用于生物材料和微生物的保存和保护的糖肽衍生物的制作方法
本发明涉及糖肽衍生物及其制备方法，和其作为佐剂用于生物材料或微生物的保存和/或保护和/或再生以及用于化妆品应用如抗老化、皮肤保护或皮肤再生的用途。
背景技术：
生物材料的保存已成为深入研究的主题。已确认抗冻糖蛋白具有用于这种应用的可能性。
在二十世纪60年代后期，Arthur DeVries证明南极鱼类的抗冻性是由于血清糖蛋白，所述血清糖蛋白通过抑制冰的生长并保护细胞免受低体温损伤将所述鱼类的冰冻温度降低至包围其的零下的海水冰冻温度以下。
被称为抗冻糖蛋白AFGPs的这些糖蛋白具有一种结构，该结构由一些(Ala-Ala-Thr)n的重复单元与作为糖苷被连接至Thr残基的羟基氧的二糖β-D-半乳糖基-(1→3)-α-N-乙酰基-D-半乳糖胺组成。
糖肽有八个不同的亚型，其分子质量在2.6kDa(n＝4)至33.7kDa(n＝50)间变动。已观察到AFGPs保护物种免受寒冷诱导的损伤。
Rubinsky等人已在WO 1991/010361中强调了用于这些应用的含有抗冻糖蛋白的制剂的作用。
然而，在以上专利申请或在以下出版物(Chem.Rev.(1996),96(2),601-617；Ann.Rev.Biophys.Chem.(1986),15,59-78)中进行的大部分研究主要显示了在低体温条件尤其是冰冻和/或玻璃化条件中的保存作用。
此外，天然的AFGPs有许多缺点，这构成了其商业应用的限制。它们分离自天然来源：鱼类。提取1kg的AFGPs需要100吨鱼。纯化和分离是困难的。分离的化合物的纯度非常低(约70％)，且提取物被其它蛋白质和非人类抗原性材料污染。此外，仅能够分离具有一定分子大小范围的级分，而非单个化合物。这些化合物具有高的分子量(2,6kDa至33,7kDa之间)。它们是不稳定的。它们对酸和碱水解高度敏感，它们在pH>9时经历β-消除，在酸性条件下经历O-糖苷键的裂解。它们还对酶水解非常敏感，这意味着它们还在含有糖苷酶的生物介质中经历O-糖苷键的裂解。这种化合物具有短的半衰期和低的生物处理性(biodisponibility)。它们还显示出一些细胞毒性问题。
为了解决这些缺点中的一些尤其是稳定性问题，已开发了C-糖苷衍生物。
Ben等人(Bioconjugate Chemistry(2011)22(9),1804-1810；CA 2653153；Journal of the American Chemical Society(2009),131(43),15745-15753；Biomacromolecules(2007),8(5),1456-1462；Organic Letters(2005)7(12),2385-2388；Cell Biochemistry and Biophysics(2003),38(2),115-124)已提供了CH2-糖肽类似物以克服这种稳定性问题，并开发了化合物家族，其通过TH(热滞后)和IRI(冰重结晶抑制(ice recristallization inhibition))显示出抗冻性质。然而，这些化合物中没有一个显示出用于对抗各种应激的生物材料保护的其他可能性，它们仅显示出对冰冻的物理性质的可能作用。它们还强调了对具有糖三氨基酸(glycotriaminoacid)的重复单元的聚合结构的需要，以具有功效。
在WO 2006/059227和WO 2007/125203中还描述了对应于CF2-糖肽类似物的其他衍生物以克服天然化合物的问题，并发现了该类化合物用于生物材料保存的令人惊讶的性质。事实上，除了低体温保存，这些化合物显示出对抗不同类型的应激的保存作用，且不需要聚合形式以具有功效。然而，这些化合物仍然遭受稳定性问题，并且通过释放高细胞毒性的二氟化(difluorinated)强酸在非常敏感的CF2-C(＝O)-NH官能团处分解。
这种不稳定性是主要问题，尤其由于化合物必须在生物介质中被中和，并且其对碱性中和特别敏感。
因此，需要佐剂，所述佐剂允许通过提高生物材料和微生物的质量和保存期，通过保护其对抗不同的应激(如氧化、UV、辐射、pH、温度(低体温至高体温)、饥饿、化学或细菌污染等)，或通过在不同的应激后使其恢复，和/或通过改进现有的用于生物材料和微生物保存的方案以使其更加可重复或更容易进行，来改进生物材料(如细胞、组织、体液和器官)和微生物的保存/保护或甚至再生。
这种佐剂还将有利地显示在化妆品或皮肤病学制剂中所需的所有特征，以保护和/或保存皮肤细胞和组织，或甚至使皮肤细胞和组织再生，并因此产生用于抗老化或皮肤保护，或甚至用于皮肤再生的高效产品。
技术实现要素：
本发明的发明人最近确认了CF2-糖肽的新家族，其解决与在前面的糖肽衍生物中观察到的稳定性问题有关的缺点，其显示用于在不同条件下生物材料和微生物保存和保护甚至再生的性质，其具有用于化妆品或皮肤病学应用(抗老化、皮肤保护、皮肤再生等)的可能性，并且其可以容易地合成。
因此，本发明涉及下式(I)的化合物：
尤其涉及下式(I’)的化合物：
或其盐、溶剂化物、互变异构体、立体异构体或立体异构体以任何比例的混合物，特别是对映异构体的混合物，特别是外消旋体混合物，
其中：
-m表示0或1，
-p表示0或1，尤其表示1，
-R0表示氢原子、O-保护基或(C1-C6)烷基、(C2-C6)烯基、(C2-C6)炔基、(C3-C7)环烷基、5至7元杂环烷基、芳基、杂芳基、芳基-(C1-C6)烷基、杂芳基-(C1-C6)烷基、(C1-C6)-烷基-芳基或(C1-C6)-烷基-杂芳基，该基团可以被选自卤原子、(C1-C6)烷氧基、OH、COOH和CHO的一个或多个基团取代，
-R5a、R6a和R7a彼此独立地表示氢或N-保护基，以及
-R5、R6和R7彼此独立地表示氢；任选被(C1-C6)烷氧基或(C1-C6)硫代烷氧基取代的(C1-C6)烷基；芳基；任选被(C1-C6)烷氧基取代的芳基-(C1-C6)烷基；或下式的基团：
或R5和R5a和/或R6和R6a和/或R7和R7a与携带它们的氮原子和碳原子形成吡咯烷环
条件是，当m＝p＝1时，R5、R6和R7中的至少一个且仅一个基团，或当m＝0且p＝1时，R5和R6中的至少一个且仅一个基团，或当m＝1且p＝0时，R5和R7中的至少一个且仅一个基团，或当m＝p＝0时，R5，表示下式的基团：
其中
-n表示1至6的整数，
-R表示氢原子或氟原子或CH3、CH2F、CH2OSiRa1Rb1Rc1、CH2OR8、CH2OC(O)R9、CH2OCO2R10、CH2OC(O)NR11R12、CH2OP(O)(OR13)2或CH2OSO3R14基团，
-R1和R2彼此独立地表示氟原子或OSiRa2Rb2Rc2、OR15、OC(O)R16、OCO2R17、OC(O)NR18R19、OP(O)(OR20)2或OSO3R21基团，
-R3表示氟原子或OSiRa3Rb3Rc3、OR22、OC(O)R23、OCO2R24、OCONR25R26、OP(O)(OR27)2、OSO3R28、N3、邻苯二甲酰亚胺基(phtalimidyl)、NR29R30、NR31C(O)R32、NR33C(O)OR34、N(C(O)R35)C(O)R36、N(C(O)R37)C(O)OR38和N(C(O)OR39)C(O)OR40基团，
-R4表示氢原子或卤原子或OSiRa4Rb4Rc4、OR41、OC(O)R42、OCO2R43、OCONR44R45、OP(O)(OR46)2或OSO3R47基团，
或R和R1与携带它们的碳原子一起形成具有下式的环缩醛：
和/或(R1和R2)、(R2和R3)和/或(R3和R4)与携带它们的碳原子一起形成具有下式的环缩醛：
-R8、R15、R22和R41彼此独立地表示氢原子、O-保护基或(C1-C6)烷基、(C2-C6)烯基、(C2-C6)炔基、(C3-C7)环烷基、5至7元杂环烷基、芳基、杂芳基、芳基-(C1-C6)烷基、杂芳基-(C1-C6)烷基、(C1-C6)-烷基-芳基、(C1-C6)-烷基-杂芳基、糖基或多糖基，该基团可以被选自卤原子、(C1-C6)烷氧基、OH、COOH和CHO的一个或多个基团取代；特别地表示氢原子、(C1-C6)烷基、芳基、芳基-(C1-C6)烷基、糖基或多糖基，该基团可以被选自卤原子、(C1-C6)烷氧基、OH、COOH和CHO的一个或多个基团取代；更特别地表示氢原子、(C1-C6)烷基、芳基或芳基-(C1-C6)烷基，该基团可以被选自卤原子、(C1-C6)烷氧基、OH、COOH和CHO的一个或多个基团取代，
-R9、R10、R16、R17、R23、R24、R32、R34至R40、R42和R43彼此独立地表示(C1-C6)烷基、(C2-C6)烯基、(C2-C6)炔基、(C3-C7)环烷基、5至7元杂环烷基、芳基、杂芳基、芳基-(C1-C6)烷基、杂芳基-(C1-C6)烷基、(C1-C6)-烷基-芳基或(C1-C6)-烷基-杂芳基，该基团可以被选自卤原子、(C1-C6)烷氧基、OH、COOH和CHO的一个或多个基团取代；特别地表示(C1-C6)烷基、芳基或芳基-(C1-C6)烷基，该基团可以被选自卤原子、(C1-C6)烷氧基、OH、COOH和CHO的一个或多个基团取代，
-R11、R12、R18、R19、R25、R26、R29至R31、R33、R44和R45彼此独立地表示氢原子或(C1-C6)烷基、(C2-C6)烯基、(C2-C6)炔基、芳基、杂芳基、芳基-(C1-C6)烷基、杂芳基-(C1-C6)烷基、(C1-C6)-烷基-芳基或(C1-C6)-烷基-杂芳基，该基团可以被选自卤原子、(C1-C6)烷氧基、OH、COOH和CHO的一个或多个基团取代；有利地表示氢原子或(C1-C6)烷基、(C2-C6)烯基、(C2-C6)炔基、芳基-(C1-C6)烷基、杂芳基-(C1-C6)烷基，该基团可以被选自卤原子、(C1-C6)烷氧基、OH、COOH和CHO的一个或多个基团取代；特别地表示氢原子或(C1-C6)烷基、芳基或芳基-(C1-C6)烷基，该基团可以被选自卤原子、(C1-C6)烷氧基、OH、COOH和CHO的一个或多个基团取代，
-R13、R14、R20、R21、R27、R28、R46和R47彼此独立地表示氢原子或(C1-C6)烷基，
-Ra1至Ra4、Rb1至Rb4和Rc1至Rc4彼此独立地表示(C1-C6)烷基、芳基或芳基-(C1-C6)烷基，以及
-Rd和Re彼此独立地表示氢原子或(C1-C6)烷基。
在本发明的情况下，盐可以为：
(1)与无机酸或与有机酸形成的酸加成盐，所述无机酸如盐酸、氢溴酸、硫酸、硝酸和磷酸等；所述有机酸如乙酸、苯磺酸、富马酸、葡庚糖酸、葡糖酸、谷氨酸、乙醇酸、羟基萘甲酸、2-羟基乙磺酸、乳酸、马来酸、苹果酸、扁桃酸、甲磺酸、粘康酸、2-萘磺酸、丙酸、琥珀酸、二苯甲酰基-L-酒石酸、酒石酸、对甲苯磺酸、三甲基乙酸和三氟乙酸等，或者
(2)当化合物中存在的酸质子被金属离子，如碱金属离子、碱土金属离子或铝离子替代时形成的盐；或与有机或无机碱配位形成的盐。可接受的有机碱包含二乙醇胺、乙醇胺、N-甲基葡糖胺、三乙醇胺、氨丁三醇等。可接受的无机碱包含氢氧化铝、氢氧化钙、氢氧化钾、碳酸钠、氢氧化钠等。
在本发明的情况下，本发明的化合物的溶剂化物包括常规的溶剂化物，如由于溶剂的存在，在本发明化合物的制备的最后一步期间形成的那些。作为示例，可以提及由于水(这些溶剂化物也被称作水合物)或乙醇的存在的溶剂化物。
对于本发明的目的，“互变异构体”是指化合物(I)的糖可以呈现的各种互变异构体形式，即吡喃糖(6元环)、呋喃糖(5元环)或直链(开环形式)形式。然而，出于实际原因，在本说明书中以其吡喃糖形式表示化合物(I)的糖。
然而，仅当基团(radical)R4表示OH基团，R1也表示OH基团时，本发明的化合物可以呈现各种互变异构体形式以使得本发明的化合物可以为呋喃糖形式。
因此，例如在半乳糖系列中，本发明的化合物可以以下列各种形式出现：
因此当R4＝R1＝OH时，基团可以呈现以下互变异构体形式：
-吡喃糖形式：
-呋喃糖形式：和
-直链形式：
同样地，因此当R4＝R1＝OH时，基团可以呈现以下互变异构体形式：
-吡喃糖形式：
-呋喃糖形式：和
-直链形式：
在封闭的吡喃糖和呋喃糖形式中，异头碳可以以两种不同的构型出现。
本发明的化合物可以呈现不同的互变异构体形式，其可以以平衡状态存在于溶液中，其中任选有主要的互变异构体形式相对于其他互变异构体形式，或者本发明的化合物可以仅呈现一种互变异构体形式，如仅呈现吡喃糖形式。这将尤其取决于介质的性质、温度、化合物的浓度等。
在最后一种情况下，其中糖仅呈现一种互变异构体形式，当R4＝OH被转化时，尤其是通过OH基团的取代或转换为氢原子或卤素原子时，能够限制该互变异构体形式中糖的构型。
在本发明的意义范围内，“立体异构体”是指非对映异构体或对映异构体。因此，它们为光学异构体。因此，彼此不为镜像的立体异构体被称作“非对映异构体”，彼此为不可重叠的镜像的立体异构体被称作“对映异构体”。
尤其地，本发明的化合物的糖部分和氨基酸部分可以属于D或L系列。
结合至四个不相同的取代基的碳原子被称作“手性中心”。
两种对映异构体的等摩尔混合物被称作外消旋混合物。
如本发明中所使用的术语“卤素”是指氟、溴、氯或碘的原子。有利地，其为氟原子。
如本发明中所使用的术语“(C1-C6)-烷基”是指包含1至6个碳原子的饱和的、直链或支链烃链，特别是指甲基、乙基、正丙基、异丙基、正丁基、异丁基、仲丁基、叔丁基、正戊基、正己基。
如本发明中所使用的术语“(C2-C6)-烯基”是指包含至少一个双键并包含2至6个碳原子的直链或支链烃链，例如乙烯基(乙烯基(vinyl))或丙烯基(例如烯丙基)。
如本发明中所使用的术语“(C2-C6)-炔基”是指包含至少一个三键并包含2至6个碳原子的直链或支链烃链，例如乙炔基或丙炔基。
如本发明中所使用的术语“(C1-C6)烷氧基”是指经由氧原子结合至分子的如以上所定义的(C1-C6)烷基，包括但不限于甲氧基、乙氧基、正丙氧基、异丙氧基、正丁氧基、异丁氧基、仲丁氧基、叔丁氧基、正戊氧基、正己氧基等。
如本发明中所使用的术语“(C1-C6)硫代烷氧基”是指经由硫原子结合至分子的如以上所定义的(C1-C6)烷基，包括但不限于硫代甲氧基、硫代乙氧基、硫代正丙氧基、硫代异丙氧基、硫代正丁氧基、硫代异丁氧基、硫代仲丁氧基、硫代叔丁氧基、硫代正戊氧基、硫代正己氧基等。
如本发明中所使用的术语“(C3-C7)-环烷基”是指包含3至7个碳原子，有利地包含5至7个碳原子的饱和烃环，特别是环己基、环戊基或环庚基。
如本发明中所使用的术语“杂环烷基”是指具有5至7元的饱和烃环，其中一个或多个碳原子，有利地一个或两个碳原子各自被杂原子如硫、氮或氧原子替代。其尤其可以为四氢呋喃基、哌啶基、吡咯烷基、四氢吡喃基或1,3-二氧戊环基。
如本发明中所使用的术语“芳基”是指优选包含6至10个碳原子且包含一个或多个稠环的芳香烃基，例如苯基或萘基。有利地，其将为苯基。
如本发明中所使用的术语“杂芳基”是指包含一个或多个稠环的芳香基，优选5至10元芳香基，其中环原子由一个或多个，有利地1至4个，更有利地1或2个杂原子如氮、氧或硫原子组成，其余的为碳原子。杂芳基尤其可以为噻吩基、呋喃基、吡咯基、吡啶基、嘧啶基、吡唑基、咪唑基、四唑基或吲哚基。
如本发明中所使用的术语“芳基-(C1-C6)-烷基”是指如以上所定义的任何芳基，其利用如以上所定义的(C1-C6)烷基结合至分子。特别地，其可以为苄基。
如本发明中所使用的术语“杂芳基-(C1-C6)-烷基”是指如以上所定义的杂芳基，其利用如以上所定义的(C1-C6)烷基结合至分子。
如本发明中所使用的术语“(C1-C6)-烷基-芳基”是指如以上所定义的(C1-C6)-烷基，其利用如以上所定义的芳基结合至分子。特别地，其可以为甲基苯基。
如本发明中所使用的术语“(C1-C6)-烷基-杂芳基”是指如以上所定义的(C1-C6)-烷基，其利用如以上所定义的杂芳基结合至分子。
如本发明中所使用的术语“三烷基甲硅烷基”是指-SiAlk1Alk2Alk3基团，其中Alk1、Alk2和Alk3表示相同的或不同的如以上所定义的(C1-C6)-烷基。例如，其可以为三甲基甲硅烷基或三乙基甲硅烷基。
如本发明中所使用的术语“保护基”是指化学基，其在多官能团化合物中选择性阻断反应位点，以允许在另一个未保护的反应位点选择性进行化学反应。
如本发明中所使用的术语“N-保护基”是指旨在合成程序期间保护胺官能团对抗不期望的反应的那些基团。在Greene,"Protective Groups In Organic Synthesis,"(John Wiley&Sons,New York(1981))中公开了常用的N-保护基。被N-保护基保护的胺官能团可以为氨基甲酸酯、酰胺、磺酰胺、N-烷基衍生物、氨基缩醛衍生物、N-苄基衍生物、亚胺衍生物、烯胺衍生物或N-杂原子衍生物。特别地，N-保护基可以为甲酰基；芳基，如苯基，其任选被一个或几个甲氧基取代，如对甲氧基苯基(PMP)；芳基-(C1-C6)烷基，如苄基，芳基部分任选被一个或几个甲氧基取代，如苄基(Bn)、对甲氧基苄基(PMB)或3,4-二甲氧基苄基(DMPM)；-CO-RGP1，如乙酰基(Ac)、新戊酰基(Piv或Pv)、苯甲酰基(Bz)或对甲氧基苄基羰基(Moz)；-CO2-RGP1，如叔丁氧羰基(Boc)、三氯乙氧羰基(TROC)、烯丙氧羰基(Alloc)、苄氧羰基(Cbz或Z)或9-芴甲氧羰基(Fmoc)；-SO2-RGP1，如苯磺酰基、甲苯磺酰基(Ts或Tos)或2-硝基苯磺酰基(也被称作硝基苯磺酰基(nosyl)-Nos或Ns)；等等，
