治疗剂的组合可以协同作用，以影响各种病症的治疗或预防，如，例如癌症，创伤，肾功能紊乱，脑功能障碍或神经元功能障碍。使用这种方法，能够采用较低剂量的各试剂实现治疗功效，从而减少不良副作用的可能性。
除了灵长类动物如人类外，多种其它哺乳动物可按照本发明的方法进行治疗。例如，可以治疗哺乳动物包括，但不限于，牛，绵羊，山羊，马，狗，猫，豚鼠，大鼠或其他牛科、羊、马、犬、猫科动物、啮齿动物或鼠科物种。然而，该方法也可实践于其它物种，如鸟类物种(例如，鸡)。
证明本发明组合物可用于治疗癌症的标准体内试验包括以下文献中描述的那些：Bertolini,F.等,“内皮抑素，抗血管生成药物，在人类高级非霍奇金淋巴瘤的NOD/SCID小鼠模型中化疗或抗CD20治疗后诱导肿瘤稳定”(Endostatin,an antiangiogenic drug,induces tumor stabilization after chemotherapy or anti-CD20therapy in a mouse model of human high-grade non-Hodgkin lymphoma).Blood,第1期,96卷,第282-87页(2000年7月1日)；Pengnian,L.,“靶向内皮特异性受体酪氨酸激酶Tie2抗血管生成基因治疗”(Antiangiogenic gene therapy targeting the endothelium-specific receptor tyrosine kinase Tie2).Proc.Natl.Acad.Sci.USA,95卷,第8829-34页(1998年7月)和Pulaski,B.“金黄色葡萄球菌肠毒素B超抗原、主要组织相容性复合物II类和CD80协同用于临床相关术后小鼠乳腺癌模型的先进自发转移的免疫治疗”(Cooperativity of Staphylococcal aureus Enterotoxin B Superantigen,Major Histocompatibility Complex Class II,and CD80for Immunotherapy of Advanced Spontaneous Metastases in a Clinically Relevant Postoperative Mouse Breast Cancer Model).Cancer Research,60卷,第2710-15页(2000年5月15日)。
在治疗或预防需要趋化因子受体调节的病症中，适当的剂量水平通常为约0.001至100毫克每千克患者体重每天，其可以以单剂量或多剂量给药。优选地，剂量水平将是每天约0.01到约25mg/kg；更优选地，每天约0.05到约10mg/kg。合适的剂量水平可以为每天约0.01到约25mg/kg，每天约0.05到约10mg/kg，每天约0.1到约5mg/kg。在该范围内，剂量可是是每天0.005-0.05、0.05-0.5或0.5-5.0mg/kg。对于口服给药，优选以包含1.0-1000毫克活性成分的片剂形式提供组合物，特别是1.0、5.0、10.0、15.0、20.0、25.0、50.0、75.0、100.0、150.0、200.0、250.0、300.0、400.0、500.0、600.0、750.0、800.0、900.0和1000.0毫克的活性成分，以对待治疗的患者进行剂量的症状调节(symptomatic adjustment)。化合物可以每天1至4次的方案给药，优选每天一次或两次。
然而，应该理解的是，对于任何特定患者具体的剂量水平和剂量频率可以改变，并将取决于多种因素，包括使用的具体化合物的活性，该化合物的代谢稳定性和作用时长，对象的年龄，体重，遗传特性，总体健康状况，性别和饮食，以及给药方式和时间，排泄速率，药物联用，以及正接受治疗的对象的特定病症的严重程度。
本发明化合物和组合物可以与具有相关用途的其他化合物和组合物组合以预防和治疗与CXCR7信号转导相关的癌症和疾病或病症。这些其他药物可以通过其常规使用的途径和用量，与本发明的化合物或组合物同时或顺序地施用。当本发明的化合物或组合物与一种或多种其它药物同时使用时，除了本发明的化合物或组合物外还包含该其他药物的药物组合物是优选的。因此，本发明的药物组合物包括除了本发明的化合物或组合物还包含一种或多种其他活性成分或治疗剂的那些。可以与本发明的化合物或组合物联用(或分别给药或在同一药物组合物内)的其他治疗剂的实例包括，但不限于：顺铂，紫杉醇，甲氨蝶呤，环磷酰胺，异环磷酰胺，苯丁酸氮芥，卡莫司汀铂，卡铂，长春新碱，长春花碱，噻替派，洛莫司汀，司莫司汀，5-氟尿嘧啶和阿糖胞苷。本发明化合物与第二活性成分的重量比可以变化，取决于各成分的有效剂量。通常，采用各自的有效剂量。因此，例如，当本发明的化合物与第二抗癌剂联用时，本发明的化合物与第二剂的重量比通常为约1000:1到约1:1000，优选约200:1到约1:200。本发明的化合物与其他活性成分的组合通常也在上述范围内，但在每种情况下，应使用有效剂量的各活性成分。
治疗炎症的方法
更进一步地，本发明化合物和组合物可用于治疗炎症，并且可以与具有治疗用途的其它化合物和组合物联用，所述的治疗用途可能需要在采用本发明化合物治疗癌症或炎症之前、之后或同时进行治疗。因此，组合方法和组合物也是本发明的组成部分，以预防和治疗感兴趣的病症或疾病，如炎性或自身免疫性疾病，以及包括炎性肠病、类风湿性关节炎、骨关节炎、牛皮癣关节炎、多关节关节炎、多发性硬化症、过敏性疾病，银屑病，特异反应性皮炎和哮喘，以及上文提到的那些病态。
例如，在治疗或预防炎症或自身免疫疾病或例如骨损失有关的关节炎中，本发明化合物和组合物可与抗炎或止痛剂联用，诸如阿片激动剂，脂氧合酶抑制剂，如5-脂氧合酶，环氧合酶抑制剂，如环氧合酶-2抑制剂，白细胞介素抑制剂，如白细胞介素-1抑制剂，NMDA拮抗剂，一氧化氮抑制剂或一氧化氮合成抑制剂，非甾体抗炎剂，或细胞因子抑制抗炎剂，例如与化合物联用，如对乙酰氨基酚，阿司匹林，可待因，芬太尼，布洛芬，吲哚美辛，酮咯酸，吗啡，萘普生，非那西丁，吡罗昔康，甾体止痛剂，舒芬太尼，苏林酸，替尼达普，等等。同样，本发明化合物和组合物可以与以下试剂一起施用：上面列出的镇痛剂；增效剂如咖啡因，H2拮抗剂(例如，雷尼替丁)，二甲基硅油，氢氧化铝或氢氧化镁；减充血剂，如苯肾上腺素，苯丙醇胺，伪麻黄碱，羟甲唑啉，肾上腺素(ephinephrine)，萘甲唑啉，赛洛唑啉，六氢脱氧麻黄硷，或左旋脱氧麻黄素；镇咳药如可待因，二氢可待因酮，咳美芬，咳必清，或右美沙芬；利尿剂；和镇静或非镇静抗组胺药。
如上所述，本发明的化合物和组合物可以与用于疾病或病症的治疗，预防，抑制或改善的其他药物联用，对于上述疾病或病症，本发明的化合物和组合物是有用的。这些其他药物可以以其常规使用的途径和用量，与本发明的化合物或组合物同时或顺序地施用。当本发明的化合物或组合物与一种或多种其它药物同时使用时，除了本发明的化合物或组合物外还包含该其他药物的药物组合物是优选的。因此，本发明的药物组合物包括除了本发明的化合物或组合物还包含一种或多种其他活性成分或治疗剂的那些。可以与本发明的化合物或组合物联用(或分别给药或在同一药物组合物内)的其他治疗剂的实例包括，但不限于：(a)VLA-4拮抗剂；(b)皮质类固醇，诸如倍氯米松，甲基强的松龙，倍他米松，强的松，强的松龙(prenisolone)，地塞米松，氟替卡松，氢化可的松，布地奈德，曲安西龙，沙美特罗，沙美特罗，沙丁胺醇，福美雷司；(c)免疫抑制剂如环孢素(环孢素A，)，他克莫司(FK-506，)，雷帕霉素(西罗莫司，)和其他FK-506型免疫抑制剂，和霉酚酸酯，例如，霉酚酸酯(d)抗组胺药(H1-组胺拮抗剂)，如溴苯吡胺，扑尔敏，二氯苯吡胺，曲普利啶，氯马斯汀，苯海拉明，二苯拉林，曲吡那敏，羟嗪，甲地嗪，异丙嗪，异丁嗪，阿扎他定，赛庚啶，安他唑啉，非尼拉敏，嘧啶胺，阿司咪唑，特非那定，氯雷他定，西替利嗪，非索非那定，脱羧氯雷他定等；(e)非甾体抗哮喘药(例如，特布他林，奥西那林，非诺特罗，异他林，沙丁胺醇，比托特罗和吡布特罗)，茶碱，色甘酸钠，阿托品，异丙托溴铵，白三烯拮抗剂(例如，扎鲁司特，孟鲁司特，普仑司特，伊拉司特，泊比司特和SKB-106,203)，白三烯生物合成抑制剂(齐留通，Bay-1005)；(f)非甾体抗炎药(NSAIDS)，诸如丙酸衍生物(例如阿明洛芬，苯恶洛芬，布氯酸，卡洛芬，芬布芬，非诺洛芬，氟洛芬，氟比洛芬，布洛芬，吲哚洛芬，酮洛芬，咪洛芬，萘普生，奥沙普秦，吡洛芬，普拉洛芬，舒洛芬，噻洛芬酸和硫恶洛芬)，乙酸衍生物(例如，吲哚美辛，阿西美辛，阿氯芬酸，环氯茚酸，双氯芬酸，芬氯酸，芬克洛酸，芬替酸，呋罗芬酸，异丁芬酸，伊索克酸，奥品酸(oxpinac)，舒林酸，硫平酸，甲苯酰吡啶乙酸，齐多美辛和佐美酸)，芬那酸衍生物(如氟灭酸，甲氯芬那酸，甲芬那酸，尼氟酸和托芬那酸)，联苯羧酸衍生物(例如，二氟尼柳和氟苯柳)，昔康类(例如，异恶噻酰胺，吡罗昔康，舒多昔康和替诺昔康)，水杨酸酯(例如，乙酰水杨酸和柳氮磺吡啶)和吡唑啉酮(例如，阿扎丙宗，苯派龙(bezpiperylon)，非普拉宗，莫非保松，羟布宗和保泰松)；(g)环氧合酶-2(COX-2)抑制剂如塞来考昔和罗非昔布(h)磷酸二酯酶IV型(PDE IV)抑制剂；(i)金化合物如金诺芬和金硫葡萄糖；(j)依那西普(k)抗体疗法，如奥索科龙(orthoclone)(OKT3)，达利珠单抗巴利昔单抗和英夫利昔单抗(l)趋化因子受体，尤其是CCR5，CXCR2，CXCR3，CCR2，CCR3，CCR4，CCR7，CX 3CRI和CXCR6的其它拮抗剂；(m)润滑剂或软化剂，如凡士林和羊毛脂；(n)角质层分离剂(例如，他扎罗汀)；(o)维生素D3衍生物，如：卡泊三烯或卡泊三醇(p)PUVA；(q)地蒽酚(r)阿维A酯和异维A酸和(s)多发性硬化症治疗剂，如干扰素干扰素硫唑嘌呤醋酸格拉替雷糖皮质激素(例如，泼尼松龙)和环磷酰胺；(t)DMARDS如甲氨蝶呤；(u)其它化合物，例如5-氨基水杨酸及其前药；羟氯喹；D-青霉胺；抗代谢物，如硫唑嘌呤，6-巯基嘌呤和甲氨蝶呤；DNA合成抑制剂，如羟基脲和微管干扰物如秋水仙碱。本发明化合物与第二活性成分的重量比可以变化，取决于各成分的有效剂量。通常，采用各自的有效剂量。因此，例如，当本发明的化合物与NSAID联用时，本发明的化合物与NSAID的重量比通常为约1000:1到约1:1000，优选约200:1到约1:200。本发明的化合物与其他活性成分的组合通常也在上述范围内，但在每种情况下，应使用有效剂量的各活性成分。
诱导祖/干细胞动员的方法
更进一步地，本发明化合物和组合物可用于动员祖/干细胞，因此用于治疗或改善疾病或病症，对于上述疾病或病症祖/干细胞动员是有效的或合乎需要的，任选地根据WO05/000333描述的程序和指南使用本发明化合物，为所有目的通过引用并入本文。可能得到改善或以其他方式受益的病症包括，例如，造血障碍，如再生障碍性贫血，白血病，药物诱导的贫血，和化疗或放疗引发的造血缺陷。更进一步地，本发明化合物和组合物可用于在免疫抑制治疗期间和之后提高移植成功性，以及用于实现更有效的伤口愈合。更进一步地，本发明化合物和组合物可用于动员祖/干细胞，并因此用于治疗或改善疾病或病症，对于上述疾病或病症祖/干细胞动员是有效的或合乎需要的，任选地根据WO05/000333描述的程序和指南使用本发明化合物，为所有目的通过引用并入本文。可能得到改善或以其他方式受益的病症包括，例如，造血障碍，如再生障碍性贫血，白血病，药物诱导的贫血，和化疗或放疗引发的造血缺陷。更进一步地，本发明化合物和组合物可用于在免疫抑制治疗期间和之后提高移植成功性，以及用于实现更有效的伤口愈合和治疗细菌感染。任选地，给予本发明的化合物之后，和祖/干细胞动员之后，收集包括动员细胞的血液，以及任选地，纯化动员的细胞以及任选地扩增，需要时，再引入到同一人或第二人(例如，匹配的供体)中。
许多不同类型的细胞可根据需要被动员。在一些实施方式中，造血祖细胞(HSC)在给予本发明的化合物或组合物之后被动员，任选地从其他血液组分中收集和纯化。任选地，通过给予至少一种本发明化合物联合粒细胞集落刺激因子(G-CSF)或AMD3100(1,1′-[1,4-亚苯基二(亚甲基)]二[1,4,8,11-四氮杂环十四烷]八氢溴化物二水合物)或其盐、外消旋体或同分异构体中的一种或多种来诱导HSC动员。
在一些实施方式中，内皮祖细胞(EPC)在给予本发明或组合物的化合物之后被动员，任选地从其他血液组分中收集和纯化。任选地，通过给予至少一种本发明化合物联合血管内皮生长因子(VEGF)、VEGF激动剂(包括但不限于VEGF激动剂抗体)或AMD3100或其盐、外消旋体或同分异构体中的一种或多种诱导EPC动员。
在一些实施方式中，间充质干细胞(MSC)或基质祖细胞(SPC)在给予本发明或组合物的化合物之后被动员，任选地从其他血液组分中收集和纯化。任选地，通过给予至少一种本发明化合物联合G-CSF、VEGF、VEGF激动剂(包括但不限于VEGF激动剂抗体)或AMD3100或其盐、外消旋体或同分异构体中的一种或多种诱导该动员。
对于固定祖细胞或干细胞，合适的剂量水平通常为约0.001-100毫克/千克患者体重/天，其可以单剂量或多剂量施用。可以单剂量，随时间的剂量，诸如在静脉或经皮给药中，或以多剂量给予化合物。本发明化合物也可用于离体治疗方案以制备细胞培养物，其随后被用于补充对象的血细胞。离体治疗可在从外周血或骨髓或从匹配的供体的移植物收获的自体细胞上进行。
本发明化合物可以与诱导祖/干细胞活化、增殖或动员的其它化合物和组合物组合。除了上述那些，这些包括但不限于FMS相关酪氨酸激酶3配体(Flt3配体)，白介素3(IL-3)，白细胞介素7(IL-7)，白细胞介素20(IL-20)，钢铁因子(SF)和粒细胞巨噬细胞集落刺激因子(GM-CSF)，并且可以提供治疗用途，该用途可能需要或受益于祖/干细胞动员之前、之后或同时的治疗。因此，组合方法和组合物也是本发明的组成部分，以预防和治疗感兴趣的的病症或疾病。另外，本发明的化合物可以在干细胞动员失调可能起一定作用的病症中提供益处，如心脏疾病和肺动脉高压。
与CXCR7相关的疾病和病症的诊断方法
更进一步地，本发明化合物和组合物可用于CXCR7相关的疾病和病症的诊断。特别是，本发明的化合物可以标记形式制备(例如，放射性标记)和用于诊断，例如，癌症。结合于CXCR7的本发明的标记的化合物(例如拮抗剂或激动剂)可用于测定哺乳动物对象中CXCR7的水平。在一些实施方式中，CXCR7调节剂施用于患有癌症的对象。在某些情况下，给予标记的化合物从而检测进展期癌症，例如癌，神经胶质瘤，间皮瘤，黑素瘤，淋巴瘤，白血病，腺癌，乳腺癌，卵巢癌，子宫颈癌，成胶质细胞瘤，白血病，淋巴瘤，前列腺癌和伯基特淋巴瘤，头颈部癌，结肠癌，结肠直肠癌，非小细胞肺癌，小细胞肺癌，食道癌，胃癌，胰腺癌，肝胆管癌，胆囊癌，小肠癌，直肠癌癌，肾癌，膀胱癌，前列腺癌，阴茎癌，尿道癌，睾丸癌，子宫颈癌，阴道癌，子宫癌，卵巢癌，甲状腺癌，甲状旁腺癌，肾上腺癌，胰腺内分泌肿瘤，类癌肿瘤，骨癌，皮肤癌，视网膜母细胞瘤，霍奇金淋巴瘤，非何杰金氏淋巴瘤(对于其他癌症，参见，《癌症：原理和实践》(德维塔，DeVita,V.T.等编辑，1997))；以及脑和神经元功能障碍，如阿尔茨海默氏病和多发性硬化；肾功能紊乱；类风湿关节炎；心脏移植排斥反应；动脉粥样硬化(和升高的胆固醇水平)；哮喘；肾小球肾炎；接触性皮炎；炎性肠病；结肠炎；牛皮癣；再灌注损伤；以及本文中描述的其他病症和疾病。在一些实施方式中，对象不具有卡波济氏肉瘤，多中心型卡斯尔曼病或AIDS相关的原发性渗出性淋巴瘤。因为CXCR7通常在癌细胞而不在非癌细胞内表达，通常需要将CXCR7拮抗剂给予有患癌症风险的对象。
各种成像和检测方法可以用于检测癌症。在一些实施方式中，直接方法可用来评估体内CXCR7生物分布，如磁共振成像(“MRI”)，正电子发射断层扫描(“PET”)和单光子发射计算机断层摄影(“SPECT”)。这些方法中的每一种都可以检测体内适当标记化合物的分布(通常为结合到CXCR7)，如果该化合物包含具有适当核特性的原子。MRI检测顺磁核；PET和SPECT从放射性核的衰退检测颗粒发射。
对于涉及PET的方法，有必要掺入适当的发射正电子的放射性核素。适合用于标记治疗剂的发射正电子的同位素相对很少。碳同位素，11C，已用于PET，但具有20.5分钟的短半衰期。因此，典型地，用于合成和使用的工具接近回旋加速器，在回旋加速器中生成前体11C原料。另一种有用的同位素，18F，具有110分钟的半衰期。这使得有足够的时间用于掺入放射性标记的示踪物，用于纯化和施用到人或动物对象。其他同位素具有更短半衰期。13N半衰期为10分钟，15O具有更短的半衰期2分钟。但是，两者的发射比11C更有能量并且已经用这些同位素进行了PET研究(参见《临床正电子发射断层扫描》(Clinical Positron Emission Tomography),Mosby Year Book,1992,K.F.Hubner等,第2章)。
SPECT成像采用同位素示踪剂，为γ-发射器。尽管有用的同位素的范围比用于PET的大，用SPECT成像提供较低的三维分辨率。然而，在一些情况下，SPECT用于获得有关化合物结合，定位和清除率的临床上重要的信息。一用于SPECT成像的有用同位素是123I，具有13.3小时半衰期的γ-发射体。标记有123I的化合物可以从制造现场运到多至约1000英里距离，或者可以运输同位素本身用于现场合成。85％的同位素发射是159KeV光子，通过目前使用的SPECT仪器容易测量。其他卤素同位素可用于PET或SPECT成像，或用于传统示踪标记。这些包括75Br、76Br、77Br和82Br，它们具有有用的半衰期和发射特征。
综上，本发明提供肿瘤、器官或组织成像的方法，所述方法包括：
(a)向有需要该成像的对象给予放射性标记或可检测形式的式I所示化合物；和
(b)检测所述化合物以确定所述化合物集中在所述对象中的何处。
此外，本发明提供检测样本中CXCR7水平升高的方法，所述方法包括：
(a)将疑似具有CXCR7水平升高的样本与放射性标记或可检测形式的式I所示化合物接触；
(b)测定结合到样本中存在的CXCR7的化合物的水平，以确定所述样本中存在的CXCR7的水平；和
(c)将步骤(b)确定的水平与对照样本比较，以确定所述样本中是否存在CXCR7水平升高。
就本文描述的治疗方法而言，标记化合物的施用可以通过通常用于将化合物与待评估的组织最终接触的任何途径，且对本领域技术人员来说是熟知的。尽管多于一种途径可用于给予特定组合物，但特定途径通常比另一途径可提供更直接和更有效的诊断。
联合治疗
CXCR7抑制剂可以单独使用或与一种或多种其它药物结合使用。可能的联用搭档可以包括，例如，其他抗血管生成因子和/或化疗剂(例如，细胞毒性剂)或辐射，癌症疫苗，免疫调节剂，抗血管剂，信号转导抑制剂，抗增生剂，或细胞凋亡诱导剂。
IV.实施例
提供以下实施例用于说明，但不限制所要求的发明。
以下使用的试剂和溶剂可以获自商业途径，如奥德里奇化学公司(Aldrich Chemical Co.,密尔沃基,威斯康星州,USA)。采用瓦里安墨丘利(Varian Mercury)400MHz NMR光谱仪记录1H-NMR谱。相对TMS提供重要峰，且按顺序制表：多重性(s,单峰；d,双峰；t,三峰；q,四峰；m,多重峰)和质子数。质谱结果报告为质荷比，随后为各离子的相对丰度(括号内)。在实施例中，为包含最常见原子同位素的M+H(或如所述M-H)离子报告单一m/e值。所有情况下同位素模式对应于期望的结构式。在惠普MSD电喷雾质谱上实施电喷雾电离(ESI)质谱分析，采用HP1100HPLC用于样本递送。通常，分析物溶于甲醇，浓度为0.1mg/毫升，取1微升与传递溶剂一同注入质谱，质谱从100到1500道尔顿扫描。所有化合物可以正ESI模式进行分析，采用乙腈/水和1％甲酸作为传递溶剂。以下提供的化合物也可以以负ESI模式进行分析，采用乙腈/水中的2mM NH4OAc作为传递系统。
以下缩写用于实施例中和整个发明说明书：rt室温；HPLC高压液相色谱；TFA三氟乙酸；LC-MSD，液相色谱/质量选择检测器；LC-MS，液相色谱/质谱；Pd2dba3三(二亚苄基丙酮)二钯；THF，四氢呋喃；DMF，二甲基甲酰胺或N,N-二甲基甲酰胺；DCM，二氯甲烷；DMSO二甲基亚砜；TLC，薄层色谱；KHMDS六甲基二硅氮烷钾盐；ES电喷雾；sat.饱和的。
本发明范围内的化合物可以按如下所述合成，使用本领域技术人员公知的各种反应。本领域技术人员还将认识到，其它方法可用于合成本发明目标化合物，且本文主体中所描述的方法尽管并不是穷尽性的，但的确为感兴趣的化合物提供了广泛适用和实用的路线。
本专利要求保护的某些分子可以不同的对映异构体和非对映异构体形式存在，这些化合物的全部这样的变体都被要求保护。
本文用于合成关键化合物的实验程序的详细说明导致获得由表征它们的物理数据和与它们相关的结构叙述描述的分子。
本领域技术人员也将认识到，在有机化学的标准实验(work up)程序中，经常使用酸和碱。在本专利内描述的实验程序中，有时产生母体化合物的盐，如果它们具有必要的固有酸度或碱度。
实施例1：1-(4-氟苯基)-1,2,4-三唑-3-羧酸乙酯的合成
4-氟苯胺(2.8克,26毫摩尔)溶于10％HCl并冷却至0℃。向溶液中小心加入溶于10毫升水中的NaNO2(1.8克,26毫摩尔)。在单独的烧瓶内，将NaOAc(13克,96毫摩尔)和水(25毫升)加入到异氰基乙酸乙酯(2.0克,18毫摩尔)的甲醇(80毫升)溶液。将溶液冷却至0℃，经15分钟小心加入4-氟苯胺重氮盐。在0℃继续搅拌15分钟，将烧瓶从冰浴中移开后继续搅拌2小时。然后将反应混合物加入500毫升水中，通过过滤收集得到的棕色沉淀物并真空干燥从而得到3.8克所需酯(90％产率)。
实施例2：1-(4-氟苯基)-1,2,4-三唑-3-羧酸的合成
1.84克1-(4-氟苯基)-1,2,4-三唑-3-羧酸乙酯(7.83毫摩尔)悬浮于0.63克氢氧化钠(2当量)在110毫升水中的溶液内。剧烈搅拌混合物，缓慢升至50℃，于是全部固体溶解。溶液冷却至室温，采用水稀释到总体积为400毫升。加入1.31毫升浓HCl(2当量)，同时剧烈搅拌混合物。搅拌持续15分钟，让所有固体均匀分散。将白色固体滤出并在漏斗上用15毫升水彻底洗涤，然后在真空炉中50℃下干燥，得到1.6克酸产物，为白色粉末(99％产率)。
实施例3：1-(4-氟苯基)-1,2,4-三唑-3-乙酰氯的合成
1.71克(8.24毫摩尔)1-(4-氟苯基)-1,2,4-三唑-3-羧酸悬浮于15毫升1,2-二氯乙烷内，然后室温滴加1.24毫升(12.4毫摩尔)草酰氯，随后加1.6微升(0.021毫摩尔)DMF。室温搅拌混合物，然后缓慢升至60℃。加入另一部分1.6微升DMF，5分钟后材料完全溶解。真空浓缩溶液从而获得1.86克所需产物，为浅黄色固体(100％产率)。产物无需纯化用于后续步骤。
实施例4：1-(4-氯-3-氟苯基)吡唑-3-羧酸乙酯的合成
在50毫升烧瓶内装入3.00克4-氯-3-氟溴苯(15毫摩尔)、1.40克1-H-吡唑-3-羧酸乙酯(10毫摩尔)、400毫克CuI(2.0毫摩尔)、4.5克K2CO3(3.3毫摩尔)和0.9毫升反式-N,N’-二甲基环己二胺(2.0毫摩尔)。将所得混合物在140℃搅拌3小时。将混合物冷却到室温后，用200毫升EtOAc稀释，然后用水(2×50毫升)和盐水(2×50毫升)洗涤。在MgSO4上干燥有机物并减压浓缩。通过快速柱色谱在硅胶上(0–25％EtOAc的己烷溶液)纯化残留物从而得到所需产物(1.2g,50％)。
实施例5：1-(4-氯-3-氟苯基)吡唑-3-羧酸的合成
向1-(4-氯-3-氟苯基)吡唑-3-羧酸乙酯(268毫克,1毫摩尔)的THF溶液中加入3.0毫升1.0M的LiOH(3.0毫摩尔)。将所得混合物在室温下搅拌，3小时时加入1.0M的HCl从而调节pH至1.0。采用EtOAc(2×100毫升)萃取有机物，之后在MgSO4上干燥并减压浓缩从而得到白色固体(230毫克,96％)，无需进一步纯化用于下一步骤。
实施例6：1-(4-氯苯基)吡唑-3-羧酸乙酯的合成
向50毫升烧瓶内装入2.87克4-氯溴苯(15毫摩尔)、1.40克1-H-吡唑-3-羧酸乙酯(10毫摩尔)、400毫克CuI(2.0毫摩尔)、4.5克K2CO3(3.3毫摩尔)和0.9毫升反式-N,N’-二甲基环己二胺(2.0毫摩尔)。将所得混合物在140℃搅拌3小时。将混合物冷却到室温后，用200毫升EtOAc稀释，然后用水(2×50毫升)和盐水(2×50毫升)洗涤。在MgSO4上干燥有机物并减压浓缩。通过快速柱色谱在硅胶上(0–25％EtOAc的己烷溶液)纯化残留物从而得到所需产物(1.25克,50％)。
实施例7：1-(4-氯苯基)吡唑-3-羧酸的合成
向1-(4-氯苯基)吡唑-3-羧酸乙酯(250毫克,1毫摩尔)的THF溶液中加入3.0毫升1.0M的LiOH(3.0毫摩尔)。将所得混合物在室温下搅拌，3小时时加入1.0M的HCl从而调节pH至1.0。采用EtOAc(2×100毫升)萃取有机物，在MgSO4上干燥并减压浓缩从而得到白色固体(213毫克,96％)，无需进一步纯化用于下一步骤。
实施例8：1-(3-氟苯基)吡唑-3-羧酸乙酯的合成
在50毫升烧瓶内装入2.62克3-氟溴苯(15毫摩尔)、1.40克乙基1-H-吡唑-3-羧酸乙酯(10毫摩尔)、400毫克CuI(2.0毫摩尔)、4.5克K2CO3(3.3毫摩尔)和0.9毫升反式-N,N’-二甲基环己二胺(2.0毫摩尔)。将所得混合物在140℃搅拌3小时。将混合物冷却到室温后，用200毫升EtOAc稀释，然后用水(2×50毫升)和盐水(2×50毫升)洗涤。在MgSO4上干燥有机物并减压浓缩。通过快速柱色谱在硅胶上(0–25％EtOAc的己烷溶液)纯化残留物从而得到所需产物(1.17g,50％)。
实施例9：1-(3-氟苯基)吡唑-3-羧酸的合成
向1-(3-氟苯基)吡唑-3-羧酸乙酯(234毫克,1毫摩尔)的THF溶液中加入3.0毫升1.0M的LiOH(3.0毫摩尔)。将所得混合物在室温下搅拌3小时，然后加入1.0M的HCl从而调节pH至1.0。采用EtOAc(2×100毫升)萃取有机物，之后在MgSO4上干燥并减压浓缩从而得到白色固体(198毫克,96％)，无需进一步纯化用于下一步骤。
实施例10：1-(4-氟苯基)-1,2,4-三唑-5-甲基-3-羧酸乙酯的合成
4-氟肼盐酸盐(12.8克,7.7毫摩尔)和硫代草酰胺乙酯(10g,7.7毫摩尔)悬浮于水(80毫升)中，然后将混合物冷却至0℃。向混合物中滴加三乙胺(10.77毫升,7.7毫摩尔)。将得到的混合物在室温搅拌2小时。然后采用水(2×200毫升)洗涤过滤的固体从而得到黄色固体(13.8g,6.1毫摩尔)。11.25克黄色固体(50毫摩尔)溶于EtOH(50毫升)和4M HCl(0.5毫升)，随后加入原乙酸三乙酯(8.9克,55毫摩尔)。将得到的混合物在80℃加热2小时，冷却至室温后收集固体(10克,85％)。
实施例11：1-(4-氟苯基)-1,2,4-三唑-5-甲基-3-羧酸的合成
1.94克1-(4-氟苯基)-1,2,4-三唑-5-甲基-3-羧酸乙酯(7.83毫摩尔)悬浮于0.63克氢氧化钠(2当量)在110毫升水中的溶液内。剧烈搅拌混合物，缓慢升至50℃，于是全部固体溶解。溶液冷却至室温，采用水稀释到总体积为400毫升。加入1.31毫升浓HCl(2当量)，同时剧烈搅拌混合物。搅拌持续15分钟。然后将白色固体滤出并用15毫升彻底洗涤，然后在真空炉中50℃下干燥，得到1.7克所需酸产物，为白色粉末(99％产率)。
实施例12：2-吡咯烷噻唑-4-羧酸乙酯的合成
将2-氯噻唑-4-羧酸乙酯(500毫克,2.6毫摩尔)、吡咯烷(210毫克,2.98毫摩尔)和二乙基异丙基胺(1毫升)在p-二氧六环(5毫升)中的混合物加热至60℃2小时。冷却至室温后，真空浓缩溶液，通过快速色谱(SiO2，2-5％MeOH的CH2Cl2溶液作为洗脱液)纯化残留物从而得到所需化合物，为泡沫(400毫克,68％产率,直接用于下一步骤)。MS:(ES)m/z 227.1(M+H+)。
实施例13：2-吡咯烷噻唑-4-羧酸的合成
向以上酯(400毫克,1.8毫摩尔)、MeOH(3毫升)、THF(5毫升)和DI H2O(2毫升)的混合物中加入LiOH一水合物(210毫克,5毫摩尔)。室温搅拌得到的混合物过夜。采用冰水稀释混合物，采用1N HCl调节pH至3，并用20％MeOH的CH2Cl2溶液萃取。干燥(Na2SO4)有机层，过滤并真空浓缩从而得到所需化合物，为灰白色固体(300毫克,89％产率,直接用于下一步骤)。MS:(ES)m/z 199.1(M+H+)。
实施例14：2-(4-羟基-哌啶-1-基)-噻唑-4-羧酸的合成
a)向烧瓶内装入4-羟基哌啶(236毫克,2.33毫摩尔)、2-溴噻唑-4-羧酸乙酯(500毫克,2.12毫摩尔)、K2CO3(879毫克,6.36毫摩尔)和N-甲基吡咯烷(3.5毫升)。将反应混合物加热至90℃并搅拌过夜。然后采用EtOAc(30毫升)稀释反应并用水(5×30毫升)洗涤。在Na2SO4上干燥有机层，过滤并浓缩。在硅胶上(95:5–20:80己烷:EtOAc)纯化粗材料从而获得产物，混合有2当量N-甲基吡咯烷(883毫克)，为澄清无色油。
b)步骤a获得的2-(4-羟基-哌啶-1-基)-噻唑-4-羧酸乙酯混合物溶于MeOH(10毫升)。向其中加入NaOH(2M,5.00毫升)。搅拌反应混合物过夜，然后用1M NaHSO4(30毫升)稀释。采用EtOAc(3×50毫升)萃取该溶液，在Na2SO4上干燥合并的有机层，过滤并浓缩从而得到产物(433毫克,1.90毫摩尔,90％)，为白色固体。
实施例15：2-(吡咯烷-1-基)噻唑-4-羧酸的合成
a)将2-氯噻唑-4-羧酸乙酯(500毫克,2.6毫摩尔)、吡咯烷(210毫克,2.98毫摩尔)和二乙基异丙胺(1毫升)在p-二氧六环(5毫升)中的混合物加热到60℃2小时。冷却至室温后，真空浓缩溶剂并通过快速色谱(SiO2，2-5％MeOH的CH2Cl2溶液作为洗脱液)纯化残留物从而得到所需化合物，为泡沫(400毫克,68％产率,直接用于下一步骤)。MS:(ES)m/z 227.1(M+H+)。
b)向以上酯(400毫克,1.8毫摩尔)、MeOH(3毫升)、THF(5毫升)和DI H2O(2毫升)的混合物中加入LiOH一水合物(210毫克,5毫摩尔)。室温搅拌得到的混合物过夜。采用冰水稀释混合物，采用1N HCl调节pH至3，并用20％MeOH的CH2Cl2溶液萃取。干燥(Na2SO4)有机层，过滤并真空浓缩从而得到所需化合物，为灰白色固体(300毫克,89％产率,直接用于下一步骤)。MS:(ES)m/z 199.1(M+H+)。
实施例16：1-(o-氟苯基)-1,2,4-三唑-3-羧酸甲酯的合成
a)向1,2,4-三唑-3-羧酸甲酯(1.0克,7.9毫摩尔)的10毫升DMF溶液中加入o-氟苯基硼酸(1.1克,7.9毫摩尔)、Cu(OAc)2(1.6克,8.8毫摩尔)和吡啶(0.70毫升,8.7毫摩尔)。将混合物置于90℃油浴中并剧烈搅拌3.5小时。之后采用100毫升EtOAc稀释混合物，过滤并用1:3v/v浓NH4OH–饱和NH4Cl洗涤。减压去除溶剂后，通过快速色谱(SiO2,20–80％EtOAc/己烷)纯化残留物从而获得280毫克白色粉末(16％产率)。
b)向溶于4毫升MeOH的步骤a获得的酯(280毫克,1.3毫摩尔)的溶液中加入2.5毫升1.0M NaOH。搅拌15分钟后，加入6.0m HCl(0.42毫摩尔,2.5毫摩尔)，减压去除MeOH，通过过滤收集白色沉淀物并真空干燥从而获得150毫克所需酸(57％产率)。
实施例17：1-(o-甲苯基)-1,2,4-三唑-3-羧酸的合成
向1-(o-甲苯基)-1,2,4-三唑-3-羧酸乙酯(400毫克,1.7毫摩尔)在3毫升THF中的溶液中加入4M LiOH(2毫升,8毫摩尔)，随后加入3毫升MeOH。在50℃搅拌反应混合物5分钟，之后采用浓HCl调节pH至4。萃取、干燥(MgSO4)、过滤并减压干燥之后，回收43毫克残留物(12％)，不需要进一步纯化用于后续步骤。
实施例18：1-(p-氟苯基)-1,2,4-三唑-3-羧酸的合成
4-氟苯胺(2.8克,26毫摩尔)溶于10％HCl并冷却至0℃。向该溶液中小心加入溶于10毫升水中的NaNO2(1.8克,26毫摩尔)。在单独的烧瓶内，将NaOAc(13克,96毫摩尔)和水(25毫升)加入到异氰基乙酸乙酯(2.0克,18毫摩尔)在甲醇中的溶液(80毫升)。将溶液冷却至0℃，经15分钟小心加入4-氟苯胺重氮盐。在0℃继续搅拌15分钟，之后将烧瓶移出冰浴，继续搅拌2小时。然后将反应混合物加入到500毫升水中，通过过滤收集得到的棕色沉淀物并真空干燥从而获得3.8克所需酯(90％产率)。
实施例19：N-[(3S)-1-(8-甲基吡咯[1,2-a]吡嗪-1-基)吡咯烷-3-基]-2-苯基-噻唑-4-甲酰胺的合成
a)3-甲基-1H-吡咯-2-羧酸乙酯(2.45克,16.0毫摩尔)溶于8毫升NMP和2-溴-1,1-二乙氧基乙烷(3.23毫升,20.8毫摩尔)的混合物中。室温下分批加入60％氢化钠(0.77克,19.2毫摩尔)。将得到的溶液加热至130℃5小时，然后冷却至室温。接着采用100毫升水稀释溶液，并采用100毫升1份的MTBE萃取得到的混合物。真空蒸发有机层并通过快速色谱(SiO2,10-40％EtOAc/己烷)纯化从而得到1.90克所需化合物，为无色油(44％产率)。
b)1.90克(7.06毫摩尔)1-(2,2-二乙氧基乙基)-3-甲基-1H-吡咯-2-羧酸乙酯(以上步骤a制备)溶于40毫升乙醇-水混合物(1:1)。加入1.48克(35.3毫摩尔)氢氧化锂一水合物之后，将混合物加热至75℃ 8小时。冷却后，真空蒸发大部分乙醇，采用30毫升水稀释得到的溶液，并用2.33克乙酸(38.8毫摩尔)中和，然后用两份30毫升二氯甲烷萃取。在无水硫酸镁上干燥有机相，过滤并真空浓缩从而得到1.68克无色油(99％产率)。
c)1.68克(6.97毫摩尔)1-(2,2-二乙氧基乙基)-3-甲基-1H-吡咯-2-羧酸(以上步骤b制备)溶于15毫升NMP和45毫升0.5M氨气的二氧六环溶液的混合物中。加入3.18克HATU(8.36毫摩尔)，室温搅拌混合物过夜。向混合物中加入10毫升NMP，真空蒸发二氧六环。加入另一部分HATU(1.59克,4.18毫摩尔)，氨气鼓泡通过混合物，直到观察不到更多的反应过程。然后采用300毫升盐水稀释混合物，并用150毫升一份MTBE萃取。真空蒸发有机层并通过快速色谱(SiO2,20-100％EtOAc/己烷)纯化从而获得1.26克所需化合物，为无色油(75％产率)。
d)1.25克(5.21毫摩尔)1-(2,2-二乙氧基乙基)-3-甲基-1H-吡咯-2-甲酰胺(以上步骤c制备)溶于30毫升冰醋酸并加热至105℃ 4小时，然后真空蒸发至干燥。残留物溶于25毫升热二氯甲烷，然后采用30毫升己烷稀释，同时蒸发大部分二氯甲烷。过滤掉固体，采用5毫升己烷洗涤，并干燥从而获得730毫克纯的所需化合物，为黄褐色粉末(95％产率)。
e)725毫克(4.90毫摩尔)8-甲基-2H-吡咯[1,2-a]吡嗪-1-酮(以上步骤d制备)悬浮于7毫升磷酰氯并室温搅拌过夜，之后加热至35℃4小时。接着将得到的溶液真空蒸发至干燥。残留物置于10毫升二氯甲烷和10毫升碳酸氢钠水溶液的混合物中，搅拌直至停止气体逸出。在无水硫酸镁上干燥分离的有机层，过滤并真空浓缩。残留物溶于9毫升热正庚烷。溶液清晰去除不溶黑色焦油并真空浓缩从而获得774毫克所需产物，为灰白色固体(95％产率)。
f)合并646毫克(3.87毫摩尔)1-氯-8-甲基-吡咯[1,2-a]吡嗪(以上步骤e制备)、2.16克(11.6毫摩尔)(S)-3-(Boc-氨基)吡咯烷、1毫升N,N-二异丙基乙基胺和1毫升NMP并加热至120℃ 1小时。冷却混合物，采用50毫升水稀释并采用三份50毫升乙酸乙酯萃取。将碳酸氢钠固体加热到水层，再采用50毫升乙酸乙酯萃取。采用碳酸氢钠水溶液洗涤合并的有机层，真空蒸发并使用快速色谱(SiO2,20-60％EtOAc/己烷)纯化从而得到872毫克所需化合物，为无色油(71％产率)。
g)872毫克(2.75毫摩尔)N-[(3S)-1-(8-甲基吡咯[1,2-a]吡嗪-1-基)吡咯烷-3-基]氨基甲酸叔丁酯(以上步骤f制备)溶于3.5毫升二氧六环。向该溶液中加入3.5毫升二氧六环中的盐酸溶液(4M)，在60℃搅拌混合物1小时，期间观察到无色固体沉淀。真空去除挥发物从而获得739毫克所需化合物，不需进一步纯化(93％产率)。
h)39毫克(0.135毫摩尔)(3S)-1-(8-甲基吡咯[1,2-a]吡嗪-1-基)吡咯烷-3-胺二盐酸盐(以上步骤g制备)和28毫克(0.135毫摩尔)2-苯基噻唑-4-羧酸溶于0.5毫升NMP。向溶液中加入77毫克(0.203毫摩尔)HATU和0.117毫升(0.675毫摩尔)N,N-二异丙基乙基胺。室温搅拌混合物1小时，然后采用3毫升DMSO稀释并直接注入反相半制备HPLC系统(5-60％乙腈/水,0.1％TFA)。真空浓缩纯馏分而获得66毫克所需产物，为TFA盐(95％产率)。1H NMR(400MHz,DMSO)δ11.28(s,1H),8.82(d,J＝7.0Hz,1H),8.33(s,1H),8.04-8.01(m,2H),7.82(m,2H),7.54-7.50(m,3H),6.86(d,J＝5.5Hz,1H),6.76(d,J＝2.2Hz,1H),4.75-4.65(m,1H),4.20-3.60(m,4H),2.48(s,3H),2.40-2.20(m,2H)；MS:(ES)m/z计算C22H21N5OS[M+H]+404.2,实测404.
