取代的直链螺环衍生物的制作方法

1.本发明涉及用于在哺乳动物中进行治疗和/或预防的药物试剂，包含此类化合物的药物组合物，以及它们作为menin/mll蛋白质/蛋白质相互作用抑制剂用于治疗疾病的用途，这些疾病例如癌症，包括但不限于白血病、骨髓增生异常综合征(mds)、和骨髓增生性肿瘤(mpn)；和糖尿病。


背景技术：

2.影响混合谱系白血病基因(mll；mll1；kmt2a)的染色体重排导致所有年龄组的侵袭性急性白血病，并且仍然主要表现为强调迫切需要新颖治疗方法的不治之症。携带这些mll染色体易位的急性白血病代表淋巴、骨髓或双表型疾病，并且在成人急性白血病中占5％至10％，并且在婴儿中占大约70％(marschalek，br j haematol 2011.152(2),141-54；tomizawa等人，pediatr blood cancer[儿科血液与癌症]2007.49(2),127-32)。
[0003]
mll是在赖氨酸4(h3k4)上甲基化组蛋白h3并在多蛋白复合物中起作用的组蛋白甲基转移酶。使用mll1的可诱导的功能丧失等位基因表明，mll1在维持造血干细胞(hsc)和发育b细胞中起重要作用，尽管其组蛋白甲基转移酶活性对于造血是非必要的(mishra等人，cell rep[细胞报告]2014.7(4),1239-47)。
[0004]
迄今已报道mll与多于60种不同配偶体进行融合，并与白血病的形成/进展有关(meyer等人,leukemia[白血病]2013.27,2165-2176)。有趣的是，mll的set(su(var)3-9，zeste的增强子和trithorax)结构域不保留在嵌合蛋白中，而是被融合配偶体替换(thiel等人,bioessays[生物学分析]2012.34,771-80)。通过融合配偶体募集染色质修饰酶如dot1l和/或ptefb复合物导致包括作为最突出的hoxa基因(例如hoxa9)和hox辅因子meis1的mll靶基因的增强的转录和转录延伸。这些基因的异常表达反过来又阻断造血分化并增强增殖。
[0005]
由多发性内分泌肿瘤1型(men1)基因编码的menin被普遍表达，并且主要位于细胞核中。已经显示与许多蛋白质相互作用，并且因此涉及多种细胞过程。对menin最佳理解的功能是其作为mll融合蛋白的致癌辅因子的作用。menin与保留在所有融合蛋白、mbm1(menin结合基序1)和mbm2中的mll的n端片段内的两种基序相互作用(thiel等人,bioessays[生物测定]2012.34,771-80)。menin/mll相互作用导致了用于晶状体上皮衍生的生长因子(ledgf)的新的相互作用表面的形成。尽管mll直接与ledgf结合，但是menin对于mll和ledgf之间稳定的相互作用以及经由ledgf的pwwp结构域的mll复合物的基因特异性染色质募集是必须的(cermakova等人,cancer res[癌症研究]2014.15,5139-51；yokoyama&cleary,cancer cell[癌症细胞]2008.8,36-46)。此外，许多遗传学研究已经显示，menin是严格要求通过mll融合蛋白进行致癌性转化，表明menin/mll相互作用是有吸引力的治疗靶。例如，men1的条件性缺失预防异位表达mll融合的骨髓祖细胞中的白血病发生(chen等人,proc natl acad sci[美国国家科学院院刊]2006.103,1018-23)。类似地，通过功能缺失突变的menin/mll融合相互作用的遗传破坏消除了mll融合蛋白的致癌特性，阻断