其中RGP1表示任选被一个或几个卤原子如F或Cl取代的(C1-C6)烷基；(C2-C6)烯基，如烯丙基；芳基，如苯基，其任选被一个或几个选自OMe(甲氧基)和NO2(硝基)的基团取代；芳基-(C1-C6)烷基，如苄基，芳基部分任选被一个或几个甲氧基取代；或9-芴甲基。
N-保护基可以特别地为-CO2-RGP1，如Cbz、Boc或Fmoc，尤其是Cbz。
如本发明中所使用的术语“O-保护基”是指在合成程序期间保护羟基对抗不期望的反应的取代基，如在Greene,"Protective Groups In Organic Synthesis,"(John Wiley&Sons,New York(1981))中公开的那些O-保护基。被O-保护基保护的羟基可以为例如醚、酯、碳酸酯、缩醛等。特别地，O-保护基可以为任选被一个或几个(尤其是1至3个)卤原子(如氯原子)取代的(C1-C6)烷基，如甲基、乙基、叔丁基或2,2,2-三氯乙基；芳基-(C1-C6)烷基，如苄基，芳基部分任选被一个或几个甲氧基取代，如苄基(Bn)或对甲氧基苄基(PMB)；式–CAr1Ar2Ar3的三苯甲基(trityl)，如三苯基甲基(也被称作三苯甲基-Tr)、(4-甲氧基苯基)二苯基甲基(也被称作甲氧基三苯甲基-NMT)或双-(4-甲氧基苯基)苯基甲基(也被称作二甲氧基三苯甲基-DMT)；式-CH2ORGP2或-CH2SRGP2(特别是-CH2ORGP2)的取代甲基，例如甲氧基甲基(MOM)、苄氧基甲基、2-甲氧基乙氧基甲基(MEM)、2-(三甲基甲硅烷基)乙氧基甲基或甲硫基甲基；式-CH2CH2ORGP2或–CH2CH2SRGP2(特别是–CH2CH2ORGP2)的取代乙基，例如乙氧基乙基(EE)；式-SiRGP3RGP4RGP5的甲硅烷基，例如三甲基甲硅烷基(TMS)、三乙基甲硅烷基(TES)、叔丁基二甲基甲硅烷基(TBS或TBDMS)和叔丁基二苯基甲硅烷基(TBDPS)；式-CO-RGP6的羰基化基团，如乙酰基(Ac)、新戊酰基(Piv或Pv)或苯甲酰基(Bz)，或者式–CO2-RGP7的羰基化基团，如烯丙氧羰基(Alloc)或9-芴甲氧羰基(Fmoc)；或者四氢吡喃基(THP)或四氢呋喃基
其中Ar1、Ar2和Ar3彼此独立地表示n芳基，如苯基，其任选被一个或几个甲氧基取代；RGP2表示任选被芳基(如苯基)、(C1-C6)烷氧基(如甲氧基)或三烷基甲硅基(如SiMe3)取代的(C1-C6)烷基(如甲基或乙基)；RGP3、RGP4和RGP5彼此独立地表示(C1-C6)烷基或芳基(如苯基)；RGP6和RGP7彼此独立地表示(C1-C6)烷基、(C2-C6)烯基、芳基、芳基-(C1-C6)烷基或9-芴甲基。
O-保护基可以特别地为(C1-C6)烷基或芳基-(C1-C6)烷基(如苄基)。
如本发明中所使用的术语“糖”是指D或L形式的赤藓糖、苏糖、核糖、阿拉伯糖、木糖、来苏糖、阿洛糖、阿卓糖、葡萄糖、甘露糖、古洛糖、艾杜糖、半乳糖、塔罗糖、赤藓酮糖、核酮糖、木酮糖、阿洛酮糖、果糖、山梨糖或塔格糖。
如本发明中所使用的术语“糖基”是指如以上所定义的糖，其利用存在于其异头中心的氧原子结合至分子。
如本发明中所使用的术语“多糖”是指包含至少2个，优选2至10个如以上所定义的糖的链，所述糖利用氧桥结合在一起，在糖的异头位OH官能团和另一个糖的非异头位OH官能团间形成所述氧桥。
如本发明中所使用的术语“多糖基”是指如以上所定义的多糖，其利用存在于末端糖的异头中心的氧原子结合至分子。
根据本发明的化合物可以具有下式(Ia)：
尤其可以具有下式(Ia’)：
其中m、p、R0、R5、R5a、R6、R6a、R7和R7a如以上所定义，尤其p＝1。
式(I)的化合物可以有利地为酸加成盐的形式，所述酸尤其为盐酸。所述酸还可以为乙酸。
m值可以特别地为1。特别地，m＝p＝1。
根据特别的实施方案，R5、R6和R7彼此独立地表示H、CH3、CH(CH3)2、CH2CH(CH3)2、CH(CH3)CH2CH3、CH2Ph、CH2PhOCH3(特别是CH2Ph-pOCH3)、CH2CH2SCH3或下式的基团：
或R5和R5a和/或R6和R6a和/或R7和R7a与携带它们的氮原子和碳原子形成吡咯烷环
条件是，当m＝p＝1时，R5、R6和R7中的至少一个且仅一个基团，或当m＝0且p＝1时，R5和R6中的至少一个且仅一个基团，或当m＝1且p＝0时，R5和R7中的至少一个且仅一个基团，或当m＝p＝0时，R5，表示下式的基团：
根据另一个特别的实施方案，R5、R6和R7彼此独立地表示氢原子、(C1-C6)烷基、芳基、芳基-(C1-C6)烷基，芳基或芳基-(C1-C6)烷基的芳基部分任选被OH或(C1-C6)烷氧基取代，或表示下式的基团：
或R5和R5a和/或R6和R6a和/或R7和R7a与携带它们的氮原子和碳原子形成吡咯烷环
条件是，当m＝p＝1时，R5、R6和R7中的至少一个且仅一个基团，或当m＝0且p＝1时，R5和R6中的至少一个且仅一个基团，或当m＝1且p＝0时，R5和R7中的至少一个且仅一个基团，或当m＝p＝0时，R5，表示下式的基团：
根据另一个特别的实施方案，R5、R6和R7彼此独立地表示氢原子；(C1-C6)烷基；芳基；任选被(C1-C6)烷氧基取代的芳基-(C1-C6)烷基，或代表下式的基团：
或R5和R5a和/或R6和R6a和/或R7和R7a与携带它们的氮原子和碳原子形成吡咯烷环
条件是，当m＝p＝1时，R5、R6和R7中的至少一个且仅一个基团，或当m＝0且p＝1时，R5和R6中的至少一个且仅一个基团，或当m＝1且p＝0时，R5和R7中的至少一个且仅一个基团，或当m＝p＝0时，R5，表示下式的基团：
根据又一个特别的实施方案，R5、R6和R7彼此独立地表示氢原子、(C1-C6)烷基(如甲基)或下式的基团：
或R5和R5a和/或R6和R6a和/或R7和R7a与携带它们的氮原子和碳原子形成吡咯烷环
条件是，当m＝p＝1时，R5、R6和R7中的至少一个且仅一个基团，或当m＝0且p＝1时，R5和R6中的至少一个且仅一个基团，或当m＝1且p＝0时，R5和R7中的至少一个且仅一个基团，或当m＝p＝0时，R5，表示下式的基团：
根据又一个特别的实施方案，R5、R6和R7彼此独立地表示(C1-C6)烷基(如甲基)或下式的基团：
条件是，当m＝p＝1时，R5、R6和R7中的至少一个且仅一个基团，或当m＝0且p＝1时，R5和R6中的至少一个且仅一个基团，或当m＝1且p＝0时，R5和R7中的至少一个且仅一个基团，或当m＝p＝0时，R5，表示下式的基团：
当R5表示时，R5a表示氢或N-保护基，尤其是氢原子。
那么：
-当m＝p＝1时，R6和R7彼此独立地表示氢；任选被(C1-C6)烷氧基或(C1-C6)硫代烷氧基取代的(C1-C6)烷基；芳基；或任选被(C1-C6)烷氧基取代的芳基-(C1-C6)烷基；尤其表示H、CH3、CH(CH3)2、CH2CH(CH3)2、CH(CH3)CH2CH3、CH2Ph、CH2PhOCH3或CH2CH2SCH3，R6a和R7a表示氢或N-保护基，尤其是氢原子，
或R6和R6a和/或R7和R7a与携带它们的氮原子和碳原子形成吡咯烷环
-当m＝0且p＝1时，R7不存在，R6彼此独立地表示氢；任选被(C1-C6)烷氧基或(C1-C6)硫代烷氧基取代的(C1-C6)烷基；芳基；或任选被(C1-C6)烷氧基取代的芳基-(C1-C6)烷基；尤其表示H、CH3、CH(CH3)2、CH2CH(CH3)2、CH(CH3)CH2CH3、CH2Ph、CH2PhOCH3或CH2CH2SCH3，且R6a表示氢或N-保护基，尤其是氢原子，
或R6和R6a与携带它们的氮原子和碳原子形成吡咯烷环
-当m＝1且p＝0时，R6不存在，R7彼此独立地表示氢；任选被(C1-C6)烷氧基或(C1-C6)硫代烷氧基取代的(C1-C6)烷基；芳基；或任选被(C1-C6)烷氧基取代的芳基-(C1-C6)烷基；尤其表示H、CH3、CH(CH3)2、CH2CH(CH3)2、CH(CH3)CH2CH3、CH2Ph、CH2PhOCH3或CH2CH2SCH3，且R7a表示氢或N-保护基，尤其是氢原子，
或R7和R7a与携带它们的氮原子和碳原子形成吡咯烷环
-当m＝p＝0时，R6和R7不存在。
当m＝p＝1时，R6和R7还可以彼此独立地表示氢、(C1-C6)烷基、芳基或芳基-(C1-C6)烷基；尤其表示(C1-C6)烷基、芳基或芳基-(C1-C6)烷基；特别地表示(C1-C6)烷基(如甲基)，且R6a和R7a表示氢或N-保护基，尤其是氢原子。
当m＝0且p＝1时，R6还可以彼此独立地表示氢、(C1-C6)烷基、芳基或芳基-(C1-C6)烷基；尤其表示(C1-C6)烷基、芳基或芳基-(C1-C6)烷基；特别地表示(C1-C6)烷基(如甲基)，且R6a表示氢或N-保护基，尤其是氢原子。
当m＝1且p＝0时，R7还可以彼此独立地表示氢、(C1-C6)烷基、芳基或芳基-(C1-C6)烷基；尤其表示(C1-C6)烷基、芳基或芳基-(C1-C6)烷基；特别地表示(C1-C6)烷基(如甲基)，且R7a表示氢或N-保护基，尤其是氢原子。
当R6表示时，R6a表示氢或N-保护基，尤其是氢原子，且p表示1。
那么：
-当m＝1时，R5和R7彼此独立地表示氢；任选被(C1-C6)烷氧基或(C1-C6)硫代烷氧基取代的(C1-C6)烷基；芳基；或任选被(C1-C6)烷氧基取代的芳基-(C1-C6)烷基；尤其表示H、CH3、CH(CH3)2、CH2CH(CH3)2、CH(CH3)CH2CH3、CH2Ph、CH2PhOCH3或CH2CH2SCH3，且R5a和R7a表示氢或N-保护基，尤其是氢原子，或R5和R5a和/或R7和R7a与携带它们的氮原子和碳原子形成吡咯烷环以及
-当m＝0时，R7不存在，R5彼此独立地表示氢；任选被(C1-C6)烷氧基或(C1-C6)硫代烷氧基取代的(C1-C6)烷基；芳基；或任选被(C1-C6)烷氧基取代的芳基-(C1-C6)烷基；尤其表示H、CH3、CH(CH3)2、CH2CH(CH3)2、CH(CH3)CH2CH3、CH2Ph、CH2PhOCH3或CH2CH2SCH3，且R5a表示氢或N-保护基，尤其是氢原子，
或R5和R5a与携带它们的氮原子和碳原子形成吡咯烷环
当m＝1时，R5和R7还可以彼此独立地表示氢、(C1-C6)烷基、芳基或芳基-(C1-C6)烷基；尤其表示(C1-C6)烷基、芳基或芳基-(C1-C6)烷基；特别地表示(C1-C6)烷基(如甲基)，且R5a和R7a表示氢或N-保护基，尤其是氢原子。
当m＝0时，R5还可以彼此独立地表示氢、(C1-C6)烷基、芳基或芳基-(C1-C6)烷基；尤其表示(C1-C6)烷基、芳基或芳基-(C1-C6)烷基；特别地表示(C1-C6)烷基(如甲基)，且R5a表示氢或N-保护基，尤其是氢原子。
当R7表示时，R7a表示氢或N-保护基，尤其是氢原子，m表示1。有利地，p＝1。
那么：
-当p＝1时，R5和R6彼此独立地表示氢；任选被(C1-C6)烷氧基或(C1-C6)硫代烷氧基取代的(C1-C6)烷基；芳基；或任选被(C1-C6)烷氧基取代的芳基-(C1-C6)烷基；尤其表示H、CH3、CH(CH3)2、CH2CH(CH3)2、CH(CH3)CH2CH3、CH2Ph、CH2PhOCH3或CH2CH2SCH3，且R5a和R6a表示氢或N-保护基，尤其是氢原子，或R5和R5a和/或R6和R6a与携带它们的氮原子和碳原子形成吡咯烷环
-当p＝0时，R6不存在，R5表示氢；任选被(C1-C6)烷氧基或(C1-C6)硫代烷氧基取代的(C1-C6)烷基；芳基；或任选被(C1-C6)烷氧基取代的芳基-(C1-C6)烷基；尤其表示H、CH3、CH(CH3)2、CH2CH(CH3)2、CH(CH3)CH2CH3、CH2Ph、CH2PhOCH3或CH2CH2SCH3，且R5a表示氢或N-保护基，尤其是氢原子，或R5和R5a与携带它们的氮原子和碳原子形成吡咯烷环
当p＝1时，R5和R6还可以彼此独立地表示氢、(C1-C6)烷基、芳基或芳基-(C1-C6)烷基；尤其表示(C1-C6)烷基、芳基或芳基-(C1-C6)烷基；特别地表示(C1-C6)烷基(如甲基)，且R5a和R6a表示氢或N-保护基，尤其是氢原子。
当p＝0时，R5还可以表示氢、(C1-C6)烷基、芳基或芳基-(C1-C6)烷基；尤其表示(C1-C6)烷基、芳基或芳基-(C1-C6)烷基；特别地表示(C1-C6)烷基(如甲基)，且R5a表示氢或N-保护基，尤其是氢原子。
根据一个特别的实施方案，当m＝p＝1时，选自R5、R6和R7的两个基团彼此独立地表示氢；任选被(C1-C6)烷氧基或(C1-C6)硫代烷氧基取代的(C1-C6)烷基；芳基；或任选被(C1-C6)烷氧基取代的芳基-(C1-C6)烷基；尤其表示H、CH3、CH(CH3)2、CH2CH(CH3)2、CH(CH3)CH2CH3、CH2Ph、CH2PhOCH3(特别是CH2Ph-pOCH3)或CH2CH2SCH3。
然后，剩余的基团表示下式的基团：
根据另一个特别的实施方案，当m＝0且p＝1时，R5和R6之一表示氢；任选被(C1-C6)烷氧基或(C1-C6)硫代烷氧基取代的(C1-C6)烷基；芳基；或任选被(C1-C6)烷氧基取代的芳基-(C1-C6)烷基；尤其表示H、CH3、CH(CH3)2、CH2CH(CH3)2、CH(CH3)CH2CH3、CH2Ph、CH2PhOCH3(特别是CH2Ph-pOCH3)或CH2CH2SCH3。
然后，剩余的基团表示下式的基团：
这个特别的实施方案还对应于特别的实施方案，当m＝1且p＝0时，R5和R7之一表示氢；任选被(C1-C6)烷氧基或(C1-C6)硫代烷氧基取代的(C1-C6)烷基；芳基；或任选被(C1-C6)烷氧基取代的芳基-(C1-C6)烷基；尤其表示H、CH3、CH(CH3)2、CH2CH(CH3)2、CH(CH3)CH2CH3、CH2Ph、CH2PhOCH3(特别是CH2Ph-pOCH3)或CH2CH2SCH3，然后剩余的基团表示下式的基团：
根据另一个特别的实施方案，当m＝p＝0时，R5表示下式的基团：
当R5a、R6a和/或R7a表示N-保护基时，所述N-保护基如以上所定义。其可以特别地为芳基，如苯基，任选被一个或几个甲氧基取代；芳基-(C1-C6)烷基，如苄基，芳基部分任选被一个或几个甲氧基取代；-CO-RGP1；-CO2-RGP1；或-SO2-RGP1，其中RGP1如以上所定义。N-保护基尤其可以为-CO2-RGP1基团，如Cbz、Boc或Fmoc，尤其是Cbz。
因此，R5a、R6a和R7a彼此独立地表示氢或N-保护基如-CO2-RGP1，尤其是氢，或R5和R5a和/或R6和R6a和/或R7和R7a与携带它们的氮原子和碳原子形成吡咯烷环
特别地，R5a、R6a和R7a每个都表示氢。
下式的基团：
可以特别地具有以下立体化学：
例如
n值可以特别地为2、3或4，尤其是4。
R0尤其可以表示氢原子或O-保护基(例如芳基-(C1-C6)烷基，如Bn)，特别是氢原子。
R0还可以表示氢原子或(C1-C6)烷基、芳基或芳基-(C1-C6)烷基，该基团不被取代，或被选自卤原子、(C1-C6)烷氧基、OH、COOH和CHO的一个或多个基团取代，该基团尤其不被取代。
R0可以特别地表示氢原子或(C1-C6)烷基或芳基-(C1-C6)烷基，尤其表示H、Bn或Et。
R可以表示CH2OSiRa1Rb1Rc1、CH2OR8、CH2OC(O)R9、CH2OCO2R10、CH2OC(O)NR11R12、CH2OP(O)(OR13)2或CH2OSO3R14基团，有利地表示CH2OSiRa1Rb1Rc1、CH2OR8或CH2OC(O)R9基团，更有利地表示CH2OR8或CH2OC(O)R9基团，甚至更有利地表示CH2OR8基团。
R可以特别地表示CH2OR8基团，其中R8表示氢原子、O-保护基或(C1-C6)烷基、芳基或芳基-(C1-C6)烷基；或CH2OC(O)R9基团，其中R9表示(C1-C6)烷基、芳基或芳基-(C1-C6)烷基。
R可以更特别地表示CH2OR8基团，其中R8表示氢原子或O-保护基。例如，R可以表示CH2OH或CH2OBn基团。
R1和R2可以彼此独立地表示OSiRa2Rb2Rc2、OR15、OC(O)R16、OCO2R17或OC(O)NR18R19基团，有利地表示OSiRa2Rb2Rc2、OR15或OC(O)R16基团，更有利地表示OR15或OC(O)R16基团，甚至更有利地表示OR15基团。
R1和R2可以特别地彼此独立地表示OR15基团，其中R15表示氢原子、O-保护基或(C1-C6)烷基、芳基或芳基-(C1-C6)烷基；或OC(O)R16基团，其中R16表示(C1-C6)烷基、芳基或芳基-(C1-C6)烷基。
