1.一种胰蛋白酶制备方法,其特征在于,包括如下步骤:
(1)胰蛋白酶表达载体的克隆构建:利用Psumo3-AMP载体将Sumo3标签蛋白第92位甘氨酸后连接胰蛋白酶的第24位异亮氨酸;
(2)过表达胰蛋白酶融合蛋白形成包涵体;
(3)胰蛋白酶融合蛋白包涵体的清洗、溶解;
(4)胰蛋白酶融合蛋白包涵体的复性:复性液的组分为1.5-2.5M尿素,30-100mM三羟甲基氨基甲烷PH 8.5,10-20mM还原型谷胱甘肽或者半胱氨酸,1-5mM氧化型谷胱甘肽或者胱氨酸;
(5)胰蛋白酶的激活和纯化:充分复性后,经阳离子交换层析纯化出正确折叠的融合蛋白Sumo3-trypsin,经过Sumo特异性蛋白酶2切去Sumo3标签蛋白,经过镍亲和层析纯化出有生物活性的胰蛋白酶。
2.根据权利要求1所述一种胰蛋白酶制备方法,其特征在于,所述复性液还包括10-50mM氯化钙。
3.根据权利要求2所述一种胰蛋白酶制备方法,其特征在于,所述复性液的组分为2M尿素,50mM三羟甲基氨基甲烷PH 8.5,15mM还原型谷胱甘肽或者半胱氨酸,1mM氧化型谷胱甘肽或者胱氨酸,50mM氯化钙。
4.根据权利要求1所述一种胰蛋白酶制备方法,其特征在于,所述胰蛋白酶种属来源为人源、猪源、牛源或鼠源。
5.根据权利要求1所述一种胰蛋白酶制备方法,其特征在于,所述连接胰蛋白酶的第24位异亮氨酸是指连接胰蛋白酶氨基酸序列第24位到最后一位氨基酸的野生型全长形式,或者第24位到最后一位氨基酸之前的任意截短形式,以及全长形式和截短形式对应的氨基酸任意突变形式。