了体内白血病的发展，并释放了mll转化的白血病母细胞的分化阻滞。这些研究还表明，要求menin通过mll融合蛋白维持hox基因表达是必需的(yokoyama等人,cell[细胞]2005.123,207-18)。另外，已经开发了表明这种蛋白/蛋白相互作用的药物性的menin/mll相互作用的小分子抑制剂，并且还证明了在aml的临床前模型中的功效(borkin等人,cancer cell[癌症细胞]2015.27,589-602；cierpicki和grembecka,future med chem[未来医药化学]2014.6,447-462)。连同在正常造血期间，menin不是mll1的必需辅因子(li等人,blood[血液]2013.122,2039-2046)的观察结果一起，这些数据证实了menin/mll相互作用的破坏用于治疗mll重排的白血病和其他具有活性hox/meis1基因标记的癌症是有希望的新治疗方法。例如，在mll基因的5'区域内的内部部分串联重复(ptd)代表主要发生在从头性和继发性aml以及骨髓发育不良综合征中的另一个主要畸变。尽管mll-ptd的分子机制和生物学功能尚未得到充分的了解，但影响menin/mll相互作用的新治疗靶向策略也可证明在mll-ptd相关的白血病治疗中有效。此外，已经示出去势抗性前列腺癌依赖于menin/mll相互作用(malik等人,nat med[自然医学杂志]2015.21,344-52)。
[0006]
mll蛋白在科学领域也称为组蛋白-赖氨酸n-甲基转移酶2a(kmt2a)蛋白(uniprot登录号q03164)。
[0007]
几篇参考文献描述了靶向menin-mll相互作用的抑制剂：wo 2011029054，j med chem[医药化学杂志]2016,59,892-913描述了噻吩并嘧啶和苯二氮卓衍生物的制备；wo 2014164543描述了噻吩并嘧啶和噻吩并吡啶衍生物；nature chemical biology[自然化学生物学]2012年3月,8,277-284和ren,j.等人bioorg med chem lett[生物有机和药物化学通讯](2016),26(18),4472-4476描述了噻吩并嘧啶衍生物；j med chem[医药化学杂志]2014,57,1543-1556描述了羟基-和氨甲基哌啶衍生物；future med chem[未来医药化学]2014,6,447-462综述了小分子和模拟肽化合物；wo 2016195776描述了呋喃并[2,3-d]嘧啶、9h-嘌呤、[1,3]噁唑并[5,4-d]嘧啶、[1,3]噁唑并[4,5-d]嘧啶、[1,3]噻唑并[5,4-d]嘧啶、噻吩并[2,3-b]吡啶和噻吩并[2,3-d]嘧啶衍生物；wo 2016197027描述了5,6,7,8-四氢吡啶并[3,4-d]嘧啶、5,6,7,8-四氢吡啶并]4,3-d]嘧啶、吡啶并[2,3-d]嘧啶和喹啉衍生物；以及wo 2016040330描述了噻吩并嘧啶和噻吩并吡啶化合物。wo 2017192543描述了作为menin抑制剂的哌啶。wo 2017112768、wo 2017207387、wo 2017214367、wo 2018053267和wo 2018024602描述了menin-mll相互作用的抑制剂。wo 2017161002和wo 2017161028描述了menin-mll的抑制剂。wo 2018050686、wo 2018050684和wo 2018109088描述了menin-mll相互作用的抑制剂。wo 2018226976描述了用于抑制menin与mll蛋白质的相互作用的方法和组合物。wo 2018175746提供了用于治疗血液恶性肿瘤和尤文氏肉瘤(ewing's sarcoma)的方法。wo 2018106818和wo 2018106820提供了促进胰腺细胞增殖的方法。wo 2018153312披露了药物化学领域的氮杂螺环化合物。wo 2017132398披露了包括使展示npm1突变的白血病细胞与在mll和menin之间相互作用的药理抑制剂接触的方法。wo 2019060365描述了取代的menin-mll抑制剂。wo 2020069027描述了用menin抑制剂治疗血液恶性肿瘤。krivtsov等人,cancer cell[癌症细胞]2019.第6期第36卷,660-673描述了menin-mll抑制剂。
c(＝o)-o-c
1-4
烷基；-c(＝o)-nr
12ar12b
；和被一个、两个、或三个取代基取代的c
1-6
烷基，这些取代基各自独立地选自下组，该组由以下组成：-oh、氰基、卤代、-s(＝o)
2-c
1-4