R1和R2可以更特别地彼此独立地表示OR15基团，其中R15表示氢原子或O-保护基。例如，R1和R2可以表示OH或OBn基团。
优选地，R1和R2是相同的，尤其表示OH或OBn基团。
特别地，R表示CH2OR8基团，R1和R2彼此独立地表示OR15基团，R8和R15有利地表示氢原子或O-保护基(例如Bn)。R8和两个R15基团可以是相同的，如H或O-保护基(例如Bn)。
根据另一个特别的实施方案，R＝CH2OH且R1＝R2＝OH，或R＝CH2OBn且R1＝R2＝OBn。
根据第一实施方案，R3表示OSiRa3Rb3Rc3、OR22、OC(O)R23、OCO2R24、OCONR25R26、NR29R30、NR31C(O)R32、NR33C(O)OR34、N(C(O)R35)C(O)R36、N(C(O)R37)C(O)OR38或N(C(O)OR39)C(O)OR40基团，有利地表示OSiRa3Rb3Rc3、OR22、OC(O)R23、NR29R30、NR31C(O)R32或NR33C(O)OR34基团，更有利地表示OR22、OC(O)R23或NR31C(O)R32基团，甚至更有利地表示OR22或NR31C(O)R32基团。
R3可以特别地表示OR22基团，其中R22表示氢原子、O-保护基或(C1-C6)烷基、芳基或芳基-(C1-C6)烷基；OC(O)R23基团，其中R23表示(C1-C6)烷基、芳基或芳基-(C1-C6)烷基；或NR31C(O)R32基团，其中R31表示氢原子或(C1-C6)烷基、芳基或芳基-(C1-C6)烷基，R32表示(C1-C6)烷基、芳基或芳基-(C1-C6)烷基。
R3可以更特别地表示OR22基团，其中R22表示氢原子或O-保护基(例如Bn)；或NR31C(O)R32基团，其中R31表示氢原子，R32表示(C1-C6)烷基。例如，R3可以表示OH、OBn、OMOM或NHAc基团，特别地表示OH或OBn。
根据第二实施方案，R3可以表示OSiRa3Rb3Rc3、OR22、OC(O)R23、OCO2R24或OCONR25R26基团，有利地表示OSiRa3Rb3Rc3、OR22或OC(O)R23基团，更有利地表示OR22或OC(O)R23基团，甚至更有利地表示OR22基团。
R3可以特别地表示OR22基团，其中R22表示氢原子、O-保护基或(C1-C6)-烷基、芳基或芳基-(C1-C6)-烷基；或OC(O)R23基团，其中R23表示(C1-C6)-烷基、芳基或芳基-(C1-C6)-烷基。
R3可以更特别地表示OR22基团，其中R22表示氢原子或O-保护基(例如Bn)。例如，R3可以表示OH或OBn基团。
根据一个特别的实施方案，R1、R2和R3是相同的。
根据另一个特别的实施方案，R表示CH2OR8基团；R1和R2彼此独立地表示OR15基团；R3表示OR22基团，R8、R15和R22有利地表示氢原子或O-保护基(例如Bn)。R8和两个R15基团可以是相同的，如H或O-保护基(例如Bn)。R8、两个R15和R22基团也可以是相同的，如H或O-保护基(例如Bn)。
根据另一个特别的实施方案，R＝CH2OH，R1＝R2＝OH或R1＝R2＝R3＝OH。
R4可以有利地表示氢原子或卤原子或OR41基团；特别地表示氢原子或OR41基团；更特别地表示OR41基团。
甚至更有利地，R4可以表示氢原子或卤原子或OH、O-保护基、-O-(C1-C6)-烷基、-O-芳基和–O-(C1-C6)-烷基-芳基；特别地表示氢原子或OH、O-保护基、-O-(C1-C6)-烷基、-O-芳基和–O-(C1-C6)-烷基-芳基；更特别地表示OH、O-保护基、-O-(C1-C6)-烷基、-O-芳基和–O-(C1-C6)-烷基-芳基。
R4还可以表示氢原子或卤原子或OH、-O-(C1-C6)-烷基、-O-芳基和–O-(C1-C6)-烷基-芳基；特别地表示氢原子或OH、-O-(C1-C6)-烷基、-O-芳基和–O-(C1-C6)-烷基-芳基；更特别地表示OH、-O-(C1-C6)-烷基、-O-芳基和–O-(C1-C6)-烷基-芳基。
特别地，R4可以表示氢原子或卤原子(如Br、Cl、F)或OH或O-保护基(例如OMe或OBn)；有利地表示氢原子或OH或O-保护基(例如OMe或OBn)；特别地表示OH或O-保护基，如OH、OMe或OBn。
根据一个特别的实施方案，R0＝H、Et或Bn，R＝CH2OH或CH2OBn，且R1＝R2＝R3＝OH或OBn。
根据另一个特别的实施方案，R0＝H或Bn，R＝CH2OH或CH2OBn，且R1＝R2＝R3＝OH或OBn。
根据另一个特别的实施方案，R0＝H，R＝CH2OH，且R1＝R2＝R3＝OH。
根据又一个特别的实施方案，R0＝H，R＝CH2OH，R1＝R2＝R3＝OH，且R4＝H或OH，特别是OH。
根据一个特别的实施方案，本发明的化合物为式(I)的化合物：
或其盐、溶剂化物、互变异构体、立体异构体或立体异构体以任何比例的混合物，特别是对映异构体的混合物，特别是外消旋体混合物，
其中：
-m表示0或1，
-p表示0或1，尤其表示1，
-R0表示氢原子或O-保护基(例如(C1-C6)烷基或芳基-(C1-C6)烷基)，
-R5a、R6a和R7a彼此独立地表示氢或N-保护基(例如-CO2-RGP1)，以及
-R5、R6和R7彼此独立地表示氢；任选被(C1-C6)烷氧基或(C1-C6)硫代烷氧基取代的(C1-C6)烷基；芳基；任选被(C1-C6)烷氧基取代的芳基-(C1-C6)烷基；或下式的基团：
或R5和R5a和/或R6和R6a和/或R7和R7a与携带它们的氮原子和碳原子形成吡咯烷环
条件是，当m＝p＝1时，R5、R6和R7中的至少一个且仅一个基团，或当m＝0且p＝1时，R5和R6中的至少一个且仅一个基团，或当m＝1且p＝0时，R5和R7中的至少一个且仅一个基团，或当m＝p＝0时，R5，表示下式的基团：
其中
-n表示1至6的整数，
-R表示CH2OR8，
-R1和R2彼此独立地表示OR15，
-R3表示OR22，
-R4表示H或OR41，特别地表示OR41，
或R和R1与携带它们的碳原子一起形成具有下式的环缩醛：
和/或(R1和R2)、(R2和R3)和/或(R3和R4)与携带它们的碳原子一起形成具有下式的环缩醛：
-R8、R15和R22彼此独立地表示氢原子或O-保护基(例如(C1-C6)烷基或芳基-(C1-C6)烷基)，
-R41表示氢原子、O-保护基(例如(C1-C6)烷基或芳基-(C1-C6)烷基)或(C1-C6)烷基、芳基、芳基-(C1-C6)烷基或(C1-C6)-烷基-芳基，该基团可以不被取代，或被选自卤原子和(C1-C6)烷氧基的一个或多个基团取代，以及
-Rd和Re彼此独立地表示氢原子或(C1-C6)烷基。
根据一个特别的实施方案，本发明的化合物具有下式(Ib)、(Ic)、(Id1)、(Id2)、(Ie1)和(Ie2)之一，尤其具有下式(Ib)、(Ic)、(Id2)和(Ie2)之一：
其中n、R0、R、R1、R2、R3、R4、R5a、R6、R6a、R7和R7a如以上所定义。
根据另一个特别的实施方案，本发明的化合物具有下式(If)、(Ig)、(Ih1)、(Ih2)、(Ii1)和(Ii2)之一，尤其具有下式(If)、(Ig)、(Ih2)和(Ii2)之一：
其中n、R0、R、R1、R2、R3、R4、R5a、R6和R6a如以上所定义。
根据又一个特别的实施方案，本发明的化合物具有下式(Ij)、(Ik)、(Il1)、(Il2)、(Im1)和(Im2)之一，尤其具有下式(Ij)、(Ik)、(Il2)和(Im2)之一：
其中n、R0、R、R1、R2、R3、R4、R5a、R6、R6a、R7和R7a如以上所定义。
根据再一个特别的实施方案，本发明的化合物具有下式(In)、(Io)、(Ip1)、(Ip2)、(Iq1)和(Iq2)之一，尤其具有下式(In)、(Io)、(Ip2)和(Iq2)之一：
其中n、R0、R、R1、R2、R3、R4和R5a如以上所定义。
有利地，本发明的化合物为式(Ib)、(If)、(Ij)或(In)的化合物，尤其为式(Ib)、(If)或(Ij)的化合物，特别地为式(Ib)的化合物。
优选地，本发明的化合物为式(Ie1)、(Ii1)、(Im1)或(Iq1)的化合物，尤其为式(Ie1)、(Ii1)或(Im1)的化合物，特别地为式(Ie1)的化合物。
特别地，本发明的化合物为式(Ie2)、(Ii2)、(Im2)或(Iq2)的化合物，尤其为式(Ie2)、(Ii2)或(Im2)的化合物，特别地为式(Ie2)的化合物。
式(I)的化合物可以选自以下化合物：
和其盐和溶剂化物(尤其是酸加成盐，特别是与盐酸或乙酸的酸加成盐，更特别是与盐酸的酸加成盐)。
特别地，式(I)的化合物可以选自以下化合物：
本发明还涉及如以上所定义的式(I)的化合物用于生物材料和微生物的保存和/或保护和/或再生的用途。
本发明还涉及通过将生物材料放置于含有如以上所定义的式(I)的化合物的介质中保存和/或保护生物材料和微生物的方法。
如本发明中所使用的术语“保存”生物材料或微生物是指维持生物材料或微生物的当前存在的状态(尤其是结构和功能)的事实，或者防止或限制该状态的降解的事实。
如本发明中所使用的术语“保护”生物材料或微生物是指保护生物材料或微生物对抗内部或外部侵袭，如应激，例如氧化应激(例如UV)、温度的变化、pH的变化、化学或细菌污染、饥饿条件等的事实。
如本发明中所使用的术语“再生”生物材料或微生物是指使生物材料或微生物的状态(尤其是结构和功能)恢复至内部或外部侵袭以前存在的状态的事实，所述内部或外部侵袭如应激，例如氧化应激(例如UV)、温度的变化、pH的变化、化学或细菌污染、饥饿条件等。其更特别地涉及生物材料，如细胞。
特别地，当被放置于低于37℃，如低于0℃的温度时，尤其在特别用于生物材料如人体器官、组织(例如，用于移植)、体液或细胞的低温贮藏的条件下，可以保护/保存生物材料或微生物。
生物材料或微生物的低温贮藏意味着将生物材料或微生物降温至零下的温度，尤其是通过使用液氮降温至约-196℃的温度。
所述生物材料可以特别地为细胞、组织、体液或器官。
所述微生物可以特别地为原核或真核微生物，尤其是单细胞的或多细胞的。
所述微生物尤其可以选自细菌，真菌，包括酵母，藻类，病毒，包括噬菌体，微寄生物(也被称作寄生微生物)和原生动物。
本发明还涉及如以上所定义的式(I)的化合物作为佐剂在培养、储存和/或保存介质中的用途。
所述培养、储存和/或保存介质旨在用于生物材料或微生物的培养、储存和/或保存。对于培养介质，生物材料将更特别地为细胞或组织。
本发明还涉及一种培养、储存和/或保存介质，其包含至少一种如以上所定义的式(I)的化合物。
所述培养、储存和/或保存介质可以为液体或为凝胶的形式。因此其含有水。然而，所述介质可以为脱水的形式，其可以通过加水被再水化。
其可以含有一种或几种组分，所述组分选自共溶剂(例如二甲基亚砜(DMSO))，盐(例如NaCl、MgCl2、ZnCl2、MnCl2、CuCl2、K2PO4、KH2PO4、K2HPO4、Na2S2O3、K2SO4、MgSO4、KNO3、Ca(NO3)2、Na2CO3、NaHCO3等)，碳源如碳水化合物(例如葡萄糖、乳糖或蔗糖)或多元醇(例如甘露醇或甘油)，维生素(例如维生素B1、B2、B6、B12、B3、B5、B9、B7、C、A、D、E和K)，氮和氨基酸源(例如蛋白胨、牛肉或酵母提取物、血清等)，生长因子(例如胰岛素、转铁蛋白、纤连蛋白、白蛋白)，分化因子，抗生素和抗真菌剂(antimycotics)(也被称作抗菌剂和抗真菌剂(antifungal agent)-例如放线菌素D、两性霉素B、氨苄西林、羧苄西林、头孢噻肟、膦胺霉素、庆大霉素、卡那霉素、新霉素、链霉素、青霉素、多粘菌素B)，激素，细胞因子和微量元素。
可以存在其他添加剂，如指示剂(例如pH指示剂)、抑制剂等。
当其为凝胶的形式时，培养介质可以进一步包含胶凝剂如琼脂、明胶、硅胶等。
优选地，对于这种应用，R0＝H，R＝CH2OH且R1＝R2＝R3＝OH。有利地，R5a、R6a和R7a彼此独立地表示氢，或R5和R5a和/或R6和R6a和/或R7和R7a与携带它们的氮原子和碳原子形成吡咯烷环
本发明还涉及式(I)的化合物用于抗老化和皮肤保护，或用于皮肤再生的化妆品用途。
本发明还涉及通过将如以上所定义的式(I)的化合物应用至皮肤，用于抗老化和皮肤保护，或用于皮肤再生的化妆方法。
本发明还涉及通过将有效量的如以上所定义的式(I)的化合物应用至需要其的人的皮肤，用于抗老化和皮肤保护，或用于皮肤再生的方法。
在这种用途或方法中，可以将式(I)的化合物局部应用于皮肤上。
本发明还涉及一种化妆品或皮肤病学组合物，其包含至少一种如以上所定义的式(I)的化合物和至少一种化妆品或皮肤病学上可接受的赋形剂。
优选地，对于这种化妆品应用，R0＝H，R＝CH2OH且R1＝R2＝R3＝OH。有利地，R5a、R6a和R7a彼此独立地表示氢，或R5和R5a和/或R6和R6a和/或R7和R7a与携带它们的氮原子和碳原子形成吡咯烷环
本发明的化妆品或皮肤病学组合物还可以包含一种或多种添加剂，如抗微生物剂(用于皮肤病学组合物)、抗氧化剂、皮肤病学活性剂(用于皮肤病学组合物)、润肤剂、保湿剂、增稠剂、芳香剂、防腐剂、色素或着色剂或遮光剂。这些添加剂对于本领域技术人员是常规的。
在下面以及Wenninger和McEwen编著的International Cosmetic Ingredient Dictionary and Handbook(The Cosmetic,Toiletry,and Fragrance Assoc.,华盛顿特区,第7版,1997)(在下文中称为“ICT手册”)中列举了这些添加剂的示例。
当将组合物应用至易受微生物(例如细菌、真菌或原生动物)感染的皮肤时，可以使用抗微生物剂。这种试剂的示例包括苄醇、氯丁醇、苯乙醇、乙酸苯汞、山梨酸钾、山梨酸、苯甲酸、苯氧乙醇、对羟基苯甲酸丁酯、对羟基苯甲酸乙酯、对羟基苯甲酸甲酯、对羟基苯甲酸丙酯和苯甲酸钠，特别是对羟基苯甲酸甲酯。在ICT手册的第1612页列举了其他的抗微生物剂。
可以使用抗氧化剂以保护组合物的成分对抗包含在组合物中的或与组合物接触的氧化剂。抗氧化剂的示例包括抗坏血酸棕榈酸酯、丁基化羟基苯甲醚、丁基化羟基甲苯、没食子酸丙酯钾(potassium propyl gallate)、没食子酸辛酯、没食子酸十二烷酯、苯基-α-萘基胺和生育酚如α-生育酚。在ICT手册的第1612-13页列举了其他的抗氧化剂。
皮肤病学活性剂包括用于治疗伤口愈合、炎症、痤疮、银屑病、脓疱病、疱疹、皮炎、疼痛、瘙痒或皮肤刺激的试剂。这种皮肤病学活性剂的示例包括氢化可的松、地塞米松、泛醇、苯酚、盐酸四环素、酵母、己基间苯二酚，核纤层蛋白、激动素、倍他米松、曲安西龙、氟轻松、甲基强的松龙、类视黄醇如视黄醇及视黄酸、氨苯砜、柳氮磺吡啶、间苯二酚、水杨酸、过氧化苯甲酰、红霉素-过氧化苯甲酰、红霉素、克林霉素、莫匹罗星、灰黄霉素、唑类如咪康唑、益康唑、伊曲康唑、氟康唑和酮康唑、环吡酮、烯丙胺类如萘替芬和特比萘芬(terfinafine)、阿昔洛韦、泛昔洛韦、伐昔洛韦、苯佐卡因、利多卡因、地布卡因、普莫卡因盐酸盐、水杨酸甲酯、樟脑、薄荷醇、间苯二酚(resocinol)、以及维生素如生育酚和乙酸生育酚。
润肤剂为软化和平滑皮肤的试剂。润肤剂的示例包括油和蜡如微晶蜡、聚乙烯、甘油三酸酯如蓖麻油、可可脂、红花油、玉米油、橄榄油、鱼肝油、杏仁油、棕榈油、角鲨烯和大豆油的甘油三酸酯、乙酰化单甘油酯、乙氧基化甘油酯、脂肪酸、脂肪酸的烷基酯、脂肪酸的烯基酯、脂肪醇、脂肪醇醚、醚-酯、羊毛脂和羊毛脂衍生物、多元醇酯、蜡酯如蜂蜡、植物蜡、磷脂(phospholid)和甾醇、棕榈酸异丙酯或硬脂酸甘油酯，特别是杏仁油或脂肪醇如鲸蜡醇、硬脂醇和/或肉豆蔻醇。在ICT手册的第1656-61页列举了其他的润肤剂。
硅氧烷是特别优选的润肤剂。可以在本发明中使用的硅氧烷包括但不限于二甲基硅氧烷、环甲基硅氧烷、苯基三甲基硅氧烷、苯基二甲基硅氧烷、鲸蜡基二甲基硅氧烷、硬脂基二甲基硅氧烷、氨端二甲基硅氧烷、C30-45烷基二甲基硅氧烷、C30-45烷基甲基硅氧烷、鲸蜡硬脂基甲基硅氧烷、二甲基硅氧烷共聚物(dimethicone copolyol)、环戊基硅氧烷、环己基硅氧烷或其任何组合。特别地，在本发明中可以使用氨端二甲基硅氧烷作为润肤剂。
增稠剂可以特别地为脂肪醇如鲸蜡醇、硬脂醇和/或肉豆蔻醇。
芳香剂或香料的示例包括胡椒薄荷、玫瑰油、玫瑰水、芦荟、丁香油、薄荷脑、樟脑、桉树油和其他植物提取物。为了消除组合物的某些气味，可以使用掩蔽剂。在ICT手册的第1639-40页列举了其他的芳香剂和掩蔽剂。
可以使用防腐剂以保护组合物免受降解。防腐剂的示例包括苯氧乙醇、对羟基苯甲酸丁酯、对羟基苯甲酸乙酯、对羟基苯甲酸甲酯、对羟基苯甲酸丙酯、苯扎氯铵、苄索氯铵、苯甲酸、苯甲醇，以及其混合物如liquipar油。特别地，其可以为苯氧乙醇、对羟基苯甲酸甲酯或其混合物。在ICT手册的第1654-55页列举了其他的防腐剂。然而，本发明的组合物可以不含防腐剂。
使用色素或着色剂以改变组合物的颜色，如获得白色的组合物。其可以特别地为二氧化钛。