实施例20：1-(4-氯苯基)-N-[(3S)-1-(8-甲基吡咯[1,2-a]吡嗪-1-基)吡咯烷-3-基]吡唑-3-甲酰胺的合成
40毫克(0.138毫摩尔)(3S)-1-(8-甲基吡咯[1,2-a]吡嗪-1-基)吡咯烷-3-胺二盐酸盐和31毫克(0.138毫摩尔)1-(4-氯苯基)吡唑-3-羧酸溶于0.5毫升NMP。向溶液中加入79毫克(0.207毫摩尔)HATU和0.120毫升(0.690毫摩尔)N,N-二异丙基乙基胺。室温搅拌混合物1小时，然后采用3毫升DMSO稀释并直接注入反相半制备HPLC系统(5-60％乙腈/水,0.1％TFA)。真空浓缩纯馏分，溶于1毫升甲醇并通过碳酸氢盐树脂筒(PL-HCO3MP SPE 500毫克/6毫升)。向得到的溶液中加入15微升浓盐酸，真空去除挥发物从而获得49毫克所需产物，为HCl盐(78％产率)。1H NMR(400MHz,DMSO)δ11.38(s,1H),8.78(d,J＝7.0Hz,1H),8.59(d,J＝3.0Hz,1H),7.95(d,J＝7.0,2H),7.81(m,2H),7.61(d,J＝8.8Hz,2H),6.92(s,1H),6.85(d,J＝5.5Hz,1H),6.76(d,J＝2.2Hz,1H),4.70-4.65(m,1H),4.18-3.80(m,4H),2.48(s,3H),2.38-2.18(m,2H)；MS:(ES)m/z计算C22H21ClN6O[M+H]+421.2,实测421.
实施例21：6-甲基-N-[(3S)-1-吡咯[1,2-a]吡嗪-1-基吡咯烷-3-基]喹唑啉-2-甲酰胺的合成
43毫克(0.156毫摩尔)(3S)-1-吡咯[1,2-a]吡嗪-1-基吡咯烷-3-胺二盐酸盐和33毫克(0.156毫摩尔)6-甲基喹唑啉-2-羧酸盐酸盐溶于0.4毫升NMP。向混合物中加入85毫克(0.224毫摩尔)HATU和155微升(0.892毫摩尔)N,N-二异丙基乙基胺。室温搅拌混合物30分钟，接着采用3毫升DMSO稀释，直接注入反相半制备HPLC系统(5-40％乙腈/水,0.1％TFA)。真空浓缩纯馏分从而获得39毫克所需产物，为TFA盐(51％产率)。1H NMR(400MHz,CD3OD)δ9.49(s,1H),8.04(d,J＝9.1Hz,1H),7.93(d,J＝6.9Hz,2H),7.75(d,J＝1.5Hz,1H),7.70(d,J＝5.9Hz,1H),7.55(s,1H),6.92(s,1H),6.85(d,J＝5.5Hz,1H),5.00-3.70(m,5H),3.30(s,3H),2.60-2.30(m,2H)；MS:(ES)m/z计算C21H20N6O[M+H]+373.2,实测373.
实施例22：1-(4-氯苯基)-N-[(3S)-1-吡咯[1,2-a]吡嗪-1-基吡咯烷-3-基]吡唑-3-甲酰胺·三氟乙酸盐的合成
向1-(4-氯苯基)吡唑-3-羧酸(49毫克,0.22毫摩尔)在0.80毫升DMSO中的溶液中加入(3S)-1-吡咯[1,2-a]吡嗪-1-基吡咯烷-3-胺二盐酸盐(74毫克,0.27毫摩尔)，随后加入三乙胺(0.12毫升,0.86毫摩尔)和HATU(92毫克,0.24毫摩尔)。1.5小时后，采用1毫升水稀释反应混合物，过滤，通过反相制备HPLC(22-36％梯度的CH3CN/H2O，含0.1％TFA改性剂)纯化并干燥(冻干机)从而得到产物。1H NMR(400MHz,CD3OD)8.76(d,J＝6.2Hz,1H),8.31(s,1H),7.86(d,J＝8.8Hz,2H),7.77(d,J＝2.5Hz,1H),7.72(d,J＝5.5Hz,1H),7.57(d,J＝5.5Hz,1H),7.50(d,J＝8.8Hz,2H),6.96(d,J＝2.5,1H),6.93(dd,J＝2.6,7.0Hz,1H),6.84(d,J＝5.9Hz,1H),4.95-4.80(m,1H),4.70-3.70(br,4H),2.60-2.30(m,2H).MS:(ES)407.2(M+H+).
实施例23：1-(o-甲苯基)-N-[(3S)-1-吡咯[1,2-a]吡嗪-1-基吡咯烷-3-基]吡唑-3-甲酰胺·三氟乙酸盐的合成
向1-(o-甲苯基)吡唑-3-羧酸(35毫克,0.17毫摩尔)在0.80毫升DMSO中的溶液中加入(3S)-1-吡咯[1,2-a]吡嗪-1-基吡咯烷-3-胺二盐酸盐(46毫克,0.17毫摩尔)，随后加入三乙胺(0.10毫升,0.70毫摩尔)和HATU(80毫克,0.21毫摩尔)。1小时后，在二氯甲烷(70毫升)中稀释反应混合物，采用水(20毫升)洗涤并减压浓缩。通过反相制备HPLC(20-40％梯度的CH3CN/H2O，含0.1％TFA改性剂)纯化残留物并干燥(冻干机)从而获得所需化合物。1H NMR(400MHz,CD3OD)8.62(d,J＝5.9Hz,1H),7.88(d,J＝2.5Hz,1H),7.75(s,1H),7.70(d,J＝5.9Hz,1H),7.54(d,J＝3.6Hz,1H),7.40-7.25(m,4H),6.94(d,J＝2.2Hz,1H),6.91(dd,J＝2.6,4.4Hz,1H),6.82(d,J＝5.5Hz,1H),4.95-3.65(br,5H),2.58-2.30(m,2H),2.20(s,3H).MS:(ES)387.2(M+H+).
实施例24：1-(o-甲苯基)-N-[(3S)-1-吡咯[1,2-a]吡嗪-1-基吡咯烷-3-基]-1,2,4-三唑-3-酰胺·三氟乙酸盐的合成
向1-(o-甲苯基)-1,2,4-三唑-3-羧酸(43毫克,0.21毫摩尔)在1毫升DMSO中的溶液中加入(3S)-1-吡咯[1,2-a]吡嗪-1-基吡咯烷-3-胺二盐酸盐(60毫克,0.22毫摩尔)，随后加入三乙胺(0.12毫升,0.89毫摩尔)和HATU(80毫克,0.21毫摩尔)。20分钟后，采用10毫升水淬灭反应混合物，采用二氯甲烷萃取。分离有机层并减压浓缩。通过反相制备HPLC(20-40％梯度的CH3CN/H2O，含0.1％TFA改性剂)纯化残留物并干燥(冻干机)从而获得20毫克所需化合物(19％产率)。1H NMR(400MHz,CD3OD)8.73(s,1H),7.76(d,J＝2.6Hz,1H),7.70(d,J＝5.5Hz,1H),7.55(d,J＝4.0Hz,1H),7.50-7.32(m,4H),6.92(dd,J＝2.5,4.4Hz,1H),6.83(d,J＝5.9Hz,1H),4.95-4.80(m,1H),4.70-3.70(br,5H),2.60-2.30(m,2H),2.22(s,3H).MS:(ES)388.2(M+H+).
实施例25：N-[(3S)-1-(8-甲基吡咯[1,2-a]吡嗪-1-基)吡咯烷-3-基]-5-苯基-嘧啶-2-甲酰胺·三氟乙酸盐的合成
a)向5-溴嘧啶-2-羧酸(41毫克,0.20毫摩尔)在0.80毫升DMSO中的溶液中加入(3S)-1-(8-甲基吡咯[1,2-a]吡嗪-1-基)吡咯烷-3-胺二盐酸盐(61毫克,0.21毫摩尔)，随后加入三乙胺(0.12毫升,0.86毫摩尔)和HATU(81毫克,0.21毫摩尔)。20分钟后，用10毫升水淬灭反应混合物并用二氯甲烷萃取。分离有机层并减压浓缩。通过快速色谱(SiO2,2％7MNH3，MeOH/二氯甲烷中)纯化残留物。MS:(ES)402.2(M+H+).
b)在4毫升小瓶内，步骤a的产物与苯硼酸(24毫克,0.2毫摩尔)、Pd(PPh3)4(23毫克,0.020毫摩尔)、脱气甲苯(2毫升)以及脱气2M K2CO3(0.3毫升,0.6毫摩尔)结合。密封小瓶，在100℃预热的电热板上搅拌反应混合物1小时。减压浓缩反应混合物，通过反相制备HPLC(20-30％梯度的CH3CN/H2O，含0.1％TFA改性剂)纯化并干燥(冻干机)从而获得所需产物。1H NMR(400MHz,CD3OD)9.18(s,2H),7.77(d,J＝7.0Hz,2H),7.67(d,J＝5.9Hz,2H),7.57-7.48(m,3H),6.76-6.72(m,2H),4.95-4.80(m,1H),4.32-4.24(m,1H),4.10-3.90(m,3H),2.64(s,3H),2.50-2.35(m,2H).MS:(ES)389.2(M+H+).
实施例26：N-[(3S)-1-(8-甲基吡咯[1,2-a]吡嗪-1-基)吡咯烷-3-基]-1-(o-甲苯基)吡唑-3-甲酰胺·三氟乙酸盐的合成
向1-(o-甲苯基)吡唑-3-羧酸(27毫克,0.13毫摩尔)在0.60毫升DMSO中的溶液中加入(3S)-1-(8-甲基吡咯[1,2-a]吡嗪-1-基)吡咯烷-3-胺二盐酸盐(39毫克,0.13毫摩尔)，随后加入三乙胺(0.080毫升,0.58毫摩尔)和HATU(53毫克,0.14毫摩尔)。15分钟后,将乙酸(0.060毫升,1毫摩尔)加入反应混合物，之后加入CH3OH(0.60毫升)和水(0.70毫升)。过滤混合物，通过反相制备HPLC(20-40％梯度的CH3CN/H2O，含0.1％TFA改性剂)纯化并干燥(冻干机)从而获得所需产物。1H NMR(400MHz,CD3OD)7.87(s,1H),7.64(m,2H),7.40-7.28(m,4H),6.93(s,1H),6.74-6.70(m,2H),4.80-4.70(m,1H),4.30-4.20(m,1H),4.10-3.85(m,3H),2.61(s,3H),2.50-2.35(m,2H),2.20(s,3H).MS:(ES)401.2(M+H+).
实施例27：N-[(3S)-1-(8-甲基吡咯[1,2-a]吡嗪-1-基)吡咯烷-3-基]-2-苯基-噁唑-4-酰胺·三氟乙酸盐的合成
向2-苯基噁唑-4-羧酸(24毫克,0.13毫摩尔)在0.5毫升DMSO中的溶液中加入(3S)-1-(8-甲基吡咯[1,2-a]吡嗪-1-基)吡咯烷-3-胺二盐酸盐(41毫克,0.14毫摩尔)，随后加入三乙胺(0.080毫升,0.58毫摩尔)和HATU(53毫克,0.14毫摩尔)。15分钟后，将乙酸(0.060毫升,1毫摩尔)加入反应混合物，随后加入CH3OH(0.60毫升)和水(0.70毫升)。过滤混合物，通过反相制备HPLC(20-40％梯度的CH3CN/H2O，含0.1％TFA改性剂)纯化并干燥(冻干机)从而获得所需产物。1H NMR(400MHz,CD3OD)8.72(d,J＝8.1Hz,1H),8.45(s,1H),8.06(d,J＝8.1Hz,2H),7.67(d,J＝5.5Hz,2H),7.52(m,3H),6.76-6.73(m,2H),4.85-4.75(m,1H),4.30-4.22(m,1H),4.10-3.90(m,3H),2.64(s,3H),2.55-2.35(m,2H).MS:(ES)388.2(M+H+).
实施例28：5-苯基-N-[(3S)-1-吡咯[1,2-a]吡嗪-1-基吡咯烷-3-基]嘧啶-2-甲酰胺·三氟乙酸盐的合成
a)向5-溴嘧啶-2-羧酸(120毫克,0.59毫摩尔)在2.0毫升DMSO中的溶液中加入(3S)-1-吡咯[1,2-a]吡嗪-1-基吡咯烷-3-胺二盐酸盐(160毫克,0.58毫摩尔)，最后加入三乙胺(0.30毫升,2.2毫摩尔)和HATU(228毫克,0.60毫摩尔)。搅拌过夜后，用10毫升水淬灭反应混合物并用二氯甲烷萃取。分离有机层并减压浓缩。通过快速色谱(SiO2,2％7M NH3，MeOH/二氯甲烷中)纯化残留物。MS:(ES)388.2(M+H+).
b)在4毫升小瓶内，步骤a的产物(80毫克,0.21毫摩尔)与苯硼酸(29毫克,0.24毫摩尔)、Pd(PPh3)4(25毫克,0.021毫摩尔)、脱气甲苯(2毫升)和脱气2M K2CO3(0.35毫升,0.7毫摩尔)结合。密封小瓶并在100℃预热电热板上搅拌反应混合物30分钟。减压浓缩反应混合物，通过反相制备HPLC(20-40％梯度的CH3CN/H2O，含0.1％TFA改性剂)纯化并干燥(冻干机)从而获得所需产物。1H NMR(400MHz,CD3OD)9.42(d,J＝7.0Hz,0.8H),9.18(s,2H),7.77-7.70(m,4H),7.58-7.48(m,4H),6.93(dd,J＝2.6,4.4Hz,1H),6.85(d,J＝5.5Hz,1H),5.00-3.65(br,5H),2.65-2.40(m,2H).MS:(ES)385.1(M+H+).
实施例29：5-苯基-N-[(3S)-1-吡咯[1,2-a]吡嗪-1-基吡咯烷-3-基]-4H-1,2,4-三唑-3-甲酰胺·三氟乙酸盐的合成
向5-苯基-4H-1,2,4-三唑-3-羧酸钠(50毫克,0.24毫摩尔)在0.70毫升DMSO中的溶液中加入(3S)-1-吡咯[1,2-a]吡嗪-1-基吡咯烷-3-胺二盐酸盐(80毫克,0.29毫摩尔)、随后加入三乙胺(0.14毫升,1.0毫摩尔)和HATU(105毫克,0.28毫摩尔)。搅拌反应混合物过夜后，直接通过反相制备HPLC(20-30％梯度的CH3CN/H2O，含0.1％TFA改性剂)纯化并干燥(冻干机)纯化从而获得所需产物。1H NMR(400MHz,DMSO)11.40(s,1H),8.05(d,J＝7.0Hz,2H),7.91(s,1H),7.84(d,J＝4.4Hz,1H),7.60-7.40(m,4H),7.00-6.90(m,2H),4.85-3.50(br,5H),2.45-2.20(m,2H).MS:(ES)374.2(M+H+).
实施例30：5-(二甲基氨基)-N-[(3S)-1-吡咯[1,2-a]吡嗪-1-基吡咯烷-3-基]嘧啶-2-甲酰胺·三氟乙酸盐的合成
在4毫升小瓶内，4-溴-N-[(3S)-1-吡咯[1,2-a]吡嗪-1-基吡咯烷-3-基]苯甲酰胺(57毫克,0.15毫摩尔)与三(二亚苄基丙酮)二钯(26毫克,0.023毫摩尔)、2-二环己基膦-2′,4′,6′-三异丙基联苯(“X-Phos”,49毫克,0.10毫摩尔)、Cs2CO3(250毫克,0.77毫摩尔)、脱气甲苯(1.0毫升)和THF(1毫升,2毫摩尔)中的2M二甲基胺结合。密封小瓶并在100℃搅拌反应混合物22小时。在硅胶上吸附并快速色谱(SiO2,2-5％7M NH3，MeOH/二氯甲烷中)纯化，随后通过反相制备HPLC(20-30％梯度的CH3CN/H2O，含0.1％TFA改性剂)纯化并干燥(冻干机)从而获得所需产物。1H NMR(400MHz,CD3OD)8.27(s,2H),7.75(t,J＝1.1,1H),7.70(d,J＝5.5,1H),7.55(s,1H),6.91(dt,J＝1.8,2.6Hz,1H),6.83(d,J＝5.5Hz,1H),5.00-4.80(m,1H),4.65-3.70(br,4H),3.10(s,6H),2.60-2.30(m,2H).MS:(ES)352.2(M+H+)。
实施例31：5-(1-羟乙基)-N-[(3S)-1-吡咯[1,2-a]吡嗪-1-基吡咯烷-3-基]嘧啶-2-甲酰胺·三氟乙酸盐的合成
a)在15毫升厚壁压力容器中加入4-溴-N-[(3S)-1-吡咯[1,2-a]吡嗪-1-基吡咯烷-3-基]苯甲酰胺(289毫克,0.747毫摩尔)、三正丁基(1-乙氧基乙烯基)锡(0.35毫升,1.0毫摩尔)、二氯二(三苯基膦)钯(30毫克,0.042毫摩尔)和脱气二氧六环(4毫升)。密封容器并浸入预热(140℃)油浴。25分钟后，从油浴中移出容器，使其冷却至室温，采用6M HCl(0.40毫升,2.4毫摩尔)处理并搅拌过夜。采用200毫升二氯甲烷和20毫升水稀释反应混合物。分离有机层并搁置，同时采用NaOH碱化水相并二氯甲烷萃取。减压浓缩合并的有机层，通过快速色谱(SiO2；2-5％CH3OH/二氯甲烷)纯化剩余的残留物从而获得209毫克所需化合物(80％产率)。MS:(ES)351.2(M+H+).
b)步骤a制备的酮(56毫克,0.16毫摩尔)溶于5毫升MeOH并在冰浴上冷却至0℃。加入硼氢化钠(7.2毫克,0.19毫摩尔)，在0℃搅拌反应20分钟。采用6M HCl淬灭反应，减压浓缩，直接通过反相制备HPLC(20-30％梯度的CH3CN/H2O，含0.1％TFA改性剂)纯化并干燥(冻干机)从而获得所需化合物。1H NMR(400MHz,CD3OD)8.93(s,2H),7.79(dd,J＝1.2,2.7Hz,1H),7.74(d,J＝5.9Hz,1H),7.58(d,J＝3.5Hz,1H),6.94(dd,J＝2.7,5.7Hz,1H),6.87(d,J＝5.9Hz,1H),5.02-4.95(q,J＝6.6Hz,1H),4.80-3.60(br,5H),2.62-2.38(m,2H),1.53(d,J＝6.6Hz,3H).MS:(ES)353.2(M+H+).
实施例32：N-[(3R)-1-咪唑并[1,2-a]吡嗪-8-基吡咯烷-3-基]-1-苯基-1,2,4-三唑-3-甲酰胺的合成
1-苯基-1,2,4-三唑-3-羧酸(1.2克,6.3毫摩尔)、(3R)-1-咪唑并[1,2-a]吡嗪-8-基吡咯烷-3-胺二盐酸盐(2.0克,7.4毫摩尔)和二异丙基乙胺(13毫升,75毫摩尔)在50毫升DMF内组合在一起。向混合物中加入HATU(2.5克,6.6毫摩尔)。搅拌3分钟后，试样LCMS表明反应完成。减压去除DIPEA和大部分DMF。在400毫升EtOAc中稀释残留物并用50毫升饱和的NaH2PO4洗涤。经检测大量所需产物存在于有机相中，因此采用400毫升10vol％i-PrOH/CHCl3萃取。干燥(Na2SO4)合并的有机层，过滤并浓缩。通过快速色谱(SiO2,2-5％MeOH/二氯甲烷)纯化粗产物从而获得936毫克所需产物(39％产率)。1H NMR(400MHz,CDCl3)8.54(s,1H),7.74(td,J＝1.1,7.5Hz,2H),7.56-7.48(m,4H),7.47-7.40(m,2H),7.37(d,J＝8.2Hz,1H),7.33(d,J＝4.3Hz,1H),5.00-4.80(m,1H),4.50-4.35(br,1H),4.30-4.15(br,3H),3.45-3.30(m,1H),2.90-2.75(m,1H),2.50-2.38(m,1H),2.25-2.15(m,1H).MS:(ES)375.2(M+H+).
实施例33：N-[(3S)-1-(3-乙基吡咯[1,2-a]吡嗪-1-基)吡咯烷-3-基]-1-苯基-1,2,4-三唑-3-甲酰胺·三氟乙酸盐的合成
a)向2-(三氯乙酰基)吡咯(380毫克,1.79毫摩尔)和K2CO3(780毫克,5.7毫摩尔)在5毫升丙酮中的浆液中加入1-溴-2-丁酮(400毫克,2.7毫摩尔)在2毫升丙酮中的溶液。室温搅拌混合物19小时，之后过滤并减压浓缩从而获得3-乙基-1H-吡咯[2,1-c][1,4]噁嗪-1-酮(298毫克,定量的)，不需纯化用于下面的步骤。
b)向150毫升厚壁玻璃压力容器中加入步骤a获得的内酯、3-乙基-1H-吡咯[2,1-c][1,4]噁嗪-1-酮(2.6克,16毫摩尔)、NH4OAc(6.0克,78毫摩尔)和乙酸(40毫升)。密封容器并浸于设置为160℃的预热油浴中，搅拌3小时。之后减压去除乙酸并通过快速色谱(SiO2,2％MeOH/二氯甲烷)纯化残留物从而获得3-乙基吡咯[1,2-a]吡嗪-1(2H)-酮(760毫克,29％产率)。MS:(ES)163.1(M+H+).
c)步骤b获得的3-乙基吡咯[1,2-a]吡嗪-1(2H)-酮(760毫克,4.7毫摩尔)与POCl3(20毫升)结合并在80℃搅拌20分钟。减压去除POCl3。残留物置于DCM并用饱和的碳酸氢钠洗涤两次。之后在硫酸镁上干燥有机相，过滤并减压浓缩。不需纯化，残留物用于下面的步骤。
d)在20毫升小瓶内，N-[(3S)-吡咯烷-3-基]氨基甲酸叔丁酯(610毫克,3.3毫摩尔)、步骤c获得的1-氯-3-乙基吡咯[1,2-a]吡嗪(470毫克,2.6毫摩尔)、DIPEA(2.0毫摩尔,11毫摩尔)和1-丁基-3-甲基咪唑四氟硼酸盐(100毫克,0.4毫摩尔)结合，在110℃加热混合物45分钟。加入1-甲基吡咯烷酮(1毫升)，随后加入额外的N-[(3S)-吡咯烷-3-基]氨基甲酸叔丁酯(200毫克,1.1毫摩尔)，并在111℃搅拌反应额外时间。然后加入额外的400毫克(2.2毫摩尔)氨基吡咯烷，在111℃再搅拌混合物20分钟。真空干燥反应混合物并通过快速色谱(SiO2,2％7M NH3，MeOH/二氯甲烷中)纯化。干燥后获得所需Boc保护的中间体。残留物置于少量甲醇和二氯甲烷中，并用二氧六环(3毫升,12毫摩尔)中的4M HCl处理。在50℃加热混合物并搅拌30分钟，之后从热中移出烧瓶。冷却至室温并加入乙醚。通过过滤收集得到的棕色沉淀物，(3S)-1-(3-乙基吡咯[1,2-a]吡嗪-1-基)吡咯烷-3-胺二盐酸盐并真空干燥；638毫克，86％产率。
e)1-苯基-1,2,4-三唑-3-羧酸(34毫克0.18毫摩尔)、(3S)-1-(3-乙基吡咯[1,2-a]吡嗪-1-基)吡咯烷-3-胺二盐酸盐(63毫克,0.21毫摩尔)和三乙胺(0.13毫升,0.93毫摩尔)在1毫升DMSO内组合。加入HATU(74毫克,0.19毫摩尔)，搅拌混合物40分钟。减压去除DMSO并通过反相制备HPLC(10-30％梯度的CH3CN/H2O，含0.1％TFA改性剂)纯化残留物并干燥(冻干机)从而获得所需化合物。1H NMR(400MHz,CD3OD)9.14(s,1H),9.05(d,J＝6.7Hz,1H),7.88(d,J＝7.4Hz,2H),7.71(s,1H),7.60-7.46(m,5H),6.89(dd,J＝2.8,4.7Hz,1H),4.95-4.80(m,1H),4.78-3.80(br,4H),2.68(q,J＝7.4Hz,2H),2.60-2.40(m,2H),1.33(t,J＝7.4Hz,3H).MS:(ES)402.2(M+H+).