烷基、-o-c
1-4
烷基、-c(＝o)-nr
10ar10b
、和-nr
10c-c(＝o)-c
1-4
烷基；
[0029]r9a
、r
9b
、r
10a
、r
10b
、r
10c
、r
11
、r
12a
和r
12b
各自独立地选自下组，该组由以下组成：氢和c
1-6
烷基；
[0030]
及其药学上可接受的盐和溶剂化物。
[0031]
本发明还涉及药物组合物，所述药物组合物包含治疗有效量的具有式(i)的化合物、其药学上可接受的盐或溶剂化物，和药学上可接受的载体或赋形剂。
[0032]
另外，本发明涉及具有式(i)的化合物、其药学上可接受的盐或溶剂化物，用于作为药物使用，并且涉及具有式(i)的化合物、其药学上可接受的盐或溶剂化物，用于在治疗或预防癌症，包括但不限于白血病、骨髓增生异常综合征(mds)、和骨髓增生性肿瘤(mpn)；和糖尿病中使用。
[0033]
在特定的实施例中，本发明涉及具有式(i)的化合物、其药学上可接受的盐或溶剂化物，用于在治疗或预防癌症中使用。
[0034]
在特定实施例中，所述癌症选自：白血病、淋巴瘤、骨髓瘤或实体瘤癌症(例如前列腺癌、肺癌、乳腺癌、胰腺癌、结肠癌、肝癌、黑色素瘤和胶质母细胞瘤等)。在一些实施例中，白血病包括急性白血病、慢性白血病、骨髓白血病、髓性白血病、成淋巴细胞白血病、淋巴细胞白血病、急性髓性白血病(aml)、慢性髓性白血病(cml)、急性成淋巴细胞白血病(all)、慢性淋巴细胞白血病(cll)、t细胞前淋巴细胞白血病(t-pll)、大颗粒淋巴细胞白血病、毛细胞白血病(hcl)、mll-重排白血病、mll-ptd白血病、mll扩增的白血病、mll-阳性白血病，展示hox/meis1基因表达标记等的白血病。
[0035]
特别地，根据本发明的化合物和其药物组合物可用于治疗或预防白血病，特别地核磷蛋白(npm1)-突变白血病，例如npm1c。
[0036]
在一个实施例中，具有式(i)的化合物及其药学上可接受的盐和溶剂化物可具有改善的代谢稳定性特性。
[0037]
在一个实施例中，具有式(i)的化合物及其药学上可接受的盐和溶剂化物可具有延长的体内半衰期(t1/2)。
[0038]
在一个实施例中，具有式(i)的化合物及其药学上可接受的盐和溶剂化物可具有改善的口服生物利用度。
[0039]
在一个实施例中，具有式(i)的化合物及其药学上可接受的盐和溶剂化物可减少肿瘤生长例如携带mll(kmt2a)基因重排/改变和/或npm1突变的肿瘤。
[0040]
在一个实施例中，具有式(i)的化合物及其药学上可接受的盐和溶剂化物在一个延长的时间段内可具有体内改善的pd特性，例如在至少16小时的时间段内靶基因(如meis1)表达的抑制和分化标记物的上调。
[0041]
在一个实施例中，具有式(i)的化合物及其药学上可接受的盐和溶剂化物可具有改善的安全性(例如减少的herg抑制；改善的心血管安全)。
[0042]
在一个实施例中，具有式(i)的化合物及其药学上可接受的盐和溶剂化物可适于q.d.给药(每日一次)。
[0043]
本发明还涉及具有式(i)的化合物、其药学上可接受的盐或溶剂化物与另外的药
物试剂的组合的用途，该用途是用于治疗或预防癌症，包括但不限于白血病、骨髓增生异常综合征(mds)、和骨髓增生性肿瘤(mpn)；和糖尿病。
[0044]
此外，本发明涉及用于制备根据本发明的药物组合物的方法，其特征在于将药学上可接受的载体与治疗有效量的具有式(i)的化合物、其药学上可接受的盐或溶剂化物充分混合。
[0045]
本发明还涉及包含具有式(i)的化合物、其药学上可接受的盐或溶剂化物以及另外的药物试剂的产品，作为用于同时、单独或连续用于治疗或预防癌症，包括但不限于白血病、骨髓增生异常综合征(mds)、和骨髓增生性肿瘤(mpn)；和糖尿病的组合制剂。
[0046]
另外，本发明涉及治疗或预防温血动物的细胞增殖疾病的方法，该方法包括向所述动物施用有效量的如本文定义的具有式(i)的化合物、其药学上可接受的盐或溶剂化物、或如本文定义的药物组合物或组合。
具体实施方式
[0047]
如本文使用的术语
‘
卤代’或
‘
卤素’代表氟、氯、溴以及碘。