在澄清或透明的组合物中使用遮光剂如氧化钛，以使其不透明。
特别地，根据本发明的化妆品或皮肤病学组合物可以被配制用于局部施用。因此，其可以为洗剂、泡沫剂、凝胶、分散剂、混悬剂、喷雾剂、精华素、霜剂、乳剂、身体乳、洗发水或面膜。
特别地，化妆品或皮肤病学组合物旨在用于抗老化和皮肤保护，或用于皮肤再生。
因此，本发明的发明人开发了方法以制备根据本发明的化合物。因此，本发明还涉及用于制备如以上所定义的式(I)的化合物的方法。
用于制备如以上所定义的式(I)的化合物的第一种方法包括以下连续步骤：
(a)将下式(II)的化合物的亚胺官能团还原以获得式(I)的化合物：
其中：
-m、p、R0、R5a、R6a和R7a如以上所定义，以及
-R5b、R6b和R7b彼此独立地表示氢；任选被(C1-C6)烷氧基或(C1-C6)硫代烷氧基取代的(C1-C6)烷基；芳基；任选被(C1-C6)烷氧基取代的芳基-(C1-C6)烷基；或下式的基团：
其中n、R、R1、R2、R3和R4如以上所定义，
或R5b和R5a和/或R6b和R6a和/或R7b和R7a与携带它们的氮原子和碳原子形成吡咯烷环
条件是，当m＝p＝1时，R5b、R6b和R7b中的至少一个且仅一个基团，或当m＝0且p＝1时，R5b和R6b中的至少一个且仅一个基团，或当m＝1且p＝0时，R5b和R7b中的至少一个且仅一个基团，或当m＝p＝0时，R5b，表示下式的基团：
以及
(b)任选使在前一步骤(a)中获得的化合物成盐或溶剂化，以获得式(I)的化合物的盐或溶剂化物。可以在该步骤之后、之前和或期间进行脱保护步骤。
步骤(a)：
可以在硼氢化物如NaBH3CN或NaBH(OAc)3的存在下进行还原反应。
可以通过将下式(III)的化合物或其盐(尤其是酸加成盐，例如与三氟乙酸或盐酸的酸加成盐)与下式(IV)的化合物反应制备式(II)的化合物：
其中：
-m、p、R0、R5a、R6a和R7a如以上所定义，以及
-R5c、R6c和R7c彼此独立地表示氢；任选被(C1-C6)烷氧基或(C1-C6)硫代烷氧基取代的(C1-C6)烷基；芳基；任选被(C1-C6)烷氧基取代的芳基-(C1-C6)烷基；或下式的基团：
其中n如以上所定义，
或R5c和R5a和/或R6c和R6a和/或R7c和R7a与携带它们的氮原子和碳原子形成吡咯烷环
条件是，当m＝p＝1时，R5c、R6c和R7c中的至少一个且仅一个基团，或当m＝0且p＝1时，R5c和R6c中的至少一个且仅一个基团，或当m＝1且p＝0时，R5c和R7c中的至少一个且仅一个基团，或当m＝p＝0时，R5c，表示下式的基团：
其中R、R1、R2、R3和R4如以上所定义，A1表示CHO或C(OA2)(OA3)，其中A2和A3彼此独立地表示H、(C1-C6)烷基或芳基-(C1-C6)烷基；尤其A2＝H，A3表示(C1-C6)烷基或芳基-(C1-C6)烷基，尤其表示(C1-C6)烷基。
可以在Dean-Stark装置的存在下，在甲苯中在回流温度进行该反应。
还可以在碱如三乙胺，和干燥剂如MgSO4的存在下进行该反应。在这种情况下，可以使用二氯甲烷作为溶剂。
对于该反应，有利地R0≠H，R5a≠H，R≠CH2OH，R1≠H，R2≠H，R3≠H，R4≠OH。因此，为了制备具有这种取代基的化合物，在进行式(III)和(IV)的化合物的反应前，OH或NH官能团应当优选被如以上所定义的保护基保护。可以在该步骤后，尤其在方法的最终步骤进行脱保护步骤。
尤其可以通过下式(V)的化合物的还原制备式(IV)的化合物：
其中A3、R、R1、R2、R3和R4如以上所定义。
可以在本领域技术人员熟知的条件下，尤其是在还原剂如DIBAl-H的存在下进行该还原反应。
可以通过本领域技术人员熟知的方法或文献中描述的方法制备式(V)的化合物。
对于该反应，有利地R≠CH2OH，R1≠H，R2≠H，R3≠H，且R4≠OH。因此，为了制备具有这种取代基的化合物，在进行式(III)和(IV)的化合物的反应前，OH官能团应当优选被如以上所定义的O-保护基保护。可以在该步骤后，尤其在方法的最终步骤进行脱保护步骤。
步骤(b)：
可以通过本领域技术人员熟知的方法，特别是通过在步骤(a)中获得的式(I)的化合物与如前面所定义的有机酸或无机酸、有机碱或无机碱或溶剂的反应，进行成盐或溶剂化步骤。
溶剂尤其可以为在制备根据本发明的化合物的最终步骤中使用的溶剂，特别是在步骤(a)中使用的溶剂。
因此，可以在单个步骤中进行步骤(a)和(b)，不用分离中间化合物。
可以在该步骤之后、之前和或期间进行脱保护步骤。
用于制备如以上所定义的式(I)的化合物的第二种方法包括以下连续步骤：
(i)将下式(IX)的化合物与如以上所定义的式(III)的化合物或其盐(尤其是酸加成盐，例如与三氟乙酸的酸加成盐)反应，
以获得式(I)的化合物：
其中R、R1、R2、R3和R4如以上所定义，LG表示离去基，
以及
(ii)任选使在前一步骤(i)中获得的化合物成盐或溶剂化，以获得式(I)的化合物的盐或溶剂化物。
步骤(i)：
如本发明中所使用的术语“离去基”是指化学基，在亲核取代反应期间，所述化学基可以容易地被亲核试剂替代，在该情况中所述亲核试剂为胺，即带有NH2基团的分子(任选为盐的形式)。该离去基可以特别地为卤原子或磺酸酯。磺酸酯特别地为–OSO2-R48基团，其中R48表示(C1-C6)烷基、芳基、芳基-(C1-C6)烷基或(C1-C6)烷基-芳基，所述基团任选被一个或几个卤原子如氟原子取代。磺酸酯尤其可以为甲磺酸酯(CH3-S(O2)O-)、三氟甲磺酸酯(CF3-S(O)2O-)或对甲苯磺酸酯(p-Me-C6H4-S(O)2O-)。
离去基LG将尤其为磺酸酯如三氟甲磺酸酯。
有利地，在碱如K2CO3的存在下进行步骤(i)的取代反应。可以在溶剂如DMF中进行反应。
对于步骤(i)的反应，有利地，R0≠H，R5a≠H，R≠CH2OH，R1≠H，R2≠H，R3≠H，且R4≠OH。因此，为了制备具有这种取代基的化合物，在进行式(III)和(IX)的化合物的反应前，OH或NH官能团应当优选被如以上所定义的保护基保护。可以在该步骤后，尤其在方法的最终步骤进行脱保护步骤。
可以通过将下式(X)的化合物的羟基官能团(OH)转化为离去基制备式(IX)的化合物：
其中R、R1、R2、R3和R4如以上所定义。
本领域技术人员熟知将OH官能团转化为离去基的反应。当LG＝OTf时，可以在Tf2O和碱如吡啶的存在下进行反应。可以在溶剂如二氯甲烷中进行反应。
对于该反应，有利地，R≠CH2OH、R1≠H、R2≠H、R3≠H、且R4≠OH。因此，为了制备具有这种取代基的化合物，在进行该反应前，OH官能团应当优选被如以上所定义的O-保护基保护。可以在该步骤后，尤其在方法的最终步骤进行脱保护步骤。
可以通过使用标准的还原剂如NaBH4，例如在溶剂如THF、MeOH或THF/MeOH混合物中的还原步骤，由式(V)的化合物制备式(X)的化合物。
步骤(ii)：
可以通过本领域技术人员熟知的方法，特别是通过在步骤(i)中获得的式(I)的化合物与如前面所定义的有机酸或无机酸、有机碱或无机碱或溶剂的反应，进行成盐或溶剂化步骤。
溶剂尤其可以为在制备根据本发明的化合物的最终步骤中使用的溶剂，特别是在步骤(i)中使用的溶剂。
因此，可以在单个步骤中进行步骤(i)和(ii)，不用分离中间化合物。
可以在该步骤之后、之前或期间进行脱保护步骤。
用于制备如以上所定义的式(I)的化合物的第三种方法，其中m和p不都为0，R5表示下式的基团：
所述方法包括以下连续步骤：
(1)将下式(XIa)的化合物或其盐(尤其是酸加成盐，例如与盐酸的酸加成盐)与下式(VII)的化合物或其盐(尤其是酸加成盐，例如与三氟乙酸或盐酸的酸加成盐)反应以获得式(I)的化合物：
其中n、R、R1、R2、R3、R4和R5a如以上所定义，
其中m、p、R0、R6a和R7a如以上所定义(m和p不都为0)，并且R6d和R7d彼此独立地表示氢；任选被(C1-C6)烷氧基或(C1-C6)硫代烷氧基取代的(C1-C6)烷基；芳基；或任选被(C1-C6)烷氧基取代的芳基-(C1-C6)烷基；或R6d和R6a和/或R7d和R7a与携带它们的氮原子和碳原子形成吡咯烷环
以及
(2)任选使在前一步骤(1)中获得的化合物成盐或溶剂化，以获得式(I)的化合物的盐或溶剂化物。
步骤(1)：
可以在用于肽偶联的常规条件下进行步骤(1)的反应，这些条件是本领域技术人员熟知的。
可以在偶联剂的存在下进行肽偶联，所述偶联剂如二异丙基碳二亚胺(DIC)、二环己基碳二亚胺(DCC)、1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐(EDC)、羰基二咪唑(CDI)、2-(1H-苯并三唑-1-基)-1,1,3,3-四甲基脲六氟磷酸盐(HBTU)、2-(1H-苯并三唑-1-基)-1,1,3,3-四甲基脲四氟硼酸盐(TBTU)、O-(7-氮杂苯并三唑-1-基)-1,1,3,3-四甲基脲六氟磷酸盐(HATU)或(苯并三唑-1-基氧基)三吡咯烷基磷鎓六氟磷酸盐(PyBOP)；任选与添加剂或碱如N-羟基琥珀酰亚胺(NHS)、N-羟基-苯并三唑(HOBt)、3,4-二氢-3-羟基-4-氧代-1,2,3-苯并三唑(HOOBt)、1-羟基-7-氮杂苯并三唑(HAt)、N-羟基磺基琥珀酰亚胺(磺基NHS)、二甲基氨基吡啶(DMAP)或N-甲基吗啉(NMM)联合。在该情况中，可以在PyBOP和NMM的存在下进行反应。
有利地，用式(VII)的化合物进行该反应，在式(VII)的化合物中如果p＝1则R6a＝H，如果p＝0则R7a＝H。因此，可以进行取代胺官能团的额外的步骤，以获得式(I)的化合物，在式(I)的化合物中如果p＝1则R6a≠H，如果p＝0则R7a≠H。可以通过本领域技术人员熟知的方法进行该取代步骤。
对于该反应，有利地，R0≠H，R5a≠H，R≠CH2OH，R1≠H，R2≠H，R3≠H，且R4≠OH。因此，为了制备具有这种取代基的化合物，在进行式(III)和(IV)的化合物的反应前，OH或NH官能团应当优选被如以上所定义的保护基保护。可以在该步骤后，尤其在方法的最终步骤进行脱保护步骤。
可以通过下式(VI)的化合物的亚胺官能团的还原获得下式(XIb)的化合物，然后进行带有PG基团的羧酸官能团的脱保护步骤制备式(XIa)的化合物：
其中n、PG、R、R1、R2、R3、R4和R5a如以上所定义，且PG表示O-保护基如(C1-C6)烷基(例如乙基)，
其中n、PG、R、R1、R2、R3、R4和R5a如以上所定义。
可以在硼氢化物如NaBH3CN或NaBH(OAc)3的存在下进行还原反应。
对于该反应，有利地，R0≠H，R5a≠H，R≠CH2OH，R1≠H，R2≠H，R3≠H，且R4≠OH。因此，为了制备具有这种取代基的化合物，在进行式(III)和(IV)的化合物的反应前，OH或NH官能团应当优选被如以上所定义的保护基保护。可以在该步骤后，尤其在方法的最终步骤进行脱保护步骤。
可以通过将下式(VIII)的化合物与式(IX)的化合物反应制备式(XIb)的化合物：
其中n和R5a如以上所定义，且PG表示O-保护基如(C1-C6)烷基(例如乙基)。
可以在碱如K2CO3的存在下进行该反应。可以在溶剂如DMF中进行反应。
对于该反应，有利地，R0≠H，R5a≠H，R≠CH2OH，R1≠H，R2≠H，R3≠H，且R4≠OH。因此，为了制备具有这种取代基的化合物，在进行式(III)和(IX)的化合物的反应前，OH或NH官能团应当优选被如以上所定义的保护基保护。可以在该步骤后，尤其在方法的最终步骤进行脱保护步骤。
步骤(2)：
可以通过本领域技术人员熟知的方法，特别是通过在步骤(1)中获得的式(I)的化合物与如前面所定义的有机酸或无机酸、有机碱或无机碱或溶剂的反应，进行成盐或溶剂化步骤。
溶剂尤其可以为在制备根据本发明的化合物的最终步骤中使用的溶剂，特别是在步骤(1)中使用的溶剂。
因此，可以在单个步骤中进行步骤(1)和(2)，不用分离中间化合物。
可以在该步骤之后、之前和或期间进行脱保护步骤。
可以在以上描述的方法中进行进一步的保护/脱保护步骤，所述步骤和其反应条件是本领域技术人员熟知的。
可以通过本领域技术人员熟知的方法，如通过萃取、蒸发溶剂或通过沉淀或结晶(然后过滤)，将由前面任何方法所获得的化合物从反应介质中分离。
如有必要，还可以通过本领域技术人员熟知的方法，如通过重结晶、蒸馏、硅胶柱色谱法或高效液相色谱法(HPLC)将化合物纯化。
本发明还涉及：
·下式(II)的化合物：
其中m、p、R0、R5a、R5b、R6a、R6b、R7a和R7b如以上所定义，且m和p不都为0，
下式(VI)的化合物：
其中n、R、R1、R2、R3、R4、R5a和PG如以上所定义，
下式(XI)的化合物：
其中n、R、R1、R2、R3、R4和R5a如以上所定义，R49表示H或O-保护基如(C1-C6)烷基，
或其盐、溶剂化物、互变异构体、立体异构体或立体异构体以任何比例的混合物，特别是对映异构体的混合物，特别是外消旋体混合物。
这些式(II)、(VI)或(XI)的化合物作为合成中间体在式(I)的化合物的制备中是有用的。
以下实施例阐明本发明，但不以任何形式限制其范围。
附图说明
图1表示在普通培养基中(存活对照)，在饥饿介质中(无血清对照)和在含有5mg/mL化合物17的饥饿介质中孵育后，随着时间(0至12天)成纤维细胞活力的百分比。
图2和3分别表示在加入0或8当量NaOD并反应2h30后化合物17的溶液的1H RMN谱。
图4和5分别表示在加入0或8当量NaOD并反应2h30后化合物X的溶液的1H RMN谱。
图6表示在加入8当量NaOD并反应3天后化合物X的溶液的1H RMN谱。
图7和8表示在加入8当量NaOD并反应3天后化合物X的溶液的质谱，分别为ESI+和ESI-模式。
具体实施方式
实施例
使用了以下缩写：
Ala ：丙氨酸
Ac ：乙酰基(COCH3)
Bn ：苄基(CH2Ph)
Cbz ：苄氧羰基(CO2CH2Ph)
CDI ：羰基二咪唑
Dab ：2,4-二氨基丁酸
DCE ：二氯乙烷
DMEM ：Dulbecco改进的Eagle介质
DMF ：二甲基甲酰胺
DIBAl-H ：二异丁基氢化铝
DIEA ：N,N-二异丙基乙胺
EDTA ：乙二胺四乙酸
ESI ：电喷雾电离
Et ：乙基(CH2CH3)
FBS ：胎牛血清
Gly ：甘氨酸
Lys ：赖氨酸
Me ：甲基(CH3)
MEM ：最小必需介质
NMM ：N-甲基吗啉
NMR ：核磁共振
OD ：光密度
Orn ：鸟氨酸
PBS ：磷酸盐缓冲盐水
Pro ：脯氨酸
PSNEt2 ：二乙基氨基甲基-聚苯乙烯
PyBOP ：(1H-苯并三唑-1-基氧基)三吡咯烷基磷鎓六氟磷酸盐
Tf ：三氟甲磺酰基(SO2CF3)
TFA ：三氟乙酸
THF ：四氢呋喃
Tyr ：酪氨酸
Z ：苄氧羰基(CO2CH2Ph)
I-根据本发明的化合物的合成
应注意如在以上的说明书中所解释，可以以互变异构体形式的混合物的形式获得R4＝R1＝OH的根据本发明的化合物。出于实践原因，通过其吡喃糖形式表示这些化合物。其涉及根据本发明的化合物17、19、20、22、24、26、28、30、32、34、36、38、40和44。
I-1.一般程序
肽中间体的合成
(其中aa1和aa2彼此独立地表示氨基酸残基)
肽中间体的合成的实施例
一般程序A
Boc-aa1-OH和HCl.H2N-aa2-OBn偶联：将Boc-aa1-OH溶解于二氯甲烷中，并分批加入羰基二咪唑(1.03当量)。在搅拌1h后，滴加HCl.H2N-aa2-OBn(1当量)和DIEA(2.1当量)的二氯甲烷溶液。将反应混合物在室温搅拌过夜。加入1N盐酸水溶液，并将混合物剧烈搅拌10min。分层，并用二氯甲烷萃取水层。将合并的有机层用盐水洗涤，用无水硫酸钠干燥并真空浓缩。通过闪式柱色谱法纯化获得的残余物，以获得Boc-aa1-aa2-OBn。
一般程序B
使用TFA的N-脱保护：将N-Boc肽溶解于二氯甲烷中，并滴加三氟乙酸(20当量)。将反应混合物在室温搅拌过夜，然后真空浓缩，以获得肽的三氟乙酸铵盐(X-＝CF3CO2-)。
一般程序C
使用HCl的N-脱保护：将N-Boc肽溶解于二氯甲烷中，并滴加4M的HCl二氧六环溶液(10当量)。将反应混合物在室温搅拌2h，然后真空浓缩，以获得肽的盐酸铵盐(X-＝Cl-)。
一般程序D
Z,Boc保护的氨基酸和-X.+H3N-aa1-aa2-OBn偶联：将Z,Boc保护的氨基酸溶解于二氯甲烷中，并分批加入羰基二咪唑(1.2当量)。在搅拌1h后，滴加-X.+H3N-aa1-aa2-OBn(1当量)和DIEA(2.1当量)的二氯甲烷溶液。将反应混合物在室温搅拌过夜。加入1M的HCl水溶液，并将混合物剧烈搅拌10min。分层，并用二氯甲烷萃取水层。将合并的有机层用盐水洗涤，用无水硫酸钠干燥并真空浓缩。通过闪式柱色谱法纯化获得的残余物，以获得偶联的残余物。
Boc-Ala-Ala-OBn：用Boc-Ala-OH(10g,52.9mmol,1当量)和HCl.H2N-Ala-OBn(11.4g,52.9mmol,1当量)使用一般程序A。浅黄色油状物(18.2g,98％)。
