一种兼有IgG结合活性及生物素结合活性的双功能蛋白及其免疫PCR试剂盒的制作方法

文档序号:19538191发布日期:2019-12-27 16:08阅读:来源:国知局

技术特征:

1.一种兼有igg结合活性及生物素结合活性的双功能蛋白g-sa,其特征在于所述双功能蛋白g-sa包括链球菌蛋白g(spg)片段和sa蛋白,所述链球菌蛋白g(spg)片段为含有spg的c3区段的序列。

2.如权利要求1所述的兼有igg结合活性及生物素结合活性的双功能蛋白g-sa;

其中,链球菌蛋白g(spg)片段和sa蛋白之间的连接序列为如seqidno.8所示;

所述链球菌蛋白g(spg)片段的核苷酸序列如seqidno.6所示;

sa蛋白的核苷酸序列如seqidno.7所示。

3.如权利要求1所述的兼有igg结合活性及生物素结合活性的双功能蛋白g-sa,所述双功能蛋白g-sa的核苷酸序列如seqidno.5所示。

4.一种兼有igg结合活性及生物素结合活性的双功能蛋白g-sa的表达方法,所述方法为:根据g蛋白的c3片段的基因序列,从含有c3片段的菌液中pcr扩增出c3序列;

通过pcr从含有sa序列的菌液中扩增出sa序列;

先将扩增出的sa序列双酶切后,连接到表达载体上,经鉴定后再将c3片段双酶切后连接上去,构建重组蛋白的原核表达质粒;

将所述表达载体转入表达宿主中培养,活化至对数生长期后加入诱导表白蛋白;

经破碎、纯化后制得融合蛋白g-sa;

将所述表达载体、共表达载体转入表达宿主中培养,活化至对数生长期后加入诱导表白蛋白。

5.如权利要求4所述的表达方法,其中,步骤(1)中使用的引物对如seqidno.1、2所示;

步骤(2)中使用的引物对如seqidno.3、4所示。

6.一种用于免疫分析的产品,所述产品包括权利要求1所述的一种兼有igg结合活性及生物素结合活性的双功能蛋白g-sa。

7.一种非诊断目的的免疫pcr方法,其中所述方法:

生物素标记dna报告分子的制备;

免疫pcr法检测;

结果判断;

其中,步骤1)具体为:利用生物素标记的上游引物ⅰ和无生物素标记的下游引物ⅱ,通过pcr扩增出生物素化dna作为免疫pcr的报告分子(本报告分子选用红色荧光蛋白rfp的一段基因序列,报告基因可以有很多选择,可以选用其它的各种碱基序列);

步骤2)具体为:

(1)包被:

(2)封闭;

(3)加一抗;

(4)加g-sa;

(5)加生物素标记的dna;

(6)预变性;

(7)pcr扩增;

(8)电泳。


技术总结
本发明提供一种兼有IgG结合活性及生物素结合活性的双功能蛋白及其免疫PCR试剂盒,其特征在于:具有如SEQ ID NO:5所示的核苷酸序列。本发明公开的重组蛋白,融合蛋白G‑SA可高效、高密度的捕获目标分子,达到快速、高灵敏的检测,同时可以广谱结合包括人及多种动物总IgG及不同亚类的IgG,与现有技术中的免疫球蛋白结合分子相比,它结合力也比现有的免疫球蛋白结合分子高。

技术研发人员:朱传刚;纪荣毅;袁娜娜;张霁月;沈元曦;林矫矫;洪炀;马以桐
受保护的技术使用者:中国农业科学院上海兽医研究所(中国动物卫生与流行病学中心上海分中心)
技术研发日:2019.08.27
技术公布日:2019.12.27
当前第2页1 2 
网友询问留言 已有0条留言
  • 还没有人留言评论。精彩留言会获得点赞!
1