1.一种活性增强子筛选载体的构建方法,其特征在于,基于逆转录病毒载体进行构建,从荧光素酶报告载体PGL4.3中获得微型启动子并通过基因合成mChery片段,并将所获得的微型启动子和mChery片段克隆至逆转录病毒载体中,获得活性增强子筛选载体。
2.根据权利要求1所述的活性增强子筛选载体的构建方法,其特征在于,所述荧光素酶报告载体为PGL4.23荧光素酶报告载体。
3.根据权利要求2所述的活性增强子筛选载体的构建方法,其特征在于,所述逆转录病毒载体为逆转录病毒载体pMX-GFP。
4.根据权利要求3所述的活性增强子筛选载体的构建方法,其特征在于,活性增强子筛选载体的构建方法具体包括:
S1、去除PGL4.23荧光素酶报告载体中原有的luc2报告基因,将mCherry基因连接到miniP后面;
S2、扩增miniP-mCherry片段,并将其连接至逆转录病毒载体pMX-GFP,用miniP-mCherry替换GFP基因,构建成最终的活性增强子筛选载体。
5.根据权利要求4所述的活性增强子筛选载体的构建方法,其特征在于,所述步骤S1具体为:利用限制性内切酶XbaI/NcoI通过双酶切去除PGL4.23荧光素酶报告载体中luc2报告基因的原始编码序列,将mCherry基因连接到miniP后面。
6.根据权利要求5所述的活性增强子筛选载体的构建方法,其特征在于,所述步骤S2具体为:利用携带NcoI或NotI酶切位点的引物扩增miniP-mCherry片段,并通过这两个酶切位点将其连接至逆转录病毒载体pMX-GFP中,用miniP-mCherry替换GFP基因,最终获得活性增强子筛选载体。
7.一种活性增强子筛选载体,其特征在于,利用如权利要求1-6任一项所述的方法构建而成。