MS(ESI+):351.2[M+H]+；373.2[M+Na]+；389.1[M+K]+
HCl.H2N-Ala-Ala-OBn：由Boc-Ala-Ala-OBn(18.04g,51.5mmol,1当量)起始使用一般程序C。白色固体(14.75g,100％)。
MS(ESI+):251.1[M-HCl+H]+；273.1[M-HCl+Na]+；289.1[M-HCl+K]+
TFA.H2N-Ala-Ala-OBn：由Boc-Ala-Ala-OBn(17.2g,49.03mmol,1当量)起始使用一般程序B。浅黄色油状物(17.9g,100％)。
1H NMR(CDCl3,300MHz):1.3-1.5(m,6H),4.0-4.2(m,1H),4.3-4.5(m,1H),5.02(d,1H,1JH-H＝11.5Hz),5.11(d,1H,1JH-H＝11.5Hz),7.1-7.4(m,5H),7.65(d,1H,3JH-H＝6Hz),7.8-8.3(m,2H)
Z-Lys(Boc)-Ala-Ala-OBn：由HCl.H2N-ALa-Ala-OBn(15g,52.3mmol,1当量)和Z-Lys(Boc)-OH(19.9g,52.5mmol,1当量)起始使用一般程序D。白色固体(21.2g,67％)。
MS(ESI+):613.3[M+H]+；635.2[M+Na]+；651.2[M+K]+
Z-Lys(HCl)-Ala-Ala-OBn：由Z-Lys(Boc)-Ala-Ala-OBn(21g,34.3mmol,1当量)起始使用一般程序C。白色固体(16.4g,87％)。
MS(ESI+):513.2[M-HCl+H]+；535.2[M-HCl+Na]+；551.2[M-HCl+K]+
Z-Lys(Boc)-Ala-OBn：用Z-Lys(Boc)-OH(2g,5.26mmol,1当量)和HCl.H2N-Ala-OBn(1.13g,5.26mmol,1当量)代替HCl.H2N-aa1-aa2-OBn使用一般程序D。浅黄色固体(1.89g,66％)。
1H NMR_(CDCl3,300MHz):1.3(m,16H)；1.6-1.7(m,2H)；3.0(m,2H)；4.1(m,1H)；4.5(m,1H)；4.6(m,1H)；5.0(s,2H)；5.1(m,1H)；5,5(d,7Hz,1H)；6,8(d,6.5Hz,1H,)；7.3(m,10H)。
Z-Lys(HCl)-Ala-OBn：由Z-Lys(Boc)-Ala-OBn(756mg,1.40mmol,1当量)起始使用一般程序C。白色固体(778mg,100％)。
MS(ESI+):223.1[M+H]+；245.1[M+Na]+；261.1[M+K]+
Boc-Gly-Gly-OBn：用Boc-Gly-OH(800mg,4.57mmol,1当量)和HCl.H2N-Gly-OBn(922mg,4.57mmol,1当量)使用一般程序A。无色油状物(1.40g,95％)。
MS(ESI+):323.2[M+H]+；345.1[M+Na]+；361.1[M+K]+
HCl.H2N-Gly-Gly-OBn：由Boc-Gly-Gly-OBn(1.37g,4.25mmol,1当量)起始使用一般程序C。白色固体(1.14g,100％)。
MS(ESI+):223.1[M-HCl+H]+；245.1[M-HCl+Na]+；261.1[M-HCl+K]+
Z-Lys(Boc)-Gly-Gly-OBn：由HCl.H2N-Gly-Gly-OBn(1.12g,4.17mmol,1当量)和Z-Lys(Boc)-OH(1.68g,4.17mmol,1当量)起始使用一般程序D。黄色油状物(1.69g,69％)。
MS(ESI+):585.3[M+H]+；607.2[M+Na]+；623.2[M+K]+
Z-Lys(HCl)-Gly-Gly-OBn：由Z-Lys(Boc)-Gly-Gly-OBn(1.60g,2.79mmol,1当量)起始使用一般程序C。白色固体(1.59g,100％)。
MS(ESI+):485.2[M-HCl+H]+；507.2[M-HCl+Na]+；523.2[M-HCl+K]+
Boc-Ala-Gly-OBn：用Boc-Ala-OH(400mg,2.11mmol,1当量)和HCl.H2N-Gly-OBn(425mg,2.11mmol,1当量)使用一般程序A。无色油状物(666mg,94％)。
MS(ESI+):359.2[M+Na]+；375.1[M+K]+
TFA.H2N-Ala-Gly-OBn：由Boc-Ala-Gly-OBn(646mg,1.92mmol,1当量)起始使用一般程序B。黄色油状物(759mg,100％)。
MS(ESI+):237.1[M-TFA+H]+；259.1[M-TFA+Na]+
Z-Lys(Boc)-Ala-Gly-OBn：由TFA.H2N-Ala-Gly-OBn(739mg,1.87mmol,1当量)和Z-Lys(Boc)-OH(711mg,1.87mmol,1当量)起始使用一般程序D。白色固体(797mg,71％)。
MS(ESI+):621.4[M+Na]+；637.4[M+K]+
Z-Lys(TFA)-Ala-Gly-OBn：由Z-Lys(Boc)-Ala-Gly-OBn(777mg,1.30mmol,1当量)起始使用一般程序B。黄色油状物(947mg,100％)。
MS(ESI+):499.3[M-TFA+H]+；521.3[M-TFA+Na]+；537.3[M-TFA+K]+
Boc-Gly-Ala-OBn：用Boc-Gly-OH(400mg,2.29mmol,1当量)和HCl.H2N-Ala-OBn(494mg,2.29mmol,1当量)使用一般程序A。无色油状物(703mg,91％)。
MS(ESI+):359.2[M+Na]+；375.1[M+K]+
TFA.H2N-Gly-Ala-OBn：由Boc-Gly-Ala-OBn(683mg,2.03mmol,1当量)起始使用一般程序B。黄色油状物(772mg,100％)。
MS(ESI+):237.1[M-TFA+H]+；259.1[M-TFA+Na]+
Z-Lys(Boc)-Gly-Ala-OBn：由TFA.H2N-Gly-Ala-OBn(753mg,1.98mmol,1当量)和Z-Lys(Boc)-OH(753mg,1.98mmol,1当量)起始使用一般程序D。黄色油状物(939mg,79％)。
MS(ESI+):621.4[M+Na]+；637.4[M+K]+
Z-Lys(TFA)-Gly-Ala-OBn：由Z-Lys(Boc)-Gly-Ala-OBn(919mg,1.53mmol,1当量)起始使用一般程序B。黄色油状物(1.10g,100％)。
MS(ESI+):499.3[M-TFA+H]+；521.3[M-TFA+Na]+
Z-Orn(Boc)-Ala-Ala-OBn：由TFA.H2N-Ala-Ala-OBn(878mg,2.41mmol,1.04当量)和Z-Orn(Boc)-OH(850mg,2.32mmol,1当量)起始使用一般程序D。白色固体(879mg,63％)。
MS(ESI+):599.3[M+H]+；621.3[M+Na]+；637.3[M+K]+
Z-Orn(HCl)-Ala-Ala-OBn：由Z-Orn(Boc)-Ala-Ala-OBn(874mg,1.46mmol,1当量)起始使用一般程序C。白色固体(822mg,100％)。
MS(ESI+):499.3[M-HCl+H]+；521.2[M-HCl+Na]+
Z-Dab(Boc)-Ala-Ala-OBn：由TFA.H2N-Ala-Ala-OBn(463mg,1.27mmol,1当量)和Z-Dab(Boc)-OH(447mg,1.27mmol,1当量)起始使用一般程序D。由Z-Dab(Boc)-OH.DCHA(二环己胺盐)制备Z-Dab(Boc)-OH如下：将盐在二氯甲烷中稀释，将该溶液用硫酸氢钾的饱和水溶液洗涤三次，用无水硫酸钠干燥并真空浓缩。白色固体(402mg,54％)。
MS(ESI+):585.3[M+H]+；607.3[M+Na]+；623.3[M+K]+
Z-Dab(HCl)-Ala-Ala-OBn：由Z-Dab(Boc)-Ala-Ala-OBn(400mg,0.684mmol,1当量)起始使用一般程序C。白色固体(413mg,100％)。
MS(ESI+):485.2[M-HCl+H]+；507.2[M-HCl+Na]+
Boc-Ala-Pro-OBn：在N2气氛下，将Boc-Ala-OH(1.00g,5.28mmol,1当量)溶解于二氯甲烷(8mL)中。顺序加入HCl.H2N-Pro-OBn(1.40g,5.81mmol,1.1当量)和2-溴乙基吡啶(1.59g,5.81mmol,1.1当量)。将反应混合物冷却至0℃，并滴加N,N-二异丙基乙胺(2.8mL,16.9mmol,3.2当量)。使混合物升至室温，并搅拌5h。反应完成后，将反应混合物用二氯甲烷(20mL)稀释。将获得的溶液用柠檬酸水溶液(10％,15mL)洗涤，然后用碳酸氢钠水溶液(5％,15mL)洗涤，然后用无水硫酸钠干燥并真空浓缩。通过闪式柱色谱法纯化获得的残余物，以获得浅黄色油状物的Boc-Ala-Pro-OBn(1.34g,67％)。
MS(ESI+):399.2[M+Na]+
TFA.H2N-Ala-Pro-OBn：由Boc-Ala-Pro-OBn(1.27g,3.7mmol,1当量)起始使用一般程序B。浅棕色油状物(1.31g,100％)。
MS(ESI+):277.2[M-TFA+H]+；299.1[M-TFA+Na]+
Z-Lys(Boc)-Ala-Pro-OBn：由Z-Lys(Boc)-OH(1.30mg,3.43mmol,1当量)和TFA.H2N-Ala-Pro-OBn(1.34mg,3.43mmol,1当量)起始使用一般程序D。白色固体(1.24g,57％)。
MS(ESI+):639.3[M+H]+；661.3[M+Na]+；677.3[M+K]+
Z-Lys(TFA)-Ala-Pro-OBn：由Z-Lys(Boc)-Ala-Pro-OBn(1.08g,1.69mmol,1当量)起始使用一般程序B。浅棕色固体(1.1g,56％)。
MS(ESI+):539.3[M-TFA+H]+
Boc-Pro-Ala-OBn：用Boc-Pro-OH(2.0g,9.29mmol,1当量)和HCl.H2N-Ala-OBn(2.04mg,9.29mmol,1当量)使用一般程序A。白色固体(2.79g,80％)。
MS(ESI+):399.2[M+Na]+；415.2[M+K]+
TFA.H2N-Pro-Ala-OBn：由Boc-Pro-Ala-OBn(537mg,1.43mmol,1当量)起始使用一般程序B。浅黄色固体(558mg,100％)。
MS(ESI+):277.2[M-TFA+H]+；299.1[M-TFA+Na]+
Z-Lys(Boc)-Pro-Ala-OBn：在N2气氛下，将TFA.H2N-Pro-Ala-OBn(542mg,1.39mmol,1.1当量)溶解于二氯甲烷(7mL)中。顺序加入Z-Lys(Boc)-OH(479mg,1.26mmol,1当量)和2-溴乙基吡啶(380mg,1.39mmol,1.1当量)。将反应混合物冷却至0℃，并滴加N,N-二异丙基乙胺(670μL,4.03mmol,3.2当量)。使混合物升至室温，并搅拌5h。反应完成后，将反应混合物用二氯甲烷(15mL)稀释。将获得的溶液用柠檬酸水溶液(10％,10mL)洗涤，然后用碳酸氢钠水溶液(5％,10mL)洗涤，然后用无水硫酸钠干燥并真空浓缩。通过闪式柱色谱法纯化获得的残余物，以获得白色固体的Z-Lys(Boc)-Pro-Ala-OBn(382mg,43％)。
MS(ESI+):639.5[M+H]+；661.5[M+Na]+；677.4[M+K]+
Z-Lys(TFA)-Pro-Ala-OBn：由Z-Lys(Boc)-Pro-Ala-OBn(358mg,0.56mmol,1当量)起始使用一般程序B。浅棕色固体(365mg,100％)。
MS(ESI+):539.3[M-TFA+H]+
Z-Ala-Lys(Boc)-OMe：由Z-Ala-OH(500mg,2.24mmol,1当量)和HCl.H2N-Lys(Boc)-OMe(665mg,2.24mmol,1当量)起始使用一般程序A。粘稠的无色油状物(863mg,83％)。
MS(ESI+):466.3[M+H]+；488.2[M+Na]+；504.2[M+K]+
Z-Ala-Lys(Boc)-OH：向Z-Ala-Lys(Boc)-OMe(786mg,1.69mmol)的四氢呋喃(49mL)溶液中加入氢氧化锂(121mg,3当量)的水(5.6mL)溶液。将反应混合物搅拌16h，然后加入盐酸水溶液(1M)直至pH 1，并将混合物用乙酸乙酯萃取3次。将合并的有机层用无水硫酸钠干燥并真空浓缩，以获得浅黄色油状物(763mg,100％)。
MS(ESI+):452.2[M+H]+；474.2[M+Na]+；490.2[M+K]+
Z-Ala-Lys(Boc)-Ala-OBn：由Z-Ala-Lys(Boc)-OH(585mg,1.23mmol,1当量)代替Boc-aa1-OH和HCl.H2N-Ala-OBn(265mg,1.23mmol,1当量)起始使用一般程序A。白色固体(364mg,48％)。
MS(ESI+):613.3[M+H]+；635.3[M+Na]+；651.3[M+K]+
Z-Ala-Lys(HCl)-Ala-OBn：由Z-Ala-Lys(Boc)-Ala-OBn(364mg,mmol,1当量)起始使用一般程序C。白色固体(326mg,100％)。
MS(ESI+):513.3[M-HCl+H]+；535.3[M-HCl+Na]+；551.2[M-HCl+K]+
Boc-Tyr(OMe)-Ala-OBn：由Boc-Tyr(OMe)-OH(1.35g,4.57mmol,1当量)和HCl.H2N-Ala-OBn(1.084mg,5.03mmol,1.1当量)起始使用一般程序A。白色固体(863mg,83％)。
MS(ESI+):457.2[M+H]+；479.2[M+Na]+；495.2[M+K]+
HCl.H2N-Tyr(OMe)-Ala-OBn：由Boc-Tyr(OMe)-Ala-OBn(1.7g,mmol,1当量)起始使用一般程序C。白色固体(1.51g,100％)。
MS(ESI+):357.2[M-HCl+H]+；379.2[M-HCl+Na]+
Z-Lys(Boc)-Tyr(OMe)-Ala-OBn：由HCl.H2N-Tyr(OMe)-Ala-OBn(1.53g,3.89mmol,1当量)和Z-Lys(Boc)-OH(1.63g,4.28mmol,1.1当量)起始使用一般程序D。浅黄色固体(1.01g,40％)。
MS(ESI+):720.4[M+H]+；766.5[M+K]+
Z-Lys(HCl)-Tyr(OMe)-Ala-OBn：由Z-Lys(Boc)-Tyr(OMe)-Ala-OBn(970mg,1.35mmol,1当量)起始使用一般程序C。浅黄色固体(880mg,100％)。
MS(ESI+):619.3[M-HCl+H]+；641.3[M-HCl+Na]+；657.3[M-HCl+K]+
中间体化合物2和4的合成：
其中R1＝Bn
向由WO 2012/085221 A1中描述的方法获得的化合物1(1.0g,1.33mmol,1当量)的冷(-78℃)无水甲苯(13mL)溶液中滴加二异丁基氢化铝溶液(甲苯中1.2M,1.4mL,1.66mmol,1.25当量)，并在氮气氛下将反应混合物在相同温度搅拌6h30。将反应混合物用乙醇(3mL)淬灭，升温至-20℃，并在该温度搅拌15分钟。加入洛瑟尔氏盐(Rochelle’s salt)溶液(20％,8ml)，将混合物升至室温并搅拌1h。将反应混合物用乙酸乙酯(3×30mL)萃取。将合并的有机层用盐水(30mL)洗涤，用无水硫酸钠干燥，过滤并真空浓缩，以获得化合物2(987mg，无色油状物)，其不作任何进一步的纯化在下一步中使用。
质量(ESI+)：777.4[M+Na]+,793.4[M+K]+
其中R1＝Me
如以上相同的程序，使用在Bioorganic&Medicinal Chemistry Letters,2010,20,5251-5254中描述的化合物3(3.56g,5.26mmol)作为起始材料，得到化合物4(3.11g，浅黄色油状物)。
质量(ESI+)：701.3[M+Na]+,717.3[M+K]+
化合物15、21、23、25、27、29、31、33、35、37、39和43的合成
