一种基于多重HRM分析的氯吡格雷耐药基因检测方法与流程

文档序号:11145721阅读:来源:国知局

技术特征:

1.一种用于HRM分析法检测氯吡格雷耐药基因的引物组合,其特征在于,其用于检测rs4244285、rs4986893、rs12248560三个位点,

rs4244285位点的上游引物序列如SEQ ID NO:1所示,

rs4244285位点的下游引物序列如SEQ ID NO:2所示;

rs4986893位点的上游引物序列如SEQ ID NO:3所示,

rs4986893位点的下游引物序列如SEQ ID NO:4所示;

rs12248560位点的上游引物序列如SEQ ID NO:5所示,

rs12248560位点的下游引物序列如SEQ ID NO:6所示。

2.一种用于HRM分析法检测氯吡格雷耐药基因的引物组合,其特征在于,其用于检测rs662、rs1045642两个位点,

rs662位点的上游引物序列如SEQ ID NO:7所示,

rs662位点的下游引物序列如SEQ ID NO:8所示;

rs1045642位点的上游引物序列如SEQ ID NO:9所示,

rs1045642位点的下游引物序列如SEQ ID NO:10所示。

3.一种用于HRM分析法检测氯吡格雷耐药基因的引物组合,其特征在于,其用于检测rs4244285、rs4986893、rs12248560、rs662、rs1045642位点,

rs4244285位点的上游引物序列如SEQ ID NO:1所示,

rs4244285位点的下游引物序列如SEQ ID NO:2所示;

rs4986893位点的上游引物序列如SEQ ID NO:3所示,

rs4986893位点的下游引物序列如SEQ ID NO:4所示;

rs12248560位点的上游引物序列如SEQ ID NO:5所示,

rs12248560位点的下游引物序列如SEQ ID NO:6所示;

rs662位点的上游引物序列如SEQ ID NO:7所示,

rs662位点的下游引物序列如SEQ ID NO:8所示;

rs1045642位点的上游引物序列如SEQ ID NO:9所示,

rs1045642位点的下游引物序列如SEQ ID NO:10所示。

4.一种利用权利要求1-3任一所述的引物组合的HRM分析方法,其特征在于,所述的方法包括以下步骤:对DNA样品进行PCR扩增,PCR反应结束后,对反应体系缓慢程序升温,升温过程中记录荧光信号,获得高分辨率熔解曲线。

5.根据权利要求4所述的方法,其特征在于,PCR扩增反应在荧光定量PCR分析仪内进行,PCR扩增的条件为:95℃预变性3min,然后进行35个反应循环,每个循环包括95℃、15s的变性,和30s的退火延伸,检测rs4244285、rs4986893、rs12248560三个位点的退火延伸温度为60℃,检测rs662和rs1045642两个位点的退火延伸温度为62℃。

6.根据权利要求5所述的方法,其特征在于,在荧光定量PCR分析仪内对反应体系进行缓慢程序升温,温度每上升0.2℃记录一次荧光信号。

7.根据权利要求1-3任一所述的引物组合在制备多重HRM分析的试剂或试剂盒中的应用。

8.根据权利要求7所述的应用,其特征在于,所述的试剂或试剂盒用于检测氯吡格雷耐药基因。

9.一种基于多重HRM分析的氯吡格雷耐药基因检测的试剂盒,其特征在于,所述的试剂盒包含镁离子、dNTP、rTaq酶、Syto9染料、碱基序列如SEQ ID NO:1、SEQ ID NO:2、SEQ ID NO:3、SEQ ID NO:4、SEQ ID NO:5、SEQ ID NO:6所示的引物。

10.一种基于多重HRM分析的氯吡格雷耐药基因检测的试剂盒,其特征在于,所述的试剂盒包含镁离子、dNTP、rTaq酶、Syto9染料、碱基序列如SEQ ID NO:1、SEQ ID NO:2、SEQ ID NO:3、SEQ ID NO:4、SEQ ID NO:5、SEQ ID NO:6、SEQ ID NO:7、SEQ ID NO:8、SEQ ID NO:9、SEQ ID NO:10所示的引物,前六种引物与后四种引物分开设置。

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