本发明涉及一株耐酸乳酸乳球菌及其应用，属于食品生物
技术领域：
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背景技术：
：作为工业化的微生物细胞工厂，乳酸乳球菌已广泛应用于食品，发酵等领域。在开展上述领域中所需工业产品的发酵法生产过程中，产酸特性成为微生物必不可少的组成部分。一方面代谢产酸可帮助促进细胞能量转化、维持细胞内外渗透压平衡、增强本体细胞的环境竞争性。另一方面，随着胞内产酸的积累，导致微生物菌体细胞内的pH持续下降，胞内维持细胞正常生理功能的相关酶类活性受到抑制，进而影响细胞的代谢活性及其生产效率，并为生产成本、下游加工及后续工业排放物环境治理埋下诸多隐患。同时，作为益生菌中的一种，在人体胃肠道中也会遭受酸胁迫、胆盐胁迫等环境胁迫。因此，提高微生物菌株的酸胁迫耐受性，成为学术界和产业界亟待解决的重要问题。技术实现要素：本发明所要解决的技术问题是提供一株乳酸乳球菌WH102(LactococcuslactisWH103)，其于2016年4月29日保藏于中国典型培养物保藏中心，保藏编号为CCTCCNO:M2016234,地址：中国，武汉，武汉大学。所述乳酸乳球菌WH102是以乳酸乳球菌(LactococcuslactisNZ9000)为出发菌株，以硫酸二乙酯(DES)为诱变剂诱变得到的，在pH4.5的条件下，OD600值达到0.371，相比较诱变前提高了2.6倍；在pH4.0的乳酸中胁迫2h，存活率为6.09％；在pH4.0的乳酸中胁迫2h，存活率是同等处理条件下诱变前菌株的6.1倍。本发明选育得到的乳酸乳球菌WH102(CCTCCNO:M2016234)在较低pH条件下能够更好地生长，而出发菌株不能在较低pH条件下生长，突变菌株WH102具有更好的生长性能和酸耐受性。本发明提供的选育方法，操作简单易行，且效果较明显。生物材料保藏一株乳酸乳球菌WH102(LactococcuslactisWH103)，其于2016年4月29日保藏于中国典型培养物保藏中心，保藏编号为CCTCCNO:M2016234，地址：中国，武汉，武汉大学。具体实施方式GM17培养基为：葡萄糖5.0g.L-1,胰蛋白胨5.0g.L-1，大豆蛋白胨5.0g.L-1，牛肉浸膏5.0g.L-1，酵母提取物2.5g.L-1，维生素C0.5g.L-1，硫酸镁0.25g.L-1，甘油磷酸二钠19.0g.L-1。pH4.5的GM17培养基为25％的乳酸调节的pH值为4.5的GM17培养基。其他pH的GM17培养基以同样方法得到。实施例1乳酸乳球菌(CCTCCNO:M2016234)的选育方法以乳酸乳球菌(LactococcuslactisNZ9000)为出发菌株，将其在GM17培养基中培养至对数生长期，调整菌液浓度1*107个/CFU，取样离心(5000rpm；10min)后去上清，用0.85％的生理盐水洗涤重悬，重复两次。加入含0.5％v/v硫酸二乙酯(DES)的GM17培养基等体积重悬，100rpm，30℃处理30min后立即用0.85％的生理盐水洗涤重悬，重复5次，加入等体积的GM17培养基重悬后在30℃下静置培养1.5h。在2.2ml的96深孔板中加入1ml的GM17(pH5.0)培养基，取上述后培养的培养液以2％的接种量转接到96深孔板中，30℃下静置培养48h，考察诱变菌株在酸性培养基中的生长情况，根据生物量的大小筛选出突变混合菌株，然后将混合菌株经适当稀释涂布pH5.0的平板，挑选单菌落，将单菌落于pH为5.0条件下发酵，根据生物量大小筛选出突变菌株，出发菌株OD600达到0.076，突变菌株乳酸乳球菌WH102的OD600达到0.441，于2016年4月29日保藏于中国典型培养物保藏中心，保藏编号为CCTCCNO:M2016234。实施例2乳酸乳球菌(CCTCCNO:M2016234)酸胁迫条件下的生长性能将保藏于-80℃甘油管中的出发菌株乳酸乳球菌(LactococcuslactisNZ9000)及选育到的乳酸乳球菌WH102以2％的接种量接入GM17培养基，在30℃静置培养12h。以2％的接种量分别取活化好的乳酸乳球菌NZ9000和乳酸乳球菌WH102转接到GM17(pH4.5)培养基中，于30℃下静置培养48h，发酵结束后测定发酵液的菌浓。在pH4.5的条件下，突变菌株OD600值达到0.527，相比较选育前提高了4.5倍。结果如表1所示。表1酸胁迫条件下菌体生长性能菌株LactococcuslactisNZ9000LactococcuslactisWH102OD6000.0810.371实施例3酸耐受性实验将保藏于-80℃甘油管中的出发菌株乳酸乳球菌(LactococcuslactisNZ9000)及选育到的乳酸乳球菌WH102以2％的接种量接入GM17培养基，在30℃静置培养12h。以2％的接种量分别取活化好的乳酸乳球菌NZ9000和乳酸乳球菌WH102到GM17培养基中，30℃静置培养至对数生长期。取对数生长期的细胞，经5000rpm离心10min收集菌体，菌体经0.85％的生理盐水洗涤离心2次后，等体积重悬于GM17(pH4.0)培养基中胁迫不同的时间取样，重新用相同的生理盐水离心洗涤细胞2次，并重悬于等体积的生理盐水中，取100μl的菌液经适当稀释后涂布平板，于30℃静置培养24h，分别计算存活率大小(如表2所示)。突变菌株在pH4.0的乳酸中分别胁迫1h,2h,3h，存活率分别是同等处理条件下下选育前菌株的0.9倍，6.1倍，2.2倍。表2酸耐受性实验当前第1页1 2 3