具有抗氧化活性的枸杞精制多糖的制备方法及其应用与流程

文档序号:12104116阅读:来源:国知局

技术特征:

1.一种具有抗氧化活性的枸杞精制多糖的制备方法,其特征在于,包括以下步骤:

(1)枸杞精制多糖的提取粗制:

取枸杞加无水乙醇回流进行脱脂,过滤,取脱脂后滤渣,加入超纯水回流提取,取回流提取液,浓缩,浓缩液加乙醇,静置过夜;分离得沉淀物,干燥,得粗多糖;

(2)枸杞精制多糖的脱色脱蛋白:

取步骤(1)制备好的粗多糖,加入体积比为1:1的丙酮-石油醚混合液,在55~65℃回流脱色1~2h,然后过滤得沉淀,烘干,得到脱色的枸杞粗多糖;

取脱色的枸杞粗多糖,加水稀释成糖液置于分液漏斗中,加入三氯甲烷和正丁醇混合溶液,反复震摇,然后离心收集上层糖液;重复操作以上步骤直至分液漏斗下层无明显沉淀析出,然后烘干得脱色脱蛋白枸杞精制多糖;

(3)枸杞精制多糖的分离纯化:

取步骤(2)脱色脱蛋白枸杞精制多糖溶于蒸馏水中,加样于Cellulose DE-52色谱柱中,先后依次用蒸馏水、0.25mol/L NaCl、2mol/L NaCl和蒸馏水洗脱,流速为1~2mL/min,分步收集洗脱液,将收集的洗脱液浓缩后置于透析袋中,放置冰箱里透析,然后取透析袋中多糖,浓缩,冻干,保存;

(4)枸杞精制多糖的酶解:

取步骤(3)得到的多糖,加入α-淀粉酶,加热酶解,得到酶解多糖;

(5)枸杞精制多糖的再分离纯化:

取步骤(4)得到的酶解多糖,上样于Sephadex G-100凝胶色谱柱,用蒸馏水洗脱,分段收集洗脱液,并用苯酚-硫酸法跟踪检测每份洗脱液的糖含量,用酶标仪检测595nm处吸收值,最后根据吸收值绘制总洗脱曲线,收集合并多糖洗脱液,浓缩,冻干,得具有抗氧化活性的枸杞精制多糖。

2.根据权利要求1所述的具有抗氧化活性的枸杞精制多糖的制备方法,其特征在于,

步骤(2)枸杞精制多糖的脱色脱蛋白:

取步骤(1)制备好的粗多糖,按重量体积比1:10加入体积比为1:1的丙酮-石油醚混合液,在55℃回流脱色1.5h,然后过滤得沉淀,烘干,得到脱色的枸杞粗多糖;

取脱色的枸杞粗多糖,加水配制2%浓度的糖液于分液漏斗中,加入糖液1/5体积的三氯甲烷和糖液1/25体积的正丁醇,反复震摇10min,然后于高速离心机中,以4℃,3500RPM离心15min,收集上层糖液;重复操作10~15次,直至分液漏斗下层无明显沉淀析出,烘干得脱色脱蛋白枸杞精制多糖。

3.根据权利要求1所述的具有抗氧化活性的枸杞精制多糖的制备方法,其特征在于,

步骤(3)枸杞精制多糖的分离纯化:

取步骤(2)脱色脱蛋白枸杞精制多糖溶于蒸馏水中,加样于Cellulose DE-52色谱柱中,先后依次用蒸馏水、0.25mol/L NaCl、2mol/L NaCl和蒸馏水洗脱,流速为2mL/min,收集0.25mol/L NaCl洗脱下来的酸性多糖,将酸性多糖洗脱液浓缩后置于透析袋中,放置于4℃冰箱里透析72h,然后取透析袋中多糖,浓缩,冻干。

4.根据权利要求1所述的具有抗氧化活性的枸杞精制多糖的制备方法,其特征在于,

步骤(4)枸杞精制多糖的酶解:

取步骤(3)得到的多糖,加入α-淀粉酶溶液,先加热至在50℃水解1.5小时,然后升温至80℃水解20~30min,得到酶解多糖。

5.权利要求1制备得到的具有抗氧化活性的枸杞精制多糖在制备抗氧化保健品或药品中的应用。

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