[0048]
如本文使用的前缀
‘cx-y’(其中x和y是整数)是指一个给定基团中碳原子的数目。因此，c
1-6
烷基基团含有从1至6个碳原子等等。
[0049]
如本文用作基团或基团的一部分的术语
‘c1-4
烷基’代表具有从1到4个碳原子的直链或支链饱和烃基团，如甲基、乙基、正丙基、异丙基、正丁基、仲丁基、叔丁基等。
[0050]
类似的，如本文用作基团或基团的一部分的术语
‘c1-6
烷基’代表具有从1到6个碳原子的直链或支链饱和烃基团，如甲基、乙基、正丙基、异丙基、正丁基、仲丁基、叔丁基、正戊基、正己基等。
[0051]
如本文用作基团或基团的一部分的术语
‘c3-6
环烷基’定义了饱和的、具有从3个到6个碳原子的环状烃基团，如环丙基、环丁基、环戊基和环己基。
[0052]
本领域技术人员将清楚的是，s(＝o)2或so2表示磺酰基部分。
[0053]
技术人员将清楚的是，co或c(＝o)代表羰基部分。
[0054]
本领域技术人员将清楚的是，例如-crr-的基团表示这种基团的实例是-cr
5ar5b-。
[0055]
本领域技术人员将清楚的是，基团如-nr-表示这种基团的实例是-nr
5c-。
[0056]
‘
含有一个、两个、或三个氮原子和任选地羰基部分的单环5元或6元芳香族环’的非限制性实例包括但不限于吡唑基、咪唑基、吡啶基、哒嗪基、嘧啶基、吡嗪基、三嗪基、或1,2-二氢-2-氧代-4-吡啶基。
[0057]
技术人员将理解含有一个、两个、或三个氮原子和羰基部分的5元或6元的单环芳香族环包括但不限于
[0058][0059]
当任何变量在任何成分中出现多于一次时，每条定义是独立的。
[0060]
当任何变量在任何式(例如式(i))中出现多于一次时，每条定义是独立的。
[0061]
通常，每当术语
‘
取代的’用于本发明时，除非另外指明或从上下文是清楚的，它意在表示在使用
‘
取代的’这种表述中表示的原子或基团上的一个或多个氢(特别是从1至4个氢、更特别是从1至3个氢、优选是1或2个氢、更优选是1个氢)被选自所表示组的选择项替换，其条件是未超过正常的化合价，并且该取代导致了化学上稳定的化合物，即足够稳健以承受从反应混合物分离至有用的纯度的化合物(在反应例如通过硅胶层析的纯化后分离)。在特定的实施例中，当取代基的数目未明确规定时，取代基的数目是一。
[0062]
取代基和/或变量的组合是可容许的，只要此类组合产生化学上稳定的化合物即可。
‘
稳定的化合物’在此上下文中意在指示足够稳健以经受住从反应混合物(反应后分离，例如通过硅胶层析纯化)分离到适用纯度程度的化合物。
[0063]
技术人员将理解术语
‘
任选地取代的’意指使用
‘
任选地取代的’表示的原子或基团可以是或可以不是取代的(这分别表示取代的或未取代的)。
[0064]
当一个部分上存在两个或更多个取代基时，在可能的情况下并且除非另外指明或从上下文是清楚的，这些取代基可以替换相同原子上的氢，或者这些取代基可以替换在所述部分不同原子上的氢原子。
[0065]
在本发明的上下文中，如果没有另外说明
‘
饱和’意指
‘
完全饱和’。
[0066]
除非另外指定或上下文中是明确的，芳香族环基团可通过任何可用的环碳原子(c连接的)或氮原子(n连接的)与具有式(i)的分子的剩余部分附接。
[0067]
除非另外指定或上下文中是明确的，否则在可能的情况下，芳香族环基团在根据实施例的碳和/或氮原子上可以任选地被取代。
[0068]
如本文使用的术语“受试者”是指是或已经是治疗、观察或实验的对象的动物，优选是哺乳动物(例如猫、狗、灵长类动物或人类)，更优选是人。
[0069]
如本文使用的术语“治疗有效量”意指活性化合物或药物试剂引发组织系统(动物或人)的生物或医药应答的量，所述生物或医药应答正为研究者、兽医、医药医生或其他临床医生所寻求，包括所治疗的疾病或障碍的症状的减轻或逆转。
[0070]
术语“组合物”旨在涵盖包含指定量的指定成分的产品，以及任何直接或间接由指定量的指定成分的组合产生的产品。
[0071]
如本文使用的术语“治疗”旨在是指其中可能减缓、中断、遏制或阻止疾病的进展的所有过程，但未必表示所有症状都全部消除。