将肽或氨基酸缩合至半缩酮2和随后的还原：在氮气氛下，将半缩酮2衍生物溶解于二氯乙烷(0.05M)中。顺序加入硫酸镁(3当量)、肽或氨基酸衍生物(0.95至1当量)和PS-NEt2(3.2mmol.g-1,2当量)。将反应混合物在室温搅拌30min，然后回流20h。反应完成后(通过19F NMR监测)，将反应混合物在填料(plug of)上快速过滤，用二氯乙烷(约初始量的10％)洗涤所述填料。将获得的溶液冷却至0℃，在氮气气氛中顺序加入三乙酰氧基硼氢化钠(2当量)和乙酸(1当量)。在0℃搅拌30min后，将反应混合物升至室温并搅拌过夜。缓慢加入碳酸氢钠的饱和水溶液，并将混合物搅拌2h。将层分开，并用二氯甲烷萃取水层。将合并的有机层用盐水洗涤，用无水硫酸钠干燥并真空浓缩，以获得粗糖肽衍生物，其通过闪式柱色谱法纯化。
化合物15：由半缩酮2(9.63g,12.76mmol,1当量)和Z-Lys(TFA)-Ala-Ala-OBn(7.59g,12.12mmol,0.95当量)起始使用一般程序。白色固体(6.71g,46％)。
MS(ESI+):1205.6[M+H]+
化合物21：由半缩酮2(1.02g,1.35mmol,1当量)和Z-Lys(HCl)-Ala-OBn(751mg,1.35mmol,1当量)起始使用一般程序。浅黄色油状物(1.14g,74％)。
MS(ESI+):1134.5[M+H]+；1156.5[M+Na]+
化合物23：由半缩酮2(1.02g,1.35mmol,1当量)和Z-Lys(HCl)-Gly-Gly-OBn(786mg,1.35mmol,1当量)起始使用一般程序。白色固体(1.03g,65％)。
MS(ESI+):1177.5[M+H]+；1199.5[M+Na]+
化合物25：由半缩酮2(1.01g,1.34mmol,当量)和Z-Lys(TFA)-Ala-Gly-OBn(924mg,1.27mmol,0.95当量)起始使用一般程序。白色固体(719mg,47％)。
MS(ESI+):1191.5[M+H]+；1213.5[M+Na]+；1229.5[M+K]+
化合物27：由半缩酮2(1.13g,1.49mmol,1当量)和Z-Lys(TFA)-Gly-Ala-OBn(1.02g,1.42mmol,0.95当量)起始使用一般程序。浅黄色油状物(774mg,46％)。
MS(ESI+):1191.5[M+H]+；1213.5[M+Na]+；1229.5[M+K]+
化合物29：由半缩酮2(1.07g,1.42mmol,1当量)和Z-Orn(HCl)-Ala-Ala-OBn(802mg,1.42mmol,1当量)起始使用一般程序。白色固体(1.23g,73％)。
MS(ESI+):1191.5[M+H]+
化合物31：由半缩酮2(516mg,684mmol,1当量)和Z-Dab(HCl)-Ala-Ala-OBn(413mg,684mmol,1当量)起始使用一般程序。无色油状物(588mg,73％)。
MS(ESI+):1177.5[M+H]+；1199.5[M+Na]+；1215.5[M+K]+
化合物33：由半缩酮2(497mg,0.658mmol,1当量)和Z-Lys(TFA)-Ala-Pro-OBn(408mg,0.625mmol,0.95当量)起始使用一般程序。浅黄色油状物(466mg,61％)。
RMN 19F(CDCl3,282.5MHz)(无1H偶联):-110.1(d,2JF-F＝257Hz),-111.0(d,2JF-F＝257Hz)
化合物35：由半缩酮2(396mg,0.524mmol,1当量)和Z-Lys(TFA)-Pro-Ala-OBn(326mg,0.498mmol,0.95当量)起始使用一般程序。白色固体(409mg,67％)。
MS(ESI+):1231.6[M+H]+
化合物37：由半缩酮2(448mg,0.594mmol,1当量)和Z-Ala-Lys(HCl)-Ala-OBn(331mg,0.594mmol,1当量)起始使用一般程序。无色油状物(470mg,66％)。
MS(ESI+):1205.6[M+H]+；1227.5[M+Na]+；1243.5[M+K]+
化合物39：由半缩酮2(1.01g,1.34mmol,1当量)和Z-Lys(HCl)-Tyr(OMe)-Ala-OBn(830mg,1.27mmol,0.95当量)起始使用一般程序。白色固体(1.02g,59％)。
MS(ESI+):1311.6[M+H]+；1333.6[M+Na]+；1349.6[M+K]+
化合物43：由半缩酮2(408mg,0.54mmol,1当量)和Z-Lys(HCl)-OBn(255mg,0.54mmol,1当量)起始使用一般程序。无色油状物(310mg,54％)。
MS(ESI+):1063.4[M+H]+
化合物17、22、24、26、28、30、32、34、36、38、40和44的合成
使用氢解的糖肽脱保护：在惰性气氛下，向受保护的糖肽的四氢呋喃溶液(0.025M)中加入盐酸水溶液(1.0M,3.6当量)，然后加入Pd/C(10％Pd,0.1当量)。将烧瓶抽真空并充满H2(3次)。将反应混合物在H2气氛下剧烈搅拌18h。反应完成后，将混合物过滤(Millipore 0.45μm)，并将过滤器用水洗涤。将滤液真空浓缩，将获得的残余物溶解于水中并冷冻干燥，以获得期望的化合物。
化合物17：由化合物15(6.48g,5.38mmol,1当量)起始使用一般程序。白色固体(3.21g,99％)。
MS(ESI+):531.2[M-2HCl+H]+；553.2[M-2HCl+Na]+；569.2[M-2HCl+K]+
化合物22：由化合物21(702mg,0.619mmol,1当量)起始使用一般程序。白色固体(330mg,100％)。
MS(ESI+):460.2[M-2HCl+H]+；482.2[M-2HCl+Na]+；498.1[M-2HCl+K]+
化合物24：由化合物23(700mg,0.595mmol,1当量)起始使用一般程序。白色固体(344mg,100％)。
MS(ESI+):503.2[M-2HCl+H]+；525.2[M-2HCl+Na]+；541.2[M-2HCl+K]+
化合物26：由化合物25(640mg,0.537mmol,1当量)起始使用一般程序。白色固体(307mg,97％)。
MS(ESI+):517.2[M-2HCl+H]+；539.2[M-2HCl+Na]+；555.2[M-2HCl+K]+
化合物28：由化合物27(604mg,0.507mmol,1当量)起始使用一般程序。白色固体(290mg,97％)。
MS(ESI+):517.2[M-2HCl+H]+；539.2[M-2HCl+Na]+；555.2[M-2HCl+K]+
化合物30：由化合物29(700mg,0.588mmol,1当量)起始使用一般程序。白色固体(356mg,100％)。
MS(ESI+):517.2[M-2HCl+H]+；539.2[M-2HCl+Na]+
化合物32：由化合物31(643mg,0.55mmol,1当量)起始使用一般程序。浅橙色固体(290mg,92％)。
MS(ESI-):501.2[M-2HCl-H]-
化合物34：由化合物33(436mg,0.354mmol,1当量)起始使用一般程序。白色固体(227mg,100％)。
MS(ESI+):557.2[M-2HCl+H]+
化合物36：由化合物35(380mg,0.309mmol,1当量)起始使用一般程序。白色固体(196mg,100％)。
MS(ESI+):557.2[M-2HCl+H]+
化合物38：由化合物37(470mg,0.39mmol,1当量)起始使用一般程序。白色固体(235mg,100％)。
MS(ESI-):529.3[M-2HCl-H]-
化合物40：由化合物39(50mg,0.038mmol,1当量)起始使用一般程序。白色固体(21mg,78％)。
MS(ESI-):635.2[M-2HCl-H]-
化合物44：由化合物43(750mg,0.705mmol,1当量)起始使用一般程序。白色固体(305mg,94％)。
MS(ESI-):387.1[M-2HCl-H]-
I-2.特别程序
中间体化合物5和6的合成：
其中R1＝Bn
在氮气氛下，使用迪安-斯塔克装置将化合物2(606mg,0.80mmol,1当量)和N-羧基苯甲酰基-乙基-赖氨酸(485mg,1.61mmol,2当量)在甲苯(8mL)中回流。3h后，将混合物真空浓缩，以获得化合物5，其不作进一步的纯化在下一步中使用。
19F NMR(CDCl3,282.5MHz)(无H偶联):-110.2(d,J＝263Hz,1F)；-114.1(d,J＝263Hz,1F)。
其中R1＝Me
如以上相同的程序，使用化合物4(1.08g,1.59mmol)作为起始材料，得到化合物6，其不作进一步的纯化在下一步中使用。
19F NMR(CDCl3,282.5MHz)(无H偶联):-109.7(d,J＝263Hz,1F)；-114.5(d,J＝263Hz,1F).
化合物7和8的合成：
其中R1＝Bn
在氮气氛下，将氰基硼氢化钠(151mg,2.41mmol,3当量)加入至化合物5(802mg,0.803mmol,1当量)在四氢呋喃(1.6mL)和甲醇(7.4mL)中的溶液中。将反应混合物在室温搅拌16h。加入饱和氯化铵水溶液(8mL)，并将混合物用乙酸乙酯(3×15mL)萃取。将合并的有机层用盐水(15mL)洗涤，用无水硫酸钠干燥，过滤并真空浓缩。通过闪式柱色谱法纯化残余物，以获得化合物7(382mg，31％，无色油状物)。
质量(ESI+):1001.6[M+H]+,1023.5[M+Na]+,1039.5[M+K]+
其中R1＝Me
如以上相同的程序，使用化合物6(1.47g,1.59mmol)作为起始材料，得到化合物8(796mg，54％，浅棕色油状物)。
质量(ESI+):925.3[M+H]+
使用取代途径的化合物8(R1＝Me)的可选合成：
中间体化合物9(R1＝Me)的合成：
在氮气氛下，将硼氢化钠(1g,26.4mmol,7当量)分批加入至冷的(0℃)化合物3(2.55g,3.77mmol,1当量)的甲醇(30mL)和THF(2.5mL)溶液中。使反应混合物升至室温，并搅拌3h30。加入饱和氯化铵溶液(10mL)和盐水(10mL)，并将混合物用乙酸乙酯(3×30mL)萃取。将合并的有机层用盐水(30mL)洗涤，用无水硫酸钠干燥，过滤并真空浓缩，以获得化合物9(2.35g，98％，浅黄色油状物)。
质量(ESI+):657.3[M+Na]+,673.3[M+K]+
19F NMR(CDCl3,282.5MHz)(无H偶联):-113.6(d,J＝262Hz,1F)；-114.6(d,J＝262Hz,1F)。
中间体化合物10(R1＝Me)的合成：
在氮气氛下，将吡啶(650μL,7.97mmol,2.2当量)和三氟甲磺酸酐(1.3mL,7.97mmol,2.2当量)依次加入至冷的(-78℃)化合物9(2.3g,3.62mmol,1当量)的二氯甲烷(36mL)溶液中。使反应混合物升至室温，并搅拌2h。加入水(20mL)，并将混合物用二氯甲烷(3×30mL)萃取。将合并的有机层用无水硫酸钠干燥，过滤并真空浓缩，以获得化合物10(2.79g，100％，淡橙色油状物)。
质量(ESI+):789.3[M+Na]+,805.2[M+K]+
19F NMR(CDCl3,282.5MHz)(无H偶联):-113.4(d,J＝259Hz,1F)；-115.6(d,J＝259Hz,1F)。
化合物8(R1＝Me)的合成：
在氮气氛下，向化合物10(100mg,0.13mmol,1当量)的干燥DMF(0.65mL)溶液中加入Z-Lys(NH2)-OEt(80mg,0.26mmol,2当量)的干燥DMF(0.65mL)溶液和碳酸钾(22mg,0.261mmol,2当量)。将反应混合物在室温搅拌2h30，并在50℃搅拌15h。冷却后，加入饱和氯化铵溶液(5mL)和盐水(5mL)，并将混合物用乙酸乙酯(3×10mL)萃取。将合并的有机层用盐水(2×20mL)洗涤，用无水硫酸钠干燥，过滤并真空浓缩，以获得化合物8(15mg，13％，无色油状物)。
质量(ESI+):925.3[M+H]+
化合物11和12的合成：
其中R1＝Bn
将2N氢氧化锂水溶液(75μL,0.015mmol,2当量)滴加至冷的(0℃)化合物7(75mg,0.075mmol,1当量)的四氢呋喃(750μL)溶液中。然后使反应升至室温，并搅拌18h。加入1N HCl水溶液至pH＝1。将反应混合物用乙酸乙酯(3×8mL)萃取。将合并的有机层用盐水(8mL)洗涤，用无水硫酸钠干燥，过滤并真空浓缩，以获得粗化合物11(76mg，93％，浅橙色固体)，其不作进一步的纯化在下一步中使用。
质量(ESI+):973.3[M-HCl+H]+,995.4[M-HCl+Na]+
19F NMR(CDCl3,282.5MHz)(无H偶联):-106.8(d,J＝261Hz,1F)；-109.6(d,J＝261Hz,1F)。
其中R1＝Me
如以上相同的程序，使用化合物8(604mg,0.652mmol)作为起始材料，得到化合物12(578mg，浅橙色固体，95％)。
质量(ESI+):897.5[M-HCl+H]+,919.5[M-HCl+Na]+,935.4[M-HCl+K]+
19F NMR(CDCl3,282.5MHz)(无H偶联):-106.1(d,J＝263Hz,1F)；-108.7(d,J＝263Hz,1F)。
中间体化合物13和14的合成：
其中R1＝Bn
在氮气氛下，使用迪安-斯塔克装置将化合物2(45mg,0.073mmol,1当量)和Z-Lys(NH2)AlaAla-OBn(75mg,0.15mmol,2当量)在甲苯(5mL)中回流。反应完成后，将混合物真空浓缩，以获得化合物13，其不作进一步的纯化在下一步中使用。
19F NMR(CDCl3,282.5MHz)(无H偶联):-110.3(d,J＝263Hz,1F)；-114.0(d,J＝263Hz,1F)。
其中R1＝Me
如以上相同的程序，使用化合物4(200mg,0.32mmol)作为起始材料，得到化合物14，其不作进一步的纯化在下一步中使用。
19F NMR(CDCl3,282.5MHz)(无H偶联):-109.5(d,J＝264Hz,1F)；-114.1(d,J＝264Hz,1F)。
中间体化合物13(R1＝Bn)的可选合成：
其中R1＝Bn
在氮气氛下，将三乙胺(116μL,0.83mmol,1当量)滴加至搅拌的化合物2(628mg,0.83mmol,1当量)的二氯甲烷(8.3mL)溶液中，依次加入Z-Lys(NH3+TFA-)AlaAla-OBn(521mg,0.83mmol,1当量)和无水硫酸镁(151mg,1.25mmol,1.5当量)，将混合物在室温搅拌3h然后过滤。将过滤器用少量二氯甲烷洗涤，将滤液用水(5mL)洗涤，用无水硫酸镁干燥并蒸发，以获得纯化合物13(878mg，88％，无色油状物)。
19F NMR(CDCl3,282.5MHz)(无H偶联):-110.3(d,J＝263Hz,1F)；-114.0(d,J＝263Hz,1F)。
化合物15的可选合成和化合物16的合成：
其中R1＝Bn
在氮气氛下，向化合物11(347mg,0.34mmol,1当量)的DMF(3.5mL)溶液中加入TFA-+H3N-AlaAla-OBn(163mg,0.45mmol,1.3当量)的DMF(3.5mL)溶液、PyBOP(521mg,0.722mmol,2.1当量)、N-甲基吗啉(150μL,13.8mmol,4当量)。将反应混合物搅拌72小时。加入盐水(4mL)，将反应混合物用乙酸乙酯(3×8mL)萃取。将合并的有机层用10％柠檬酸水溶液(8mL)、1N氢氧化钠水溶液(8mL)和盐水(2×8mL)洗涤，用无水硫酸钠干燥，过滤并真空浓缩。通过闪式柱色谱法纯化残余物，以获得化合物15(219mg，53％，白色固体)。
质量(ESI+):1205.4[M+H]+
其中R1＝Me
如以上相同的程序，使用化合物12(556mg,0.595mmol)作为起始材料，得到化合物16(544mg，浅黄色油状物，81％)。
质量(ESI+):1129.4[M+H]+,1151.5[M+Na]+,1167.5[M+K]+
化合物15和16的可选合成：
其中R1＝Bn
在氮气氛下，将氰基硼氢化钠(32mg,0.51mmol,6.9当量)加入至化合物13(88mg,0.073mmol,1当量)在四氢呋喃(0.8mL)和甲醇(1.9mL)中的溶液中。将反应混合物在室温搅拌20h。加入饱和氯化铵水溶液(10mL)，并将混合物用乙酸乙酯(3×10mL)萃取。将合并的有机层用盐水(20mL)洗涤，用无水硫酸钠干燥，过滤并真空浓缩。通过闪式柱色谱法纯化残余物，以获得化合物15(57mg，68％，浅黄色固体)。
质量(ESI+):1205.6[M+H]+
其中R1＝Me
如以上相同的程序，使用化合物14(364mg,0.32mmol)作为起始材料，得到化合物16(113mg，32％，无色油状物)。
质量(ESI+):1129.5[M+H]+,1151.5[M+Na]+,1167.5[M+K]+
化合物18的合成：