实施例34：N-[(3S)-1-(3-乙基吡咯[1,2-a]吡嗪-1-基)吡咯烷-3-基]-1-(4-氟苯基)-1,2,4-三唑-3-甲酰胺·三氟乙酸盐的合成
1-(4-氟苯基)-1,2,4-三唑-3-羧酸(35毫克0.17毫摩尔)、(3S)-1-(3-乙基吡咯[1,2-a]吡嗪-1-基)吡咯烷-3-胺二盐酸盐(60毫克,0.20毫摩尔)和三乙胺(0.12毫升,0.86毫摩尔)在1毫升DMSO内组合。加入HATU(74毫克,0.19毫摩尔)，搅拌混合物50分钟。减压去除DMSO，通过反相制备HPLC(10-30％梯度的CH3CN/H2O，含0.1％TFA改性剂)纯化残留物并干燥(冻干机)从而获得所需化合物。1H NMR(400MHz,CD3OD)9.10(s,1H),7.92-7.88(m,2H),7.71(s,1H),7.53(s,2H),7.35(t,J＝8.8Hz,2H),6.89(dd,J＝2.4,4.7Hz,1H),4.95-4.80(m,1H),4.78-3.80(br,4H),2.68(q,J＝7.4Hz,2H),2.60-2.35(m,2H),1.33(t,J＝7.4Hz,3H).MS:(ES)420.2(M+H+).
实施例35：N-[(3S)-1-(3-乙基吡咯[1,2-a]吡嗪-1-基)吡咯烷-3-基]-2-(4-羟基-1-哌啶基)噻唑-4-甲酰胺·三氟乙酸盐的合成
2-(4-羟基-1-哌啶基)噻唑-4-羧酸(40毫克0.18毫摩尔)、(3S)-1-(3-乙基吡咯[1,2-a]吡嗪-1-基)吡咯烷-3-胺二盐酸盐(60毫克,0.20毫摩尔)和三乙胺(0.13毫升,0.93毫摩尔)在1毫升DMSO内组合。加入HATU(77毫克,0.20毫摩尔)，搅拌混合物40分钟。减压去除DMSO，通过反相制备HPLC(10-30％梯度的CH3CN/H2O，含0.1％TFA改性剂)纯化残留物并干燥(冻干机)从而获得所需化合物。1H NMR(400MHz,CD3OD)7.70(d,J＝2.4Hz,1H),7.52-7.50(m,2H),7.41(s,1H),6.89(dd,J＝2.4,4.3Hz,1H),4.95-4.78(m,2H),4.60-3.70(br,4H),3.95-3.80(m,2H),3.36-3.20(m,2H),2.68(q,J＝7.4Hz,2H),2.60-2.30(m,2H),1.98-1.90(m,2H),1.62-1.55(m,2H),1.33(t,J＝7.4Hz,3H).MS:(ES)441.2(M+H+).
实施例36：1-(4-氟苯基)-N-[(3R)-1-咪唑并[1,2-a]吡嗪-8-基吡咯烷-3-基]-1,2,4-三唑-3-甲酰胺
1-(4-氟苯基)-1,2,4-三唑-3-羧酸(300毫克1.4毫摩尔)、(3R)-1-吡咯[1,2-a]吡嗪-1-基吡咯烷-3-胺二盐酸盐(400毫克,1.4毫摩尔)和三乙胺(1.5毫升,11毫摩尔)的混合物在8毫升DMF中结合。搅拌混合物30分钟，之后加入HATU(576毫克,1.5毫摩尔)。接着在60℃搅拌混合物1小时。色谱(SiO2,5–20％MeOH/EtOAc)分析混合物。从快速色谱回收的一部分残留物通过反相制备HPLC(10-30％梯度的CH3CN/H2O，含0.1％TFA改性剂)纯化并减压浓缩从而获得70毫克所需化合物的TFA盐。通过将其悬于饱和NaCl(1毫升)、加入1M NaOH(0.6毫升,0.6毫摩尔)并用二氯甲烷萃取，TFA盐转为自由碱。二氯甲烷的去除导致获得玻璃质残留物。样本溶于CH3CN/H2O并干燥(冻干机)从而获得白色粉末(28毫克,5％产率)。1H NMR(400MHz,DMSO)9.31(s,1H),8.92(d,J＝5.9Hz,1H),7.92-7.85(m,3H),7.76(s,1H),7.53(s,1H),7.41(t,J＝9.0Hz,2H),7.21(d,J＝4.7Hz,1H),4.65-4.50(m,1H),4.48-3.65(br,4H),2.30-2.05(m,2H).MS:(ES)393.2(M+H+).
实施例37：N-[(3S)-1-(3-异丙基吡咯[1,2-a]吡嗪-1-基)吡咯烷-3-基]-1-苯基-1,2,4-三唑-3-甲酰胺·三氟乙酸盐的合成
a)向2-(三氯乙酰基)吡咯(5.3克,25毫摩尔)和K2CO3(11g,76毫摩尔)在100毫升丙酮中的浆液中加入1-溴-3-甲基丁-2-酮(4.5克,27毫摩尔)在30毫升丙酮的溶液中。在50℃搅拌混合物，之后过滤并减压浓缩从而得到3-异丙基-1H-吡咯[2,1-c][1,4]噁嗪-1-酮(4.1克,93％)，不需纯化用于下面的步骤。
b)向150毫升厚壁玻璃压力管中加入步骤a获得的内酯、3-异丙基-1H-吡咯[2,1-c][1,4]噁嗪-1-酮(4.1克,23毫摩尔)、NH4OAc(9.4克,122毫摩尔)和乙酸(25毫升)。采用特氟龙衬套密封管，浸入设置为160℃的预热油浴中，在该温度下再搅拌9小时。从浴中移出管，加入额外的10克(130毫摩尔)NH4OAc，并在160℃搅拌反应3小时。之后减压去除乙酸，残留物置于150毫升DCM和30毫升饱和NaHCO3中。通过硅藻土过滤，分离水相并弃去，浓缩有机相并通过快速色谱(SiO2,1％MeOH/二氯甲烷)纯化从而得到2.0克3-异丙基吡咯[1,2-a]吡嗪-1(2H)-酮(49％产率)。MS:(ES)177.2(M+H+).
c)步骤b获得的3-异丙基吡咯[1,2-a]吡嗪-1(2H)-酮(1.6克,4.7毫摩尔)与POCl3(20毫升)结合并在70℃搅拌20分钟。减压去除POCl3。残留物置于DCM中，用饱和的碳酸氢钠洗涤两次。之后在硫酸钠上干燥有机相，过滤并减压浓缩。通过快速色谱(SiO2,5–10％MTBE/己烷)纯化残留物从而提供氯-3-异丙基吡咯[1,2-a]吡嗪(1.09克,62％产率)。
d)在20毫升小瓶内，N-[(3S)-吡咯烷-3-基]氨基甲酸叔丁酯(2.06克,11.1毫摩尔)、步骤c获得的1-氯-3-异丙基吡咯[1,2-a]吡嗪(1.09克,5.6毫摩尔)、DIPEA(4.0毫摩尔,23毫摩尔)和1-甲基吡咯烷酮(1毫升)结合，搅拌下在110℃加热混合物1小时。温度降至90℃，再搅拌反应16小时。之后在DCM(100毫升)中稀释有机反应混合物，用水(20毫升)洗涤，干燥(Na2SO4)，过滤并减压浓缩。通过快速色谱(SiO2,2％7M NH3，MeOH/二氯甲烷中)纯化残留物。干燥后获得所需Boc保护的中间体。将其置于少量甲醇和二氯甲烷中，采用二氧六环(4毫升,16毫摩尔)中的4M HCl处理。在50℃加热混合物并搅拌20分钟，之后将烧瓶从热移出，使其冷却至室温，加入二氧六环。通过过滤收集得到的白色沉淀物，(3S)-1-(3-异丙基吡咯[1,2-a]吡嗪-1-基)吡咯烷-3-胺二盐酸盐，并真空干燥；925毫克，52％产率。
e)1-苯基-1,2,4-三唑-3-羧酸(54毫克0.29毫摩尔)、(3S)-1-(3-异丙基吡咯[1,2-a]吡嗪-1-基)吡咯烷-3-胺二盐酸盐(98毫克,0.31毫摩尔)和三乙胺(0.16毫升,1.2毫摩尔)在0.6毫升DMSO内组合。加入HATU(110毫克,0.29毫摩尔)，搅拌混合物1小时。减压去除DMSO，通过反相制备HPLC(10-30％梯度的CH3CN/H2O，含0.1％TFA改性剂)纯化残留物并干燥(冻干机)从而获得所需化合物。1H NMR(400MHz,CD3OD)9.14(s,1H),7.89(d,J＝7.4Hz,2H),7.73(s,1H),7.60-7.46(m,5H),6.90(dd,J＝2.7,4.3Hz,1H),5.00-4.80(m,1H),4.60-3.85(br,4H),3.05-2.95(m,1H),2.60-2.38(m,2H),1.35(d,J＝6.6Hz,6H).MS:(ES)416.2(M+H+).
实施例38：1-(4-氟苯基)-N-[(3S)-1-(3-异丙基吡咯[1,2-a]吡嗪-1-基)吡咯烷-3-基]-1,2,4-三唑-3-甲酰胺·三氟乙酸盐的合成
1-(4-氟苯基)-1,2,4-三唑-3-羧酸(53毫克0.26毫摩尔)、(3S)-1-(3-异丙基吡咯[1,2-a]吡嗪-1-基)吡咯烷-3-胺二盐酸盐(91毫克,0.29毫摩尔)和三乙胺(0.16毫升,1.15毫摩尔)在0.6毫升DMSO内组合。加入HATU(104毫克,0.27毫摩尔)，搅拌混合物1小时。减压去除DMSO，通过反相制备HPLC(10-30％梯度的CH3CN/H2O，含0.1％TFA改性剂)纯化残留物并干燥(冻干机)从而获得所需化合物。1H NMR(400MHz,CD3OD)9.10(s,1H),7.92(dd,J＝4.7,7.0Hz,2H),7.73(s,1H),7.57(s,1H),7.54(d,J＝4.3Hz,1H),7.35(t,J＝8.6Hz,2H),6.91(dd,J＝2.7,4.3Hz,1H),5.00-4.85(m,1H),4.60-3.65(br,4H),3.05-2.95(m,1H),2.60-2.38(m,2H),1.35(d,J＝7.0Hz,6H).MS:(ES)434.2(M+H+).
实施例39：2-(4-羟基-1-哌啶基)-N-[(3S)-1-(3-异丙基吡咯[1,2-a]吡嗪-1-基)吡咯烷-3-基]噻唑-4-甲酰胺·三氟乙酸盐的合成
2-(4-羟基-1-哌啶基)噻唑-4-羧酸(54毫克,0.24毫摩尔)、(3S)-1-(3-异丙基吡咯[1,2-a]吡嗪-1-基)吡咯烷-3-胺二盐酸盐(81毫克,0.26毫摩尔)和三乙胺(0.14毫升,1.0毫摩尔)在0.6毫升DMSO内组合。加入HATU(104毫克,0.27毫摩尔)，搅拌混合物25分钟。减压去除DMSO，通过反相制备HPLC(10-30％梯度的CH3CN/H2O，含0.1％TFA改性剂)纯化残留物并干燥(冻干机)从而获得所需化合物。1H NMR(400MHz,CD3OD)7.72(d,J＝2.4Hz,1H),7.56(s,1H),7.52(d,J＝4.3Hz,1H),7.41(s,1H),6.90-6.87(m,1H),4.95-4.70(m,2H),4.60-3.80(br,4H),3.95-3.80(m,2H),3.36-3.20(m,2H),3.05-2.95(m,1H),2.60-2.30(m,2H),1.98-1.90(m,2H),1.62-1.55(m,2H),1.35(d,J＝6.6Hz,6H).MS:(ES)455.2(M+H+).
实施例40：1-(2-氟苯基)-N-[(3S)-1-咪唑并[1,2-a]吡嗪-8-基吡咯烷-3-基]-1,2,4-三唑-3-甲酰胺·三氟乙酸盐的合成
1-(2-氟苯基)-1,2,4-三唑-3-羧酸(41毫克0.20毫摩尔)、(3S)-1-咪唑并[1,2-a]吡嗪-8-基吡咯烷-3-胺二盐酸盐(69毫克,0.25毫摩尔)和三乙胺(0.11毫升,0.80毫摩尔)在0.5毫升DMSO内组合。加入HATU(80毫克,0.21毫摩尔)，搅拌混合物10分钟。随后加入乙酸(0.1毫升)、MeOH(0.4毫升)和水(1毫升)，过滤，通过反相制备HPLC(10-30％梯度的CH3CN/H2O，含0.1％TFA改性剂)纯化并干燥(冻干机)从而获得40毫克所需化合物(40％产率)。1H NMR(400MHz,CD3OD)8.96(d,J＝2.7Hz,1H),8.05(s,1H),7.95-7.82(m,3H),7.56-7.38(m,3H),7.17(d,J＝5.5Hz,1H),5.00-3.65(br,5H),2.60-2.38(m,2H).MS:(ES)393.2(M+H+).
实施例41：N-[(3S)-1-咪唑并[1,2-a]吡嗪-8-基吡咯烷-3-基]-1-(4-甲基磺酰基苯基)-1,2,4-三唑-3-甲酰胺·三氟乙酸盐的合成
a)在100毫升烧瓶内装入1H-1,2,4-三唑-3-羧酸甲酯(2.8克,16毫摩尔)、4-碘苯基硼酸(4.0克,16毫摩尔)、Cu(OAc)2(3.3克,18毫摩尔)、吡啶(1.5毫升,19毫摩尔)和DMF(30毫升)。将混合物在设置为90℃预热油浴中搅拌30分钟，期间溶液颜色从深蓝变为淡绿。在EtOAc(200毫升)内稀释混合物，过滤并采用3:1v/v饱和的NH4Cl–30％NH4OH洗涤。真空浓缩有机相并通过快速色谱(SiO2,20％–60％EtOAc/己烷)纯化得到的残留物从而得到白色粉末1-(4-碘苯基)-1,2,4-三唑-3-羧酸甲酯(830毫克,16％产率)。
b)将1-(4-碘苯基)-1,2,4-三唑-3-羧酸甲酯(830毫克,2.5毫摩尔)溶于MeOH(20毫升)和THF(10毫升)。加入1M NaOH(2.5毫升,2.5毫摩尔)，室温搅拌混合物2h。加入额外的1M NaOH(2.5毫升,2.5毫摩尔)，将反应加热至50℃ 30分钟。冷却至室温后，通过加入6M HCl调节pH至4，减压去除MeOH和THF，通过过滤收集获得的白色沉淀物并真空干燥从而获得680毫克(86％产率)1-(4-碘苯基)-1,2,4-三唑-3-羧酸。
c)向1-(4-碘苯基)-1,2,4-三唑-3-羧酸(680毫克,2.15毫摩尔)在1,2-二氯乙烷(8毫升)中的悬浮液中加入草酰氯(0.30毫升,3.4毫摩尔)，随后加入DMF(0.020毫升,0.26毫摩尔)。在50℃油浴中搅拌混合物5分钟，之后减压浓缩并真空干燥。将获得的残留物悬于DCM(10毫升)中，向其中加入(3S)-1-咪唑并-[1,2-a]吡嗪-8-基吡咯烷-3-胺二盐酸盐(650毫克,2.36毫摩尔)，随后加入DIPEA(1.5毫升,8.6毫摩尔)。搅拌混合物，短暂沸腾，从热源移出并再搅拌20分钟。减压浓缩后，通过快速色谱(SiO2；2％MeOH/二氯甲烷)纯化残留物从而获得886毫克白色泡沫(82％产率)。
d)步骤c获得的N-[(3S)-1-咪唑并[1,2-a]吡嗪-8-基吡咯烷-3-基]-1-(4-碘苯基)-1,2,4-三唑-3-甲酰胺(73毫克,0.15毫摩尔)、甲烷亚磺酸钠(31毫克,0.30毫摩尔)、CuI(5.4毫克,0.028毫摩尔)、脯氨酸(6.8毫克,0.059毫摩尔)、Cs2CO3(23毫克,0.70毫摩尔)和DMSO(0.40毫升)在4毫升小瓶内组合在一起并在120℃搅拌3小时。通过反相制备HPLC(10-30％梯度的CH3CN/H2O，含0.1％TFA改性剂)纯化反应混合物并干燥(冻干机)从而获得所需化合物。1H NMR(400MHz,CD3OD)d 9.31(s,1H),9.15(d,J＝7.0Hz,0.5H),8.20-8.10(m,4H),8.05(s,1H),7.95(d,J＝5.4Hz,1H),7.82(s,1H),7.18(d,J＝5.8Hz,1H),5.00-3.65(br,5H),3.18(s,3H),2.60-2.38(m,2H).MS:(ES)453.2(M+H+).
实施例42：N-[(3S)-1-咪唑并[1,2-a]吡嗪-8-基吡咯烷-3-基]-1-(p-甲苯基)-1,2,4-三唑-3-甲酰胺·三氟乙酸盐的合成
在4毫升小瓶内，N-[(3S)-1-咪唑并[1,2-a]吡嗪-8-基吡咯烷-3-基]-1-(4-碘苯基)-1,2,4-三唑-3-酰胺(64毫克,0.13毫摩尔)、甲基硼酸(32毫克,0.53毫摩尔)、(1,1'-二(二苯基膦)二茂铁)钯(II)二氯化物(9.5毫克,0.013毫摩尔)、CsF(67毫克,0.44毫摩尔)和脱气二氧六环(0.80毫升)结合。密封小瓶并在90℃搅拌2小时。减压去除二氧六环，通过反相制备HPLC(10-30％梯度的CH3CN/H2O，含0.1％TFA改性剂)纯化残留物并干燥(冻干机)从而获得所需化合物。1H NMR(400MHz,CD3OD)9.07(s,1H),8.05(s,1H),7.94(d,J＝5.9Hz,1H),7.82(s,1H),7.74(d,J＝8.6Hz,2H),7.38(d,J＝8.6Hz,2H),7.17(d,J＝5.4Hz,1H),5.00-3.65(br,5H),2.60-2.38(m,2H),2.41(s,1H).MS:(ES)389.2(M+H+).
实施例43：1-(4-氟苯基)-N-[(3S)-1-吡咯[1,2-a]吡嗪-1-基吡咯烷-3-基]-1,2,4-三唑-3-甲酰胺·三氟乙酸盐的合成
向1-(4-氟苯基)-1,2,4-三唑-3-羰基氯(70毫克,0.31毫摩尔)在DCM(10毫升)的悬浮液中加入(3S)-1-吡咯[1,2-a]吡嗪-1-基吡咯烷-3-胺二盐酸盐(104毫克,0.38毫摩尔)、随后加入DIPEA(0.70毫升,4.0毫摩尔)。搅拌反应混合物10分钟，减压浓缩，通过反相制备HPLC(10-30％梯度的CH3CN/H2O，含0.1％TFA改性剂)纯化并干燥(冻干机)从而获得所需化合物。1H NMR(400MHz,CD3OD)9.10(s,1H),7.91-7.88(m,2H),7.79(dd,J＝1.2,2.8Hz,1H),7.74(d,J＝5.9Hz,1H),7.59(d,J＝4.3Hz,1H),7.34(t,J＝8.6Hz,2H),6.95(dd,J＝2.8,4.7Hz,1H),6.86(d,J＝5.5Hz,1H),5.00-4.85(m,1H),4.80-3.65(br,4H),2.60-2.38(m,2H).MS:(ES)392.2(M+H+).
实施例44：1-(4-氰基苯基)-N-[(3S)-1-咪唑并[1,2-a]吡嗪-8-基吡咯烷-3-基]-1,2,4-三唑-3-甲酰胺的合成
在4毫升小瓶内装入N-[(3S)-1-咪唑并[1,2-a]吡嗪-8-基吡咯烷-3-基]-1-(4-碘苯基)-1,2,4-三唑-3-甲酰胺(82毫克,0.16毫摩尔)、Zn(CN)2(24毫克,0.20毫摩尔)、四(三苯基膦)钯(0)(23毫克,0.020毫摩尔)和脱气DMF。密封小瓶，在80℃搅拌混合物1小时。减压去除DMF，通过快速色谱(SiO2,7M NH3，MeOH/二氯甲烷中)纯化残留物从而获得48毫克白色粉末所需产物(74％产率)。1H NMR(400MHz,CDCl3)8.64(s,1H),7.94(d,J＝6.6Hz,2H),7.85(d,J＝6.6Hz,2H),7.55(s,1H),7.50(s,1H),7.44(d,J＝4.3Hz,1H),7.40-7.30(m,2H),5.00-4.85(m,1H),4.50-4.35(br,1H),4.30-4.15(br,3H),2.50-2.38(m,1H),2.25-2.15(m,1H).MS:(ES)400.1(M+H+)。
实施例45：1-(4-氯苯基)-N-[(3S)-3-(羟甲基)-1-吡咯[1,2-a]吡嗪-1-基-吡咯烷-3-基]吡唑-3-甲酰胺的合成
a)向1(1.0克,4.6毫摩尔)和580毫克2(580毫克,3.8毫摩尔)的混合物中加入1.7毫升Hunig碱(9.5毫摩尔)。在130℃搅拌得到的混合物3小时。混合物冷却至室温后，加入200毫升异丙醇/氯仿(1:2)，采用饱和NaHCO3(2x20毫升)水溶液和盐水(2x 50毫升)洗涤有机物。在MgSO4上干燥有机物并减压浓缩。通过快速柱色谱在硅胶上(0–10％MeOH，EtOAc中)纯化残留物从而得到所需产物3，为棕色粉末(700毫克,46％)。
b)在50℃搅拌3(332毫克,1.0毫摩尔)和3毫升二氧六环(12毫摩尔)中的4.0MHCl的混合物1h。然后减压浓缩混合物从而获得棕色粉末(300毫克,98％),，不需进一步纯化用于下一步骤。
c)在10毫升小瓶内装入中间体A2(92毫克,0.417毫摩尔)、中间体B1(122毫克,0.40毫摩尔)、HATU(166毫克,0.437毫摩尔)、Hunig碱(146毫克,1.12毫摩尔)和4毫升DMF。室温搅拌混合物1h，然后用100毫升异丙醇/氯仿(1:2)稀释，之后用水(2x 20毫升)和盐水(2x 20毫升)洗涤。在MgSO4上干燥有机物并减压浓缩。通过制备HPLC纯化残留物从而得到所需产物(105毫克,60％)。1H NMR(400MHz,CD3OD)8.28(d,J＝2.5Hz,1H),7.85(dd,J＝2.2,6.9Hz,2H),7.48(dd,J＝2.2,6.9Hz,2H),7.42(d,J＝5.2Hz,1H),7.39(dd,J＝1.1,2.6Hz,1H),6.98(d,J＝4.4Hz,1H),6.93(d,J＝2.6Hz,1H),6.86(d,J＝5.1Hz,1H),6.65(dd,J＝2.5,4.1Hz,1H),4.34(d,J＝11.4Hz,1H),4.15(d,J＝11.4Hz,1H),4.02-3.88(m,4H),2.65-2.55(m,1H),2.45-2.36(m,1H)；MS:(ES)m/z计算C22H21ClN6O2[M+H]+437.2,实测437.
实施例46：1-(4-氟苯基)-N-[(3S)-3-(羟甲基)-1-吡咯[1,2-a]吡嗪-1-基-吡咯烷-3-基]吡唑-3-酰胺的合成
向10毫升小瓶内装入中间体A3(83毫克,0.417毫摩尔)、中间体B1(122毫克,0.40毫摩尔)、HATU(166毫克,0.437毫摩尔)、Hunig碱(146毫克,1.12毫摩尔)和4毫升DMF。室温搅拌混合物1h，然后采用100毫升异丙醇/氯仿(1:2)稀释，再用水(2x 20毫升)和盐水(2x 20毫升)洗涤。在MgSO4上干燥有机物并减压浓缩。通过HPLC纯化残留物从而得到所需产物(120毫克,71％)。1H NMR(400MHz,CD3OD)8.22(d,J＝2.6Hz,1H),7.86-7.82(m,2H),7.42(d,J＝4.7Hz,1H),7.38(t,J＝1.5Hz,1H),7.21(dt,J＝2.2,8.4Hz,2H),6.98(d,J＝4.4Hz,1H),6.91(d,J＝2.5Hz,1H),6.86(d,J＝4.7Hz,1H),6.64(dd,J＝2.5,4.0Hz,1H),4.34(d,J＝11.4Hz,1H),4.15(d,J＝11.4Hz,1H),4.02-3.88(m,4H),2.65-2.55(m,1H),2.45-2.36(m,1H)；MS:(ES)m/z计算C22H21FN6O2[M+H]+421.2,实测421.
实施例47：N-[(3S)-3-(羟甲基)-1-吡咯[1,2-a]吡嗪-1-基-吡咯烷-3-基]-2-(4-羟基-1-哌啶基)噻唑-4-甲酰胺的合成
在10毫升小瓶内装入中间体A4(90毫克,0.395毫摩尔)、中间体B1(122毫克,0.40毫摩尔)、HATU(166毫克,0.437毫摩尔)、Hunig碱(146毫克,1.12毫摩尔)和4毫升DMF。室温搅拌混合物1h，然后采用100毫升异丙醇/氯仿(1:2)稀释，再用水(2x 20毫升)和盐水(2x 20毫升)洗涤。在MgSO4上干燥有机物并减压浓缩。通过HPLC纯化残留物从而得到所需产物(85毫克,49％)。1H NMR(400MHz,CD3OD)8.07(s,1H),7.80-7.76(m,1H),7.72(d,J＝5.6Hz,1H),7.56(d,J＝4.4Hz,1H),7.37(s,1H),6.94(dd,J＝2.4,4.4Hz,1H),6.85(d,J＝6.0Hz,1H),4.80-4.60(br,1H),4.50-4.20(br,2H),4.02-3.80(m,4H),3.35-3.25(m,4H),2.78-2.66(m,1H),2.56-2.45(m,1H),1.98-1.88(m,2H),1.64-1.52(m,2H)；MS:(ES)m/z计算C21H26N6O3S[M+H]+443.2,实测443.
实施例48：N-[(3S)-3-(羟甲基)-1-吡咯[1,2-a]吡嗪-1-基-吡咯烷-3-基]-1-苯基-1,2,4-三唑-3-甲酰胺的合成
在10毫升小瓶内装入中间体A5(76毫克,0.40毫摩尔)、中间体B1(122毫克,0.40毫摩尔)、HATU(166毫克,0.437毫摩尔)、Hunig碱(146毫克,1.12毫摩尔)和4毫升DMF。室温搅拌混合物1h，然后采用100毫升异丙醇/氯仿(1:2)稀释，再用水(2x 20毫升)和盐水(2x 20毫升)洗涤。在MgSO4上干燥有机物并减压浓缩。通过制备HPLC纯化残留物从而得到所需产物(110毫克,62％)。1H NMR(400MHz,CD3OD)9.12(s,1H),7.85(td,J＝1.5,7.4Hz,2H),7.76(d,J＝2.2Hz,1H),7.70(d,J＝5.5Hz,2H),7.55(m,2H),7.46(m,1H),6.92(s,1H),6.83(d,J＝5.5Hz,1H),4.60-3.80(br,4H),4.02(s,2H),2.82-2.70(m,1H),2.58-2.48(m,1H)；MS:(ES)m/z计算C21H21N7O2[M+H]+404.2,实测404.
实施例49：1-(4-氟苯基)-N-[(3S)-3-(羟甲基)-1-咪唑并[1,2-a]吡嗪-8-基-吡咯烷-3-基]吡唑-3-甲酰胺的合成
a)向1(1.0克,4.6毫摩尔)和580毫克2(580毫克,3.8毫摩尔)的混合物中加入1.7毫升Hunig碱(9.5毫摩尔)。在130℃搅拌得到的混合物3小时。混合物冷却至室温后加入200毫升异丙醇/氯仿(1:2)，采用饱和的NaHCO3(2x 20毫升)水溶液和盐水(2x 50毫升)洗涤有机物。在MgSO4上干燥有机物并减压浓缩。通过快速柱色谱在硅胶上(0–10％MeOH，EtOAc中)纯化残留物从而得到所需产物3，为棕色粉末(900毫克,58％)。
b)在50℃搅拌3(333毫克,1毫摩尔)和3毫升二氧六环(12毫摩尔)中的4.0M HCl的混合物1小时。然后减压浓缩混合物从而获得棕色粉末(300毫克,98％)，不需进一步纯化用于下一步骤。
c)在10毫升小瓶内装入中间体A3(86毫克,0.417毫摩尔)、中间体B2(120毫克,0.40毫摩尔)、HATU(166毫克,0.437毫摩尔)、Hunig碱(146毫克,1.12毫摩尔)和4毫升DMF。室温搅拌混合物1h，然后采用100毫升异丙醇/氯仿(1:2)稀释，再用水(2x 20毫升)和盐水(2x 20毫升)洗涤。在MgSO4上干燥有机物并减压浓缩。通过HPLC纯化残留物从而得到所需产物(118毫克,71％)。1H NMR(400MHz,CD3OD)8.23(d,J＝2.5Hz,1H),8.01(d,J＝1.1Hz,1H),7.89(d,J＝5.7Hz,1H),7.86-7.82(m,2H),7.78(s,1H),7.22(t,J＝8.8Hz,2H),7.12(d,J＝5.5Hz,1H),6.91(d,J＝2.6Hz,1H),),4.60-3.80(br,4H),4.00(s,2H),2.80-2.70(m,1H),2.56-2.46(m,1H)；MS:(ES)m/z计算C21H20FN7O2[M+H]+422.2,实测422.
实施例50：N-[(3S)-3-(羟甲基)-1-咪唑并[1,2-a]吡嗪-8-基-吡咯烷-3-基]-2-(4-羟基-1-哌啶基)噻唑-4-甲酰胺的合成
在10毫升小瓶内装入中间体A4(90毫克,0.395毫摩尔)、中间体B2(120毫克,0.40毫摩尔)、HATU(166毫克,0.437毫摩尔)、Hunig碱(146毫克,1.12毫摩尔)和4毫升DMF。室温搅拌混合物1h，然后采用100毫升异丙醇/氯仿(1:2)稀释，再用水(2x 20毫升)和盐水(2x 20毫升)洗涤。在MgSO4上干燥有机物并减压浓缩。通过制备HPLC纯化残留物从而得到所需产物(81毫克,49％)。1H NMR(400MHz,CD3OD)8.02(s,1H),7.90(d,J＝5.5Hz,1H),7.79(s,1H),7.35(s,2H),7.14(d,J＝5.8Hz,1H),4.60-3.80(br,4H),3.94(s,2H),3.90-3.80(m,3H),3.32-3.20(m,2H),2.75-2.65(m,1H),2.52-2.45(m,1H),1.97-1.87(m,2H),1.64-1.50(m,2H)；MS:(ES)m/z计算C20H25N7O3S[M+H]+444.2,实测444.
实施例51：N-[(3S)-3-(羟甲基)-1-咪唑并[1,2-a]吡嗪-8-基-吡咯烷-3-基]-1-苯基-1,2,4-三唑-3-甲酰胺的合成
在10毫升小瓶内装入中间体A5(76毫克,0.40毫摩尔)、中间体B2(122毫克,0.40毫摩尔)、HATU(166毫克,0.437毫摩尔)、Hunig碱(146毫克,1.12毫摩尔)和4毫升DMF。室温搅拌混合物1h，然后采用100毫升异丙醇/氯仿(1:2)稀释，再用水(2x 20毫升)和盐水(2x 20毫升)洗涤。在MgSO4上干燥有机物并减压浓缩。通过制备HPLC纯化残留物从而得到所需产物(110毫克,62％)。1H NMR(400MHz,CD3OD)9.12(s,1H),8.02(d,J＝1.1Hz,1H),7.90(d,J＝5.9Hz,1H),7.84(dd,J＝1.5,8.8Hz,2H),7.79(s,1H),7.55(t,J＝7.3Hz,2H),7.46(t,J＝7.3Hz,1H),7.13(d,J＝5.5Hz,1H),4.02(s,2H),4.60-3.80(br,4H),2.80-2.70(m,1H),2.58-2.48(m,1H)；MS:(ES)m/z计算C20H20N8O2[M+H]+405.2,实测405.
