用于裂解玉米赤霉烯酮的手段和方法与流程

文档序号:19894565发布日期:2020-02-11 13:06阅读:来源:国知局

技术特征:

1.一种用于增加α/β-水解酶的稳定性的方法,所述α/β-水解酶包含对应于seqidno:1的位置145至218的序列,或包含与对应于seqidno:1的位置145至218的序列具有58%或更高的序列同一性的序列,所述方法包括:

在以下位置处置换至少一个氨基酸:

-对应于seqidno:1的位置160至205的位置,或

-对应于seqidno:2的位置159至204的位置,或

-对应于seqidno:3、4或5的位置160至205的位置,或

-对应于seqidno:6的位置176至222的位置,

其中,采用这样的氨基酸置换所述氨基酸:所采用的氨基酸具有比被置换的氨基酸更负的亲水指数,

其中所述亲水指数由kyte和doolittle亲水指数确定,

由此获得具有增加的稳定性的α/β-水解酶。

2.根据权利要求1所述的方法,其中所述方法包括在以下位置处置换至少一个氨基酸:

-对应于seqidno:1的位置185至191的位置,和/或

-对应于seqidno:2的位置184至190的位置,和/或

-对应于seqidno:3、4或5的位置185至191的位置,和/或

-对应于seqidno:6的位置201至208的位置。

3.根据权利要求1或2所述的方法,其中采用选自r、k、n、q、d、e、h、p、y、w、s、t、g、a、m、c、f、l或v的氨基酸置换所述氨基酸,优选地,所采用的氨基酸选自r、k、n、q、d、e、h、p、y、w、s、t或g,更优选地选自r、k、n、q、d、e、h或p。

4.根据前述权利要求中任一项所述的方法,其中采用选自r、d、h、g、n或p,优选地选自r、d、h、g或n的氨基酸置换所述氨基酸,更优选地,所采用的氨基酸选自r或n。

5.根据前述权利要求中任一项所述的方法,其中所述氨基酸置换选自以下的一个或多个:v→a、g→r、g→s、a→p、a→r、a→d、a→h、a→n、a→g、s→d、p→h、m→d、g→e、i→a、i→v、h→n、q→k、f→y和/或v→c,优选地,所述氨基酸置换选自以下的一个或多个:v160a、g185r、g185s、a186p、a186r、a188d、a188h、a188n、a188g、a188r、s189d、p190h、m191d、g199e、i200a、i200v、h203n、q205k、f183y和/或v197c,更优选地,所述氨基酸置换选自g185r、a186r、a188r、a188d、a188h、a188n和/或m191d。

6.根据前述权利要求中任一项所述的方法,其中所述增加的稳定性为gravy值的降低,ph稳定性的增加和/或温度稳定性的增加。

7.一种通过权利要求4、5或6中任一项所述的方法能够获得的α/β-水解酶。

8.一种具有多肽序列的α/β-水解酶,所述多肽序列包含对应于seqidno:1的位置145至218的序列,或包含与对应于seqidno:1的位置145至218的序列具有大于58%的序列同一性的序列,

其中,所述多肽序列包含在以下位置处的至少一个氨基酸置换:

-对应于seqidno:1的位置160至205的位置,或

-对应于seqidno:2的位置159至204的位置,或

-对应于seqidno:3、4或5的位置160至205的位置,或

-对应于seqidno:6的位置176至222的位置,

其中,所述α/β-水解酶具有的gravy值与具有seqidno:1的多肽序列的α/β-水解酶的gravy值相比负至少0.6%。

9.一种具有多肽序列的α/β-水解酶,所述多肽序列包含对应于seqidno:1的位置145至218的序列,或包含与对应于seqidno:1的位置145至218的序列具有大于58%的序列同一性的序列,

其中,所述多肽序列包含在以下位置处的至少一个氨基酸置换:

-对应于seqidno:1的位置185至191的位置,或

-对应于seqidno:2的位置184至190的位置,或

-对应于seqidno:3、4或5的位置185至191的位置,或

-对应于seqidno:6的位置201至208的位置,

其中,所述氨基酸置换选自v→a、g→r、g→s、a→p、a→r、a→d、a→h、a→n、a→g、s→d、p→h、m→d、g→e、i→a、i→v、h→n和q→k,和/或

其中采用选自p、r、d、h、g或n的氨基酸置换所述氨基酸,优选地,所采用的氨基酸选自r、d、h、g或n,更优选地,所采用的氨基酸选自r或n。

10.一种具有多肽序列的α/β-水解酶,所述多肽序列包含对应于seqidno:6的位置161至235的序列,或包含与对应于seqidno:6的位置161至235的序列具有大于58%的序列同一性的序列,

其中,所述多肽序列包含在以下位置处的至少一个氨基酸置换:

-对应于seqidno:1的位置160至205的位置,或

-对应于seqidno:2的位置159至204的位置,或

-对应于seqidno:3、4或5的位置160至205的位置,或

-对应于seqidno:6的位置176至222的位置,

其中,所述α/β-水解酶具有的gravy值与具有seqidno:6的多肽序列的α/β-水解酶的gravy值相比负至少0.6%。

11.根据前述权利要求中任一项所述的α/β-水解酶,其中所述α/β-水解酶包含以下氨基酸置换:

-g→r和a→n,优选地g185r和a188n;

-g→s和a→r,优选地g185s和a188r;

-g→r、a→r、a→h、s→d、p→h和m→d,优选地g185r、a186r、a188h、s189d、p190h和m191d;

-v→a、g→r、a→n、g→e、i→a、h→n和q→k,优选地v160a、g185r、a188n、g199e、i200a、h203n和q205k;

-v→a、g→s、a→r、g→e、i→a、h→n和q→k,优选地v160a、g185s、a188r、g199e、i200a、h203n和q205k;

-v→a、g→e、i→a、h→n和q→k,优选地v160a、g199e、i200a、h203n和q205k;

-v→a、g→r、a→r、a→h、g→e、i→v、h→n和q→k,优选地v160a、g185r、a186r、a188h、g199e、i200v、h203n和q205k;

-v→a、g→r、a→r、a→h、s→d、p→h、m→d、g→e、i→v、h→n和q→k,优选地v160a、g185r、a186r、a188h、s189d、p190h、m191d、g199e、i200v、h203n和q205k;和/或

f→y和v→c,优选地f183y和v197c。

12.一种前述权利要求中任一项所述的α/β-水解酶用于降解玉米赤霉烯酮(zen)的用途。

13.一种包含前述权利要求中任一项所述的α/β-水解酶的组合物,优选地,所述组合物为食品或饲料添加剂或食品或饲料产品。

14.根据前述权利要求中任一项所述的α/β-水解酶或组合物,用于在治疗或预防疾病中使用。

15.包含前述权利要求中任一项所述的α/β-水解酶或组合物的试剂盒。

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