将化合物16(100mg,0.089mmol,1当量)溶解于四氢呋喃(798μL)和盐酸水溶液(2M,88μL,2当量)中。将烧瓶放置于氮气氛中，并加入10％Pd/C(30mg,0.32当量)。然后，将烧瓶充满氢气氛并将反应混合物搅拌24小时，然后用Millipore过滤并真空浓缩。将残余物溶解于水中，用Millipore过滤(0.2μm)并冷冻干燥，以获得浅橙色固体的化合物18(55mg,100％)。
质量(ESI+):545.3[M-2HCl+H]+,562.4[M-2HCl+NH4]+
19F NMR(CDCl3,282.5MHz)(无H偶联):-109.1(d,J＝258Hz,1F)；-110.8(d,J＝258Hz,1F)。
化合物19的合成：
将化合物17(323mg,0.54mmol)溶解于水(7mL)中，并加入安伯来特(AmberliteTM)IRA-67(1.3g，预先用水洗涤)。将反应混合物在室温搅拌3小时，然后用Millipore过滤(0.2μm)，用水稀释并冷冻干燥，以获得化合物19(223mg,78％)。
质量(ESI+):531.2[M+H]+,553.2[M+Na]+,569.2[M+K]+
化合物20的合成：
将化合物15(150mg,0.124mmol,1当量)溶解于四氢呋喃(1.5mL)、水(1.5mL)和乙酸(5.3mL)中。将烧瓶放置于氮气氛中，并加入10％Pd/C(26mg,0.2当量)。然后，将烧瓶充满氢气氛并将反应混合物剧烈搅拌24小时，然后用Millipore过滤并真空浓缩。将残余物溶解于水中，用Millipore过滤(0.2μm)并冷冻干燥，以获得浅黄色固体的化合物20(66mg,82％)。
质量(ESI+):531.2[M-2AcOH+H]+,553.2[M-2AcOH+Na]+,569.2[M-2AcOH+K]+
化合物20的可选合成：
将化合物19溶解于水(10.4mL)中。滴加AcOH(6当量,1M,2.34mL,2.34mmol)，在1h30期间将混合物手动摇动(agitate)数次。然后将混合物冷冻干燥，以获得白色固体的化合物20(244mg,0.375mmol,96％)。
质量(ESI+):531.2[M-2AcOH+H]+,553.2[M-2AcOH+Na]+,569.2[M-2AcOH+K]+
化合物41和42的合成：
在氮气氛下，将半缩酮45(1g,1.58mmol,1当量)溶解于二氯乙烷(32mL)中。顺序加入硫酸镁(570mg,4.73mmol,3当量)、Z-Lys(HCl)-Ala-Ala-OBn(820mg,1.50mmol,0.95当量)和PS-NEt2(3.2mmol.g-1,980mg,3.15mmol,2当量)。将反应混合物在室温搅拌30min，然后回流20h。反应完成后(通过19F NMR监测)，将反应混合物在填料上快速过滤，用二氯乙烷洗涤所述填料。将获得的溶液冷却至0℃，在氮气氛下顺序加入三乙酰氧基硼氢化钠(634mg,2.99mmol,2当量)和乙酸(86μl,1.50mmol,1当量)。在0℃搅拌30min后，将反应混合物升至室温并搅拌过夜。缓慢加入碳酸氢钠的饱和水溶液，并将混合物搅拌2h。分层，并用二氯甲烷萃取水层。将合并的有机层用盐水洗涤，用无水硫酸钠干燥并真空浓缩，以获得白色固体的化合物41(611mg,37％)。
MS(ESI+):1099.4[M+H]+；1121.4[M+Na]+；1137.4[M+K]+
在惰性气氛中，向化合物41(585mg,0.45mmol,1当量)的THF(17.8mL)溶液中加入盐酸水溶液(1.61ml,1.61mmol,3.6当量)，然后加入Pd/C(10％Pd,4.7mg,0.045mmol,0.1当量)。将烧瓶抽真空并充满H2(3次)。将反应混合物在H2气氛中剧烈搅拌18h。反应完成后，将混合物过滤(Millipore 0.45μm)，并将过滤器用水洗涤。将滤液真空浓缩，将获得的残余物溶解于水中并冷冻干燥，以获得作为浅橙色固体的化合物42(262mg,100％)。
MS(ESI+):515.3[M-2HCl+H]+；537.2[M-2HCl+Na]+；553.2[M-2HCl+K]+
中间体化合物45的合成：
向根据Synlett 2005,17,2627-2630和Org.Lett.2002,4,757-759(还参见WO 2004/014928、WO 2007/125203和WO 2007/125194)合成的、冷的(-78℃)二氟酯(2.19g,3.39mmol,1当量)的无水甲苯(34mL)溶液中加入二异丁基氢化铝(甲苯中1.2M；3.7mL；4.4mmol；1.2当量)溶液，将所得的混合物在该温度搅拌3h。然后，将反应用甲醇(6mL)淬灭，并将溶液升温至-20℃持续15min。然后，加入洛瑟尔氏盐溶液(20％,60ml)，并将溶液剧烈搅拌30min。然后将混合物用乙酸乙酯萃取。将合并的有机萃取物用盐水洗涤，用硫酸镁干燥，过滤并真空浓缩，以获得无色油状物的化合物45(2.15g,93％)。
质量(ESI+):652.2[M+H2O]+
II-生物活性：
II-1.糖肽17对饥饿条件下的新生儿(neonatal)皮肤成纤维细胞的保存/保护的作用。通过台盼蓝拒染法(trypan blue exclusion method)评估。
材料和方法
传代培养
·在补充有最终10％的胎牛血清、最终1％的抗生素(青霉素/链霉素)和最终0.1％的两性霉素B的DMEM介质中培养新生儿皮肤成纤维细胞(细胞系：CCD-27SK，ATCC号CRL-1475)。
·在37℃和10％CO2的孵育器中，在75cm2的培养瓶中培养成纤维细胞至80％的细胞融合。每两天用预热至37℃的新鲜介质替换介质。
饥饿介质
·该介质由45％不含胎牛血清的传代培养介质和55％含有EDTA(最终浓度0.45mM)的磷酸盐缓冲液盐水1X混合组成。其被称作无血清介质。
产品制备
·在饥饿介质中将化合物17(MM＝603.4g/mol)稀释至最终5mg/ml，并通过加入1N NaOH将pH调节至7.4。
一般实验程序
在96孔板上的测试
·将成纤维细胞浓缩至2.105细胞/ml，将100μl细胞悬液加入至96孔板的孔中，并在37℃和10％CO2的孵育器中孵育4小时。
·细胞粘附后，将介质替换，将板孵育(37℃-10％CO2)以进行如下测试：
ο每个采样时间对应一个板：D0、D3、D4、D5、D6、D7、D10、D12天
ο加入了120μl培养基(存活对照)、饥饿介质(无血清对照)或5mg/ml化合物17的溶液的每个条件对应三个孔(一式三份计数)。
活力测试
·通过台盼蓝拒染技术评估细胞活力，所述技术的原理基于活细胞具有排斥台盼蓝染料的完整的细胞膜。因此，在用显微镜观察时只有死细胞是蓝色的。
对于采样，将110μl台盼蓝(SIGMAT8154)加入至对应孔的110μl胰蛋白酶处理的(trypsinated)细胞悬液中用于计数。
将200μl台盼蓝/细胞混合物滴至血细胞计数器中。通过使用Neubauer计数室将细胞计数。在形成9mm2大方格的9个1mm2区域中将未染色的(有活力的)和染色的(无活力的)细胞分别计数，并相加以获得每个样品中细胞的总数量。使用三次计数的平均值计算活力百分比如下：
[有活力的细胞的数量/细胞的总数量]*100
·在加入后的几天中(D0、D3、D4、D5、D6、D7、D10、D12)，将饥饿条件下的培养物的细胞活力百分比与对照培养物作比较。
结果
结果绘制于图1的柱状图中，其表示在12天的时期期间体外的成纤维细胞活力的发展，结果还绘制于下表1中。
表1
存活对照在D0至D12显示了非常好的活力(活力>90％)。
在饥饿介质中的细胞(无血清对照)从D5显示了其活力明显的下降(59％)；在D6(34％)、D7(15％)该现象更严重，在D10达到了100％死亡。
在饥饿介质中培养但用5mg/ml化合物17处理的细胞的活力在D0(97％)至D12(77％)之间非常轻微地下降，但依然明显高于无血清对照。因此，化合物17显示了对皮肤成纤维细胞显著的保存/保护作用，因为在不利于生长的条件下细胞被维持在健康的状态。
II-2.糖肽在不同的应激条件中对人真皮成纤维细胞或鼻上皮细胞的保存/保护的作用。
测试了不同的应激条件，以评估几种化合物对2种类型的细胞：人皮肤成纤维细胞(剥夺(deprivation)、UV应激、氧化应激或细菌应激)或人鼻上皮细胞(剥夺)的保存/保护作用。不同的方案描述如下。
材料和方法
传代培养
·在补充有最终10％的FBS、最终1％的抗生素(混合Dutscher L0010，青霉素/链霉素/两性霉素B)和最终1％的L-谷氨酰胺的DMEM介质中培养人新生儿皮肤成纤维细胞(细胞系：CCD-27SK，ATCC CRL-1475)。在补充有10％FBS、1％抗生素和1％L-谷氨酰胺的MEM介质中培养人鼻上皮细胞(细胞系：RPMI2650，ATCC CCL-30)。
·在37℃和10％CO2的孵育器中，在75cm2的培养瓶中培养细胞至80％的细胞融合，然后在3个瓶中传代培养。每两天用预热至37℃的新鲜介质替换介质。
测试介质
·对于饥饿测试，介质由45％不含FBS的传代培养介质和55％含有EDTA(最终浓度0.45mM)的PBS 1X混合组成。其被称作饥饿介质。
·对于氧化、细菌和UV应激，介质由45％传代培养介质和55％含有EDTA(最终浓度0.45mM)的PBS 1X混合组成。
化合物溶液
·将测试化合物溶解于PBS(总体积的10％)中，然后在合适的测试介质中稀释至确定的最终浓度。必要时，通过加入1N NaOH将pH调节至7.4。
一般实验程序
在24孔板上的测试
·将细胞浓缩至1.105细胞/ml，将500μl细胞悬液加入至24孔板的孔中，并在37℃和10％CO2的孵育器中孵育。
·孵育3天后，去除介质以根据应激条件进行测试。
·进行几个对照，即，阳性对照(无应激)和应激对照(应激，无化合物)，所述阳性对照被视为100％活力，将所述应激对照与测试(应激+化合物)比较以显示测试化合物潜在的保存作用。
对于细菌应激，仅在3个测试间比较细胞的溶解(应激+3个不同浓度的化合物)。
如下进行诱导的应激：
ο饥饿
向每种条件的三个孔(一式三份计数)中加入1ml培养基(阳性对照)或饥饿介质(应激对照)或加入有确定浓度的测试化合物的饥饿介质。将板在37℃和10％CO2中孵育不同时间(1、4、6、7或8天)，然后使用中性红摄入法分析细胞活力。
ο氧化应激
向每种条件的三个孔(一式三份计数)中加入0.8ml培养基(对照)或每个测试化合物的溶液。将板在37℃和10％CO2中孵育24h。
然后，如下进行氧化应激：向除了阴性对照外的孔中加入0.2ml的500μM H2O2溶液，向阴性对照的孔中加入0.2ml培养基。
将板在37℃和10％CO2中孵育持续不同的暴露时间(1h和24h)，然后使用中性红摄入法分析细胞活力。
οUV应激
向每种条件的三个孔(一式三份计数)中加入1ml培养基(对照)或1ml每个测试化合物的溶液。
将板在37℃和10％CO2中孵育24h。
然后，如下进行UV应激：使板在UVA CUBE 400(HONLE UV technology)中经受11焦耳/cm2，将经照射的板在37℃和10％CO2中孵育不同时间(1h、3h和24h)，然后使用中性红摄入法分析细胞活力。
ο细菌应激
金黄色葡萄球菌(Staphylococcus aureus)培养物的上清液的制备。
在37℃搅拌下，在16小时期间，在大豆胰蛋白酶解肉汤(Tryptic Soy Broth)中进行金黄色葡萄球菌的预培养。
孵育后，通过离心(4000rpm,10分钟)收集细菌，并将其悬浮以在不含抗生素的细胞培养基中获得OD620nm＝3.3。在37℃搅拌下，在24小时期间进行培养。然后，在离心(4000rpm,10分钟)后回收上清液，并通过0.22μm过滤灭菌。将抗生素(混合Dutscher L0010，青霉素/链霉素/两性霉素B)以1％加入至各份细胞培养基中。在深冻冰箱中储存的上清液含有在细菌生长期间产生的所有毒素和代谢废物。
测试。
如下进行测试：
·在培养基中稀释(1/2)金黄色葡萄球菌培养物的上清液。
·向每种条件的三个孔(一式三份计数)中加入0.5ml测试化合物的溶液。将板在37℃和10％CO2中温育24小时。
·然后，使用稀释的金黄色葡萄球菌培养物上清液进行细菌应激，以使细胞受应激。将每个孔中的溶液去除并用0.5ml稀释的上清液和0.5ml 2X浓缩的化合物溶液替代。将板在37℃和10％CO2中孵育48h。
·然后，使用乳酸脱氢酶(LDH)生物测试分析细胞溶解。
活力测试(中性红摄入)
中性红摄入测试用于测定细胞活力。该测试基于有活力的细胞将离体活体染料中性红吸收并结合至其溶酶体的能力。因此，仅有活力的细胞被染色。在应激测试(T0)后的不同时间，将板与中性红溶液孵育3.5小时。然后洗涤细胞，在每个孔中取出染料，并使用分光光度计读取吸光度。
对于采样，将1mL含有中性红的DMEM(不含酚红指示剂)(OD＝0.110)加入至细胞中持续3.5小时(37℃,10％CO2)。孵育后，去除介质，用PBS洗涤两次，并加入1mL提取溶液(49％绝对乙醇、49％超纯水、2％冰乙酸)。将板在旋转摇荡器中避光放置15分钟，然后在540nm读取OD。
计算
阳性对照的OD540nm平均值被视为100％活力。
每个测试的活力的百分比计算如下：
活力测试％＝(测试溶液的OD540nm-空白)*100/(阳性对照的OD540nm-空白)。
在不同时间，将由加入有测试化合物的应激培养物计算的细胞活力百分比与应激-对照培养物作比较。
LDH生物测试
通过LDH生物测试的分子的作用的启示
使用比色测试测定细胞溶解，所述比色测试定量地测量乳酸脱氢酶(LDH)，所述乳酸脱氢酶是一种在细胞溶解时释放的稳定的胞质酶。
在暴露于细菌应激48小时后，进行LDH生物测试。使用试剂盒“CytoToxNon-Radioactive Cytotoxicity Assay”(Promega)和其方案，以确定在不同孔中含有的LDH的浓度。
490nm处的OD值表示细胞溶解的水平。将每个测试化合物溶液的OD490nm平均值一起作比较。
结果
a)饥饿
根据经测试的化合物或细胞，用不同糖肽获得的结果汇集在表2至5中。
·人新生儿皮肤成纤维细胞
表2：在血清剥夺后培养7天，化合物17、化合物19和化合物20对人成纤维细胞的保存作用
如表2中所示，在饥饿介质(应激对照)中的细胞从D1(77％)至D7(8％)显示了其活力明显的下降。同样地，结果显示用5mg/ml化合物17、化合物19或化合物20处理的应激细胞的活力在D1(73至87％)和D7(45至50％)轻微下降，但在D7依然明显高于应激对照。
因此，化合物17、19或20显示了对皮肤成纤维细胞显著的保存/保护作用，因为在不利于生长的条件下细胞被维持在健康的状态。
表3：在血清剥夺后培养8天，化合物44、化合物24、化合物26、化合物28、化合物30、化合物34和化合物38对人皮肤成纤维细胞的保存作用
(*在该测试中，仅阳性对照是用补充有5％FBS而非10％FBS的培养基制备的)
如表3中所示，在饥饿介质(应激对照)中的细胞在8天内显示了其活力明显的下降(34％)。在D8，在饥饿介质中培养并加入有10mg/ml化合物44、24、26、28、30、34和38的皮肤成纤维细胞的活力依然明显高于应激对照的活力(64至108％对比于34％)。
这些结果显示了化合物44、24、26、28、30、34和38对皮肤成纤维细胞的显著的保存/保护作用，所述化合物在不利于生长的条件下将细胞维持在健康的状态。
表4：在血清剥夺后培养4天，化合物17和化合物22对人成纤维细胞的保存作用
如表4中所示，在饥饿介质(应激对照)中的细胞在4天内显示了其活力明显的下降(57％)，然而用10mg/ml化合物17或化合物22处理的应激细胞的细胞活力依然非常高(分别为116％和93％)。这些结果显示了化合物17和22显著的保存/保护作用。
·人鼻上皮细胞
表5：在血清剥夺后培养6天，化合物19对人鼻上皮细胞的保存作用
如上表中所示，在饥饿介质(应激对照)中的细胞在D4(27％)至D6(7％)显示了其活力明显的下降。同样地，结果显示加入有10mg/ml化合物19的应激细胞的活力在6天内下降，但依然高于应激对照(在D6，26％对比于7％)。因此，化合物19显示了对人鼻上皮细胞的保存/保护作用。
b)氧化应激
用不同浓度的化合物19获得的结果汇集在下表中。
表6：在加入H2O2后培养24h，人新生儿皮肤成纤维细胞的活力
表6中的结果显示加入有5mg/ml、10mg/ml或15mg/ml化合物19的应激细胞的活力在24h内上升，并且依然大大高于应激对照的活力(在氧化应激后24h，分别为109至127％对比于74％)。因此，化合物19显示了对抗氧化应激的保存/保护作用，所述作用是剂量依赖的。
此外在加入有化合物19的培养物中，细胞活力随着时间上升，显示了对应激细胞的生长/再生作用。
c)UV应激
用不同浓度的化合物17和化合物19获得的结果汇集在下表7中。
表7：在UV照射后培养24h，人新生儿皮肤成纤维细胞的活力
