一种Fluoxapiprolin抗性基因型G700V辣椒疫霉的LAMP引物及应用的制作方法

文档序号:22131202发布日期:2020-09-08 12:55阅读:来源:国知局

技术特征:

1.一种fluoxapiprolin抗性基因型g700v辣椒疫霉的lamp检测引物组合物,由序列表中序列1所示的核苷酸、序列表中序列2所示的核苷酸、序列表中序列3所示的核苷酸、序列表中序列4所示的核苷酸、序列表中序列5所示的核苷酸和序列表中序列6所示的核苷酸组成。

2.权利要求1所述的lamp引物组合物在检测fluoxapiprolin抗性基因型g700v辣椒疫霉中的应用。

3.一种检测fluoxapiprolin抗性基因型g700v辣椒疫霉的lamp检测试剂盒,包括权利要求1所述的lamp检测引物组合物;

优选的,所述lamp检测试剂盒中还包括pcr反应试剂。

4.权利要求3或4所述的试剂盒在检测fluoxapiprolin抗性基因型g700v辣椒疫霉中的应用。

5.一种辅助鉴定辣椒疫霉是否产生对fluoxapiprolin的抗型的方法,是检测辣椒疫霉中的基因型是否为fluoxapiprolin抗性基因型g700v,所述fluoxapiprolin抗性基因型g700v为辣椒疫霉基因组中的genbankaccessionvertionnumber为bt031593.1所示的基因,自5’端第2103位核苷酸由g突变为t,造成其编码的蛋白质的第700位氨基酸密码子gga(gly)→gta(val)的突变。

6.一种检测fluoxapiprolin抗性基因型g700v辣椒疫霉的lamp检测方法,包括下述步骤:

1)提取待测辣椒疫霉的dna;

2)以提取的dna为模板,利用权利要求1所述的lamp检测引物组合物或权利要求3或4所示的lamp检测试剂盒进行lamp扩增,扩增产物若从粉色变为黄色,且进行琼脂糖凝胶电泳,在紫外光下检测结果,若存在梯状条带,则证明所检测辣椒疫霉为fluoxapiprolin抗性基因型g700v;若无梯状条带,则证明所检测辣椒疫霉为非fluoxapiprolin抗性基因型g700v;或扩增产物的颜色为粉色,判定为非fluoxapiprolin抗性基因型g700v的辣椒疫霉。

7.根据权利要求6所述的检测fluoxapiprolin抗性基因型g700v辣椒疫霉的lamp方法,其特征在于:lamp反应参数为61-69℃,15-60min。

8.根据权利要求7所述的检测fluoxapiprolin抗性基因型g700v辣椒疫霉的lamp方法,其特征在于:lamp反应参数为68-69℃,15-60min。

9.根据权利要求6所述的检测fluoxapiprolin抗性基因型g700v辣椒疫霉的lamp方法,其特征在于:选用warmstartcolorimetriclamp2xmastermix(dna&rna)kit(newenglandbiolabs),反应体系为25μl包括:12.5μlwarmstartcolorimetriclamp2xmastermix,1.6μm序列表中序列1所示的核苷酸、1.6μm序列表中序列2所示的核苷酸、0.2μm序列表中序列3所示的核苷酸、0.2μm序列表中序列4所示的核苷酸、0.4μm序列表中序列5所示的核苷酸和0.4μm序列表中序列6所示的核苷酸组成,1μl模板dna,加ddh2o至25μl。

10.权利要求1或2所述的lamp检测引物组合物、权利要求3所述的lamp检测试剂盒、或者权利要求6-9中任意一项所述的方法在辅助筛选对fluoxapiprolin产生抗性的辣椒疫霉中应用。


技术总结
本发明公开了一种fluoxapiprolin抗性基因型G700V辣椒疫霉的LAMP检测引物组合物及其应用。该LAMP检测引物组合物由序列表中序列1所示的核苷酸、序列表中序列2所示的核苷酸、序列表中序列3所示的核苷酸、序列表中序列4所示的核苷酸、序列表中序列5所示的核苷酸和序列表中序列6所示的核苷酸组成。本发明的检测方法简便易行、实用性好、灵敏度高、特异性强、准确性高、实现了恒温扩增,同时还为fluoxapiprolin抗性基因型G700V辣椒疫霉的检测提供了新的技术平台,可用于fluoxapiprolin抗性基因型G700V辣椒疫霉的高灵敏度快速检测,同时能够对辣椒疫霉的fluoxapiprolin抗性群体进行检测,及时了解抗性群体发展动态,本发明对作物辣椒疫病的抗药性治理和科学指导用药,降低生产成本,减少农药的环境污染也具有重要意义。

技术研发人员:刘西莉;苗建强;李成成;刘小飞;高续恒;李桂香;张西涛
受保护的技术使用者:西北农林科技大学
技术研发日:2020.07.27
技术公布日:2020.09.08
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