[0072]
如本文使用的术语“(本)发明的一种或多种化合物”或“根据(本)发明的一种或多种化合物”意指包括具有式(i)的化合物及其药学上可接受的盐和溶剂化物。
[0073]
如本文使用的具有仅显示为实线并且不显示为实楔形键或虚楔形键的键的任何
化学式，或另外表示为围绕一个或多个原子具有特别构型(例如r，s)的化学式，考虑每种可能的立体异构体，或两种或更多种立体异构体的混合物。
[0074]
在上文和下文中，术语“一种或多种具有式(i)的化合物”意指包括其互变异构体和其立体异构形式。
[0075]
术语“立体异构体”、“立体异构形式”或“立体化学异构形式”在上文或下文中可互换地使用。
[0076]
本发明包括本发明的化合物呈纯立体异构体形式或呈两种或更多种立体异构体的混合物形式的所有立体异构体。
[0077]
对映异构体为彼此不可重叠的镜像的立体异构体。对映异构体对的1:1混合物是外消旋体或外消旋混合物。
[0078]
阻转异构体(atropisomer)(或限制构型异构体(atropoisomer))是具有特定空间构型的立体异构体，该特定空间构型由大空间位阻所致的围绕单键受限制的旋转所产生。具有式(i)的化合物的所有阻转异构形式旨在包括在本发明的范围内。
[0079]
非对映体(或非对映异构体)为不是对映异构体的立体异构体，即它们并非为镜像关系。如果化合物含有双键，则这些取代基可以呈e或z构型。
[0080]
二价环状饱和或部分饱和基团上的取代基可以具有顺式构型或反式构型；例如，如果化合物含有二取代的环烷基基团，则这些取代基可以呈顺式构型或反式构型。
[0081]
因此，本发明包括对映异构体、阻转异构体、非对映异构体、外消旋体、e异构体、z异构体、顺式异构体、反式异构体及其混合物，只要化学上可能即可。
[0082]
所有那些术语(即对映异构体、阻转异构体、非对映异构体、外消旋体、e异构体、z异构体、顺式异构体、反式异构体及其混合物)的含义为技术人员所已知。
[0083]
绝对构型是根据卡恩-英戈尔德-普雷洛格(cahn-ingold-prelog)系统指定的。不对称原子处的构型由r或s指定。绝对构型未知的经过拆分的立体异构体可以根据它们旋转平面偏振光的方向而由(+)或(-)指定。例如，绝对构型未知的已拆分的对映异构体可以根据它们旋转平面偏振光的方向而由(+)或(-)指定。
[0084]
当鉴定特定的立体异构体时，这意指所述立体异构体基本上不含其他立体异构体，即与少于50％、优选地少于20％、更优选地少于10％、甚至更优选地少于5％，特别是少于2％并且最优选地少于1％的其他立体异构体相关联。因此，当具有式(i)的化合物例如被指定为(r)时，这意指所述化合物基本上不含(s)异构体；当具有式(i)的化合物例如被指定为e时，这意指所述化合物基本上不含z异构体；当具有式(i)的化合物例如被指定为顺式时，这意指所述化合物基本上不含反式异构体。
[0085]
一些根据式(i)的化合物还能以其互变异构形式存在。尽管在以上式(i)中未明确表示，但是此类形式在它们可能存在的情况下旨在包括在本发明的范围内。由此得出，单一化合物可以按立体异构和互变异构形式存在。
[0086]
药学上可接受的盐包括酸加成盐和碱加成盐。可以通过常规手段，例如通过使游离酸或游离碱形式与一个或多个当量的适当的碱或酸、任选地在溶剂中或在其中所述盐不可溶的介质中进行反应，之后使用标准技术(例如，在真空中，通过冷冻干燥或通过过滤)去除所述溶剂或所述介质来形成此类盐。盐还可以通过将以盐形式的本发明的化合物的反离子与另一种反离子进行交换来制备，例如使用适合的离子交换树脂。
[0087]
如在上文或下文中所提及的药学上可接受的盐意在包含具有式(i)的化合物及其溶剂化物能够形成的有治疗活性的无毒的酸盐和碱盐形式。
[0088]
适当的酸包括例如，无机酸，如氢卤酸(例如盐酸或氢溴酸)、硫酸、硝酸、磷酸以及类似酸；或有机酸，例如乙酸、丙酸、羟基乙酸、乳酸、丙酮酸、草酸(即乙二酸)、丙二酸、琥珀酸(即丁二酸)、马来酸、富马酸、苹果酸、酒石酸、柠檬酸、甲磺酸、乙磺酸、苯磺酸、对甲苯磺酸、环己氨磺酸、水杨酸、对氨基水杨酸、双羟萘酸以及类似酸。相反地，可以通过用适当的碱处理将所述盐形式转化为游离碱形式。