如上表中所示，应激对照测试中的经照射的细胞在UV照射后1h显示了其活力明显的下降(10％活力)，然而加入有5mg/ml化合物17或19的应激细胞的活力在24h内上升，并且依然大大高于应激对照的活力(在UV应激后24h，分别为82％和89％对比于12％)。
因此，化合物17和19显示了对抗UV应激的保存/保护作用。
此外在加入有化合物17或19的培养物中，细胞活力随着时间上升，显示了对应激细胞的生长或再生作用。
d)细菌应激
在下表8中比较了用5、10或15mg/mL的化合物17的3种溶液获得的OD490nm值。
表8：在细菌应激后48h人新生儿皮肤成纤维细胞的溶解
当化合物17的量从5mg/ml升高至15mg/ml时，OD490nm下降，所述OD490nm表示细菌应激后48h的细胞溶解。因此，化合物17显示了细胞对抗细菌应激的保护作用。
III-比较研究
化合物17和化合物X(在WO 2006/059227中被称作化合物15)间的比较稳定性研究
该研究的目的在于证明化合物17相比于化合物X在碱性条件中稳定性的巨大改善。为此，进行了下组实验。
在第一组实验中(表9中的实验1至7)，在总体积355μL的氧化氘([X]＝4.810-2mmol.mL-1)中，将X(10mg,1.72 10-2mmol)与2至8当量的NaOD反应2h30，然后用D2O中的1M DCl酸化。为了确保溶液中所有化合物都为其酸性形式，将DCl的当量调节为比中和溶液所需的量多3个DCl的当量(nDCl＝nNaOD+3)。用氧化氘将体积调节至544μL。
在第二组实验中(表9中的实验8至14)，在总体积343μL的氧化氘([17]＝4.8 10-2mmol.mL-1)中，将17(10mg,1.66 10-2mmol)与2至8当量的NaOD反应2h30，然后用D2O中的1M DCl酸化。为了确保溶液中所有化合物都为其酸性形式，将DCl的当量调节为比中和溶液所需的量多3个DCl的当量(nDCl＝nNaOD+3)。用氧化氘将体积调节至526μL。
表9
对每个实验进行1H NMR分析。这就是为什么在氧化氘中进行实验，并使用D2O中的1M NaOD作为碱和使用D2O中的1M DCl作为酸。这些1H NMR分析允许显示不存在化合物17的降解，以及化合物X的降解，如以下方案1中所示：
事实上，通过比较对应于连接至X(CH2NGP)中的氮原子的赖氨酸侧链的亚甲基的积分(3.3ppm)与X1(水解的CH2Lys)中相同的亚甲基的积分(3.0ppm)，1H NMR允许确定形成的化合物X1的量。结果描述于下表10中。
表10
对于这些结果，看起来化合物X对碱性介质敏感，而化合物17则不然。事实上，化合物17的原始1H NMR谱(对照-图2)与实验8至14的1H NMR谱(实验14的1H NMR谱表示在图3中)是非常相似的，而化合物X的原始1H NMR谱(对照-图4)与实验1至7的1H NMR谱(实验7的1H NMR谱表示在图5中)的比较通过化合物X1(和因此化合物X2)的逐步形成显示了化合物X的逐步水解，其中在实验7中水解高达22％(8当量的NaOD持续2h30)。
为了确定来自于X水解的化合物X1和X2的结构，进行以下实验，其中在总体积355μL的氧化氘([X]＝4.8 10-2mmol.mL-1)中，将X(10mg,1.72 10-2mmol)与8当量的NaOD反应3天，然后用D2O中的1M DCl酸化。在这些条件下，几乎所有的化合物X都被水解，如通过1H NMR所确定，化合物X的水解百分比为85％，如表11中所证明。
表11
实验A和B的溶液的1H NMR谱分别表示在图4和图6中。
通过质谱(ESI+和ESI-)分析实验B的溶液。在ESI+中，探测到质量为289.2和311.2的两种离子加合物，其分别对应于[X1-2HCl+H]+和[X1-2HCl+Na]+(质谱呈现在图7中)。在ESI-中，探测到质量为273.1和287.2的两种离子加合物，其分别对应于[X2-H]-和[X1-2HCl-H]-(质谱呈现在图8中)。
权利要求书(按照条约第19条的修改)
1.一种下式(I)的化合物：
或其盐、溶剂化物、互变异构体、立体异构体或立体异构体以任何比例的混合物，特别是对映异构体的混合物，特别是外消旋体混合物，
其中：
-m表示0或1，
-p表示0或1，
-R0表示氢原子、O-保护基或(C1-C6)烷基、(C2-C6)烯基、(C2-C6)炔基、(C3-C7)环烷基、5至7元杂环烷基、芳基、杂芳基、芳基-(C1-C6)烷基、杂芳基-(C1-C6)烷基、(C1-C6)-烷基-芳基或(C1-C6)-烷基-杂芳基，该基团可以被选自卤原子、(C1-C6)烷氧基、OH、COOH和CHO的一个或多个基团取代，
-R5a、R6a和R7a彼此独立地表示氢或N-保护基，以及
-R5、R6和R7彼此独立地表示氢；任选被(C1-C6)烷氧基或(C1-C6)硫代烷氧基取代的(C1-C6)烷基；芳基；任选被(C1-C6)烷氧基取代的芳基-(C1-C6)烷基；或下式的基团：
或R5和R5a和/或R6和R6a和/或R7和R7a与携带它们的氮原子和碳原子形成吡咯烷环
条件是，当m＝p＝1时，R5、R6和R7中的至少一个且仅一个基团，或当m＝0且p＝1时，R5和R6中的至少一个且仅一个基团，或当m＝1且p＝0时，R5和R7中的至少一个且仅一个基团，或当m＝p＝0时，R5，表示下式的基团：
其中
-n表示1至6的整数，
-R表示氢原子或氟原子或CH3、CH2F、CH2OSiRa1Rb1Rc1、CH2OR8、CH2OC(O)R9、CH2OCO2R10、CH2OC(O)NR11R12、CH2OP(O)(OR13)2或CH2OSO3R14基团，
-R1和R2彼此独立地表示氟原子或OSiRa2Rb2Rc2、OR15、OC(O)R16、OCO2R17、OC(O)NR18R19、OP(O)(OR20)2或OSO3R21基团，
-R3表示氟原子或OSiRa3Rb3Rc3、OR22、OC(O)R23、OCO2R24、OCONR25R26、OP(O)(OR27)2、OSO3R28、N3、邻苯二甲酰亚胺基、NR29R30、NR31C(O)R32、NR33C(O)OR34、N(C(O)R35)C(O)R36、N(C(O)R37)C(O)OR38和N(C(O)OR39)C(O)OR40基团，
-R4表示氢原子或卤原子或OSiRa4Rb4Rc4、OR41、OC(O)R42、OCO2R43、OCONR44R45、OP(O)(OR46)2或OSO3R47基团，
或R和R1与携带它们的碳原子一起形成具有下式的环缩醛：
和/或(R1和R2)、(R2和R3)和/或(R3和R4)与携带它们的碳原子一起形成具有下式的环缩醛：
-R8、R15、R22和R41彼此独立地表示氢原子、O-保护基或(C1-C6)烷基、(C2-C6)烯基、(C2-C6)炔基、(C3-C7)环烷基、5至7元杂环烷基、芳基、杂芳基、芳基-(C1-C6)烷基、杂芳基-(C1-C6)烷基、(C1-C6)-烷基-芳基、(C1-C6)-烷基-杂芳基、糖基或多糖基，该基团可以被选自卤原子、(C1-C6)烷氧基、OH、COOH和CHO的一个或多个基团取代；特别地表示氢原子、(C1-C6)烷基、芳基、芳基-(C1-C6)烷基、糖基或多糖基，该基团可以被选自卤原子、(C1-C6)烷氧基、OH、COOH和CHO的一个或多个基团取代；更特别地表示氢原子、(C1-C6)烷基、芳基或芳基-(C1-C6)烷基，该基团可以被选自卤原子、(C1-C6)烷氧基、OH、COOH和CHO的一个或多个基团取代，
-R9、R10、R16、R17、R23、R24、R32、R34至R40、R42和R43彼此独立地表示(C1-C6)烷基、(C2-C6)烯基、(C2-C6)炔基、(C3-C7)环烷基、5至7元杂环烷基、芳基、杂芳基、芳基-(C1-C6)烷基、杂芳基-(C1-C6)烷基、(C1-C6)-烷基-芳基或(C1-C6)-烷基-杂芳基，该基团可以被选自卤原子、(C1-C6)烷氧基、OH、COOH和CHO的一个或多个基团取代；特别地表示(C1-C6)烷基、芳基或芳基-(C1-C6)烷基，该基团可以被选自卤原子、(C1-C6)烷氧基、OH、COOH和CHO的一个或多个基团取代，
-R11、R12、R18、R19、R25、R26、R29至R31、R33、R44和R45彼此独立地表示氢原子或(C1-C6)烷基、(C2-C6)烯基、(C2-C6)炔基、芳基、杂芳基、芳基-(C1-C6)烷基、杂芳基-(C1-C6)烷基、(C1-C6)-烷基-芳基或(C1-C6)-烷基-杂芳基，该基团可以被选自卤原子、(C1-C6)烷氧基、OH、COOH和CHO的一个或多个基团取代；有利地表示氢原子或(C1-C6)烷基、(C2-C6)烯基、(C2-C6)炔基、芳基-(C1-C6)烷基、杂芳基-(C1-C6)烷基，该基团可以被选自卤原子、(C1-C6)烷氧基、OH、COOH和CHO的一个或多个基团取代；特别地表示氢原子或(C1-C6)烷基、芳基或芳基-(C1-C6)烷基，该基团可以被选自卤原子、(C1-C6)烷氧基、OH、COOH和CHO的一个或多个基团取代，
-R13、R14、R20、R21、R27、R28、R46和R47彼此独立地表示氢原子或(C1-C6)烷基，
-Ra1至Ra4、Rb1至Rb4和Rc1至Rc4彼此独立地表示(C1-C6)烷基、芳基或芳基-(C1-C6)烷基，以及
-Rd和Re彼此独立地表示氢原子或(C1-C6)烷基。
2.根据权利要求1所述的化合物，其中其为下式(Ie1)、(Ii1)、(Im1)或(Iq1)的化合物，优选为下式(Ie1)的化合物：
或其盐、溶剂化物或互变异构体。
3.根据权利要求1所述的化合物，其中R5、R6和R7彼此独立地表示氢原子、(C1-C6)烷基、芳基、任选被(C1-C6)烷氧基取代的芳基-(C1-C6)烷基，或表示下式的基团：
且优选下式的基团：
如
或R5和R5a和/或R6和R6a和/或R7和R7a与携带它们的氮原子和碳原子形成吡咯烷环
条件是，当m＝p＝1时，R5、R6和R7中的至少一个且仅一个基团，或当m＝0且p＝1时，则R5和R6中的至少一个且仅一个基团，或当m＝1且p＝0时，则R5和R7中的至少一个且仅一个基团，或当m＝p＝0时，R5，表示下式的基团：
且优选下式的基团：
如
4.根据权利要求1所述的化合物，其中R5、R6和R7彼此独立地表示H、CH3、CH(CH3)2、CH2CH(CH3)2、CH(CH3)CH2CH3、CH2Ph、CH2PhOCH3、CH2CH2SCH3或下式的基团：
且优选下式的基团：
如
或R5和R5a和/或R6和R6a和/或R7和R7a与携带它们的氮原子和碳原子形成吡咯烷环
条件是，当m＝p＝1时，R5、R6和R7中的至少一个且仅一个基团，或当m＝0且p＝1时，R5和R6中的至少一个且仅一个基团，或当m＝1且p＝0时，R5和R7中的至少一个且仅一个基团，或当m＝p＝0时，R5，表示下式的基团：
且优选下式的基团：
如
5.根据权利要求1至4中任一项所述的化合物，其中n的值为2、3或4。
6.根据权利要求1至5中任一项所述的化合物，其中R0表示氢原子或(C1-C6)烷基、芳基或芳基-(C1-C6)烷基，该基团不被取代，或被选自卤原子、(C1-C6)烷氧基、OH、COOH和CHO的一个或多个基团取代；
R表示CH2OR8基团；R1和R2彼此独立地表示OR15基团；R3表示OR22基团，其中R8、R15和R22有利地表示氢原子或O-保护基；以及
R4表示氢原子或OR41基团，其中R41有利地表示氢原子、O-保护基或(C1-C6)烷基、芳基、芳基-(C1-C6)烷基或(C1-C6)-烷基-芳基，该基团不被取代，或可以被选自卤原子和(C1-C6)烷氧基的一个或多个基团取代。
7.根据权利要求1至6中任一项所述的化合物，其中R0＝H、Et或Bn，R＝CH2OH或CH2OBn，R1＝R2＝R3＝OH或OBn，且R4＝H、OH、OMe或OBn。
8.根据权利要求1至7中任一项所述的化合物，其中R0＝H，R＝CH2OH，R1＝R2＝R3＝OH，且R4＝H或OH。
9.根据权利要求1至8中任一项所述的化合物，其中其选自以下化合物：
和其盐和溶剂化物，特别是与盐酸或乙酸的酸加成盐。
10.根据权利要求1至9中任一项所述的化合物用于生物材料，如细胞、组织、体液和器官，以及微生物的保存和/或保护和/或再生的用途。
11.一种培养、储存和/或保存介质，其包含至少一种根据权利要求1至9中任一项所述的化合物。
12.根据权利要求1至9中任一项所述的化合物，其在抗老化、皮肤保护或皮肤再生中的用途。
13.一种化妆品或皮肤病学组合物，其包含至少一种根据权利要求1至9中任一项所述的化合物和至少一种化妆品或皮肤病学上可接受的赋形剂。
14.一种用于制备根据权利要求1至9中任一项所述的式(I)的化合物的方法，其包括以下连续步骤：
(a)将下式(II)的化合物的亚胺官能团还原以获得式(I)的化合物：
其中：
-m、p、R0、R5a、R6a和R7a如权利要求1中所定义，以及
-R5b、R6b和R7b彼此独立地表示氢；任选被(C1-C6)烷氧基或(C1-C6)硫代烷氧基取代的(C1-C6)烷基；芳基；任选被(C1-C6)烷氧基取代的芳基-(C1-C6)烷基；或下式的基团：
其中n、R、R1、R2、R3和R4如权利要求1中所定义，
或R5b和R5a和/或R6b和R6a和/或R7b和R7a与携带它们的氮原子和碳原子形成吡咯烷环
条件是，当m＝p＝1时，R5b、R6b和R7b中的至少一个且仅一个基团，或当m＝0且p＝1时，R5b和R6b中的至少一个且仅一个基团，或当m＝1且p＝0时，R5b和R7b中的至少一个且仅一个基团，或当m＝p＝0时，R5b，表示下式的基团：
以及
(b)任选使在前一步骤(a)中获得的化合物成盐或溶剂化，以获得式(I)的化合物的盐或溶剂化物。
15.一种用于制备根据权利要求1至9中任一项所述的式(I)的化合物的方法，其包括以下连续步骤：
(i)将下式(IX)的化合物与下式(III)的化合物或其盐，如与三氟乙酸或盐酸的酸加成盐反应以获得式(I)的化合物：
其中R、R1、R2、R3和R4如权利要求1中所定义，LG表示离去基，
其中：
-m、p、R0、R5a、R6a和R7a如权利要求1中所定义，以及
-R5c、R6c和R7c彼此独立地表示氢；任选被(C1-C6)烷氧基或(C1-C6)硫代烷氧基取代的(C1-C6)烷基；芳基；任选被(C1-C6)烷氧基取代的芳基-(C1-C6)烷基；或下式的基团：
其中n如权利要求1中所定义，
或R5c和R5a和/或R6c和R6a和/或R7c和R7a与携带它们的氮原子和碳原子形成吡咯烷环
条件是，当m＝p＝1时，R5c、R6c和R7c中的至少一个且仅一个基团，或当m＝0且p＝1时，R5c和R6c中的至少一个且仅一个基团，或当m＝1且p＝0时，R5c和R7c中的至少一个且仅一个基团，或当m＝p＝0时，R5c，表示下式的基团：
以及
(ii)任选使在前一步骤(i)中获得的化合物成盐或溶剂化，以获得式(I)的化合物的盐或溶剂化物。
16.一种用于制备根据权利要求1至9中任一项所述的式(I)的化合物的方法，其中m和p不都为0，且R5表示下式的基团：
所述方法包括以下连续步骤：
(1)将下式(XIa)的化合物或其盐，如与盐酸的酸加成盐，与下式(VII)的化合物或其盐，如与三氟乙酸或盐酸的酸加成盐，反应以获得式(I)的化合物：
其中n、R、R1、R2、R3、R4和R5a如权利要求1中所定义，
其中m、p、R0、R6a和R7a如权利要求1中所定义，条件是，m和p不都为0，且R6d和R7d彼此独立地表示氢；任选被(C1-C6)烷氧基或(C1-C6)硫代烷氧基取代的(C1-C6)烷基；芳基；或任选被(C1-C6)烷氧基取代的芳基-(C1-C6)烷基；或R6d和R6a和/或R7d和R7a与携带它们的氮原子和碳原子形成吡咯烷环
以及
(2)任选使在前一步骤(1)中获得的化合物成盐或溶剂化，以获得式(I)的化合物的盐或溶剂化物。
17.一种下式(II)、(VI)或(XI)的化合物：
或其盐、溶剂化物、互变异构体、立体异构体或立体异构体以任何比例的混合物，特别是对映异构体的混合物，特别是外消旋体混合物，
其中：
-n、m、p、R0、R、R1、R2、R3、R4、R5a、R6a和R7a如权利要求1中所定义，
-R5b、R6b和R7b彼此独立地表示氢；任选被(C1-C6)烷氧基或(C1-C6)硫代烷氧基取代的(C1-C6)烷基；芳基；任选被(C1-C6)烷氧基取代的芳基-(C1-C6)烷基；或下式的基团：
其中n、R、R1、R2、R3和R4如权利要求1中所定义，
或R5b和R5a和/或R6b和R6a和/或R7b和R7a与携带它们的氮原子和碳原子形成吡咯烷环
条件是，当m＝p＝1时，R5b、R6b和R7b中的至少一个且仅一个基团，或当m＝0且p＝1时，R5b和R6b中的至少一个且仅一个基团，或当m＝1且p＝0时，R5b和R7b中的至少一个且仅一个基团，或当m＝p＝0时，R5b，表示下式的基团：
-R49表示H或O-保护基如(C1-C6)烷基，以及
-PG表示O-保护基如(C1-C6)烷基。
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