实施例52：1-(4-氟苯基)-N-[(3R,4S)-4-羟基-1-吡咯[1,2-a]吡嗪-1-基-吡咯烷-3-基]吡唑-3-甲酰胺的合成
a)向1(120毫克,0.59毫摩尔)和2(90毫克,0.59毫摩尔)的混合物中加入1.0毫升Hunig碱(5.5毫摩尔)。在130℃搅拌得到的混合物3小时。混合物冷却至室温后加入200毫升异丙醇/氯仿(1:2)，采用饱和的NaHCO3(2x 20毫升)水溶液和盐水(2x 50毫升)洗涤有机物。在MgSO4上干燥有机物并减压浓缩。通过快速柱色谱在硅胶上(0–10％MeOH，EtOAc中)纯化残留物从而得到所需产物3，为棕色粉末(150毫克,79％)。
b)在50℃搅拌3(150毫克,0.47毫摩尔)和2毫升二氧六环(8.0毫摩尔)中的4.0M HCl 1h。然后减压浓缩混合物从而获得棕色粉末(130毫克,95％)，不需进一步纯化用于下一步骤。
c)在10毫升小瓶内装入中间体A3(43毫克,0.209毫摩尔)、中间体B2(60毫克,0.20毫摩尔)、HATU(83毫克,0.218毫摩尔)、Hunig碱(73毫克,0.56毫摩尔)和2毫升DMF。室温搅拌混合物1h，然后采用100毫升异丙醇/氯仿(1:2)稀释，再用水(2x 20毫升)和盐水(2x 20毫升)洗涤。在MgSO4上干燥有机物并减压浓缩。通过制备HPLC纯化残留物从而得到所需产物(54毫克,50％)。1H NMR(400MHz,CD3OD)8.29(d,J＝2.6Hz,1H),7.89-7.84(m,2H),7.77(d,J＝1.5Hz,1H),7.72(d,J＝5.9Hz,1H),7.57(d,J＝4.4Hz,1H),7.26(t,J＝8.8Hz,2H),6.98(d,J＝2.2Hz,1H),6.92(t,J＝3.0Hz,1H),6.84(d,J＝5.8Hz,1H),4.85(m,1H),4.64(m,1H),4.70-3.60(br,4H)；MS:(ES)m/z计算C21H19FN6O2[M+H]+407.2,实测407。
实施例53：中间体A1的合成
a)在50毫升烧瓶内装入1.89克原料1(15毫摩尔)、1.96克原料2(10毫摩尔)、400毫克CuI(2.0毫摩尔)、4.5克K2CO3(3.3毫摩尔)和0.9毫升反式-N,N’-二甲基环己二胺(2.0毫摩尔)。在140℃搅拌得到的混合物3小时。将混合物冷却至室温后，加入200毫升EtOAc，采用水(2x 50毫升)、盐水(2x 50毫升)洗涤有机物。在MgSO4上干燥有机物并减压浓缩。通过快速色谱在硅胶上(0–25％EtOAc，己烷中)纯化残留物从而得到所需产物3(1.2克,50％)。
b)向酯3(240毫克,1毫摩尔)的THF溶液中加入3.0毫升1.0M LiOH(3.0毫摩尔)。室温搅拌得到的混合物3小时。加入1.0M HCl调节pH至1.0，采用EtOAc(2x 100毫升)萃取有机物，随后在MgSO4上干燥。减压浓缩得到产物，为白色固体(217毫克,96％)，不需进一步纯化用于下一步骤。
实施例54：1-[2-(氰基甲基)苯基]-N-[(3S)-1-吡咯[1,2-a]吡嗪-1-基吡咯烷-3-基]吡唑-3-甲酰胺的合成
在10毫升小瓶内装入中间体A1(45毫克,0.20毫摩尔)、中间体B4(55毫克,0.20毫摩尔)、HATU(83毫克,0.22毫摩尔)、Hunig碱(73毫克,0.6毫摩尔)和2毫升DMF。室温搅拌混合物1h，然后采用100毫升异丙醇/氯仿(1:2)稀释，再用水(2x 20毫升)和盐水(2x 20毫升)洗涤。在MgSO4上干燥有机物并减压浓缩。通过制备HPLC纯化残留物从而得到所需产物(56毫克,68％)。1H NMR(400MHz,CD3OD)8.03(d,J＝2.2Hz,1H),7.75(s,1H),7.70(d,J＝5.5Hz,1H),7.60-7.48(m,5H),6.98(d,J＝2.5Hz,1H),6.91(dd,J＝2.6,4.4Hz,1H),6.82(d,J＝5.8Hz,1H),4.95-3.65(br,5H),3.93(s,2H),2.55-2.30(m,2H)；MS:(ES)m/z计算C23H21N7O[M+H]+412.2,实测412.
实施例55：1-[2-(氰基甲基)苯基]-N-[(3S)-1-(8-甲基吡咯[1,2-a]吡嗪-1-基)吡咯烷-3-基]吡唑-3-甲酰胺的合成
在10毫升小瓶内装入中间体A1(45毫克,0.20毫摩尔)、中间体B5(58毫克,0.20毫摩尔)、HATU(83毫克,0.22毫摩尔)、Hunig碱(78毫克,0.6毫摩尔)和2毫升DMF。室温搅拌混合物1h，然后采用100毫升异丙醇/氯仿(1:2)稀释，再用水(2x 20毫升)和盐水(2x 20毫升)洗涤。在MgSO4上干燥有机物并减压浓缩。通过制备HPLC纯化残留物从而得到所需产物(60毫克,56％)。1H NMR(400MHz,CD3OD)8.02(d,J＝2.2Hz,1H),7.65-7.57(m,3H),7.54-7.46(m,3H),6.97(d,J＝2.2Hz,1H),6.75-6.72(m,2H),4.82-4.75(m,1H),4.28-4.24(m,1H),4.08-4.00(m,1H),3.98-3.90(m,4H),2.61(s,3H),2.52-2.30(m,2H)；MS:(ES)m/z计算C24H23N7O[M+H]+426.2,实测426.
实施例56：1-(4-氯-3-氟-苯基)-N-[(3S)-1-(8-甲基吡咯[1,2-a]吡嗪-1-基)吡咯烷-3-基]吡唑-3-甲酰胺和1-(3-氟苯基)-N-[(3S)-1-(8-甲基吡咯[1,2-a]吡嗪-1-基)吡咯烷-3-基]吡唑-3-甲酰胺的合成
在10毫升小瓶内装入中间体A6(48毫克,0.20毫摩尔)、中间体B5(58毫克,0.20毫摩尔)、HATU(83毫克,0.22毫摩尔)、Hunig碱(78毫克,0.6毫摩尔)和2毫升DMF。室温搅拌混合物1h，然后采用100毫升异丙醇/氯仿(1:2)稀释，再用水(2x 20毫升)和盐水(2x 20毫升)洗涤。在MgSO4上干燥有机物并减压浓缩。通过制备HPLC纯化残留物从而得到氯氟(40毫克,46％)和氟(5毫克,6％)产物。1-(4-氯-3-氟-苯基)-N-[(3S)-1-(8-甲基吡咯[1,2-a]吡嗪-1-基)吡咯烷-3-基]吡唑-3-甲酰胺:1H NMR(400MHz,CD3OD)8.36(d,J＝2.6Hz,1H),7.90(dd,J＝2.6,10.3Hz,1H),7.72-7.64(m,3H),7.61(t,J＝8.0Hz,1H),6.95(d,J＝2.6Hz,1H),6.77-6.73(m,2H),4.82-4.75(m,1H),4.30-4.24(m,1H),4.08-3.92(m,3H),2.63(s,3H),2.52-2.30(m,2H)；MS:(ES)m/z计算C22H20ClFN6O[M+H]+439.2,实测439.1-(3-氟苯基)-N-[(3S)-1-(8-甲基吡咯[1,2-a]吡嗪-1-基)吡咯烷-3-基]吡唑-3-甲酰胺:1H NMR(400MHz,CD3OD)8.35(d,J＝2.6Hz,1H),7.76-7.64(m,3H),7.53(dt,J＝6.2,8.4Hz,2H),7.13(dt,J＝2.5,8.4Hz,1H),6.95(d,J＝2.6Hz,1H),6.77-6.73(m,2H),4.82-4.75(m,1H),4.30-4.24(m,1H),4.08-3.92(m,3H),2.63(s,3H),2.52-2.30(m,2H)；MS:(ES)m/z计算C22H21FN6O[M+H]+405.2,实测405.
实施例57：2-(4-羟基-1-哌啶基)-N-[(3S)-1-(8-甲基吡咯[1,2-a]吡嗪-1-基)吡咯烷-3-基]噻唑-4-甲酰胺的合成
在10毫升小瓶内装入中间体A4(45毫克,0.20毫摩尔)、中间体B5(58毫克,0.20毫摩尔)、HATU(83毫克,0.22毫摩尔)、Hunig碱(78毫克,0.6毫摩尔)和2毫升DMF。室温搅拌混合物1h，然后采用100毫升异丙醇/氯仿(1:2)稀释，再用水(2x 20毫升)和盐水(2x 20毫升)洗涤。在MgSO4上干燥有机物并减压浓缩。通过制备HPLC纯化残留物从而得到所需产物(35毫克,41％)。1H NMR(400MHz,CD3OD)7.68-7.65(m,2H),7.38(s,1H),6.76-6.74(m,2H),4.75-4.65(m,1H),4.25-4.15(m,1H),4.06-3.80(m,5H),3.35-3.20(m,3H),2.62(s,1H),2.50-2.30(m,2H),1.98-1.90(m,2H),1.65-1.52(m,2H)；MS:(ES)m/z计算C21H26N6O2S[M+H]+427.2,实测427.
实施例58：1-(4-氯-3-氟-苯基)-N-[(3S)-1-吡咯[1,2-a]吡嗪-1-基吡咯烷-3-基]吡唑-3-甲酰胺和1-(3-氟苯基)-N-[(3S)-1-吡咯[1,2-a]吡嗪-1-基吡咯烷-3-基]吡唑-3-甲酰胺的合成
在10毫升小瓶内装入中间体A6(48毫克,0.20毫摩尔)、中间体B6(58毫克,0.20毫摩尔)、HATU(83毫克,0.22毫摩尔)、Hunig碱(78毫克,0.6毫摩尔)和2毫升DMF。室温搅拌混合物1h，然后采用100毫升异丙醇/氯仿(1:2)稀释，再用水(2x 20毫升)和盐水(2x 20毫升)洗涤。在MgSO4上干燥有机物并减压浓缩。通过制备HPLC纯化残留物从而得到4-氯-3-氟产物(38毫克,45％)和3-氟产物(8毫克,10％)。1-(4-氯-3-氟-苯基)-N-[(3S)-1-吡咯[1,2-a]吡嗪-1-基吡咯烷-3-基]吡唑-3-甲酰胺的合成:1H NMR(400MHz,CD3OD)8.37(d,J＝2.9Hz,1H),7.91(dd,J＝2.6,10.3Hz,1H),7.77(s,1H),7.71-7.68(m,2H),7.61-7.55(m,2H),6.97(d,J＝2.6Hz,1H),6.92(dd,J＝2.6,4.4Hz,1H),6.84(d,J＝5.9Hz,1H),4.95-3.70(br,5H),2.60-2.36(m,2H)；MS:(ES)m/z计算C21H18ClFN6O[M+H]+425.2,实测425.1-(3-氟苯基)-N-[(3S)-1-吡咯[1,2-a]吡嗪-1-基吡咯烷-3-基]吡唑-3-甲酰胺:1H NMR(400MHz,CD3OD)8.80(d,J＝5.9Hz,1H),8.38(d,J＝2.3Hz,1H),7.79-7.68(m,4H),7.59-7.48(m,2H),7.14(dt,J＝2.8,8.6Hz,1H),6.98(d,J＝2.4Hz,1H),6.95(dd,J＝2.6,4.4Hz,1H),6.86(d,J＝5.5Hz,1H),4.95-3.70(br,5H),2.60-2.36(m,2H)；MS:(ES)m/z计算C21H19FN6O[M+H]+391.2,实测391.
实施例59：2-(4-羟基-1-哌啶基)-N-[(3S)-1-吡咯[1,2-a]吡嗪-1-基吡咯烷-3-基]噻唑-4-甲酰胺的合成
在10毫升小瓶内装入中间体A4(45毫克,0.20毫摩尔)、中间体B6(55毫克,0.20毫摩尔)、HATU(83毫克,0.22毫摩尔)、Hunig碱(78毫克,0.6毫摩尔)和2毫升DMF。室温搅拌混合物1h，然后采用100毫升异丙醇/氯仿(1:2)稀释，再用水(2x 20毫升)和盐水(2x 20毫升)洗涤。在MgSO4上干燥有机物并减压浓缩。通过制备HPLC纯化残留物从而得到所需产物(65毫克,79％)。1H NMR(400MHz,CD3OD)7.76(s,1H),7.70(d,J＝5.8Hz,1H),7.54(d,J＝3.7Hz,1H),7.39(s,1H),7.53(dd,J＝2.5,4.0Hz,1H),6.84(d,J＝5.5Hz,1H),4.82-4.75(m,1H),4.70-3.60(br,4H),3.90-3.80(m,2H),3.40-3.20(m,3H),2.52-2.30(m,2H),1.96-1.90(m,2H),1.65-1.52(m,2H)；MS:(ES)m/z计算C20H24FN6O2S[M+H]+413.2,实测413.
实施例60：1-(5-氯-2-吡啶基)-N-[(3S)-1-吡咯[1,2-a]吡嗪-1-基吡咯烷-3-基]吡唑-3-甲酰胺的合成
在10毫升小瓶内装入中间体A7(45毫克,0.20毫摩尔)、中间体B6(55毫克,0.20毫摩尔)、HATU(83毫克,0.22毫摩尔)、Hunig碱(78毫克,0.6毫摩尔)和2毫升DMF。室温搅拌混合物1h，然后采用100毫升异丙醇/氯仿(1:2)稀释，再用水(2x 20毫升)和盐水(2x 20毫升)洗涤。在MgSO4上干燥有机物并减压浓缩。通过制备HPLC纯化残留物从而得到所需产物(45毫克,56％)。1H NMR(400MHz,CD3OD)8.61(s,1H),8.44(s,1H),8.07(d,J＝8.8Hz,1H),7.99(d,J＝8.8Hz,1H),7.77(s,1H),7.72(d,J＝5.9Hz,1H),7.57(d,J＝4.4Hz,1H),6.96(s,1H),6.94-6.91(m,1H),6.85(d,J＝5.9Hz,1H),5.00-3.65(br,5H),2.60-2.30(m,2H)；MS:(ES)m/z计算C20H18ClN7O[M+H]+408.2,实测408.
实施例61：2-(4-羟基-1-哌啶基)-N-[(3S)-1-咪唑并[1,2-a]吡嗪-8-基吡咯烷-3-基]噻唑-4-甲酰胺的合成
在10毫升小瓶内装入中间体A4(90毫克,0.40毫摩尔)、中间体B7(100毫克,0.40毫摩尔)、HATU(166毫克,0.40毫摩尔)、Hunig碱(156毫克,1.2毫摩尔)和4毫升DMF。室温搅拌混合物1h，然后采用100毫升异丙醇/氯仿(1:2)稀释，再用水(2x 20毫升)和盐水(2x 20毫升)洗涤。在MgSO4上干燥有机物并减压浓缩。通过制备HPLC纯化残留物从而得到所需产物(80毫克,48％)。1H NMR(400MHz,CD3OD)7.74(s,1H),7.66(d,J＝4.7Hz,1H),7.50(s,1H),7.36(s,1H),7.22(d,J＝4.9Hz,1H),4.76-4.65(m,1H),4.40-4.30(m,1H),4.20-3.75(m,4H),3.40-3.20(m,4H),2.42-2.10(m,2H),1.95-1.85(m,2H),1.65-1.50(m,2H)；MS:(ES)m/z计算C19H23N7O2S[M+H]+414.2,实测414.
实施例62：1-(4-氟苯基)-N-[(3S)-1-咪唑并[1,2-a]吡嗪-8-基吡咯烷-3-基]-5-甲基-1,2,4-三唑-3-甲酰胺的合成
在10毫升小瓶内装入中间体A8(82mg,0.30毫摩尔)、中间体B7(82毫克,0.30毫摩尔)、HATU(125毫克,0.33毫摩尔)、Hunig碱(160毫克,1.23毫摩尔)和4毫升DMF。室温搅拌混合物1h，然后采用100毫升异丙醇/氯仿(1:2)稀释，再用水(2x 20毫升)和盐水(2x 20毫升)洗涤。在MgSO4上干燥有机物并减压浓缩。通过制备HPLC纯化残留物从而得到所需产物(65毫克,53％)。1H NMR(400MHz,CD3OD)8.95(d,J＝6.3Hz,0.2H),8.05(s,1H),7.94(d,J＝5.5Hz,1H),7.81(s,1H),7.64-7.59(m,2H),7.36-7.30(m,2H),7.17(d,J＝5.4Hz,1H),5.00-4.85(m,1H),4.80-3.65(br,4H),2.51(s,3H),2.60-2.38(m,2H)；MS:(ES)m/z计算C20H19FN8O[M+H]+407.2,实测407.
实施例63：2-(4-羟基-1-哌啶基)-N-[(3S)-1-咪唑并[1,2-a]吡嗪-8-基吡咯烷-3-基]噻唑-4-甲酰胺的合成
在10毫升小瓶内装入中间体A4(90毫克,0.40毫摩尔)、中间体B8(100毫克,0.40毫摩尔)、HATU(166毫克,0.40毫摩尔)、Hunig碱(156毫克,1.2毫摩尔)和4毫升DMF。室温搅拌混合物1h，然后采用100毫升异丙醇/氯仿(1:2)稀释，再用水(2x 20毫升)和盐水(2x 20毫升)洗涤。在MgSO4上干燥有机物并减压浓缩。通过制备HPLC纯化残留物从而得到所需产物(75毫克,45％).1H NMR(400MHz,CD3OD)9.06(s,1H),7.64(d,J＝4.8Hz,1H),7.36(s,1H),7.26(d,J＝4.8Hz,1H),4.73-4.68(m,1H),4.60-3.60(br,4H),3.96-3.80(m,3H),3.35-3.20(m,2H),2.45-2.35(m,1H),2.30-2.18(m,1H),1.95-1.88(m,2H),1.62-1.50(m,2H)；MS:(ES)m/z计算C18H22N8O2S[M+H]+415.2,实测415.
实施例64：3-[[1-(4-氟苯基)吡唑-3-羰基]氨基]-1-吡咯[1,2-a]吡嗪-1-基-吡咯烷-3-羧酸和N-3-氨基甲酰基-1-吡咯[1,2-a]吡嗪-1-基-吡咯烷-3-基-1-(4-氟苯基)吡唑-3-甲酰胺的合成
a)向a(248毫克,1.0毫摩尔)和b(152毫克,1.0毫摩尔)的混合物中加入2.0毫升Hunig碱(9.5毫摩尔)。在130℃搅拌得到的混合物3小时。将混合物冷却至室温后，加入100毫升异丙醇/氯仿(1:2)，采用饱和NaHCO3(2x 20毫升)水溶液和盐水(2x 50毫升)洗涤混合物。在MgSO4上干燥有机物并减压浓缩。通过快速柱色谱在硅胶上(0–10％MeOH，EtOAc中)纯化残留物从而得到所需产物c，为棕色粉末(250毫克,67％)。
b)在50℃搅拌c(250毫克,0.67毫摩尔)和2毫升二氧六环(8毫摩尔)中的4.0MHCl的混合物1h。然后减压浓缩混合物从而获得棕色粉末(228毫克,98％)，不需进一步纯化作为中间体B9用于下一步骤。
c)在10毫升小瓶内装入中间体A3(136毫克,0.66毫摩尔)、中间体B9(228毫克,0.66毫摩尔)、HATU(274毫克,0.72毫摩尔)、Hunig碱(257毫克,1.98毫摩尔)和5毫升DMF。室温搅拌混合物1h，然后采用100毫升EtOAc稀释，再用水(2x 20毫升)和盐水(2x 20毫升)洗涤。在MgSO4上干燥有机物并减压浓缩。通过快速色谱在硅胶上(50-100％EtOAc，己烷中)纯化残留物从而得到所需产物d(220毫克,72％)。
d)在10毫升小瓶内装入d(230毫克,0.50毫摩尔)、1N LiOH(3毫升)和3毫升MeOH。室温搅拌混合物1h，然后调节到pH为3。然后采用100毫升EtOAc萃取，再用水(2x 20毫升)和盐水(2x 20毫升)洗涤。在MgSO4上干燥有机物并减压浓缩。通过快速柱色谱在硅胶上(100％EtOAc，己烷中)纯化残留物从而得到所需产物(205毫克,95％)。3-[[1-(4-氟苯基)吡唑-3-羰基]氨基]-1-吡咯[1,2-a]吡嗪-1-基-吡咯烷-3-羧酸:1H NMR(400MHz,CD3OD)8.29(d,J＝2.7Hz,1H),7.89(m,2H),7.78(dd,J＝1.2,2.7Hz,1H),7.73(d,J＝5.4Hz,1H),7.55(d,J＝3.5Hz,1H),7.30-7.22(m,2H),6.97(d,J＝2.7Hz,1H),6.94(dd,J＝2.8,4.3Hz,1H),6.84(d,J＝5.5Hz,1H),4.60-3.80(br,4H),2.90-2.82(m,1H),2.80-2.70(m,1H)；MS:(ES)m/z计算C22H19FN6O3[M+H]+435.2,实测435.
e)在10毫升小瓶内装入3-[[1-(4-氟苯基)吡唑-3-羰基]氨基]-1-吡咯[1,2-a]吡嗪-1-基-吡咯烷-3-羧酸(100毫克,0.25毫摩尔)、HATU(114毫克,0.3毫摩尔)、DCM(2毫升)中饱和的NH3和5毫升DMF。室温搅拌混合物1h，然后采用100毫升EtOAc稀释，再用水(2x 20毫升)和盐水(2x 20毫升)洗涤。在MgSO4上干燥有机物并减压浓缩。通过快速色谱在硅胶上(50-100％EtOAc，己烷中)纯化残留物从而得到所需产物(75毫克,69％)。N-3-氨基甲酰基-1-吡咯[1,2-a]吡嗪-1-基-吡咯烷-3-基-1-(4-氟苯基)吡唑-3-酰胺：1H NMR(400MHz,CD3OD)8.30(d,J＝2.4Hz,1H),7.88(m,2H),7.78(q,J＝1.2Hz,1H),7.72(d,J＝5.9Hz,1H),7.55(d,J＝3.9Hz,1H),7.30-7.22(m,2H),6.99(d,J＝2.7Hz,1H),6.93(dd,J＝2.7,4.3Hz,1H),6.83(d,J＝5.5Hz,1H),4.60-3.80(br,4H),2.90-2.80(m,1H),2.78-2.68(m,1H)；MS:(ES)m/z计算C22H20FN7O2[M+H]+434.2,实测434.
实施例65：2-苯基-2H-四唑-5-羧酸乙酯的合成
在0℃，向苯胺(0.58克,6.2毫摩尔)在9.2毫升EtOH/H2O(1:1)的溶液中加入2.3毫升浓盐酸，随后加入NaNO2(0.47克,6.8毫摩尔,1.1eq)。在0℃搅拌混合物30分钟。向单独的乙醛酸乙酯(1.74克,17毫摩尔,3.1eq)在34毫升EtOH的溶液中加入对甲苯磺酰肼(1.0克,5.4毫摩尔,1eq)，随后加入NaNO2(0.47克,6.8毫摩尔,1.1eq)。在室温搅拌混合物30分钟然后浓缩。残留物重溶于34毫升吡啶并冷却至0℃。向冷却的溶液中加入预制的重氮盐。室温搅拌反应混合物3h然后用水淬灭。采用乙酸乙酯萃取混合物，用Na2SO4干燥有机层并真空浓缩。通过硅胶快速色谱(hex:EtoAc 9:1)纯化得到2-苯基-2H-四唑-5-羧酸乙酯(0.84克,3.9毫摩尔,71％)。
实施例66：2-苯基-2H-四唑-5-羧酸的合成
向2-苯基-2H-四唑-5-羧酸乙酯(0.84克,3.9毫摩尔,1eq)在7.6毫升EtOH/H2O(1.5:1)中的溶液中加入NaOH(0.31克,7.8毫摩尔,2eq)。在60℃加热反应混合物30分钟然后用0.65毫升浓盐酸淬灭。过滤混合物并采用甲醇洗涤，用硫酸钠干燥滤液并真空浓缩。硅胶快速色谱(100％EtoAc)纯化得到2-苯基-2H-四唑-5-羧酸(0.41克,2.2毫摩尔,55％)。
实施例67：(S)-(1-(咪唑并[1,2-a]吡嗪-8-基)吡咯烷-3-基)氨基甲酸叔丁酯的合成
向(S)-吡咯烷-3-基氨基甲酸叔丁酯(80.2克,0.43mol,1.1eq)在75毫升二异丙基胺和34毫升NMP中的溶液中分批加入8-氯咪唑并[1,2-a]吡嗪(60克,0.39mol,1eq)。在100℃加热反应混合物4h，然后用1.2L乙酸乙酯稀释。采用H2O和盐水洗涤有机层，用硫酸钠干燥并浓缩从而获得(S)-(1-(咪唑并[1,2-a]吡嗪-8-基)吡咯烷-3-基)氨基甲酸叔丁酯(111.7克,0.37mol,94％)。
实施例68：(S)-1-(咪唑并[1,2-a]吡嗪-8-基)吡咯烷-3-胺的合成
在0℃，向乙酰氯(114毫升,1.6mol)在290毫升MeOH中的溶液中加入(S)-(1-(咪唑并[1,2-a]吡嗪-8-基)吡咯烷-3-基)氨基甲酸叔丁酯(111.7克,0.37mol)在450毫升MeOH中的溶液。室温搅拌反应混合物2h，然后在60℃加热30分钟。过滤产物，采用200毫升MeOH洗涤并在真空干燥箱内干燥从而获得(S)-1-(咪唑并[1,2-a]吡嗪-8-基)吡咯烷-3-胺(101.2克,1.6mol,100％)。
实施例69：(S)-N-(1-(咪唑并[1,2-a]吡嗪-8-基)吡咯烷-3-基)-2-苯基-2H-四唑-5-甲酰胺的合成
向1毫升DMSO中的2-苯基-2H-四唑-5-羧酸(0.10克,0.53毫摩尔,1eq)和(S)-1-(咪唑并[1,2-a]吡嗪-8-基)吡咯烷-3-胺(0.15克,0.53毫摩尔,1eq)的溶液中加入三乙胺(0.22毫升,0.58毫摩尔,1.1eq)和HATU(0.22克,0.58毫摩尔,3eq)。室温搅拌混合物1h，然后浓缩并通过HPLC纯化从而得到(S)-N-(1-(咪唑并[1,2-a]吡嗪-8-基)吡咯烷-3-基)-2-苯基-2H-四唑-5-甲酰胺(0.10克,0.26毫摩尔,49％)。1H NMR(400MHz,CD3OD)8.19(d,J＝7.0Hz,2H),8.06(s,1H),7.95(d,J＝5.5Hz,1H),7.82(s,1H),7.70-7.58(m,3H),7.19(d,J＝5.8Hz,1H),5.00-4.90(m,1H),4.80-3.80(br,4H),2.62-2.38(m,2H)；MS:(ES)m/z计算C18H17N9O[M+H]+376.2,实测376.
实施例70：6-(4-羟基哌啶-1-基)哒嗪-3-羧酸甲酯的合成
在75℃加热11毫升SOCl2中的6-氯哒嗪-3-羧酸(0.50克,3.2毫摩尔)溶液2小时然后浓缩并重溶于5毫升MeOH。向溶液中加入MeOH中的25％的甲醇钠(0.75毫升,3.5毫摩尔,1.1eq)溶液。室温搅拌反应混合物20h，然后用水淬灭并用二氯甲烷萃取。残留物的硅胶快速色谱(EtOAc/MeOH 90:10)提供6-氯哒嗪-3-羧酸和6-m乙氧基哒嗪-3-羧酸(0.160克)的2:1混合物。向酯和氯化物的混合物在1.9毫升p-二氧六环中的溶液中加入4-羟基哌啶(0.094克,93毫摩尔)，随后加入二异丙基乙基胺(0.49毫升,2.8毫摩尔)。在100℃加热混合物20h然后浓缩。采用硅胶快速色谱纯化得到6-(4-羟基哌啶-1-基)哒嗪-3-羧酸甲酯(0.15克,63毫摩尔)。
实施例71：6-(4-羟基哌啶-1-基)哒嗪-3-羧酸的合成
向2.5毫升EtOH/H2O(1.5:1)中的酯(0.15克,0.63毫摩尔,1eq)的溶液中加入NaOH(0.08克,1.9毫摩尔,3eq)。在50℃加热反应混合物1h然后用0.16毫升浓盐酸淬灭。过滤混合物并用甲醇洗涤，采用硫酸钠干燥滤液并真空浓缩从而得到6-(4-羟基哌啶-1-基)哒嗪-3-羧酸。
实施例72：(S)-6-(4-羟基哌啶-1-基)-N-(1-(咪唑并[1,2-a]吡嗪-8-基)吡咯烷-3-基)哒嗪-3-甲酰胺的合成
向1毫升DMSO中6-(4-羟基哌啶-1-基)哒嗪-3-羧酸(0.10克,0.45毫摩尔,1eq)和(S)-1-(咪唑并[1,2-a]吡嗪-8-基)吡咯烷-3-胺(0.12克,0.44毫摩尔,1eq)的溶液中加入三乙胺(0.19毫升,0.49毫摩尔,1.1eq)和HATU(0.19克,0.49毫摩尔,3eq)。室温搅拌混合物30然后浓缩并通过HPLC纯化从而得到(S)-6-(4-羟基哌啶-1-基)-N-(1-(咪唑并[1,2-a]吡嗪-8-基)吡咯烷-3-基)哒嗪-3-甲酰胺(0.12克,0.29毫摩尔,66％).1H NMR(400MHz,CD3OD)8.05(s,1H),8.02(d,J＝9.8Hz,1H),7.94(d,J＝5.5Hz,1H),7.81(s,1H),7.5(d,J＝9.8Hz,1H),7.18(d,J＝5.8Hz,1H),4.98-4.80(m,1H),4.80-3.80(br,4H),4.20-4.10(m,2H),4.00-3.90(m,1H),3.55-3.45(m,2H),2.60-2.35(m,2H),2.05-1.95(m,2H),1.68-1.55(m,2H)；MS:(ES)m/z计算C20H24N8O2[M+H]+409.2,实测409.
实施例73：1-(3,4-二氟苯基)-1H-1,2,4-三唑-3-羧酸乙酯的合成
在0℃，向5.4毫升水中的3,4-二氟苯胺(1毫升,10毫摩尔)溶液中加入2.8毫升浓盐酸，随后加入NaNO2(1.0克,15毫摩尔,1.5eq)。在0℃搅拌混合物30分钟。加入额外量的NaNO2(0.35克,5毫摩尔,0.5eq)，在0℃搅拌混合物1小时。向单独的13毫升EtOH/H2O(12:1)中的NaOAc(8.9克,108毫摩尔,11eq)溶液中加入2-异氰基乙酸乙酯(1.1毫升,10毫摩尔,1eq)。将混合物冷却至0℃，滴加重氮盐混合物。搅拌1小时后，采用水淬灭反应并用EtOAc萃取。用硫酸钠干燥有机层并真空浓缩。通过硅胶快速色谱(hex:EtoAc 1:1)纯化1-(3,4-二氟苯基)-1H-1,2,4-三唑-3-羧酸乙酯(0.30克,1.3毫摩尔,13％)。
实施例74：1-(3,4-二氟苯基)-1H-1,2,4-三唑-3-羧酸的合成
T向5毫升EtOH/H2O(1.5:1)中的1-(3,4-二氟苯基)-1H-1,2,4-三唑-3-羧酸乙酯(0.30克,1.2毫摩尔,1eq)溶液中加入NaOH(0.095克,2.4毫摩尔,2eq)。在50℃加热反应混合物1小时然后用0.20毫升浓盐酸淬灭。过滤混合物，用EtOAc然后用MeOH洗涤，采用硫酸钠干燥MeOH滤液并真空浓缩从而得到1-(3,4-二氟苯基)-1H-1,2,4-三唑-3-羧酸(0.22克,0.98毫摩尔,84％)。
实施例75：(S)-1-(3,4-二氟苯基)-N-(1-(咪唑并[1,2-a]吡嗪-8-基)吡咯烷-3-基)-1H-1,2,4-三唑-3-甲酰胺的合成
向1毫升DMSO中的1-(3,4-二氟苯基)-1H-1,2,4-三唑-3-羧酸(0.10克,0.44毫摩尔,1eq)和(S)-1-(咪唑并[1,2-a]吡嗪-8-基)吡咯烷-3-胺(0.12克,0.44毫摩尔,1eq)的溶液中加入三乙胺(0.19毫升,0.49毫摩尔,1.1eq)和HATU(0.19克,1.3毫摩尔,3eq)。室温搅拌1小时后，浓缩混合物并通过HPLC纯化从而得到(S)-1-(3,4-二氟苯基)-N-(1-(咪唑并[1,2-a]吡嗪-8-基)吡咯烷-3-基)-1H-1,2,4-三唑-3-甲酰胺(0.046克,0.11毫摩尔,25％)。1H NMR(400MHz,CD3OD)9.14(s,1H),8.05(s,1H),7.96-7.88(m,2H),7.81(s,1H),7.75-7.71(m,1H),7.52(q,J＝8.6Hz,1H),7.19(d,J＝5.5Hz,1H),4.98-4.80(m,1H),4.80-3.80(br,4H),2.62-2.40(m,2H)；MS:(ES)m/z计算C19H16F2N8O[M+H]+411.2,实测411.
实施例76：(S)-(1-(吡唑[1,5-a]吡嗪-4-基)吡咯烷-3-基)氨基甲酸叔丁酯的合成
向0.2毫升NMP中的(S)-吡咯烷-3-基氨基甲酸叔丁酯(0.50克,2.7毫摩尔,1eq)和二异丙基胺(0.66毫升,3.8毫摩尔,1.4eq)的溶液中加入4-氯吡唑[1,5-a]吡嗪(0.47毫升,3.1毫摩尔,1.1eq)。室温搅拌1小时后，浓缩混合物并通过硅胶柱色谱(100％EtOAc)纯化从而得到(S)-(1-(吡唑[1,5-a]吡嗪-4-基)吡咯烷-3-基)氨基甲酸叔丁酯(0.740克,2.4毫摩尔,91％)。
实施例77：(S)-1-(吡唑[1,5-a]吡嗪-4-基)吡咯烷-3-胺的合成
向3毫升二氧六环中的(S)-(1-(吡唑[1,5-a]吡嗪-4-基)吡咯烷-3-基)氨基甲酸叔丁酯(0.74克,2.4毫摩尔,1eq)溶液中加入二氧六环(3毫升,20毫摩尔,4eq)中的4.0M HCl溶液。在60℃加热3小时后，浓缩混合物从而得到(S)-1-(吡唑[1,5-a]吡嗪-4-基)吡咯烷-3-胺(0.670克,2.4毫摩尔,100％)。
实施例78：(S)-1-苯基-N-(1-(吡唑[1,5-a]吡嗪-4-基)吡咯烷-3-基)-1H-1,2,4-三唑-3-甲酰胺的合成
向1毫升DMSO中的1-苯基-1H-1,2,4-三唑-3-羧酸(0.093克,0.49毫摩尔,1.4eq)和(S)-1-(吡唑[1,5-a]吡嗪-4-基)吡咯烷-3-胺(0.10克,0.36毫摩尔,1eq)的溶液中加入三乙胺(0.20毫升,1.4毫摩尔,2.6eq)和HATU(0.21克,0.55毫摩尔,1.5eq)。室温搅拌1小时后，浓缩混合物并通过HPLC纯化从而得到(S)-1-苯基-N-(1-(吡唑[1,5-a]吡嗪-4-基)吡咯烷-3-基)-1H-1,2,4-三唑-3-甲酰胺(0.095克,0.25毫摩尔,52％)。1H NMR(400MHz,CD3OD)9.13(s,1H),8.16(d,J＝2.4Hz,1H),8.09(d,J＝5.8Hz,1H),7.86(d,J＝7.8Hz,2H),7.60-7.46(m,4H),7.19(d,J＝5.5Hz,1H),4.95-4.80(m,1H),4.78-3.80(br,4H),2.62-2.40(m,2H)；MS:(ES)m/z计算C19H18N8O[M+H]+375.2,实测375.
实施例79：(S)-N-(1-(吡咯[1,2-a]吡嗪-1-基)吡咯烷-3-基)氨基甲酸叔丁酯的合成
向2.6毫升DIPEA中的(S)-吡咯烷-3-基氨基甲酸叔丁酯(0.91克,4.9毫摩尔,1eq)溶液中加入1-氯吡咯[1,2-a]吡嗪(0.75克,4.9毫摩尔,1eq)和1滴1-丁基-3-甲基咪唑四氟硼酸盐。在110℃加热3h后，浓缩混合物并通过硅胶快速色谱(100％EtOAc)纯化从而得到(S)-N-(1-(吡咯[1,2-a]吡嗪-1-基)吡咯烷-3-基)氨基甲酸叔丁酯(0.88克,2.9毫摩尔,59％)。
实施例80：(S)-1-(吡咯[1,2-a]吡嗪-1-基)吡咯烷-3-胺的合成
向3.6毫升二氧六环的(S)-N-(1-(吡咯[1,2-a]吡嗪-1-基)吡咯烷-3-基)氨基甲酸叔丁酯(0.88克,2.9毫摩尔,1eq)溶液中加入二氧六环(3.6毫升,14.5毫摩尔,5eq)中的4.0M HCl溶液。在60℃加热1小时后，浓缩混合物从而得到(S)-1-(吡咯[1,2-a]吡嗪-1-基)吡咯烷-3-胺(0.79克,2.9毫摩尔,100％)。
实施例81：(S)-5-溴-N-(1-(吡咯[1,2-a]吡嗪-1-基)吡咯烷-3-基)嘧啶-2-甲酰胺的合成
向20毫升DMSO中的5-溴嘧啶-2-羧酸(2.0克,9.9毫摩尔,1eq)和(S)-1-(吡咯[1,2-a]吡嗪-1-基)吡咯烷-3-胺(2.7克,9.9毫摩尔,1eq)的溶液中加入三乙胺(5.4毫升,39毫摩尔,3.9eq)和HATU(4.1克,11毫摩尔,1.1eq)。室温搅拌1小时后，浓缩混合物并通过硅胶快速色谱(EtoAc:MeOH 2:3)纯化从而得到(S)-5-溴-N-(1-(吡咯[1,2-a]吡嗪-1-基)吡咯烷-3-基)嘧啶-2-甲酰胺(5.0克,1.3毫摩尔,13％)。
实施例82：(S)-5-(环戊-1-烯-1-基)-N-(1-(吡咯[1,2-a]吡嗪-1-基)吡咯烷-3-基)嘧啶-2-甲酰胺的合成
向1.8毫升DMF中的(S)-5-溴-N-(1-(吡咯[1,2-a]吡嗪-1-基)吡咯烷-3-基)嘧啶-2-甲酰胺(0.10克,0.27毫摩尔,1eq)溶液中加入2-(环戊-1-烯-1-基)-4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂环戊硼烷(dioxaborolane)(0.15克,0.77毫摩尔,2.8eq)，随后加入0.2毫升水中的K2CO3(0.18克,1.3毫摩尔,4.8eq)和Pd(dppf)Cl2(0.02克,0.03毫摩尔,0.09eq)。120℃加热1小时后，浓缩混合物并通过硅胶快速色谱(EtoAc:MeOH 1:1)随后通过HPLC纯化从而得到(S)-5-(环戊-1-烯-1-基)-N-(1-(吡咯[1,2-a]吡嗪-1-基)吡咯烷-3-基)嘧啶-2-甲酰胺(0.070克,0.19毫摩尔,69％)。
实施例83：(S)-5-环戊基-N-(1-(吡咯[1,2-a]吡嗪-1-基)吡咯烷-3-基)嘧啶-2-甲酰胺的合成
向1毫升MeOH中的(S)-5-(环戊-1-烯-1-基)-N-(1-(吡咯[1,2-a]吡嗪-1-基)吡咯烷-3-基)嘧啶-2-甲酰胺(0.07克,0.19毫摩尔,1eq)溶液中加入10％Pd/C(0.02克,0.02毫摩尔,0.1eq)。反应混合物装备H2气球并在室温搅拌3小时。过滤混合物并通过HPLC纯化从而得到(S)-5-环戊基-N-(1-(吡咯[1,2-a]吡嗪-1-基)吡咯烷-3-基)嘧啶-2-甲酰胺(0.005克,0.013毫摩尔,7％)。1H NMR(400MHz,CD3OD)8.83(s,2H),7.78(q,J＝1.1Hz,1H),7.73(d,J＝5.8Hz,1H),7.57(d,J＝3.9Hz,1H),6.94(dd,J＝2.7,4.7Hz,1H),6.86(d,J＝5.9Hz,1H),5.00-4.80(m,1H),4.50-3.50(br,4H),3.20-3.10(m,1H),2.60-2.48(m,1H),2.48-2.38(br,1H),2.22-2.12(m,2H),1.95-1.60(m,6H)；MS:(ES)m/z计算C21H24N6O[M+H]+377.2,实测377.
实施例84：(S)-N-(1-([1,2,4]三唑并[4,3-a]吡嗪-8-基)吡咯烷-3-基)-6-甲基喹唑啉-2-甲酰胺的合成
向1毫升DMSO中的6-甲基喹唑啉-2-羧酸(0.040克,0.21毫摩尔,1.2eq)和(S)-1-([1,2,4]三唑并[4,3-a]吡嗪-8-基)吡咯烷-3-胺(0.49克,0.18毫摩尔,1eq)的溶液中加入三乙胺(0.10毫升,0.7毫摩尔,4eq)和HATU(0.075克,0.20毫摩尔,1.1eq)。室温搅拌1小时后，浓缩混合物并通过HPLC纯化从而得到(S)-N-(1-([1,2,4]三唑并[4,3-a]吡嗪-8-基)吡咯烷-3-基)-6-甲基喹唑啉-2-甲酰胺(0.028克,0.07毫摩尔,42％)。1H NMR(400MHz,DMSO)9.62(s,1H),9.31(t,J＝3.9Hz,1H),8.08-8.00(m,2H),8.00-7.92(m,1H),7.85(d,J＝5.1Hz,1H),7.29(d,J＝5.0Hz,1H),4.82-4.70(m,1H),4.70-3.60(br,4H),2.56(s,3H),2.40-2.20(br,2H)；MS:(ES)m/z计算C19H18N8O[M+H]+375.2,实测375.
实施例85：(S)-N-(1-(咪唑并[1,2-a]吡嗪-8-基)吡咯烷-3-基)-6-甲基喹唑啉-2-甲酰胺的合成
向1毫升DMSO中的6-甲基喹唑啉-2-羧酸(0.040克,0.21毫摩尔,1.2eq)和(S)-1-(咪唑并[1,2-a]吡嗪-8-基)吡咯烷-3-胺(0.49克,0.18毫摩尔,1eq)的溶液中加入三乙胺(0.10毫升,0.7毫摩尔,4eq)和HATU(0.075克,0.20毫摩尔,1.1eq)。室温搅拌1小时后，浓缩混合物并通过HPLC纯化从而得到(S)-N-(1-(咪唑并[1,2-a]吡嗪-8-基)吡咯烷-3-基)-6-甲基喹唑啉-2-甲酰胺(0.057克,0.15毫摩尔,86％).1H NMR(400MHz,CD3OD)9.48(s,1H),8.02(d,J＝1.6Hz,2H),7.98-7.88(m,3H),7.78(s,1H),7.17(d,J＝5.8Hz,1H),5.00-3.80(br,4H),2.60(s,3H),2.65-2.40(br,2H)；MS:(ES)m/z计算C20H19N7O[M+H]+374.2,实测374.
实施例86：2-(4-氯-2-甲酰基-苯胺基)-2-氧-乙酸乙酯的合成
在0℃，向1.6毫升DCM中的2-氨基-5-氯-苯甲醛(0.10克,0.65毫摩尔,1eq)的溶液中加入氯乙酸乙酯(0.09毫升,0.85毫摩尔,1.3eq)和吡啶(0.16毫升,2.0毫摩尔,3eq)。室温搅拌1小时后，用水淬灭反应并用乙酸乙酯萃取。采用10％柠檬酸、之后用饱和碳酸氢钠洗涤有机层，然后用硫酸钠干燥并浓缩。在硅胶柱色谱(hex:EtoAc 3:2)上纯化残留物从而得到2-(4-氯-2-甲酰基-苯胺基)-2-氧-乙酸乙酯(0.14克,0.55毫摩尔,84％)。
实施例87：6-氯喹唑啉-2-羧酸乙酯的合成
向5.5毫升乙酸中的2-(4-氯-2-甲酰基-苯胺基)-2-氧-乙酸乙酯(0.14克,0.55毫摩尔,1eq)的溶液中加入乙酸铵(0.42克,5.4毫摩尔,10eq)。115℃加热1小时后，浓缩混合物然后用水稀释并用乙酸乙酯萃取。浓缩有机层并通过硅胶柱色谱(hex:EtoAc 3:2)纯化残留物从而获得6-氯喹唑啉-2-羧酸乙酯(0.11克,0.48毫摩尔,88％)。
实施例88：(S)-3-(6-氯喹唑啉-2-甲酰胺基)吡咯烷-1-羧酸叔丁酯的合成
向0.42毫升NMP的6-氯喹唑啉-2-羧酸乙酯(0.200克,0.85毫摩尔,1eq)的溶液中加入(S)-3-氨基吡咯烷-1-羧酸叔丁酯(0.16克,0.86毫摩尔,1eq)和二异丙基乙胺(0.6毫升,3.4毫摩尔,4eq)。在150℃搅拌20h，浓缩混合物并通过硅胶快速色谱纯化从而提供(S)-3-(6-氯喹唑啉-2-甲酰胺基)吡咯烷-1-羧酸叔丁酯(0.08克,0.21毫摩尔,25％)。
实施例89：(S)-6-氯-N-(1-(吡咯[1,2-a]吡嗪-1-基)吡咯烷-3-基)喹唑啉-2-甲酰胺的合成
向1毫升p-二氧六环中的(S)-3-(6-氯喹唑啉-2-甲酰胺基)吡咯烷-1-羧酸叔丁酯(0.086克,0.23毫摩尔,1eq)的溶液中加入二氧六环(0.29毫升,1.2毫摩尔,5eq)中的4.0MHCl溶液。在60℃搅拌1小时，浓缩混合物从而提供(S)-6-氯-N-(吡咯烷-3-基)喹唑啉-2-甲酰胺，其不需进一步纯化继续使用。
向0.16毫升二异丙基乙胺的溶液中加入1-氯吡咯[1,2-a]吡嗪(0.047克,0.31毫摩尔)，随后加入1滴1-丁基-3-甲基咪唑四氟硼酸盐。在90℃加热反应20h。通过HPLC纯化残留物从而得到(S)-6-氯-N-(1-(吡咯[1,2-a]吡嗪-1-基)吡咯烷-3-基)喹唑啉-2-甲酰胺(0.05克,0.013毫摩尔,6％).1H NMR(400MHz,CD3OD)9.60(s,1H),8.26(s,1H),8.17(d,J＝9.1Hz,1H),8.07(dd,J＝1.8,9.1Hz,1H),7.76(d,J＝1.5Hz,1H),7.72(d,J＝5.8Hz,1H),7.57(s,1H),6.93(m,1H),6.85(d,J＝5.8Hz,1H),5.06-4.84(m,1H),4.82-3.60(br,4H),2.65-2.40(br,2H)；MS:(ES)m/z计算C20H17ClN6O[M+H]+393.2,实测393.
实施例90：(S)-5-甲基-N-(1-(吡咯[1,2-a]吡嗪-1-基)吡咯烷-3-基)嘧啶-2-甲酰胺的合成
向1毫升DMSO中的5-甲基嘧啶-2-羧酸(0.03克,0.22毫摩尔,1eq)和(S)-1-(吡咯[1,2-a]吡嗪-1-基)吡咯烷-3-胺(0.060克,0.22毫摩尔,1eq)的溶液中加入三乙胺(0.12毫升,0.86毫摩尔,4eq)和HATU(0.09克,0.24毫摩尔,1.1eq)。室温搅拌1小时后，浓缩混合物并通过HPLC纯化从而得到(S)-5-甲基-N-(1-(吡咯[1,2-a]吡嗪-1-基)吡咯烷-3-基)嘧啶-2-甲酰胺(0.029克,0.09毫摩尔,41％).1H NMR(400MHz,CD3OD)8.75(s,2H),7.76(s,1H),7.71(d,J＝5.5Hz,1H),7.54(s,1H),6.91(s,1H),6.85(d,J＝5.8Hz,1H),5.00-3.60(br,5H),2.65-2.30(br,2H),2.40(s,3H)；MS:(ES)m/z计算C17H18N6O[M+H]+323.2,实测323.
实施例91：(S)-N-(1-(吡咯[1,2-a]吡嗪-1-基)吡咯烷-3-基)-5-乙烯基嘧啶-2-甲酰胺的合成
向1毫升DMF中的(S)-5-溴-N-(1-(吡咯[1,2-a]吡嗪-1-基)吡咯烷-3-基)嘧啶-2-甲酰胺(0.10克,0.26毫摩尔,1eq)的溶液中加入4,4,5,5-四甲基-2-乙烯基-1,3,2-二氧杂环戊硼烷(0.13克,0.84毫摩尔,3.2eq)，随后加入0.2毫升水中的K2CO3(0.18克,1.3毫摩尔,5eq)和Pd(dppf)Cl2(0.02克,0.02毫摩尔,0.1eq)。在120℃加热1小时后，浓缩混合物并通过硅胶柱色谱(EtoAc:MeOH 1:1)、随后通过HPLC纯化从而得到(S)-N-(1-(吡咯[1,2-a]吡嗪-1-基)吡咯烷-3-基)-5-乙烯基嘧啶-2-甲酰胺(0.040克,0.12毫摩尔,46％)。
实施例92：(S)-5-乙基-N-(1-(吡咯[1,2-a]吡嗪-1-基)吡咯烷-3-基)嘧啶-2-甲酰胺的合成
向1毫升MeOH中的(S)-N-(1-(吡咯[1,2-a]吡嗪-1-基)吡咯烷-3-基)-5-乙烯基嘧啶-2-酰胺(0.04克,0.12毫摩尔,1eq)的溶液中加入10％Pd/C(0.013克,0.01毫摩尔,0.1eq)。反应混合物装备H2气球并在室温搅拌1小时。过滤混合物并通过HPLC纯化从而得到(S)-5-乙基-N-(1-(吡咯[1,2-a]吡嗪-1-基)吡咯烷-3-基)嘧啶-2-甲酰胺(0.009克,0.25毫摩尔,22％).1H NMR(400MHz,CD3OD)8.80(s,2H),7.76(m,1H),7.71(d,J＝5.8Hz,1H),7.54(s,1H),6.92(dd,J＝2.6,4.4Hz,1H),6.84(d,J＝5.5Hz,1H),5.00-3.60(br,5H),2.81(q,J＝7.4Hz,2H),2.65-2.30(br,2H),1.33(t,J＝7.4Hz,3H)；MS:(ES)m/z计算C17H18N6O[M+H]+337.2,实测337.
实施例93：(S)-5-环丙基-N-(1-(吡咯[1,2-a]吡嗪-1-基)吡咯烷-3-基)嘧啶-2-甲酰胺的合成
向2毫升甲苯中的(S)-5-溴-N-(1-(吡咯[1,2-a]吡嗪-1-基)吡咯烷-3-基)嘧啶-2-甲酰胺(0.25克,0.65毫摩尔,1eq)的溶液中加入2-环丙基-4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂环戊硼烷(0.16克,1.86毫摩尔,2.8eq)，之后加入PCy3(0.033克,0.11毫摩尔,0.2eq)、0.1毫升水中的K3PO4(0.48克,2.3毫摩尔,3.5eq)和Pd(OAc)2(0.013克,0.06毫摩尔,0.1eq)。120℃加热1小时后，过滤混合物并通过HPLC纯化从而得到(S)-5-环丙基-N-(1-(吡咯[1,2-a]吡嗪-1-基)吡咯烷-3-基)嘧啶-2-甲酰胺(0.009克,0.026毫摩尔,4％).1H NMR(400MHz,CD3OD)8.64(s,2H),7.76(m,1H),7.71(d,J＝5.4Hz,1H),7.54(s,1H),6.92(dd,J＝2.6,4.4Hz,1H),6.84(d,J＝5.5Hz,1H),5.00-3.60(br,5H),2.65-2.30(br,2H),2.07-2.02(m,1H),1.23-1.18(m,2H),0.96-0.91(m,2H)；MS:(ES)m/z计算C19H20N6O[M+H]+349.2,实测349.
实施例94：(S)-5-(4-氟苯基)-N-(1-(吡咯[1,2-a]吡嗪-1-基)吡咯烷-3-基)嘧啶-2-甲酰胺的合成
向1.8毫升DMF中的(S)-5-溴-N-(1-(吡咯[1,2-a]吡嗪-1-基)吡咯烷-3-基)嘧啶-2-甲酰胺(0.036克,0.093毫摩尔,1eq)的溶液中加入(4-氟苯基)硼酸(0.10克,0.71毫摩尔,7.7eq)，随后加入0.2毫升水中的K2CO3(0.18克,1.3毫摩尔,14eq)和Pd(dppf)Cl2(0.02克,0.03毫摩尔,0.3eq)。120℃加热1小时后，过滤混合物并通过HPLC纯化从而得到(S)-5-(4-氟苯基)-N-(1-(吡咯[1,2-a]吡嗪-1-基)吡咯烷-3-基)嘧啶-2-甲酰胺(0.014克,0.035毫摩尔,37％).1H NMR(400MHz,CD3OD)9.17(s,2H),7.83(m,3H),7.71(d,J＝5.4Hz,1H),7.56(s,1H),7.31(t,J＝8.5Hz,2H),6.92(s,1H),6.85(d,J＝5.9Hz,1H),5.00-3.60(br,5H),2.65-2.30(br,2H)；MS:(ES)m/z计算C22H19FN6O[M+H]+403.2,实测403.
实施例95：(S)-5-(丙-1-烯-2-基)-N-(1-(吡咯[1,2-a]吡嗪-1-基)吡咯烷-3-基)嘧啶-2-甲酰胺的合成
向(S)-5-溴-N-(1-(吡咯[1,2-a]吡嗪-1-基)吡咯烷-3-基)嘧啶-2-甲酰胺(0.075克,0.19毫摩尔,1eq)在1.8毫升DMF的溶液中加入4,4,5,5-四甲基-2-(丙-1-烯-2-基)-1,3,2-二氧杂环戊硼烷(0.10克,0.6毫摩尔,3eq)，随后加入0.2毫升水中的K2CO3(0.14克,0.99毫摩尔,5eq)和Pd(dppf)Cl2(0.02克,0.02毫摩尔,0.1eq)。120℃加热2小时后，过滤混合物，浓缩并用于下一步骤。
实施例96：(S)-5-异丙基-N-(1-(吡咯[1,2-a]吡嗪-1-基)吡咯烷-3-基)嘧啶-2-甲酰胺的合成
向1毫升甲醇中的(S)-5-(丙-1-烯-2-基)-N-(1-(吡咯[1,2-a]吡嗪-1-基)吡咯烷-3-基)嘧啶-2-甲酰胺(0.090克,0.26毫摩尔,1eq)的溶液中加入10％Pd/C(0.027克,0.03毫摩尔,0.1eq)。反应混合物装备H2气球并在室温搅拌1小时。过滤混合物并通过HPLC纯化从而得到(S)-5-异丙基-N-(1-(吡咯[1,2-a]吡嗪-1-基)吡咯烷-3-基)嘧啶-2-甲酰胺(0.048克,0.14毫摩尔,53％).1H NMR(400MHz,CD3OD)8.81(s,2H),7.76(s,1H),7.71(d,J＝5.8Hz,1H),7.55(s,1H),6.92(s,1H),6.84(d,J＝5.9Hz,1H),5.00-3.60(br,5H),3.18-3.00(m,1H),2.65-2.30(br,2H),1.36(d,J＝7.0Hz,6H)；MS:(ES)m/z计算C19H22N6O[M+H]+351.2,实测351.
实施例97：1-(4-氟苯基)吡唑-3-羧酸乙酯的合成
向15毫升甲苯中的1-氟-4-碘-苯(1.47克,6.6毫摩尔,1.3eq)和1H-吡唑-3-羧酸乙酯(0.71克,5.1毫摩尔,1eq)的溶液中加入CuI(0.19克,1.0毫摩尔,0.2eq),反式-N,-N-二甲基环己烷1,2-二胺(0.4毫升,2.5毫摩尔,0.2eq)和碳酸钾(1.4克,10毫摩尔,2eq)。在110℃加热反应混合物2d然后过滤并浓缩。通过硅胶柱色谱(hex:EtoAc 4:1)纯化残留物从而提供1-(4-氟苯基)吡唑-3-羧酸乙酯(0.92克,3.9毫摩尔,77％)。
实施例98：1-(4-氟苯基)吡唑-3-羧酸的合成
向18毫升EtOH/H2O(1.5:1)中的1-(4-氟苯基)吡唑-3-羧酸乙酯(0.92克,3.9毫摩尔,1eq)的溶液中加入NaOH(0.47克,11.8毫摩尔,3eq)。在50℃加热反应混合物1h，然后用水淬灭并用乙酸乙酯萃取。浓缩合并的有机层并通过硅胶柱色谱(EtoAc:MeOH 3:1)纯化从而得到1-(4-氟苯基)吡唑-3-羧酸(0.42克,2.0毫摩尔,52％)。
实施例99：(S)-1-(4-氟苯基)-N-(1-(8-甲基吡咯[1,2-a]吡嗪-1-基)吡咯烷-3-基)-1H-吡唑-3-甲酰胺的合成
向1毫升DCM中的1-(4-氟苯基)-1H-吡唑-3-羧酸(0.04克,0.19毫摩尔,1.5eq)的溶液中加入(S)-1-(8-甲基吡咯[1,2-a]吡嗪-1-基)吡咯烷-3-胺(0.036克,0.13毫摩尔,1eq)、丙基磷酸酐(0.3毫升,0.47毫摩尔,2.5eq)和N-甲基吗啉(0.15毫升,1.36毫摩尔,10.5eq)。室温搅拌反应混合物1h，然后用水淬灭并用乙酸乙酯萃取。浓缩合并的有机层并通过HPLC纯化从而得到(S)-1-(4-氟苯基)-N-(1-(8-甲基吡咯[1,2-a]吡嗪-1-基)吡咯烷-3-基)-1H-吡唑-3-甲酰胺(0.030克,0.074毫摩尔,57％).1H NMR(400MHz,CDCCl3)7.91(d,J＝7.3Hz,1H),7.82(s,1H),7.68(dd,J＝4.4,8.8Hz,2H),7.33(d,J＝4.8Hz,1H),7.19(t,J＝8.8Hz,3H),7.00(m,2H),6.50(s,1H),4.75(s,1H),3.90-3.56(m,4H),2.57(s,3H),2.42-2.38(m,1H),2.02-1.80(m,1H)；MS:(ES)m/z计算C22H21FN6O[M+H]+405.2,实测405.
实施例100：(S)-N-(1-([1,2,4]三唑并[4,3-a]吡嗪-8-基)吡咯烷-3-基)-1-苯基-1H-1,2,4-三唑-3-甲酰胺的合成
a)将二乙基异丙胺(3毫升)中的8-氯-[1,2,4]三唑并[4,3-a]吡嗪(620毫克,4.0毫摩尔)和(S)-吡咯烷-3-基氨基甲酸叔丁酯(1.2克,6.5毫摩尔)的混合物加热至120℃2小时。冷却至室温后，采用EtOAc中10％MeOH稀释混合物并采用饱和KH2PO4和NaHCO3水溶液洗涤，随后用盐水洗涤。真空浓缩有机层并通过快速色谱(SiO2,2to 5％MeOH，CH2Cl2中，作为洗脱液)纯化残留物从而获得所需化合物，为泡沫(1.15克,95％产率,直接用于下一步骤)。MS:(ES)m/z 305.2(M+H+).
b)在室温，以上Boc-胺溶于CH2Cl2(4毫升)和MeOH(3毫升)，随后加入二氧六环(9毫升,36毫摩尔)中的4N HCl。室温搅拌混合物2h。采用EtOAc稀释得到的悬浮液。过滤和晾干得到所需化合物，为灰白色固体(1.05克,定量的,直接用于下一步骤).MS:(ES)m/z 205.1(M+H+).
c)向DMF(5毫升)中的以上(S)-1-([1,2,4]三唑并[4,3-a]吡嗪-8-基)吡咯烷-3-胺盐酸盐(90毫克,0.32毫摩尔)、1-苯基-1H-1,2,4-三唑-3-羧酸(58毫克,0.30毫摩尔)的悬浮液中加入二乙基异丙胺(650毫克,5毫摩尔)，随后加入HATU(120毫克,0.31毫摩尔)。室温搅拌得到的溶液1h。采用乙酸乙酯稀释反应混合物，用KH2PO4和NaHCO3饱和水溶液洗涤，随后用盐水洗涤。真空浓缩有机层，通过反相HPLC(乙腈-H2O，含0.1％TFA，作为洗脱液)纯化残留物从而获得23毫克标题化合物(20％产率)，为白色固体。1H NMR(400MHz,d6-DMSO)δ2.10-2.38(两组m,2H),3.50-4.60(br,4H),4.65(m,1H),7.29(d,J＝4.4Hz,1H),7.46(t,J＝7.3Hz,1H),7.59(t,J＝7.3Hz,2H),7.75(d,J＝4.7Hz,1H),7.90(d,J＝8.0Hz,2H),9.00(d,J＝7.0H,1H),9.20(s,1H),9.40(s,1H).MS:(ES)m/z计算C18H17N9O[M+H]+376.2,实测376.2.
实施例101：(S)-N-(1-([1,2,4]三唑并[4,3-a]吡嗪-8-基)吡咯烷-3-基)-1-(4-氟苯基)-1H-1,2,4-三唑-3-甲酰胺的合成
向DMF(5毫升)中的(S)-1-([1,2,4]三唑并[4,3-a]吡嗪-8-基)吡咯烷-3-胺盐酸盐(63毫克,0.23毫摩尔)、1-(4-氟苯基)-1H-1,2,4-三唑-3-羧酸(42毫克,0.2毫摩尔)的悬浮液中加入二乙基异丙胺(650毫克,5毫摩尔)，随后加入HATU(76毫克,0.2毫摩尔)。室温搅拌得到的溶液1h。采用乙酸乙酯稀释反应混合物，用KH2PO4和NaHCO3饱和水溶液洗涤，随后用盐水洗涤。真空浓缩有机层，通过反相HPLC(乙腈-H2O，含0.1％TFA，作为洗脱液)纯化残留物从而获得32毫克标题化合物(40％产率)，为白色固体.MS:(ES)m/z实测394.2.
实施例102：(S)-N-(1-([1,2,4]三唑并[4,3-a]吡嗪-8-基)吡咯烷-3-基)-1-(4-氟苯基)-1H-吡唑-3-甲酰胺的合成
向DMF(5毫升)中的(S)-1-([1,2,4]三唑并[4,3-a]吡嗪-8-基)吡咯烷-3-胺盐酸盐(94毫克,0.34毫摩尔)、1-(4-氟苯基)-1H-吡唑-3-羧酸(63毫克,0.3毫摩尔)的悬浮液中加入二乙基异丙胺(650毫克,5毫摩尔)，随后加入HATU(120毫克,0.31毫摩尔)。室温搅拌得到的溶液1h。采用乙酸乙酯稀释反应混，随后加入HATU(120毫克,0.31毫摩尔)。室温搅拌得到的溶液1h。采用乙酸乙酯稀释反应混合物，用饱和KH2PO4和NaHCO3水溶液洗涤，随后用盐水洗涤。真空浓缩有机层，通过反相HPLC(乙腈-H2O，含0.1％TFA，作为洗脱液)纯化残留物从而获得23毫克标题化合物(20％产率)，为白色固体向DMF(5毫升)中的合物，用KH2PO4和NaHCO3饱和水溶液洗涤，随后用盐水洗涤。真空浓缩有机层，通过反相HPLC(乙腈-H2O，含0.1％TFA，作为洗脱液)纯化残留物从而获得50毫克标题化合物(42％产率)，为白色固体。MS:(ES)m/z实测393.2.
实施例103：(S)-N-(1-([1,2,4]三唑并[4,3-a]吡嗪-8-基)吡咯烷-3-基)-1-苯基-1H-咪唑-4-甲酰胺的合成
向DMF(5毫升)中的(S)-1-([1,2,4]三唑并[4,3-a]吡嗪-8-基)吡咯烷-3-胺盐酸盐(109毫克,0.4毫摩尔)和1-苯基-1H-咪唑-4-羧酸(76毫克,04毫摩尔)的悬浮液中加入二乙基异丙胺(650毫克,5毫摩尔)，随后加入HATU(160毫克,0.41毫摩尔)。室温搅拌得到的溶液1h。采用乙酸乙酯稀释反应混合物，用KH2PO4和NaHCO3饱和水溶液洗涤，随后用盐水洗涤。真空浓缩有机层，通过反相HPLC(乙腈-H2O，含0.1％TFA，作为洗脱液)纯化残留物从而获得100毫克标题化合物(67％产率)，为白色固体。MS:(ES)m/z实测375.1.
实施例104：(S)-N-(1-([1,2,4]三唑并[4,3-a]吡嗪-8-基)吡咯烷-3-基)-5-异丙基嘧啶-2-甲酰胺的合成
a)向DMF(5毫升)和水(1毫升)中的5-溴嘧啶-2-羧酸乙酯(700毫克,3毫摩尔)、4,4,5,5-四甲基-2-(丙-1-烯-2-基)-1,3,2-二氧杂环戊硼烷(1.5克,9毫摩尔)和K2CO3(2.1克,15毫摩尔)的悬浮液中加入Pd(dppfCl2)(250毫克,0.3毫摩尔)。得到的混合物脱气(N2)2分钟然后加热至120℃1h。冷却至室温后，采用MeOH稀释反应混合物并通过硅藻土过滤。滤液直接用于下一步骤。MS:(ES)m/z 165.2(M+H+).
b)向上述滤液中加入10％Pd/C(wet,300毫克)，在氢气球下搅拌混合物过夜。滤掉固体。采用CH2Cl2稀释滤液并用1N HCl和盐水洗涤。真空浓缩有机层从而获得300毫克标题化合物(60％产率)，为浅棕色固体。MS:(ES)m/z 167.2(M+H+).
c)向DMF(5毫升)中的(S)-1-([1,2,4]三唑并[4,3-a]吡嗪-8-基)吡咯烷-3-胺盐酸盐(84毫克,0.3毫摩尔)、5-异丙基嘧啶-2-羧酸(51毫克,0.3毫摩尔)的悬浮液中加入二乙基异丙胺(650毫克,5毫摩尔)，随后加入HATU(120毫克,0.31毫摩尔)。室温搅拌得到的溶液1h。采用乙酸乙酯稀释反应混合物，用KH2PO4和NaHCO3饱和水溶液洗涤，随后用盐水洗涤。真空浓缩有机层，通过反相HPLC(乙腈-H2O，含0.1％TFA，作为洗脱液)纯化残留物从而获得6毫克标题化合物(5％产率)，为白色固体。MS:(ES)m/z实测353.1.
实施例105：(S)-N-(1-(咪唑并[1,2-a]吡嗪-8-基)吡咯烷-3-基)-5-异丙基嘧啶-2-甲酰胺的合成
向DMF(5毫升)中的(S)-1-(咪唑并[1,2-a]吡嗪-8-基)吡咯烷-3-胺盐酸盐(84毫克,0.3毫摩尔)和5-异丙基嘧啶-2-羧酸(85毫克,0.5毫摩尔)的悬浮液中加入二乙基异丙胺(650毫克,5毫摩尔)，随后加入HATU(190毫克,0.5毫摩尔)。室温搅拌得到的溶液1h。采用乙酸乙酯稀释反应混合物，用KH2PO4和NaHCO3饱和水溶液洗涤，随后用盐水洗涤。真空浓缩有机层，通过反相HPLC(乙腈-H2O，含0.1％TFA，作为洗脱液)纯化残留物从而获得35毫克标题化合物(32％产率)，为白色固体。MS:(ES)m/z实测352.1.
实施例106：(±)-N-(3-(羟甲基)-1-(吡咯[1,2-a]吡嗪-1-基)吡咯烷-3-基)-5-异丙基嘧啶-2-甲酰胺的合成
向DMF(5毫升)中的(±)-(3-氨基-1-(吡咯[1,2-a]吡嗪-1-基)吡咯烷-3-基)甲醇盐酸盐(62毫克,0.2毫摩尔)和5-异丙基嘧啶-2-羧酸(40毫克,0.22毫摩尔)的悬浮液中加入二乙基异丙胺(650毫克,5毫摩尔)，随后加入HATU(76毫克,0.2毫摩尔)。室温搅拌得到的溶液1h。采用乙酸乙酯稀释反应混合物，用KH2PO4和NaHCO3饱和水溶液洗涤，随后用盐水洗涤。真空浓缩有机层，通过反相HPLC(乙腈-H2O，含0.1％TFA，作为洗脱液)纯化残留物从而获得25毫克标题化合物(32％产率)，为白色固体。MS:(ES)m/z实测381.1.
实施例107：(S)-N-(1-([1,2,4]三唑并[1,5-a]吡嗪-8-基)吡咯烷-3-基)-1-(4-氟苯基)-1H-吡唑-3-甲酰胺的合成
a)将甲苯中2-氨基吡嗪(1.9克,20毫摩尔)和N,N-二甲基甲酰胺二甲基乙缩醛(2.62克,22毫摩尔)的混合物加热至回流6h。蒸发溶剂，残留物直接用于下一步骤。
b)向冷却在冰浴中的以上残留物的MeOH(30毫升)的溶液中加入NaOAc三水合物(3.65克,25毫摩尔)，随后缓慢加入NH2OH·HCl(1.74克,25毫摩尔)。经6小时使混合物缓慢回温至室温，然后采用DCM和MeOH中20％7N氨水稀释。过滤掉固体，真空浓缩滤液并采用EtOH研磨残留物。过滤和晾干得到所需化合物，为灰白色固体(1.9克,69％产率,直接用于下一步骤)。MS:(ES)m/z 139.1(M+H+).
c)将以上固体(1.9克,13.8毫摩尔)和PPA(15毫升)的混合物加热至90℃6小时，然后用冰水稀释并用氨水溶液和碳酸氢钠调节pH至8。然后采用CH2Cl2中的10％MeOH萃取混合物。干燥(Na2SO4)有机层，过滤并真空浓缩从而获得所需化合物，为灰白色固体(1.2克,75％产率,直接用于下一步骤)。MS:(ES)m/z 121.1(M+H+).
d)室温下，向以上固体(600毫克,5毫摩尔)在AcOH中的混合物中缓慢加入30％过氧化氢溶液(1.8毫升,19毫摩尔)。将得到的混合物加热至90℃6小时，然后倾入冰水。采用1N NaOH调节pH至8。然后采用CH2Cl2中的10％MeOH萃取混合物。干燥(Na2SO4)有机层，过滤并真空浓缩从而获得所需化合物，为泡沫(120毫克,17％产率,直接用于下一步骤)。MS:(ES)m/z 137.2.1(M+H+).
e)将以上泡沫(120毫克,0.9毫摩尔)和POCl3(5毫升)的混合物加热至120℃6小时，然后真空浓缩。采用EtOAc稀释残留物并用饱和NaHCO3水溶液洗涤。干燥(Na2SO4)有机层，过滤并真空浓缩从而获得所需化合物，为棕褐色固体(50毫克,36％产率,直接用于下一步骤)。MS:(ES)m/z 155.0(M+H+).
f)将二乙基异丙胺(2毫升)中以上8-氯-[1,2,4]三唑并[1,5-a]吡嗪(50毫克,0.32毫摩尔)和(S)-吡咯烷-3-基氨基甲酸叔丁酯(100毫克,0.53毫摩尔)的混合物加热至120℃2小时。冷却至室温后，采用10％MeOH的EtOAc溶液稀释混合物，并用KH2PO4和NaHCO3饱和水溶液洗涤，随后用盐水洗涤。真空浓缩有机层并通过快速色谱(SiO2,2-5％MeOH，CH2Cl2中，作为洗脱液)纯化残留物从而获得所需化合物，为泡沫(80毫克,82％产率,直接用于下一步骤).MS:(ES)m/z 305.2(M+H+).
g)室温下，以上Boc-胺溶于CH2Cl2(3毫升)和MeOH(1毫升)，随后加入4N HCl的二氧六环(4毫升,16毫摩尔)溶液。室温搅拌混合物2h，然后真空浓缩从而获得所需化合物，为浅黄色固体(72毫克,定量的,直接用于下一步骤).MS:(ES)m/z 205.1(M+H+).
h)向DMF(5毫升)中的以上胺盐酸盐(60毫克,0.22毫摩尔)和1-(4-氟苯基)-1H-吡唑-3-羧酸(46毫克,0.22毫摩尔)的悬浮液中加入二乙基异丙胺(650毫克,5毫摩尔)，随后加入HATU(86毫克,0.22毫摩尔)。室温搅拌得到的溶液1h。采用乙酸乙酯稀释反应混合物，用KH2PO4和NaHCO3饱和水溶液洗涤，随后用盐水洗涤。真空浓缩有机层，通过反相HPLC(乙腈-H2O，含0.1％TFA，作为洗脱液)纯化残留物从而获得28毫克标题化合物(32％产率)，为白色固体。1H NMR(400MHz,d6-DMSO)δ2.05-2.38(两组m,2H),3.60-4.58(br,4H),4.63(m,1H),6.89(d,J＝2.2Hz,1H),7.36(t,J＝6.6Hz,2H),7.29(d,J＝4.4Hz,1H),7.46(t,J＝7.3Hz,1H),7.57(d,J＝4.4Hz,1H),7.97-7.92(m,2H)(check F-coupling),8.13(d,J＝4.4Hz,1H),8.46(s,1H),8.52(d,J＝2.6Hz,1H),8.55(d,J＝7.0Hz,1H).MS:(ES)m/z计算C19H17FN8O[M+H]+393.2,实测393.
实施例108：(S)-N-(1-(咪唑并[1,2-a]吡嗪-8-基)吡咯烷-3-基)-1-苯基-1H-1,2,4-三唑-3-甲酰胺的合成
a)将二乙基异丙胺(3毫升)中的8-氯咪唑并[1,2-a]吡嗪(500毫克,3.25毫摩尔)和(S)-吡咯烷-3-基氨基甲酸叔丁酯(1.0克,5.38毫摩尔)的混合物加热至120℃3h。冷却至室温后，采用10％MeOH的EtOAc溶液稀释混合物，并用KH2PO4和NaHCO3饱和水溶液洗涤，随后用盐水洗涤。真空浓缩有机层并通过快速色谱(SiO2,2-5％MeOH，CH2Cl2中，作为洗脱液)纯化残留物从而获得所需化合物，为泡沫(985毫克,定量的,直接用于下一步骤).MS:(ES)m/z 304.1(M+H+).
b)在室温，以上Boc-胺溶于CH2Cl2(5毫升)和MeOH(3毫升)，随后加入二氧六环(9毫升,16毫摩尔)中的4N HCl。室温搅拌混合物2h。采用EtOAc稀释得到的悬浮液。过滤和晾干得到所需化合物，为灰白色固体(895毫克,定量的,直接用于下一步骤)。MS:(ES)m/z 204.1(M+H+).
c)向DMF(5毫升)中的以上(S)-1-(咪唑并[1,2-a]吡嗪-8-基)吡咯烷-3-胺盐酸盐(84毫克,0.3毫摩尔)和1-苯基-1H-1,2,4-三唑-3-羧酸(57毫克,0.3毫摩尔)的悬浮液中加入二乙基异丙胺(650毫克,5毫摩尔)，随后加入HATU(120毫克,0.31毫摩尔)。室温搅拌得到的溶液1h。采用乙酸乙酯稀释反应混合物，用KH2PO4和NaHCO3饱和水溶液洗涤，随后用盐水洗涤。真空浓缩有机层，通过硅胶快速色谱(2-5％MeOH，CH2Cl2中，作为洗脱液)，随后用反相HPLC(乙腈-H2O，含0.1％TFA，作为洗脱液)纯化残留物从而获得60毫克标题化合物(54％产率)，为白色固体。MS:(ES)m/z计算C19H18N8O[M+H]+375.2,实测375.2.
实施例109：(S)-1-(4-氟苯基)-N-(1-(咪唑并[1,2-a]吡嗪-8-基)吡咯烷-3-基)-1H-1,2,4-三唑-3-甲酰胺的合成
向DMF(5毫升)中的(S)-1-(咪唑并[1,2-a]吡嗪-8-基)吡咯烷-3-胺盐酸盐(55毫克,0.2毫摩尔)和1-(4-氟苯基)-1H-1,2,4-三唑-3-羧酸(42毫克,0.2毫摩尔)的悬浮液中加入二乙基异丙胺(650毫克,5毫摩尔)，随后加入HATU(76毫克,0.2毫摩尔)。室温搅拌得到的溶液1h。采用乙酸乙酯稀释反应混合物，用KH2PO4和NaHCO3饱和水溶液洗涤，随后用盐水洗涤。真空浓缩有机层，通过反相HPLC(乙腈-H2O，含0.1％TFA，作为洗脱液)纯化残留物从而获得45毫克标题化合物(57％产率)，为白色固体。MS:(ES)m/z实测393.1.
实施例110：(S)-1-(3-氟苯基)-N-(1-(咪唑并[1,2-a]吡嗪-8-基)吡咯烷-3-基)-1H-1,2,4-三唑-3-甲酰胺的合成
向DMF(5毫升)中的(S)-1-(咪唑并[1,2-a]吡嗪-8-基)吡咯烷-3-胺盐酸盐(84毫克,0.3毫摩尔)和1-(3-氟苯基)-1H-1,2,4-三唑-3-羧酸(63毫克,0.3毫摩尔)的悬浮液中加入二乙基异丙胺(650毫克,5毫摩尔)，随后加入HATU(120毫克,0.31毫摩尔)。室温搅拌得到的溶液1h。采用乙酸乙酯稀释反应混合物，用KH2PO4和NaHCO3饱和水溶液洗涤，随后用盐水洗涤。真空浓缩有机层，通过反相HPLC(乙腈-H2O，含0.1％TFA，作为洗脱液)纯化残留物从而获得88毫克标题化合物(75％产率)，为白色固体。MS:(ES)m/z实测393.1.
实施例111：(S)-N-(1-(咪唑并[1,2-a]吡嗪-8-基)吡咯烷-3-基)-5-苯基-1,2,4-噁二唑-3-甲酰胺的合成
a)经2小时，在-15℃向2-肟基草氨酸乙酯(ethyl 2-oximinoxamate)(1.32克,10毫摩尔)和二乙基异丙胺(4毫升,23毫摩尔)在CH2Cl2(30毫升)中的混合物中缓慢加入苯甲酰氯(1.41克,10毫摩尔)。经5小时，使混合物回温至室温，然后倾入冰水并用CH2Cl2萃取。干燥(Na2SO4)有机层，过滤并浓缩从而获得所需化合物，为白色固体(2.36克,定量的,直接用于下一步骤)。
b)将上述固体(1.2克,5毫摩尔)和吡啶(6毫升)的混合物加热至120℃10小时。溶剂蒸发后，通过硅胶快速色谱(10-25％EtOAc，己烷中，为洗脱液)纯化残留物从而获得所需化合物，为灰白色固体(900毫克,83％产率,直接用于下一步骤)。MS:(ES)m/z 219.1(M+H+).
c)向以上酯(900毫克,4.1毫摩尔)、MeOH(5毫升)、THF(5毫升)和DI H2O(5毫升)的混合物中加入LiOH一水合物(420毫克,10毫摩尔)。室温搅拌得到的混合物3小时。采用冰水稀释混合物，采用1N HCl调节pH至3，然后用CH2Cl2中的10％MeOH萃取混合物。干燥(Na2SO4)有机层，过滤并真空浓缩得到所需化合物，为灰白色固体(900毫克,83％产率,直接用于下一步骤)。MS:(ES)m/z 219.1(M+H+).
d)向DMF(5毫升)中的以上5-苯基-1,2,4-噁二唑-3-羧酸(58毫克,0.3毫摩尔)、(S)-1-([1,2,4]三唑并[1,5-a]吡嗪-5-基)吡咯烷-3-胺盐酸盐(90毫克,0.32毫摩尔)的悬浮液中加入二乙基异丙胺(650毫克,5毫摩尔)，随后加入HATU(120毫克,0.31毫摩尔)。室温搅拌得到的溶液1h。采用乙酸乙酯稀释反应混合物，用KH2PO4和NaHCO3饱和水溶液洗涤，随后用盐水洗涤。真空浓缩有机层，通过反相HPLC(乙腈-H2O，含0.1％TFA，作为洗脱液)纯化残留物从而获得26毫克标题化合物(23％产率)，为白色固体。MS:(ES)m/z实测376.2.
实施例112：(S)-1-(4-氯苯基)-N-(1-(吡咯[1,2-a]吡嗪-1-基)吡咯烷-3-基)-1H-1,2,4-三唑-3-甲酰胺的合成
a)在-5℃，向H2O(30毫升)中的4-氯苯胺(2.56克,20毫摩尔)和浓HCl(15毫升)的混合物中滴加NaNO2(1.38克,20毫摩尔)的H2O(5毫升)溶液，然后在0℃搅拌10分钟，从而形成重氮盐。
b)冰浴中，向上述混合物中缓慢加入MeOH(100毫升)和H2O(10毫升)中的异氰基乙酸乙酯(2.26克,20毫摩尔)溶液。经5小时使得混合物缓慢回温至室温，蒸发溶剂。采用CH2Cl2中的10％MeOH稀释残留物，并用饱和NaHCO3水溶液洗涤，随后用盐水洗涤。干燥(Na2SO4)有机层并减压浓缩从而获得所需化合物，为黄色固体(1.5克,29％产率,直接用于下一步骤).MS:(ES)m/z 252.2(M+H+).
c)向以上酯(1.5克,6毫摩尔)、MeOH(30毫升)、THF(50毫升)和DI H2O(15毫升)的混合物中加入LiOH一水合物(2.5克,60毫摩尔)。室温搅拌得到的混合物3小时。采用冰水稀释混合物，采用1N HCl调节pH至3，然后用CH2Cl2中的15％iPrOH萃取混合物。干燥(Na2SO4)有机层，过滤并真空浓缩得到所需化合物，为灰白色固体(900毫克,83％产率,直接用于下一步骤)。MS:(ES)m/z 219.1(M+H+).
d)向DMF(5毫升)中的以上5-苯基-1,2,4-噁二唑-3-羧酸(58毫克,0.3毫摩尔)、(S)-1-([1,2,4]三唑并[1,5-a]吡嗪-5-基)吡咯烷-3-胺盐酸盐(90毫克,0.32毫摩尔)的悬浮液中加入二乙基异丙胺(650毫克,5毫摩尔)，随后加入HATU(120毫克,0.31毫摩尔)。室温搅拌得到的溶液1h。采用乙酸乙酯稀释反应混合物，用KH2PO4和NaHCO3饱和水溶液洗涤，随后用盐水洗涤。真空浓缩有机层，通过反相HPLC(乙腈-H2O，含0.1％TFA，作为洗脱液)纯化残留物从而获得26毫克标题化合物(23％产率)，为白色固体。MS:(ES)m/z实测376.2.
实施例113：(S)-5-苯基-N-(1-(吡咯[1,2-a]吡嗪-1-基)吡咯烷-3-基)-1,2,4-噁二唑-3-甲酰胺的合成
向DMF(5毫升)中的以上(S)-1-(吡咯[1,2-a]吡嗪-1-基)吡咯烷-3-胺盐酸盐(90毫克,0.32毫摩尔)和5-苯基-1,2,4-噁二唑-3-羧酸(58毫克,0.3毫摩尔)的悬浮液中加入二乙基异丙胺(650毫克,5毫摩尔)，随后加入HATU(120毫克,0.31毫摩尔)。室温搅拌得到的溶液1h。采用乙酸乙酯稀释反应混合物，用KH2PO4和NaHCO3饱和水溶液洗涤，随后用盐水洗涤。真空浓缩有机层，通过硅胶快速色谱(2-5％MeOH，CH2Cl2中，作为洗脱液)，随后用反相HPLC(乙腈-H2O，含0.1％TFA，作为洗脱液)纯化残留物从而获得15毫克标题化合物(18％产率)，为白色固体。MS:(ES)m/z实测374.1.
实施例114：(S)-1-苯基-N-(1-(吡咯[1,2-a]吡嗪-1-基)吡咯烷-3-基)-1H-1,2,4-三唑-3-甲酰胺的合成
向DMF(5毫升)中的(S)-1-(吡咯[1,2-a]吡嗪-1-基)吡咯烷-3-胺盐酸盐(60毫克,0.21毫摩尔)和1-苯基-1H-1,2,4-三唑-3-羧酸(40毫克,0.21毫摩尔)的悬浮液中加入二乙基异丙胺(650毫克,5毫摩尔)，随后加入HATU(80毫克,0.21毫摩尔)。室温搅拌得到的溶液1h。采用乙酸乙酯稀释反应混合物，用KH2PO4和NaHCO3饱和水溶液洗涤，随后用盐水洗涤。真空浓缩有机层，通过反相HPLC(乙腈-H2O，含0.1％TFA，作为洗脱液)纯化残留物从而获得15毫克标题化合物(18％产率)，为白色固体。MS:(ES)m/z实测374.1.
实施例115：1-(4-氟-苯基)-1H-吡唑-3-羧酸(1-吡咯[1,2-a]吡嗪-1-基-吡咯烷-3-基)-甲酰胺的合成
将DMSO(0.5毫升)加入到1-(4-氟-苯基)-1H-吡唑-3-羧酸(41毫克,0.20毫摩尔)和1-吡咯[1,2-a]吡嗪-1-基-吡咯烷-3-基胺二盐酸盐(55毫克,0.20毫摩尔)的混合物中。向其中加入三乙胺(0.112毫升,0.80毫摩尔)，随后加入HATU(84毫克,0.22毫摩尔)。搅拌混合物30min，用二氯甲烷(1.0毫升)稀释，然后用水(3×1.0毫升)洗涤，在硫酸钠上干燥，过滤并浓缩。通过反相HPLC(10:90–95:5MeCN:H2O+0.1％TFA)纯化粗材料。冻干合并的产物馏分从而获得产物的TFA盐，为白色固体(9.5毫克,0.02毫摩尔,9％产率)。1HNMR(400MHz,CD3OD)8.26(s,1H),7.87(dd,J＝4.8,9.2Hz,2H),7.77(d,J＝2.6Hz,1H),7.71(d,J＝5.5Hz,1H),7.56(d,J＝4.4Hz,1H),7.25(t,J＝9.2Hz,2H),6.95(d,J＝2.5Hz,1H),6.92(dd,J＝2.6,4.4Hz,1H),6.84(d,J＝5.5Hz,1H),4.95-3.65(br,5H),2.58-2.30(m,2H)；MS:(ES)m/z计算C21H19FN6O[M+H]+391.2,实测391.
实施例116：2-苯基-噁唑-4-羧酸的合成
2-苯基-噁唑-4-羧酸乙基酯(500毫克,2.30毫摩尔)溶于THF(2.3毫升)和MeOH(2.3毫升)的混合物。向其中加入NaOH(10％水溶液，2.3毫升)。搅拌反应混合物2h，然后用EtOAc稀释并用1N HCl洗涤。采用EtOAc萃取水层，在Na2SO4上干燥合并的有机物，过滤并浓缩从而得到产物，为白色固体(366毫克,84％)。
实施例117：2-苯基-噁唑-4-羧酸(1-吡咯[1,2-a]吡嗪-1-基-吡咯烷-3-基)-甲酰胺的合成
将DMSO(0.5毫升)加入到2-苯基-噁唑-4-羧酸(38毫克,0.20毫摩尔)和1-吡咯[1,2-a]吡嗪-1-基-吡咯烷-3-基胺二盐酸盐(55毫克,0.20毫摩尔)的混合物中。向其中加入三乙胺(0.112毫升,0.80毫摩尔)，随后加入HATU(84毫克,0.22毫摩尔)。搅拌混合物30min，然后用二氯甲烷(1.0毫升)稀释，用水(3×1.0毫升)洗涤，在硫酸钠上干燥，过滤并浓缩从而获得粗材料。通过反相HPLC(10:90–95:5MeCN:H2O+0.1％TFA)纯化粗材料。冻干合并的产物馏分从而获得产物的TFA盐，为白色固体(27毫克,0.06毫摩尔,28％产率)。1H NMR(400MHz,CD3OD)8.76(d,J＝6.6Hz,1H),8.49(s,1H),8.10-8.06(m,2H),7.79(dd,J＝1.2,2.4Hz,1H),7.74(d,J＝5.5Hz,1H),7.59-7.50(m,4H),6.95(dd,J＝2.7,4.2Hz,1H),6.87(d,J＝5.4Hz,1H),4.95-3.65(br,5H),2.60-2.30(m,2H)；MS:(ES)m/z计算C21H19N5O2[M+H]+374.2,实测374.
实施例118：2-苯基-噻唑-4-羧酸(1-吡咯[1,2-a]吡嗪-1-基-吡咯烷-3-基)-甲酰胺的合成
将DMSO(0.5毫升)加入到2-苯基-噁唑-4-羧酸(41毫克,0.20毫摩尔)和1-吡咯[1,2-a]吡嗪-1-基-吡咯烷-3-基胺二盐酸盐(55毫克,0.20毫摩尔)的混合物中。向混合物中加入三乙胺(0.112毫升,0.80毫摩尔)，随后加入HATU(84毫克,0.22毫摩尔)。搅拌混合物30min，然后用二氯甲烷(1.0毫升)稀释，用水(3×1.0毫升)洗涤，在硫酸钠上干燥有机物，过滤并减压浓缩从而获得粗材料。通过反相HPLC(10:90–95:5MeCN:H2O+0.1％TFA)纯化粗材料。冻干合并的产物馏分从而获得产物的TFA盐，为白色固体(34毫克,0.07毫摩尔,34％产率)。1H NMR(400MHz,CD3OD)8.87(d,J＝6.7Hz,1H),8.26(s,1H),8.07-8.01(m,2H),7.79(dd,J＝1.2,2.7Hz,1H),7.74(d,J＝5.5Hz,1H),7.59(d,J＝4.3Hz,1H),7.51-7.46(m,3H),6.95(dd,J＝2.3,4.4Hz,1H),6.87(d,J＝5.5Hz,1H),4.95-3.65(br,5H),2.60-2.38(m,2H)；MS:(ES)m/z计算C21H19N5OS[M+H]+390.2,实测390.
实施例119：1-o-甲苯基-1H-吡唑-3-羧酸(1-吡咯[1,2-a]吡嗪-1-基-吡咯烷-3-基)-甲酰胺的合成
将DMSO(0.4毫升)加入到1-o-甲苯基-1H-吡唑-3-羧酸(15毫克,0.07毫摩尔)和1-吡咯[1,2-a]吡嗪-1-基-吡咯烷-3-基胺二盐酸盐(19毫克,0.07毫摩尔)的混合物中。向其中加入三乙胺(0.039毫升,0.28毫摩尔)，随后加入HATU(30毫克,0.08毫摩尔)。搅拌混合物30min，然后用二氯甲烷(1.0毫升)稀释，用水(3×1.0毫升)洗涤，在硫酸钠上干燥有机物，过滤并减压浓缩从而获得粗材料。通过反相HPLC(10:90–95:5MeCN:H2O+0.1％TFA)纯化粗材料。冻干合并的产物馏分从而获得产物的TFA盐，为白色固体(12毫克,0.02毫摩尔,34％产率).1H NMR(400MHz,CD3OD)8.62(d,J＝5.9Hz,1H),7.88(d,J＝2.5Hz,1H),7.75(s,1H),7.70(d,J＝5.9Hz,1H),7.54(d,J＝3.6Hz,1H),7.40-7.25(m,4H),6.94(d,J＝2.2Hz,1H),6.91(dd,J＝2.6,4.4Hz,1H),6.82(d,J＝5.5Hz,1H),4.95-3.65(br,5H),2.58-2.30(m,2H),2.20(s,3H)；MS:(ES)m/z计算C22H22N6O[M+H]+387.2,实测387.
实施例120：2-(4-氟-苯基)-噻唑-4-羧酸[1-(8-甲基-吡咯[1,2-a]吡嗪-1-基)-吡咯烷-3-基]-甲酰胺的合成
将DMSO(0.5毫升)加入到2-(4-氟-苯基)-噻唑-4-羧酸(31毫克,0.14毫摩尔)和1-(8-甲基-吡咯[1,2-a]吡嗪-1-基)-吡咯烷-3-基胺二盐酸盐(40毫克,0.14毫摩尔)的混合物中。向混合物中加入三乙胺(0.078毫升,0.56毫摩尔)，随后加入HATU(57毫克,0.15毫摩尔)。搅拌混合物30min，然后用二氯甲烷(1.0毫升)稀释，用水(3×1.0毫升)洗涤，在硫酸钠上干燥有机物，过滤并减压浓缩从而获得粗材料。通过反相HPLC(10:90–95:5MeCN:H2O+0.1％TFA)纯化粗材料。浓缩合并的馏分，置于CH2Cl2中，用NaHCO3洗涤，在Na2SO4上干燥，过滤并减压浓缩。然后通过快速色谱在硅胶上(CH2Cl2:MeOH梯度99:1-90:10)纯化得到的油。浓缩合并的产物馏分，然后从MeCN和1M HCl的混合物冻干从而获得产物的HCl盐，为白色固体(32毫克,0.06毫摩尔,43％产率)。1H NMR(400MHz,CD3OD)8.22(s,1H),8.09(dd,J＝5.1,8.8Hz,2H),7.67(d,J＝5.5Hz,2H),7.24(t,J＝8.8Hz,2H),6.75(d,J＝5.5Hz,2H),4.85-4.75(m,1H),4.30-4.22(m,1H),4.10-3.90(m,3H),2.64(s,3H),2.55-2.35(m,2H)；MS:(ES)m/z计算C22H20FN5OS[M+H]+422.2,实测422.
实施例121：2-(4-氟苯基)-噻唑-4-羧酸(1-吡咯[1,2-a]吡嗪-1-基-吡咯烷-3-基)-甲酰胺的合成
将DMSO(0.5毫升)加入到2-(4-氟-苯基)-噻唑-4-羧酸(56毫克,0.25毫摩尔)和1-吡咯[1,2-a]吡嗪-1-基-吡咯烷-3-基胺二盐酸盐(70毫克,0.25毫摩尔)的混合物中。向其中加入三乙胺(0.139毫升,1.0毫摩尔)，随后加入HATU(106毫克,0.28毫摩尔)。搅拌混合物30min，然后用二氯甲烷(1.0毫升)稀释，然后用水(3×1.0毫升)洗涤，在硫酸钠上干燥过滤并减压浓缩从而获得粗材料。通过反相HPLC(10:90–95:5MeCN:H2O+0.1％TFA)纯化粗材料。冻干合并的产物馏分从而获得产物的TFA盐，为黄色固体(67毫克,0.13毫摩尔,51％产率).1H NMR(400MHz,CD3OD)8.85(d,J＝6.6Hz,1H),8.23(s,1H),8.09-8.05(m,2H),7.76(s,1H),7.72(d,J＝5.9Hz,1H),7.56(s,1H),7.23(t,J＝8.8Hz,1H),6.93(dd,J＝2.5,4.4Hz,1H),6.85(d,J＝5.9Hz,1H),5.00-3.60(m,5H),2.60-2.35(m,2H)；MS:(ES)m/z计算C21H18FN5OS[M+H]+408.2,实测408.
实施例122：1-(四氢-吡喃-4-基)-1H-吡唑-3-羧酸的合成
a)在烧瓶内装入4-羟基四氢吡喃(3.00g,29.4毫摩尔)、甲烷磺酰氯(2.39毫升,30.9毫摩尔)、三乙胺(8.20毫升,58.8毫摩尔)和CH2Cl2。室温搅拌得到的混合物过夜。然后用饱和的NaHCO3(100毫升)水溶液和水(100毫升)洗涤反应混合物，在Na2SO4上干燥，过滤并减压浓缩。这样获得的粗产物不需进一步纯化使用。
b)在小瓶内装入1H-吡唑-3-羧酸乙酯(3.74克,26.7毫摩尔)、粗的甲基磺酸四氢-吡喃-4-基酯(29.4毫摩尔)、Cs2CO3(17.4克,53.4毫摩尔)和DMF(100毫升)。将反应混合物加热至80℃并搅拌过夜。然后在CH2Cl2(250毫升)和水(250毫升)之间分配反应，用水(5×250毫升)洗涤有机层，在Na2SO4上干燥，过滤并减压浓缩。通过快速色谱在硅胶上(95:5–50:50己烷:EtOAc)纯化包含2区域同分异构体的粗产物，分离后面洗脱的异构体。再次在硅胶上(85:15–60:40己烷:EtOAc)纯化从而获得纯的所需产物(1.14克,19％)。
c)1-(四氢-吡喃-4-基)-1H-吡唑-3-羧酸乙酯(1.14克,5.09毫摩尔)溶于THF(5.0毫升)和MeOH(5.0毫升)的混合物中。向其中加入NaOH(20％水溶液，5.0毫升)。搅拌反应混合物过夜，然后用EtOAc稀释并用1M NaHSO4洗涤。采用EtOAc萃取水层并在Na2SO4上干燥合并的有机物，过滤并减压浓缩从而得到产物，为白色固体(802毫克,80％)。
实施例123：1-(四氢-吡喃-4-基)-1H-吡唑-3-羧酸(1-吡咯[1,2-a]吡嗪-1-基-吡咯烷-3-基)-甲酰胺的合成
将DMSO(0.5毫升)加入到1-(四氢吡喃-4-基)-1H-吡唑-3-羧酸(31毫克,0.16毫摩尔)和1-吡咯[1,2-a]吡嗪-1-基-吡咯烷-3-基胺二盐酸盐(45毫克,0.16毫摩尔)的混合物中。向其中加入三乙胺(0.089毫升,0.64毫摩尔)，随后加入HATU(68毫克,0.18毫摩尔)。搅拌混合物30min，然后用二氯甲烷(1.0毫升)稀释，用水(3×1.0毫升)洗涤，在硫酸钠上干燥有机物，过滤并减压浓缩。通过反相HPLC(10:90–95:5MeCN:H2O+0.1％TFA)纯化粗材料。冻干合并的产物馏分从而获得产物的TFA盐，为淡黄色固体(29毫克,0.06毫摩尔,37％产率).1H NMR(400MHz,CD3OD)8.48(d,J＝6.2Hz,1H),7.78-7.70(m,3H),7.55(s,1H),6.91(dd,J＝2.5,4.4Hz,1H),6.83(d,J＝5.5Hz,1H),6.73(d,J＝2.2Hz,1H),5.00-3.60(m,8H),3.55(dt,J＝2.2,11.7Hz,2H),2.60-2.39(m,2H),2.20-1.95(m,4H)；MS:(ES)m/z计算C20H24N6O2[M+H]+381.2,实测381.
实施例124：1-(四氢-吡喃-4-基)-1H-吡唑-3-羧酸(1-[1,2,4]三唑并[4,3-a]吡嗪-8-基-吡咯烷-3-基)-甲酰胺的合成
将DMSO(0.5毫升)加入到1-(四氢吡喃-4-基)-1H-吡唑-3-羧酸(35毫克,0.18毫摩尔)和1-[1,2,4]三唑并[4,3-a]吡嗪-8-基-吡咯烷-3-基胺(50毫克,0.18毫摩尔)的混合物中。向其中加入三乙胺(0.100毫升,0.72毫摩尔)，随后加入HATU(76毫克,0.20毫摩尔)。搅拌混合物30min，然后用二氯甲烷(1.0毫升)稀释，用水(3×1.0毫升)洗涤，在硫酸钠上干燥有机物，过滤并减压浓缩。通过反相HPLC(10:90–95:5MeCN:H2O+0.1％TFA)纯化粗材料。冻干合并的产物馏分从而获得产物的TFA盐，为白色固体(16毫克,0.03毫摩尔,18％产率).1H NMR(400MHz,CD3OD)9.25(s,1H),7.85(d,J＝5.1Hz,1H),7.73(d,J＝2.6Hz,1H),7.20(d,J＝5.5Hz,1H),6.73(d,J＝2.5Hz,1H),5.00-3.60(m,8H),3.55(dt,J＝2.2,11.7Hz,2H),2.60-2.39(m,2H),2.20-1.95(m,4H)；MS:(ES)m/z计算C18H22N8O2[M+H]+383.2,实测383.
实施例125：1-(四氢-吡喃-4-基)-1H-吡唑-3-羧酸(1-咪唑并[1,2-a]吡嗪-8-基-吡咯烷-3-基)-甲酰胺的合成
将DMSO(0.5毫升)加入到1-(四氢-吡喃-4-基)-1H-吡唑-3-羧酸(35毫克,0.18毫摩尔)和1-咪唑并[1,2-a]吡嗪-8-基-吡咯烷-3-基胺二盐酸盐(50毫克,0.18毫摩尔)的混合物中。向其中加入三乙胺(0.100毫升,0.72毫摩尔)，随后加入HATU(76毫克,0.20毫摩尔)。搅拌混合物30min，然后用二氯甲烷(1.0毫升)稀释，用水(3×1.0毫升)洗涤，在硫酸钠上干燥有机物，过滤并减压浓缩。通过反相HPLC(10:90–95:5MeCN:H2O+0.1％TFA)纯化粗材料。冻干合并的产物馏分从而获得产物的TFA盐，为淡黄色油(35毫克,0.07毫摩尔,39％产率).1H NMR(400MHz,CD3OD)8.02(s,1H),7.90(d,J＝5.9Hz,1H),7.79(s,1H),7.73(d,J＝2.5Hz,1H),7.14(d,J＝5.5Hz,1H),6.72(d,J＝2.6Hz,1H),5.00-3.70(m,8H),3.55(dt,J＝2.2,11.7Hz,2H),2.60-2.30(m,2H),2.20-1.95(m,4H)；MS:(ES)m/z计算C19H23N7O2[M+H]+382.2,实测382.
实施例126：2-o-甲苯基噁唑-4-羧酸(1-吡咯[1,2-a]吡嗪-1-基-吡咯烷-3-基)-甲酰胺的合成
a)在烧瓶内装入2-氯噁唑-4-羧酸乙酯(500毫克,2.85毫摩尔)、2-甲基苯硼酸(387毫克,2.85毫摩尔)、Pd(PPh3)4(132毫克,0.114毫摩尔)、K2CO3(787毫克,5.7毫摩尔)和甲苯(29毫升)。在氮气流下反应混合物脱气，然后加热至90℃ 1h。接着采用EtOAc稀释反应并用1M NaOH水溶液洗涤。在Na2SO4上干燥有机层，过滤并减压浓缩。通过快速色谱在硅胶上(己烷:EtOAc)纯化粗材料从而获得产物与2-氯噁唑-4-羧酸乙酯的2:1混合物(360毫克)，不需进一步纯化继续使用。
b)2-o-甲苯基-噁唑-4-羧酸乙酯与-氯噁唑-4-羧酸乙酯(360毫克)的2:1的混合物溶于THF(1.0毫升)和MeOH(1.0毫升)的混合物中。向其中加入NaOH(20％水溶液，1.0毫升)。搅拌反应混合物过夜，然后用EtOAc(50毫升)稀释并用1M NaHSO4(50毫升)洗涤。采用EtOAc(2×50毫升)萃取水层并在Na2SO4上干燥合并的有机物，过滤并浓缩从而获得产物与2-氯-噁唑-4-羧酸的2:1混合物(360毫克)。
c)步骤b获得的酸的2:1的混合物(37毫克)溶于DMSO(0.5毫升)，加入1-吡咯[1,2-a]吡嗪-1-基-吡咯烷-3-基胺二盐酸盐(50毫克,0.18毫摩尔)。向其中加入三乙胺(0.100毫升,0.72毫摩尔)，随后加入HATU(76毫克,0.20毫摩尔)。搅拌混合物30min，然后用二氯甲烷(1.0毫升)稀释，用水(3×1.0毫升)洗涤，在硫酸钠上干燥，过滤并减压浓缩从而获得粗材料。通过反相HPLC(10:90–95:5MeCN:H2O+0.1％TFA)纯化粗材料。冻干合并的产物馏分从而获得产物的TFA盐，为黄色固体(26毫克,0.05毫摩尔,29％产率).1HNMR(400MHz,CD3OD)8.61(d,J＝6.2Hz,1H),8.49(s,1H),7.94(d,J＝7.7Hz,1H),7.76(d,J＝1.1Hz,1H),7.71(d,J＝5.4Hz,1H),7.56(d,J＝2.9Hz,1H),7.40-7.26(m,3H),6.92(dt,J＝1.8,2.6Hz,1H),6.83(d,J＝5.5Hz,1H),5.00-3.60(m,5H),2.66(s,3H),2.60-2.38(m,2H)；MS:(ES)m/z计算C22H21N5O2[M+H]+388.2,实测388.
实施例127：2-苯基噁唑-4-羧酸(1-咪唑并[1,2-a]吡嗪-8-基-吡咯烷-3-基)-甲酰胺的合成
将DMSO(0.5毫升)加入到2-苯基噁唑-4-羧酸(42毫克,0.22毫摩尔)和1-咪唑并[1,2-a]吡嗪-8-基-吡咯烷-3-基胺二盐酸盐(60毫克,0.22毫摩尔)的混合物中。向其中加入三乙胺(0.123毫升,0.88毫摩尔)，随后加入HATU(91毫克,0.24毫摩尔)。搅拌混合物30min，然后用二氯甲烷(1.0毫升)稀释，用水(3×1.0毫升)洗涤，在硫酸钠上干燥，过滤并减压浓缩。通过反相HPLC(10:90–95:5MeCN:H2O+0.1％TFA)纯化粗材料。冻干合并的产物馏分从而获得产物的TFA盐，为白色固体(62毫克,0.13毫摩尔,58％产率).1H NMR(400MHz,CD3OD)8.71(d,J＝6.3Hz,1H),8.46(s,1H),8.06-8.02(m,3H),7.91(d,J＝5.5Hz,1H),7.80(s,1H),7.49(m,3H),7.15(d,J＝5.9Hz,1H),5.00-3.80(m,5H),2.60-2.38(m,2H)；MS:(ES)m/z计算C20H18N6O2[M+H]+375.2,实测375.
实施例128：2-苯基噁唑-4-羧酸(1-[1,2,4]三唑并[4,3-a]吡嗪-8-基-吡咯烷-3-基)-甲酰胺的合成
将DMSO(0.5毫升)加入到2-苯基噁唑-4-羧酸(42毫克,0.22毫摩尔)和1-[1,2,4]三唑并[4,3-a]吡嗪-8-基-吡咯烷-3-基胺(60毫克,0.22毫摩尔)的混合物中。向其中加入三乙胺(0.123毫升,0.88毫摩尔)，随后加入HATU(91毫克,0.24毫摩尔)。搅拌混合物30min，然后用二氯甲烷(1.0毫升)稀释，用水(3×1.0毫升)洗涤，在硫酸钠上干燥有机物，过滤并减压浓缩。通过反相HPLC(10:90–95:5MeCN:H2O+0.1％TFA)纯化粗材料。冻干合并的产物馏分从而获得产物的TFA盐，为白色固体(58毫克,0.12毫摩尔,54％产率).1H NMR(400MHz,CD3OD)9.26(s,1H),8.70(d,J＝5.9Hz,0.5H),8.45(s,1H),8.04(d,J＝5.5Hz,2H),7.86(d,J＝5.5Hz,1H),7.49(m,3H),7.21(d,J＝5.5Hz,1H),5.00-3.80(m,5H),2.60-2.38(m,2H)；MS:(ES)m/z计算C19H17N7O2[M+H]+376.2,实测376.
实施例129：2-苯基噻唑-4-羧酸(1-咪唑并[1,2-a]吡嗪-8-基-吡咯烷-3-基)-甲酰胺的合成
将DMSO(0.5毫升)加入到2-苯基噻唑-4-羧酸(45毫克,0.22毫摩尔)和1-咪唑并[1,2-a]吡嗪-8-基-吡咯烷-3-基胺二盐酸盐(60毫克,0.22毫摩尔)的混合物中。向其中加入三乙胺(0.123毫升,0.88毫摩尔)，随后加入HATU(91毫克,0.24毫摩尔)。搅拌混合物30min，然后用二氯甲烷(1.0毫升)稀释，用水(3×1.0毫升)洗涤，在硫酸钠上干燥有机物，过滤并减压浓缩。通过反相色谱(10:90–95:5MeCN:H2O+0.1％TFA)纯化粗材料。冻干合并的产物馏分从而获得产物的TFA盐，为淡黄色固体(74毫克,0.15毫摩尔,67％产率).1H NMR(400MHz,CD3OD)8.82(d,J＝6.3Hz,1H),8.23(s,1H),8.03-8.01(m,3H),7.92-7.90(m,1H),7.88(s,1H),7.48-7.45(m,3H),7.15(d,J＝5.8Hz,1H),4.98-3.80(m,5H),2.60-2.40(m,2H)；MS:(ES)m/z计算C20H18N6OS[M+H]+391.2,实测391.
实施例130：2-苯基噻唑-4-羧酸(1-[1,2,4]三唑并[4,3-a]吡嗪-8-基-吡咯烷-3-基)-甲酰胺的合成
将DMSO(0.5毫升)加入到2-苯基噻唑-4-羧酸(45毫克,0.22毫摩尔)和1-[1,2,4]三唑并[4,3-a]吡嗪-8-基-吡咯烷-3-基胺二盐酸盐(60毫克,0.22毫摩尔)的混合物中。向其中加入三乙胺(0.123毫升,0.88毫摩尔)，随后加入HATU(91毫克,0.24毫摩尔)。搅拌混合物30min，然后用二氯甲烷稀释，用水(3×1.0毫升)洗涤，在硫酸钠上干燥，过滤并减压浓缩。采用MeCN研磨粗材料，过滤并采用MeCN洗涤固体。将得到的固体置于MeCN和1M HCl中，然后冻干从而获得产物的HCl盐，为白色固体(17毫克,0.04毫摩尔,18％产率).1H NMR(400MHz,CD3OD)9.31(s,1H),8.85(d,J＝3.6Hz,1H),8.24(s,1H),8.02(d,J＝3.6Hz,2H),7.92(d,J＝5.4Hz,1H),7.47(s,3H),7.19(d,J＝5.4Hz,1H),5.00-3.80(m,5H),2.60-2.40(m,2H)；MS:(ES)m/z计算C19H17N7OS[M+H]+392.2,实测392.
实施例131：1-o-甲苯基-1H-吡唑-3-羧酸的合成
a)在烧瓶内装入2-碘甲苯(0.964毫升,7.57毫摩尔)、1H-吡唑-3-羧酸乙酯(1.00克,7.14毫摩尔)、CuI(272毫克,1.43毫摩尔)、反式-N,N’-二甲基环己烷-1,2-二胺(0.451毫升,2.86毫摩尔)和K2CO3(3.15克,22.8毫摩尔)。然后将反应混合物加热至140℃ 3h。然后在CH2Cl2和饱和的NH4Cl水溶液中分配反应并分离。采用水洗涤有机层，在Na2SO4上干燥，过滤并浓缩。通过快速色谱在硅胶上(90:10–70:30己烷:甲基叔丁基醚)纯化粗材料从而得到产物(238毫克,1.03毫摩尔,14％)，为无色油。
b)将1-o-甲苯基-1H-吡唑-3-羧酸乙酯(238毫克,1.03毫摩尔)溶于THF(2.0毫升)和MeOH(2.0毫升)的混合物中。向其中加入NaOH(20％水溶液，1.0毫升)。搅拌反应混合物2h，然后采用EtOAc稀释并用1M HCl洗涤。采用EtOAc萃取水层并在Na2SO4上干燥合并的有机物，过滤并浓缩从而得到产物，为白色固体(164毫克,0.81毫摩尔,79％)。
实施例132：1-o-甲苯基-1H-吡唑-3-羧酸(1-咪唑并[1,2-a]吡嗪-8-基-吡咯烷-3-基)-甲酰胺的合成
将DMSO(0.5毫升)加入到1-o-甲苯基-1H-吡唑-3-羧酸(44毫克,0.22毫摩尔)和1-咪唑并[1,2-a]吡嗪-8-基-吡咯烷-3-基胺二盐酸盐(60毫克,0.22毫摩尔)的混合物中。向其中加入三乙胺(0.123毫升,0.88毫摩尔)，随后加入HATU(91毫克,0.24毫摩尔)。搅拌混合物30min，然后用二氯甲烷(1.0毫升)稀释，用水(3×1.0毫升)洗涤，在硫酸钠上干燥有机物，过滤并减压浓缩。通过反相色谱(10:90–95:5MeCN:H2O+0.1％TFA)纯化粗产物。冻干合并的产物馏分从而获得产物的TFA盐，为黄色固体(29毫克,0.06毫摩尔,26％产率).1H NMR(400MHz,CD3OD)8.58(d,J＝7.3Hz,1H),8.01(d,J＝0.7Hz,1H),7.92-7.87(m,2H),7.78(d,J＝1.1Hz,1H),7.40-7.28(m,4H),7.12(d,J＝5.8Hz,1H),6.93(d,J＝2.2Hz,1H),4.94-3.80(m,5H),2.56-2.32(m,2H),2.20(s,3H)；MS:(ES)m/z计算C21H21N7O[M+H]+388.2,实测388.
实施例133：1-o-甲苯基-1H-吡唑-3-羧酸(1-[1,2,4]三唑并[4,3-a]吡嗪-8-基-吡咯烷-3-基)-甲酰胺的合成
将DMSO(0.5毫升)加入到1-o-甲苯基-1H-吡唑-3-羧酸(44毫克,0.22毫摩尔)和1-[1,2,4]三唑并[4,3-a]吡嗪-8-基-吡咯烷-3-基胺二盐酸盐(60毫克,0.22毫摩尔)的混合物中。向其中加入三乙胺(0.123毫升,0.88毫摩尔)，随后加入HATU(91毫克,0.24毫摩尔)。搅拌混合物30min，然后用二氯甲烷稀释，用水(3×1.0毫升)洗涤，在硫酸钠上干燥，过滤并减压浓缩。采用MeCN研磨粗材料，过滤并采用MeCN洗涤固体。将得到的固体置于MeCN和1M HCl中，然后冻干从而获得产物的HCl盐，为白色固体(13毫克,0.03毫摩尔,12％产率).1H NMR(400MHz,CD3OD)9.30(s,1H),7.91(d,J＝5.8Hz,1H),7.88(s,1H),7.40-7.28(m,4H),7.17(m,1H),6.95(s,1H),4.94-4.70(m,4H),4.24-3.84(m,3H),2.62-2.38(m,2H),2.20(s,3H)；MS:(ES)m/z计算C20H20N8O[M+H]+389.2,实测389.
实施例134：2-o-甲苯基-噻唑-4-羧酸的合成
a)烧瓶内装入2-甲基苯硼酸(500毫克,3.68毫摩尔)、2-溴噻唑-4-羧酸乙酯(869毫克,3.68毫摩尔)、Pd(PPh3)4(173毫克,0.150毫摩尔)、K2CO3(2M水溶液,3.68毫升,7.36毫摩尔)和甲苯(37毫升)。在氮气流下反应混合物脱气，然后加热至90℃并搅拌过夜。然后用EtOAc稀释并用1M NaOH水溶液洗涤。采用EtOAc(2×100毫升)萃取水层，在Na2SO4上干燥合并的有机层，过滤并减压浓缩。通过快速色谱在硅胶上(95:5–70:30己烷:EtOAc)纯化粗产物从而得到产物(550毫克,2.22毫摩尔,60％)，为淡黄色油。
b)2-o-甲苯基-噻唑-4-羧酸乙酯(550毫克,2.22毫摩尔)溶于THF(1.0毫升)和MeOH(1.0毫升)的混合物中。向其中加入NaOH(20％水溶液，0.444毫升)。搅拌反应混合物过夜，然后用CH2Cl2(30毫升)稀释并用1M NaHSO4(30毫升)洗涤。采用CH2Cl2(2×30毫升)萃取水层，然后采用水(1×30毫升)洗涤合并的有机层，在Na2SO4上干燥，过滤并减压浓缩从而得到产物(434毫克,1.98毫摩尔,89％)，为白色固体。
实施例135：2-o-甲苯基噻唑-4-羧酸(1-吡咯[1,2-a]吡嗪-1-基-吡咯烷-3-基)-甲酰胺的合成
将DMSO(0.5毫升)加入到2-o-甲苯基噻唑-4-羧酸(48毫克,0.22毫摩尔)和1-吡咯[1,2-a]吡嗪-1-基-吡咯烷-3-基胺二盐酸盐(60毫克,0.22毫摩尔)的混合物中。向其中加入三乙胺(0.123毫升,0.88毫摩尔)，随后加入HATU(91毫克,0.24毫摩尔)。搅拌混合物30min，用二氯甲烷(1.0毫升)稀释，然后用水(3×1.0毫升)洗涤，在硫酸钠上干燥，过滤并减压浓缩。通过反相HPLC(10:90–95:5MeCN:H2O+0.1％TFA)纯化粗材料。冻干合并的产物馏分从而获得产物的TFA盐，为黄色固体(10毫克,0.02毫摩尔,9％产率).1H NMR(400MHz,CD3OD)8.74(d,J＝6.7Hz,1H),8.34(s,1H),7.78(dd,J＝1.2,2.7Hz,1H),7.76-7.70(m,2H),7.57(d,J＝4.3Hz,1H),7.42-7.26(m,3H),6.93(dd,J＝2.8,4.7Hz,1H),6.84(d,J＝5.9Hz,1H),5.00-4.80(m,1H),4.60-3.60(br,4H),2.60-2.36(m,2H),2.55(s,3H)；MS:(ES)m/z计算C22H21N5OS[M+H]+404.2,实测404.
实施例136：2-o-甲苯基噻唑-4-羧酸(1-咪唑并[1,2-a]吡嗪-8-基-吡咯烷-3-基)-甲酰胺的合成
将DMSO(0.5毫升)加入到2-o-甲苯基噻唑-4-羧酸(48毫克,0.22毫摩尔)和1-咪唑并[1,2-a]吡嗪-8-基-吡咯烷-3-基胺二盐酸盐(60毫克,0.22毫摩尔)的混合物中。向其中加入三乙胺(0.123毫升,0.88毫摩尔)，随后加入HATU(91毫克,0.24毫摩尔)。搅拌混合物30min，然后用二氯甲烷(1.0毫升)稀释，用水(3×1.0毫升)洗涤，在硫酸钠上干燥有机物，过滤并减压浓缩。通过反相HPLC(10:90–95:5MeCN:H2O+0.1％TFA)纯化包含材料的粗产物。冻干合并的产物馏分从而获得产物的TFA盐，为黄色固体(58毫克,0.11毫摩尔,51％产率).1H NMR(400MHz,CD3OD)8.33(s,1H),8.04(d,J＝1.2Hz,1H),7.92(d,J＝5.5Hz,1H),7.81(d,J＝1.2Hz,1H),7.73(dd,J＝1.5,7.8Hz,1H),7.42-7.26(m,3H),7.16(d,J＝5.5Hz,1H),5.00-4.80(m,1H),4.60-3.60(br,4H),2.60-2.38(m,2H),2.55(s,3H)；MS:(ES)m/z计算C21H20N6OS[M+H]+405.2,实测405.
实施例137：1-(3-甲基-吡咯[1,2-a]吡嗪-1-基)-吡咯烷-3-基胺二盐酸盐的合成
a)氯丙酮(2.81毫升,35.3毫摩尔)的丙酮(50毫升)溶液滴加到2-(三氯乙酰基)吡咯(5.00克,23.5毫摩尔)、丙酮(70毫升)和K2CO3(9.74克,70.5毫摩尔)的浆液中。室温搅拌混合物过夜。然后过滤反应混合物并用丙酮洗涤。浓缩滤液并在水(100毫升)和乙酸乙酯(100毫升)之间分配残留物。分离层，采用乙酸乙酯(100毫升)萃取水层。采用水(3×100毫升)洗涤合并的有机层，在Na2SO4上干燥，过滤并减压浓缩。通过快速色谱在硅胶上采用己烷:乙酸乙酯纯化粗材料从而得到产物(2.35克,15.8毫摩尔,67％)。
b)在密封的小瓶内加热3-甲基-吡咯[2,1-c][1,4]噁嗪-1-酮(2.35克,15.8毫摩尔)、NH4OAc(5.32克,69.0毫摩尔)和AcOH(13.8毫升)的混合物至160℃48小时。真空去除溶剂，粗产物置于CH2Cl2中。采用饱和的NaHCO3洗涤，在Na2SO4上干燥，过滤并减压浓缩。通过快速色谱(硅胶，采用己烷:EtOAc)纯化获得产物(710毫克,4.79毫摩尔,35％)。
c)将POCl3(2毫升)加入到3-甲基-2H-吡咯[1,2-a]吡嗪-1-酮(710毫克,4.79毫摩尔)中，将溶液加热至105℃3h。真空浓缩反应混合物。得到的油置于CH2Cl2内，采用饱和NaHCO3水溶液洗涤，然后用水洗涤。在Na2SO4上干燥有机层，过滤并减压浓缩。通过快速色谱在硅胶上(95:5–70:30己烷:EtOAc)纯化获得产物(798毫克,4.79毫摩尔,定量的产率)，为黄色固体。
d)小瓶内装入1-氯-3-甲基吡咯[1,2-a]吡嗪(798毫克,4.79毫摩尔)、(S)-3-(Boc-氨基)吡咯烷(901毫克,4.84毫摩尔)、iPr2NEt(2.52毫升,14.52毫摩尔)和1-丁基-3-甲基-1H-咪唑四氟硼酸盐(催化剂)并加热至110℃ 15h。真空浓缩反应混合物并通过快速色谱在硅胶上(99:1–90:10CH2Cl2:MeOH)纯化从而得到产物(965毫克,3.05毫摩尔,64％)。
e)将HCl(4M，二氧六环中，3.80毫升,15.2毫摩尔)加入到[1-(3-甲基-吡咯[1,2-a]吡嗪-1-基)-吡咯烷-3-基]-氨基甲酸叔丁酯(965毫克,3.04毫摩尔)的MeOH(10毫升)溶液中。搅拌过夜然后浓缩从而得到产物(860毫克,2.97毫摩尔,98％)，为白色固体。
实施例138：1-(4-氟苯基)-1H-吡唑-3-羧酸[1-(3-甲基-吡咯[1,2-a]吡嗪-1-基)-吡咯烷-3-基]-甲酰胺的合成
将DMSO(0.5毫升)加入到1-(4-氟苯基)-1H-吡唑-3-羧酸(50毫克,0.24毫摩尔)和1-(3-甲基吡咯[1,2-a]吡嗪-1-基)-吡咯烷-3-基胺二盐酸盐(69毫克,0.29毫摩尔)的混合物中。向其中加入三乙胺(0.134毫升,0.96毫摩尔)，之后加入HATU(99毫克,0.26毫摩尔)。搅拌混合物30分钟，之后采用二氯甲烷(1.0毫升)稀释，采用水(3×1.0毫升)洗涤，在硫酸钠上干燥，过滤并减压浓缩。采用反相HPLC(10:90–95:5MeCN:H2O+0.1％TFA)纯化粗材料。冻干合并的产物馏分从而获得产物的TFA盐，为白色固体(31毫克,0.06毫摩尔,25％产率)。1H NMR(400MHz,CD3OD)8.75(d,J＝7.0Hz,1H),8.28(d,J＝2.7Hz,1H),7.88(m,2H),7.68(q,J＝1.2Hz,1H),7.52(d,J＝4.3Hz,1H),7.49(s,1H),7.27-7.22(m,2H),6.96(d,J＝2.4Hz,1H),6.87(dd,J＝2.7,4.3Hz,1H),5.00-4.80(m,1H),4.60-3.60(br,4H),2.60-2.38(m,2H),2.30(d,J＝1.1Hz,3H)；MS:(ES)m/z计算C22H21FN6O[M+H]+405.2,实测405.
实施例139：1-苯基-1H-[1,2,4]三唑-3-羧酸[1-(3-甲基吡咯[1,2-a]吡嗪-1-基)-吡咯烷-3-基]-甲酰胺的合成
将DMSO(0.5毫升)加入到1-苯基-1H-1,2,4-三唑-3-羧酸(50毫克,0.26毫摩尔)和1-(3-甲基吡咯[1,2-a]吡嗪-1-基)-吡咯烷-3-基胺二盐酸盐(74毫克,0.26毫摩尔)的混合物中。向其中加入三乙胺(0.145毫升,1.04毫摩尔)，之后加入HATU(110毫克,0.29毫摩尔)。搅拌混合物30分钟，之后采用二氯甲烷(1.0毫升)稀释，采用水(3×1.0毫升)洗涤，在硫酸钠上干燥，过滤并减压浓缩。采用反相HPLC(10:90–95:5MeCN:H2O+0.1％TFA)纯化粗材料。冻干合并的产物馏分从而获得产物的TFA盐，为棕色固体(66毫克,0.13毫摩尔,51％产率)。1H NMR(400MHz,CD3OD)9.14(s,1H),7.88(td,J＝1.2,6.2Hz,2H),7.68(q,J＝1.2Hz,1H),7.62-7.44(m,6H),6.88(dd,J＝2.3,4.3Hz,1H),5.00-4.80(m,1H),4.60-3.60(br,4H),2.60-2.38(m,2H),2.30(d,J＝1.1Hz,3H)；MS:(ES)m/z计算C21H21N7O[M+H]+388.2,实测388.
实施例140：1-苯基-1H-咪唑-4-羧酸(1-吡咯[1,2-a]吡嗪-1-基-吡咯烷-3-基)-甲酰胺的合成
将DMSO(0.5毫升)加入到1-苯基-1H-咪唑-4-羧酸(34毫克,0.18毫摩尔)和1-吡咯[1,2-a]吡嗪-1-基-吡咯烷-3-基胺二盐酸盐(50毫克,0.18毫摩尔)的混合物中。向其中加入三乙胺(0.100毫升,0.72毫摩尔)，之后加入HATU(76毫克,0.20毫摩尔)。搅拌混合物30分钟，之后采用二氯甲烷(1.0毫升)稀释，采用水(3×1.0毫升)洗涤，在硫酸钠上干燥，过滤并减压浓缩。采用反相HPLC(10:90–95:5MeCN:H2O+0.1％TFA)纯化粗材料。冻干合并的产物馏分从而获得产物的TFA盐，为淡黄色固体(49毫克,0.10毫摩尔,56％产率)。1H NMR(400MHz,CD3OD)8.23(d,J＝1.1Hz,1H),8.15(d,J＝1.6Hz,1H),7.79(dd,J＝1.2,2.8Hz,1H),7.73(d,J＝5.5Hz,1H),7.64-7.52(m,5H),7.50-7.42(m,1H),6.94(dd,J＝2.3,4.3Hz,1H),6.86(d,J＝5.5Hz,1H),5.00-4.80(m,1H),4.50-3.50(br,4H),2.58-2.48(m,1H),2.48-2.35(br,1H)；MS:(ES)m/z计算C21H20N6O[M+H]+373.2,实测373.
实施例141：2-(4-羟基哌啶-1-基)-噻唑-4-羧酸[1-(3-甲基-吡咯[1,2-a]吡嗪-1-基)-吡咯烷-3-基]-甲酰胺的合成
将DMSO(0.5毫升)加入到2-(4-羟基哌啶-1-基)-噻唑-4-羧酸(48毫克,0.21毫摩尔)和1-(3-甲基吡咯[1,2-a]吡嗪-1-基)-吡咯烷-3-基胺二盐酸盐(60毫克,0.21毫摩尔)的混合物中。向其中加入三乙胺(0.117毫升,0.84毫摩尔)，之后加入HATU(87毫克,0.23毫摩尔)。搅拌混合物30分钟，之后采用二氯甲烷(1.0毫升)稀释，采用水(3×1.0毫升)洗涤，在硫酸钠上干燥，过滤并减压浓缩。采用反相HPLC(10:90–95:5MeCN:H2O+0.1％TFA)纯化粗材料。浓缩合并的馏分，置于CH2Cl2中，采用NaHCO3洗涤，在Na2SO4上干燥，过滤并浓缩。然后通过快速色谱在硅胶上(CH2Cl2:MeOH梯度99:1-90:10)纯化得到的油。浓缩合并的产物馏分，然后从MeCN和1M HCl冻干从而获得产物的HCl盐，为黄色固体(22毫克,0.04毫摩尔,19％产率)。1H NMR(400MHz,CD3OD)7.37(s,1H),7.28(q,J＝1.2Hz,1H),7.25(s,1H),6.86(d,J＝4.3Hz,1H),6.57(dd,J＝2.7,4.3Hz,1H),5.48(s,2H),4.70-4.60(m,1H),4.22-3.78(m,8H),3.28-3.10(m,1H),2.40-2.28(m,1H),2.22-2.12(m,4H),1.96-1.88(m,2H)；1.62-1.52(m,2H)；MS:(ES)m/z计算C21H26N6O2S[M+H]+427.2,实测427.
实施例142：1-苯基-1H-咪唑-4-羧酸[1-(3-甲基-吡咯[1,2-a]吡嗪-1-基)-吡咯烷-3-基]-甲酰胺的合成
将DMSO(0.5毫升)加入到1-苯基-1H-咪唑-4-羧酸(32毫克,0.17毫摩尔)和1-(3-甲基吡咯[1,2-a]吡嗪-1-基)-吡咯烷-3-基胺二盐酸盐(50毫克,0.17毫摩尔)的混合物中。向其中加入三乙胺(0.095毫升,0.68毫摩尔)，之后加入HATU(72毫克,0.19毫摩尔)。搅拌混合物30分钟，之后采用二氯甲烷(1.0毫升)稀释，采用水(3×1.0毫升)洗涤，在硫酸钠上干燥，过滤并减压浓缩。采用反相HPLC(10:90–95:5MeCN:H2O+0.1％TFA)纯化粗材料。冻干合并的产物馏分从而获得产物的TFA盐，为浅棕色固体(33毫克,0.07毫摩尔,39％产率).1H NMR(400MHz,CD3OD)8.23(d,J＝1.6Hz,1H),8.15(d,J＝1.6Hz,1H),7.67(q,J＝1.2Hz,1H),7.62-7.45(m,6H),6.88(q,J＝2.3Hz,1H),5.00-4.80(m,1H),4.60-3.60(br,4H),2.58-2.48(m,1H),2.48-2.38(br,1H),2.30(d,J＝1.1Hz,3H)；MS:(ES)m/z计算C22H22N6O[M+H]+387.2,实测387.
实施例143：1-(4-氯苯基)-1H-吡唑-3-羧酸[1-(3-甲基-吡咯[1,2-a]吡嗪-1-基)-吡咯烷-3-基]-甲酰胺的合成
将DMSO(0.5毫升)加入到1-(4-氯苯基)-1H-吡唑-3-羧酸(38毫克,0.17毫摩尔)和1-(3-甲基吡咯[1,2-a]吡嗪-1-基)-吡咯烷-3-基胺二盐酸盐(50毫克,0.17毫摩尔)的混合物中。向其中加入三乙胺(0.095毫升,0.68毫摩尔)，之后加入HATU(72毫克,0.19毫摩尔)。搅拌混合物30分钟，之后采用二氯甲烷(1.0毫升)稀释，采用水(3×1.0毫升)洗涤，在硫酸钠上干燥，过滤并减压浓缩。采用反相HPLC(10:90–95:5MeCN:H2O+0.1％TFA)纯化粗材料。冻干合并的产物馏分从而获得产物的TFA盐，为白色固体(50毫克,0.09毫摩尔,55％产率).1H NMR(400MHz,CD3OD)8.78(d,J＝7.0Hz,0.5H),8.33(d,J＝2.7Hz,1H),7.87(td,J＝2.4,9.0Hz,2H),7.67(q,J＝1.2Hz,1H),7.51(td,J＝3.1,9.0Hz,4H),6.98(d,J＝2.8Hz,1H),6.87(q,J＝2.8,1.9Hz,1H),4.50-3.50(br,5H),2.58-2.48(m,1H),2.48-2.38(br,1H),2.30(d,J＝0.7Hz,3H)；MS:(ES)m/z计算C22H21ClN6O[M+H]+421.2,实测421.
实施例144：2-吡咯烷-1-基-噻唑-4-羧酸[1-(3-甲基-吡咯[1,2-a]吡嗪-1-基)-吡咯烷-3-基]-甲酰胺的合成
将DMSO(0.5毫升)加入到2-吡咯烷-1-基-噻唑-4-羧酸(34毫克,0.17毫摩尔)和1-(3-甲基吡咯[1,2-a]吡嗪-1-基)-吡咯烷-3-基胺二盐酸盐(50毫克,0.17毫摩尔)的混合物中。向其中加入三乙胺(0.095毫升,0.68毫摩尔)，之后加入HATU(72毫克,0.19毫摩尔)。搅拌混合物30分钟，之后采用二氯甲烷(1.0毫升)稀释，采用水(3×1.0毫升)洗涤，在硫酸钠上干燥，过滤并减压浓缩。采用反相HPLC(10:90–95:5MeCN:H2O+0.1％TFA)纯化粗材料。冻干合并的产物馏分从而获得产物的TFA盐，为微红色固体(20毫克,0.04毫摩尔,23％产率).1H NMR(400MHz,CD3OD)7.67(dd,J＝1.2,2.3Hz,1H),7.52(d,J＝4.6Hz,1H),7.49(s,1H),7.36(s,1H),6.87(dd,J＝2.7,4.7Hz,1H),5.00-4.80(m,1H),4.50-3.50(br,4H),3.50-3.40(m,3H),2.58-2.48(m,1H),2.48-2.38(br,1H),2.30(d,J＝0.7Hz,3H),2.10-2.00(m,4H)；MS:(ES)m/z计算C20H24N6OS[M+H]+397.2,实测397.
实施例145：2-苯基噁唑-4-羧酸[1-(3-甲基-吡咯[1,2-a]吡嗪-1-基)-吡咯烷-3-基]-甲酰胺的合成
将DMSO(0.5毫升)加入到2-苯基噁唑-4-羧酸(32毫克,0.17毫摩尔)和1-(3-甲基-吡咯[1,2-a]吡嗪-1-基)-吡咯烷-3-基胺二盐酸盐(50毫克,0.17毫摩尔)的混合物中。向其中加入三乙胺(0.095毫升,0.68毫摩尔)，之后加入HATU(72毫克,0.19毫摩尔)。搅拌混合物30分钟，之后采用二氯甲烷(1.0毫升)稀释，采用水(3×1.0毫升)洗涤，在硫酸钠上干燥，过滤并减压浓缩。采用反相HPLC(10:90–95:5MeCN:H2O+0.1％TFA)纯化粗材料。冻干合并的产物馏分从而获得产物的TFA盐，为浅棕色固体(42毫克,0.08毫摩尔,49％产率)。1H NMR(400MHz,CD3OD)d 8.74(d,J＝6.7Hz,1H),8.49(s,1H),8.10-8.06(m,2H),7.68(dd,J＝1.2,2.7Hz,1H),7.57-7.50(m,4H),6.88(dd,J＝2.7,4.7Hz,1H),5.00-4.80(m,1H),4.50-3.50(br,4H),2.58-2.48(m,1H),2.48-2.38(br,1H),2.31(d,J＝1.1Hz,3H)；MS:(ES)m/z计算C22H21N5O2[M+H]+388.2,实测388.
实施例146：2-苯基噻唑-4-羧酸[1-(3-甲基-吡咯[1,2-a]吡嗪-1-基)-吡咯烷-3-基]-甲酰胺的合成
将DMSO(0.5毫升)加入到2-苯基噻唑-4-羧酸(43毫克,0.21毫摩尔)和1-(3-甲基吡咯[1,2-a]吡嗪-1-基)-吡咯烷-3-基胺二盐酸盐(60毫克,0.21毫摩尔)的混合物中。向其中加入三乙胺(0.117毫升,0.84毫摩尔)，之后加入HATU(87毫克,0.23毫摩尔)。搅拌混合物30分钟，之后采用二氯甲烷(1.0毫升)稀释，采用水(3×1.0毫升)洗涤，在硫酸钠上干燥，过滤并减压浓缩。采用反相HPLC(10:90–95:5MeCN:H2O+0.1％TFA)纯化粗材料。冻干合并的产物馏分从而获得产物的TFA盐，为灰色固体(30毫克,0.06毫摩尔,28％产率)。1H NMR(400MHz,CD3OD)8.87(d,J＝6.6Hz,1H),8.26(s,1H),8.06-8.03(m,2H),7.68(dd,J＝1.2,2.7Hz,1H),7.54-7.45(m,5H),6.88(dd,J＝2.4,6.7Hz,1H),5.00-4.80(m,1H),4.50-3.50(br,4H),2.60-2.40(m,2H),2.31(d,J＝1.1Hz,3H)；MS:(ES)m/z计算C22H21N5OS[M+H]+404.2,实测404.
实施例147：1-(4-氟苯基)-1H-[1,2,4]三唑-3-羧酸[1-(3-甲基-吡咯[1,2-a]吡嗪-1-基)-吡咯烷-3-基]-甲酰胺的合成
将DMSO(0.5毫升)加入到1-(4-氟苯基)-1H-[1,2,4]三唑-3-羧酸和1-(3-甲基-吡咯[1,2-a]吡嗪-1-基)-吡咯烷-3-基胺二盐酸盐(60毫克,0.21毫摩尔)的混合物中。向其中加入三乙胺(0.150毫升,1.05毫摩尔)，之后加入HATU(87毫克,0.23毫摩尔)。搅拌混合物30分钟，之后采用二氯甲烷(1.0毫升)稀释，采用水(3×1.0毫升)洗涤，在硫酸钠上干燥，过滤并减压浓缩。采用反相HPLC(10:90–95:5MeCN:H2O+0.1％TFA)纯化粗材料。冻干合并的产物馏分从而获得产物的TFA盐，为黄色固体(11毫克,0.02毫摩尔,10％产率)。1H NMR(400MHz,CD3OD)9.10(s,1H),9.07(d,J＝6.2Hz,1H),7.92-7.88(m,2H),7.68(dd,J＝1.2,2.6Hz,1H),7.53(d,J＝4.4Hz,1H),7.50(s,1H),7.34(t,J＝8.6Hz,2H),6.89(dd,J＝2.4,4.4Hz,1H),5.00-4.80(m,1H),4.50-3.50(br,4H),2.60-2.40(m,2H),2.31(d,J＝1.1Hz,3H)；MS:(ES)m/z计算C21H20FN7O[M+H]+406.2,实测406.
实施例148：6-甲基喹唑啉-2-羧酸(1-吡咯[1,2-a]吡嗪-1-基-吡咯烷-3-基)-甲酰胺的合成
将DMSO(0.5毫升)加入到6-甲基喹唑啉-2-羧酸·HCl(27毫克,0.12毫摩尔)和1-吡咯[1,2-a]吡嗪-1-基-吡咯烷-3-基胺二盐酸盐(33毫克,0.12毫摩尔)的混合物中。向其中加入三乙胺(0.084毫升,0.60毫摩尔)，之后加入HATU(49毫克,0.13毫摩尔)。搅拌混合物30分钟，之后采用二氯甲烷(1.0毫升)稀释，采用水(3×1.0毫升)洗涤，在硫酸钠上干燥，过滤并减压浓缩。采用反相色谱(10:90–95:5MeCN:H2O+0.1％TFA)纯化粗材料。冻干合并的产物馏分从而获得产物的TFA盐，为微红色固体(13毫克,0.03毫摩尔,22％产率)。1H NMR(400MHz,CD3OD)9.55(s,1H),8.11(d,J＝9.4Hz,1H),7.98(d,J＝9.4Hz,2H),7.53(dd,J＝1.2,2.4Hz,1H),7.55(d,J＝4.8Hz,1H),7.50(s,1H),6.89(dd,J＝2.3,4.8Hz,1H),5.00-4.80(m,1H),4.50-3.50(br,4H),2.63(s,3H),2.60-2.40(m,2H),2.31(d,J＝1.1Hz,3H)；MS:(ES)m/z计算C22H22N6O[M+H]+387.2,实测387.
实施例149：1-苯基-1H-[1,2,3]三唑-4-羧酸(1-吡咯[1,2-a]吡嗪-1-基-吡咯烷-3-基)-甲酰胺的合成
将DMSO(0.5毫升)加入到1-苯基-1H-[1,2,3]三唑-4-羧酸(42毫克,0.22毫摩尔)和1-吡咯[1,2-a]吡嗪-1-基-吡咯烷-3-基胺二盐酸盐(60毫克,0.22毫摩尔)的混合物中。向其中加入三乙胺(0.123毫升,0.88毫摩尔)，之后加入HATU(91毫克,0.24毫摩尔)。搅拌混合物30分钟，之后采用二氯甲烷(1.0毫升)稀释，采用水(3×1.0毫升)洗涤，在硫酸钠上干燥，过滤并减压浓缩。采用反相HPLC(10:90–95:5MeCN:H2O+0.1％TFA)纯化粗材料。冻干合并的产物馏分从而获得产物的TFA盐，为浅黄色固体(68毫克,0.14毫摩尔,63％产率)。1H NMR(400MHz,CD3OD)9.03(d,J＝6.7Hz,1H),8.97(s,1H),7.89(d,J＝8.2Hz,2H),7.79(dd,J＝1.2,2.7Hz,1H),7.74(d,J＝5.9Hz,1H),7.65-7.50(m,4H),6.95(dd,J＝2.8,4.7Hz,1H),6.87(d,J＝5.9Hz,1H),5.00-4.80(m,1H),4.70-3.70(br,4H),2.60-2.38(m,2H)；MS:(ES)m/z计算C20H19N7O[M+H]+374.2,实测374.
实施例150
如上所述制备下表中的化合物。为各个化合物提供表征数据(NMR)。
具体实施例(表1)
生物学实施例1
为证明上述化合物可用于趋化因子结合到CXCR7的调节剂，体外筛选化合物，以确定在多种浓度下它们从CXCR7受体置换SDF-1的能力。如IC50值的确定，试剂和细胞(Determination of IC50 values,Reagents and Cells)(见下文)中详述，在125I-标记的SDF-1趋化因子存在下，将化合物与表达CXCR7受体(例如，MCF细胞或转染以表达CXCR7的细胞)的细胞组合。然后用筛选过程确定在多种浓度下化合物从CXCR7受体位点置换标记的趋化因子的能力。
那些被认为是有效调节剂的化合物能够在浓度等于或低于15微摩尔(μM)但>2500nM(+)，更优选地在浓度为＞500nM到≤2500nM(++)，从CXCR7受体置换至少50％的SDF-1。目前，特别优选的化合物可以在浓度等于或低于500nM(+++)从CXCR7受体置换至少50％的SDF-1。满足这些标准的示例性化合物载于表1和上面的实施例。在表1中，平均结合IC50参见下述的缓冲液结合分析，而平均血清IC50参见下述的血清结合分析。如以上实施例所述制备全部化合物，或通过相关方法替代容易获得的原料。
1.IC50值的确定
试剂和细胞.125I-标记的SDF-1购自珀金-埃尔默生命科学公司(波士顿,MA)。MCF-7(腺癌；乳腺)细胞系从美国典型培养物保藏中心(ATCC,马纳萨斯,VA)获得，或和在37℃湿润培养箱中在5％CO2/空气混合物条件下培养于补充有10％胎牛血清(FBS)(HyClone公司，洛根，犹他州)和牛胰岛素(0.01毫克/毫升)(Sigma公司，圣路易斯，密苏里州)的DMEM(Mediatech公司，赫恩登，弗吉尼亚州)中。如下所述制备CXCR7转染的MDA-MB-435S。MDA-MB-435S人乳腺癌系，购自ATCC，并在DMEM/10％FBS培养基中培养。采用μMACs mRNA分离试剂盒(Miltenyi Biotec,Auburn,CA)从MCF-7细胞分离编码CXCR7的基因的完整编码序列(也称为CCXCKR2，hRDCl)。利用RNeasy柱(Qiagen,Inc.,Valencia,CA)通过DNA酶消化去除DNA污染，采用GeneAmp RNA PCR核心试剂盒(Applied Biosystems,Foster City,CA)生成cDNA。使用Taq PCR Master Mix试剂盒(Qiagen,Inc.)和携带5'和3'Not I位点的hRDCl引物执行cDNA样品的PCR(hRDC1F 5’GAATGCGGCCGCTATGGATCTGCATCTCTTCGACT-3’，hRDC1R 5’-GAATGCGGCCGCTCATTTGGTGCTCTGCTCCAAG-3’)。Not I消化的PCR产物连接入Not I消化的pcDNA3.1(+)(英杰公司,Carlsbad,CA)并筛选其方向和测序验证。然后通过Maxiprep(Qiagen,Inc.)从过夜细菌培养物分离质粒DNA。加入质粒DNA(10μg)到MDA-MB-435s细胞，通过基因脉冲器(Biorad laboratories,Hercules,CA)进行细胞电穿孔(0.22kV,960uF)。电穿孔后48小时，将细胞转移至选择培养基(600微克/毫升G418)。
缓冲液结合分析.可以测试目标化合物，以确定它们与MCF-7和/或MDA-MB-435S CXCR7转染细胞上的CXCR7位点结合的能力。使用了采用过滤方案的效率最大化放射性配体结合，如Dairaghi DJ等,“HHV-8编码vMIP-I选择结合趋化因子受体CCR5.病毒趋化因子激动剂和拮抗剂曲线”(HHV8-encoded vMIP-I selectively engages chemokine receptor CCR5.Agonist and antagonist profiles of viral chemokines).,J.Biol.Chem.1999Jul 30；274(31):21569-74和Gosling J等,“前沿：结合包括ELC、SLC和TECK的树突状细胞和T细胞活性趋化因子的新型趋化因子受体的鉴定”(Cutting edge:identification of a novel chemokine receptor that binds dendritic cell-and T cell-active chemokines including ELC,SLC,and TECK).,J.Immunol.2000Mar 15；164(6):2851-6中所描述的。
在这些测试中，用目标化合物探试MCF-7和/或MDA-MB-435S细胞，并评估这些化合物替换125I放射性标记的SDF-1的能力，采用Dairaghi和Gosling描述的方案。将目标化合物加入到板上至指定的浓度，然后在以下结合介质中与细胞孵育，随后加入放射性标记的趋化因子(125I SDF-1)，在4℃放置3小时：(25mM HEPES,140mM NaCl,1mM CaCl2,5mM MgCl2和0.2％牛血清白蛋白,pH调至7.1)。然后全部测试在4℃孵育3小时，伴随轻微摇动。所有结合试验孵育后，使用细胞收集器(Packard)抽吸反应到PEI处理的GF/B玻璃过滤器(Packard)并洗涤两次(25mM HEPES,500mM NaCl,1mM CaCl2,5mM MgCl2,pH调节至7.1)。将闪烁剂(MicroScint 10,Packard)加入孔中，在Packard Topcount闪烁计数器上对过滤器计数。分析数据并使用GraphPad Prism(GraphPad软件)绘图。
血清结合分析.为了更正确地评估化合物的结合效力，在100％人血清存在下进行放射性配体结合试验，以更准确地反映体内环境。虽然(用血清结合分析)观察到的IC50值通常低于缓冲液结合实验报告的值，但对于评价化合物效力而言，实验的相关性增强了。测试目标化合物，以确定它们与MCF-7和/或MDA-MB-435S CXCR7转染细胞上的CXCR7位点结合的能力。使用了采用过滤方案的效率最大化放射性配体结合，如Dairaghi DJ等,“HHV-8编码vMIP-I选择结合趋化因子受体CCR5.病毒趋化因子激动剂和拮抗剂曲线”(HHV8-encoded vMIP-I selectively engages chemokine receptor CCR5.Agonist and antagonist profiles of viral chemokines).,J.Biol.Chem.1999Jul 30；274(31):21569-74和Gosling J等,“前沿：结合包括ELC、SLC和TECK的树突状细胞和T细胞活性趋化因子的新型趋化因子受体的鉴定”(Cutting edge:identification of a novel chemokine receptor that binds dendritic cell-and T cell-active chemokines including ELC,SLC,and TECK).,J.Immunol.2000 Mar 15；164(6):2851-6中所描述的。
在这些测试中，用目标化合物探试MCF-7和/或MDA-MB-435S细胞，并评估这些化合物替换125I放射性标记的SDF-1的能力，采用Dairaghi和Gosling描述的方案。将目标化合物加入到板中至指定的浓度，然后加入细胞和放射性标记的趋化因子(125I SDF-1)，均在以下介质内进行(加入人AB血清，含10mM HEPES以在pH7.4稳定)。然后全部测试在4℃孵育3小时，伴随轻微摇动。所有结合试验孵育后，使用细胞收集器(Packard)抽吸反应到PEI处理的GF/B玻璃过滤器(Packard)并洗涤两次(25mM HEPES,500mM NaCl,1mM CaCl2,5mM MgCl2,pH调节至7.1)。将闪烁剂(MicroScint 10,Packard)加入孔中，在Packard Topcount闪烁计数器上对过滤器计数。分析数据并使用GraphPad Prism(GraphPad软件)绘图。
跨内皮迁移试验：可在跨内皮迁移试验中进一步评价本发明化合物抑制细胞迁移的能力。在本试验中，分析细胞通过一层内皮细胞朝趋化因子源迁移的能力。在本试验的一实施例中，在具有5uM过滤器孔径的跨室培养皿(Corning Costar)的上室内将100,000人脐静脉内皮细胞(HUVEC，获自Lonza)进行铺板。加入培养液，将板放置于37℃、5％CO2培养箱内过夜。HUVEC过夜贴附到过滤器形成单层后，将包含趋化因子(如SDF-1,终浓度10nM)的培养液加入到下室。然后加入500,000NC-37细胞(获自ATCC)到上室，在测试化合物存在或不存在的情况下，将板放回至培养箱，3小时到过夜。可加入不同浓度的化合物到不同的孔内从而创建剂量反应，在孵育结束时，移出上室，定量下室内的细胞。例如可以通过标记荧光染料如(Invitrogen,CA)然后在合适的酶标仪上定量荧光而定量细胞。可以分析数据并使用GraphPad Prism(GraphPad软件)绘图。然后以化合物抑制这些细胞迁移到下室的能力确定化合物的效力。
体内效力
a)破坏性关节炎症兔模型
可以基本如Podolin等所述进行兔LPS研究。同上。采用LPS(10ng)在两膝盖关节内处理雌性新西兰兔(约2千克)。经两次以5ml/kg剂量体积口服感兴趣的化合物(如在1％纤维素酯(methocel)内配置)或载体(1％纤维素酯)(关节内LPS注射前2小时和关节内LPS注射后4小时)。LPS注射后16小时，灌洗膝盖，进行细胞计数。通过募集到膝关节发炎滑液的炎性细胞数量的减少确定治疗的有益效果。采用感兴趣的化合物的治疗导致募集的炎性细胞的显著减少。
b)在胶原诱导的关节炎大鼠模型中评价感兴趣的化合物
可以进行17天的进展性II型胶原关节炎研究从而评价感兴趣的化合物对关节炎诱导的临床踝肿胀的效果。大鼠胶原关节炎是多发性关节炎的实验模型，已广泛地用于很多抗关节炎剂的临床前试验(参见Trentham等,J.Exp.Med.146(3):857-868(1977),Bendele等,Toxicologic Pathol.27:134-142(1999),Bendele等,Arthritis Rheum.42:498-506(1999))。该模型的特点是起病可靠，以及强劲、易于衡量的多关节炎症的发展，与血管翳形成相关的显著的软骨破坏，以及轻度至中度的骨再吸收和骨膜骨增生。
用异氟烷麻醉雌性Lewis大鼠(约为0.2千克)并在该17天研究的第0天和6天在尾根处和背部两处注射含有2mg/mL牛II型胶原的弗氏(Freund’s)不完全佐剂。从第0天直到第17天采用皮下方式以有效剂量每日给药感兴趣的化合物。卡尺测量踝关节直径，减少的关节肿胀被作为功效的量度。
(c)在伤口愈合小鼠模型中评价感兴趣的化合物
在伤口愈合研究中，使用ICR衍生的雄性小鼠(24±2克)。在测试期间，将动物单独地放在单独的笼子中。环己烯巴比妥(90毫克/千克，IP)麻醉后，将每只动物的肩与后被区剃光。采用锋利的打洞器(ID 12mm)去除包括肉膜和附着组织的皮肤。皮肤损伤后，试验化合物或载体立即各自局部给药，每日一次，连续10天。阳性对照，例如A2腺苷受体激动剂CGS-21680；10微克/小鼠)，也在实验的过程每日局部给药。伤口面积，勾绘到透明的塑料片，在第1、3、5、7、9和11天通过采用图像分析仪(生命科学资源“Life Science Resources”Vista,3.0版)测定。计算伤口闭合百分比(％)，采用Graph-Pad Prism(Graph Pad软件)通过线性回归确定伤口半闭合时间(CT50)并进行分析。不成对学生t检验可用于在每个测量时间点对治疗组和载体组进行比较。差异在P<0.05水平被认为有统计学显著性。
(d)在肺癌小鼠模型中评价感兴趣的化合物
许多动物肿瘤模型是本领域已知的，并且可用于评价本文化合物。例如，在肺癌异种移植物研究中，A549肿瘤片段(30-40mg)植入到裸鼠皮下空间。允许肿瘤生长，直到大约150毫克大小(100至200毫克)，此时将小鼠用于研究，并开始治疗。采用感兴趣的化合物或载体对照治疗小鼠。美法仑可作为阳性对照(9mpk/剂量，腹膜内给药，Q4Dx3)。每周两次用卡尺在两个维度测量肿瘤并采用长椭圆体的公式(a x b2/2)转换成肿瘤质量，其中a是较长尺寸，b是较短尺寸，并假设单位密度(1mm3＝1mg)。也可以每周两次测量体重，以评估化合物给药的任何不利影响。通过治疗组相比于载体治疗对照组肿瘤生长的延迟评估抗肿瘤活性。
(e)实验性自身免疫性脑脊髓炎的啮齿动物过继转移模型
啮齿动物EAE是多发性硬化症(MS)的实验模型，已被广泛地用于治疗复发缓解型和进行性MS的许多药物的临床前试验。这种模式的特点是起病可靠，以及强劲、易于检测的尾巴和四肢瘫痪，神经炎症，响应神经抗原的明显的髓鞘脱失。
在第0天，采用弗氏完全佐剂中的合适的神经抗原(例如，髓鞘碱性蛋白，髓鞘少突胶质糖蛋白，蛋白脂质蛋白)注射小鼠。注射CFA/抗原后收集免疫细胞，并采用细胞因子和神经抗原离体刺激，以产生对神经抗原有特异性的T细胞系。然后将这些细胞转移到受体小鼠。从第0天到研究结束采用皮下、腹膜内或口服方式以有效剂量每日给药感兴趣的化合物。每日观察瘫痪程度作为效力的检测。
(f)在恶性胶质瘤小鼠模型中评价感兴趣的化合物
许多动物肿瘤模型是本领域已知的，并且可用于评价本文化合物。例如，在鼠恶性胶质瘤模型中，通过立体定位注射将1x106U251MG细胞植入裸鼠脑中。20天后，采用1-15gy的辐射照射肿瘤。照射后，采用化合物或载体对照治疗小鼠(例如通过皮下，腹膜内，口服，肠胃外或其他途径)，允许肿瘤发展。为剩余研究监控肿瘤生长和/或死亡率。每周两次用卡尺在两个维度测量肿瘤并采用长椭圆体的公式(a x b2/2)转换成肿瘤质量，其中a是较长尺寸，b是较短尺寸，并假设单位密度(1mm3＝1mg)。也可以每周两次测量体重，以评估化合物给药的任何不利影响。通过治疗组相比于载体治疗对照组肿瘤生长的延迟评估抗肿瘤活性。
(g)在恶性胶质瘤大鼠模型中评价感兴趣的化合物
许多动物肿瘤模型是本领域已知的，并且可用于评价本文化合物。例如，在恶性胶质瘤大鼠C6模型中，通过立体定位注射将1x106C6细胞植入SD大鼠脑中。7天后，采用5-20gy辐射照射肿瘤。照射后，采用化合物或载体对照治疗小鼠(例如通过皮下，腹膜内，口服，肠胃外或其他途径)，允许肿瘤发展。随访动物直至死亡或体重损失＞20％、或由于肿瘤诱发神经损伤如癫痫和根据适当的法规和标准不能移动而被移除。通过KaplanMeier存活分析来测定化合物活性，表1中化合物1.090具有强烈的抗肿瘤活性，如在治疗组相比于载体治疗控制组肿瘤生长延迟所评估的。
(h)在高血压小鼠模型中评价感兴趣的化合物
很多肺功能紊乱和高血压动物模型是本领域已知的，且可用于评价本文化合物。例如，在慢性缺氧诱发的肺动脉高血压模型中，新生小鼠(FVB/NJ)随机暴露于常压常氧(室间空气(RA))或低氧(HA)(FiO2＝0.12)下2周。RA或HA1周后，采用感兴趣的化合物治疗小鼠，如从出生后7至14天每日皮下注射载体或化合物。通过检测右心室收缩压(RVSP)测定肺动脉高血压的程度。简要地说，开胸后将连接压力传感器(Gould Instruments，OH)的25号针插入右心室并记录RSVP。RVSP测量后立即处死小鼠，取出心脏并解剖。通过右心室与左心室+隔膜的重量比(RV/LV+S)评价右心室肥大(RVH)。RVH和RSVP测量值的提高表明候选化合物具有治疗能力。
验证
可进一步测试通过前述筛选方法被初步确定为感兴趣的化合物，以验证体内表观活性。优选采用合适的动物模型进行这样的研究。这种方法的基本形式包括将在初始筛选中确定的先导化合物给予用作人疾病模型的动物，然后检测疾病(例如，癌症，心肌梗塞，伤口愈合，炎性疾病或与CXCR7相关的其它疾病)是否在实际上被调节和/或疾病或病症得到改善。用于验证研究的动物模型通常是任何种类的哺乳动物。合适动物的具体实例包括，但不限于，灵长类动物，小鼠，大鼠和斑马鱼。
序列表
SEQ ID NO:1CXCR7编码序列
ATGGATCTGCATCTCTTCGACTACTCAGAGCCAGGGAACTTCTCGGACATCAGCTGGCCATGCAACAGCAGCGACTGCATCGTGGTGGACACGGTGATGTGTCCCAACATGCCCAACAAAAGCGTCCTGCTCTACACGCTCTCCTTCATTTACATTTTCATCTTCGTCATCGGCATGATTGCCAACTCCGTGGTGGTCTGGGTGAATATCCAGGCCAAGACCACAGGCTATGACACGCACTGCTACATCTTGAACCTGGCCATTGCCGACCTGTGGGTTGTCCTCACCATCCCAGTCTGGGTGGTCAGTCTCGTGCAGCACAACCAGTGGCCCATGGGCGAGCTCACGTGCAAAGTCACACACCTCATCTTCTCCATCAACCTCTTCGGCAGCATTTTCTTCCTCACGTGCATGAGCGTGGACCGCTACCTCTCCATCACCTACTTCACCAACACCCCCAGCAGCAGGAAGAAGATGGTACGCCGTGTCGTCTGCATCCTGGTGTGGCTGCTGGCCTTCTGCGTGTCTCTGCCTGACACCTACTACCTGAAGACCGTCACGTCTGCGTCCAACAATGAGACCTACTGCCGGTCCTTCTACCCCGAGCACAGCATCAAGGAGTGGCTGATCGGCATGGAGCTGGTCTCCGTTGTCTTGGGCTTTGCCGTTCCCTTCTCCATTATCGCTGTCTTCTACTTCCTGCTGGCCAGAGCCATCTCGGCGTCCAGTGACCAGGAGAAGCACAGCAGCCGGAAGATCATCTTCTCCTACGTGGTGGTCTTCCTTGTCTGCTGGCTGCCCTACCACGTGGCGGTGCTGCTGGACATCTTCTCCATCCTGCACTACATCCCTTTCACCTGCCGGCTGGAGCACGCCCTCTTCACGGCCCTGCATGTCACACAGTGCCTGTCGCTGGTGCACTGCTGCGTCAACCCTGTCCTCTACAGCTTCATCAATCGCAACTACAGGTACGAGCTGATGAAGGCCTTCATCTTCAAGTACTCGGCCAAAACAGGGCTCACCAAGCTCATCGATGCCTCCAGAGTCTCAGAGACGGAGTACTCTGCCTTGGAGCAGAGCACCAAATGA
SEQ ID NO:2CXCR7氨基酸序列
MDLHLFDYSEPGNFSDISWPCNSSDCIVVDTVMCPNMPNKSVLLYTLSFIYIFIFVIGMIANSVVVWVNIQAKTTGYDTHCYILNLAIADLWVVLTIPVWVVSLVQHNQWPMGELTCKVTHLIFSINLFGSIFFLTCMSVDRYLSITYFTNTPSSRKKMVRRVVCILVWLLAFCVSLPDTYYLKTVTSASNNETYCRSFYPEHSIKEWLIGMELVSVVLGFAVPFSIIAVFYFLLARAISASSDQEKHSSRKIIFSYVVVFLVCWLPYHVAVLLDIFSILHYIPFTCRLEHALFTALHVTQCLSLVHCCVNPVLYSFINRNYRYELMKAFIFKYSAKTGLTKLIDASRVSETEYSALEQSTK
SEQ ID NO:3CXCR7.2编码序列
ATGGATCTGCACCTCTTCGACTACGCCGAGCCAGGCAACTTCTCGGACATCAGCTGGCCATGCAACAGCAGCGACTGCATCGTGGTGGACACGGTGATGTGTCCCAACATGCCCAACAAAAGCGTCCTGCTCTACACGCTCTCCTTCATTTACATTTTCATCTTCGTCATCGGCATGATTGCCAACTCCGTGGTGGTCTGGGTGAATATCCAGGCCAAGACCACAGGCTATGACACGCACTGCTACATCTTGAACCTGGCCATTGCCGACCTGTGGGTTGTCCTCACCATCCCAGTCTGGGTGGTCAGTCTCGTGCAGCACAACCAGTGGCCCATGGGCGAGCTCACGTGCAAAGTCACACACCTCATCTTCTCCATCAACCTCTTCAGCGGCATTTTCTTCCTCACGTGCATGAGCGTGGACCGCTACCTCTCCATCACCTACTTCACCAACACCCCCAGCAGCAGGAAGAAGATGGTACGCCGTGTCGTCTGCATCCTGGTGTGGCTGCTGGCCTTCTGCGTGTCTCTGCCTGACACCTACTACCTGAAGACCGTCACGTCTGCGTCCAACAATGAGACCTACTGCCGGTCCTTCTACCCCGAGCACAGCATCAAGGAGTGGCTGATCGGCATGGAGCTGGTCTCCGTTGTCTTGGGCTTTGCCGTTCCCTTCTCCATTATCGCTGTCTTCTACTTCCTGCTGGCCAGAGCCATCTCGGCGTCCAGTGACCAGGAGAAGCACAGCAGCCGGAAGATCATCTTCTCCTACGTGGTGGTCTTCCTTGTCTGCTGGCTGCCCTACCACGTGGCGGTGCTGCTGGACATCTTCTCCATCCTGCACTACATCCCTTTCACCTGCCGGCTGGAGCACGCCCTCTTCACGGCCCTGCATGTCACACAGTGCCTGTCGCTGGTGCACTGCTGCGTCAACCCTGTCCTCTACAGCTTCATCAATCGCAACTACAGGTACGAGCTGATGAAGGCCTTCATCTTCAAGTACTCGGCCAAAACAGGGCTCACCAAGCTCATCGATGCCTCCAGAGTGTCGGAGACGGAGTACTCCGCCTTGGAGCAAAACGCCAAGTGA
SEQ ID NO:4CXCR7.2氨基酸序列
MDLHLFDYAEPGNFSDISWPCNSSDCIVVDTVMCPNMPNKSVLLYTLSFIYIFIFVIGMIANSVVVWVNIQAKTTGYDTHCYILNLAIADLWVVLTIPVWVVSLVQHNQWPMGELTCKVTHLIFSINLFSGIFFLTCMSVDRYLSITYFTNTPSSRKKMVRRVVCILVWLLAFCVSLPDTYYLKTVTSASNNETYCRSFYPEHSIKEWLIGMELVSVVLGFAVPFSIIAVFYFLLARAISASSDQEKHSSRKIIFSYVVVFLVCWLPYHVAVLLDIFSILHYIPFTCRLEHALFTALHVTQCLSLVHCCVNPVLYSFINRNYRYELMKAFIFKYSAKTGLTKLIDASRVSETEYSALEQNAK
SEQ ID NO:5CXCR7.3编码序列
ATGGATCTGCATCTCTTCGACTACTCAGAGCCAGGGAACTTCTCGGACATCAGCTGGCCATGCAACAGCAGCGACTGCATCGTGGTGGACACGGTGATGTGTCCCAACATGCCCAACAAAAGCGTCCTGCTCTACACGCTCTCCTTCATTTACATTTTCATCTTCGTCATCGGCATGATTGCCAACTCCGTGGTGGTCTGGGTGAATATCCAGGCCAAGACCACAGGCTATGACACGCACTGCTACATCTTGAACCTGGCCATTGCCGACCTGTGGGTTGTCCTCACCATCCCAGTCTGGGTGGTCAGTCTCGTGCAGCACAACCAGTGGCCCATGGGCGAGCTCACGTGCAAAGTCACACACCTCATCTTCTCCATCAACCTCTTCGGCAGCATTTTCTTCCTCACGTGCATGAGCGTGGACCGCTACCTCTCCATCACCTACTTCACCAACACCCCCAGCAGCAGGAAGAAGATGGTACGCCGTGTCGTCTGCATCCTGGTGTGGCTGCTGGCCTTCTGCGTGTCTCTGCCTGACACCTACTACCTGAAGACCGTCACGTCTGCGTCCAACAATGAGACCTACTGCCGGTCCTTCTACCCCGAGCACAGCATCAAGGAGTGGCTGATCGGCATGGAGCTGGTCTCCGTTGTCTTGGGCTTTGCCGTTCCCTTCTCCATTGTCGCTGTCTTCTACTTCCTGCTGGCCAGAGCCATCTCGGCGTCCAGTGACCAGGAGAAGCACAGCAGCCGGAAGATCATCTTCTCCTACGTGGTGGTCTTCCTTGTCTGCTGGTTGCCCTACCACGTGGCGGTGCTGCTGGACATCTTCTCCATCCTGCACTACATCCCTTTCACCTGCCGGCTGGAGCACGCCCTCTTCACGGCCCTGCATGTCACACAGTGCCTGTCGCTGGTGCACTGCTGCGTCAACCCTGTCCTCTACAGCTTCATCAATCGCAACTACAGGTACGAGCTGATGAAGGCCTTCATCTTCAAGTACTCGGCCAAAACAGGGCTCACCAAGCTCATCGATGCCTCCAGAGTCTCAGAGACGGAGTACTCTGCCTTGGAGCAGAGCACCAAATGA
SEQ ID NO:6CXCR7.3氨基酸序列
MDLHLFDYSEPGNFSDISWPCNSSDCIVVDTVMCPNMPNKSVLLYTLSFIYIFIFVIGMIANSVVVWVNIQAKTTGYDTHCYILNLAIADLWVVLTIPVWVVSLVQHNQWPMGELTCKVTHLIFSINLFGSIFFLTCMSVDRYLSITYFTNTPSSRKKMVRRVVCILVWLLAFCVSLPDTYYLKTVTSASNNETYCRSFYPEHSIKEWLIGMELVSVVLGFAVPFSIVAVFYFLLARAISASSDQEKHSSRKIIFSYVVVFLVCWLPYHVAVLLDIFSILHYIPFTCRLEHALFTALHVTQCLSLVHCCVNPVLYSFINRNYRYELMKAFIFKYSAKTGLTKLIDASRVSETEYSALEQSTK
SEQ ID NO:7CXCR7.4编码序列
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SEQ ID NO:8CXCR7.4氨基酸序列
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SEQ ID NO:9CXCR7.5编码序列
ATGGATCTGCATCTCTTCGACTACTCAGAGCCAGGGAACTTCTCGGACATCAGCTGGCCGTGCAACAGCAGCGACTGCATCGTGGTGGACACGGTGATGTGTCCCAACATGCCCAACAAAAGCGTCCTGCTCTACACGCTCTCCTTCATTTACATTTTCATCTTCGTCATCGGCATGATTGCCAACTCCGTGGTGGTCTGGGTGAATATCCAGGCCAAGACCACAGGCTATGACACGCACTGCTACATCTTGAACCTGGCCATTGCCGACCTGTGGGTTGTCCTCACCATCCCAGTCTGGGTGGTCAGTCTCGTGCAGCACAACCAGTGGCCCATGGGCGAGCTCACGTGCAAAGTCACACACCTCATCTTCTCCATCAACCTCTTCAGCAGCATTTTCTTCCTCACGTGCATGAGCGTGGACCGCTACCTCTCCATCACCTACTTCACCAACACCCCCAGCAGCAGGAAGAAGATGGTACGCCGTGTCGTCTGCATCCTGGTGTGGCTGCTGGCCTTCTGCGTGTCTCTGCCTGACACCTACTACCTGAAGACCGTCACGTCTGCGTCCAACAATGAGACCTACTGCCGGTCCTTCTACCCCGAGCACAGCATCAAGGAGTGGCTGATCGGCATGGAGCTGGTCTCCGTTGTCTTGGGCTTTGCCGTTCCCTTCTCCATTATCGCTGTCTTCTACTTCCTGCTGGCCAGAGCCATCTCGGCGTCCAGTGACCAGGAGAAGCACAGCAGCCGGAAGATCATCTTCTCCTACGTGGTGGTCTTCCTTGTCTGCTGGTTGCCCTACCACGTGGCGGTGCTGCTGGACATCTTCTCCATCCTGCACTACATCCCTTTCACCTGCCGGCTGGAGCACGCCCTCTTCACGGCCCTGCATGTCACACAGTGCCTGTCGCTGGTGCACTGCTGCGTCAACCCTGTCCTCTACAGCTTCATCAATCGCAACTACAGGTACGAGCTGATGAAGGCCTTCATCTTCAAGTACTCGGCCAAAACAGGGCTCACCAAGCTCATCGATGCCTCCAGAGTCTCAGAGACGGAGTACTCCGCCTTGGAGCAGAGCACCAAATGA
SEQ ID NO:10CXCR7.5氨基酸序列
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本领域一般技术人员将从提供的说明书，附图和实施例中认识到可以在不脱离由以下权利要求及其等同限定的本发明的范围的情况下，对本发明的各种实施方式作出修改和改变。
本文引用的所有专利、专利申请、出版物和报告都通过引用整体并入本文。以倾向于后者解决本文引用的任何参考文献与本说明书的教导之间的任何冲突。类似地，以倾向于后者解决本领域认可的词或短语的定义与本说明书中所提供的词或短语的定义之间的任何冲突。