[0089]
还可以通过用适当的有机和无机碱处理将含有酸性质子的具有式(i)的化合物及其溶剂化物转化为它们的无毒金属或胺盐形式。
[0090]
适当的碱盐形式包含例如铵盐，碱金属及碱土金属盐例如锂、钠、钾、铯、镁、钙盐等，与有机碱(例如伯、仲及叔脂肪族及芳香族胺，如甲胺、乙胺、丙胺、异丙胺、四丁胺异构体、二甲胺、二乙胺、二乙醇胺、二丙胺、二异丙胺、二正丁胺、吡咯烷、哌啶、吗啉、三甲胺、三乙胺、三丙胺、奎宁环、吡啶、喹啉和异喹啉)的盐；苯乍生、n-甲基-d-葡糖胺、海巴明盐、以及与氨基酸(例如像精氨酸、赖氨酸等)的盐。相反地，可以通过用酸处理将所述盐形式转化成游离酸形式。
[0091]
术语“前药”包括任何化合物，其在口服或肠胃外施用(尤其是口服施用)后，在体内代谢成实验上可检测的量的(更)有活性的形式，并且是在预定的时间之内(例如在0.5与24小时之间的给药间隔，或例如在6与24小时之间的给药间隔之内(即每天一次至四次))。为了避免疑问，术语“肠胃外”施用包括除了口服施用外所有的施用形式，特定地为静脉内(iv)、肌内(im)、和皮下(sc)注射。
[0092]
前药可以按以下的方式通过修饰存在于化合物上的官能团来制备，该方式使得当向哺乳动物受试者施用此类前药时，这些修饰在体内被切割。通常，通过合成具有前药取代基的母体化合物来完成这些修饰。通常，前药包括化合物，其中羟基、氨基、巯基、羧基或羰基基团被结合到在体内可以被切割的任何基团上以分别再生成游离的羟基、氨基、巯基、羧基或羰基基团。
[0093]
前药的实例包括但不局限于，羟基官能团的酯和氨基甲酸酯、羧基官能团的酯基、n-酰基衍生物和n-曼尼希碱。有关前药的一般信息可以例如在bundegaard,h.“design of prodrugs[前药的设计]”第l-92页,纽约牛津爱思唯尔出版社(elesevier,new york-oxford)(1985)中找到。
[0094]
术语溶剂化物包含具有式(i)的化合物能够形成的其溶剂加成形式以及其盐。此类溶剂加成形式的实例是例如水合物、醇化物等。
[0095]
如在以下描述的方法中制备的本发明的化合物可以合成为对映异构体的混合物形式，特别是对映异构体的外消旋混合物，这些对映异构体可以根据本领域中已知的拆分程序相互分离。分离具有式(i)的化合物及其药学上可接受的盐和溶剂化物的对映异构形式的方式涉及使用手性固定相的液相色谱。所述纯立体化学异构形式还可以来源于适当起始材料的相应的纯立体化学异构形式，条件是反应立体定向地发生。优选地，如果特定的立体异构体是所希望的，则所述化合物将通过立体定向制备方法来合成。这些方法将有利地采用对映异构体纯的原材料。
[0096]
如本文使用的术语“对映异构体纯的”意指产物含有至少按重量计80％的一种对
映异构体和按重量计20％或更少的另一种对映异构体。优选地所述产物含有至少按重量计90％的一种对映异构体和按重量计10％或更少的另一种对映异构体。在最优选的实施例中，术语“对映异构体纯的”意指组合物含有至少按重量计99％的一种对映异构体和1％或更少的另一种对映异构体。
[0097]
本发明还包括本发明的同位素标记的化合物，这些同位素标记的化合物与本文列举的那些相同，但是事实上一个或多个原子被原子质量或质量数不同于自然中通常发现(或自然中发现的最多的那一个)的原子质量或质量数的原子所替换。
[0098]
如本文所指定的任何特定的原子或元素的所有同位素和同位素混合物都被认为是在本发明的化合物的范围之内，不论是天然存在的或是合成产生的，不论具有天然丰度或呈同位素富集的形式。可以并入到本发明的化合物中的示例性同位素包括氢、碳、氮、氧、磷、硫、氟、氯和碘的同位素，如2h、3h、
11
c、
13
c、
14
c、
13
n、
15
o、
17
o、
18
o、
32
p、
33
p、
35
s、
18
f、
36
cl、
122
i、
123
i、
125
i、
131
i、
75
br、
76
br、
77
br和
82
br。优选地，同位素选自下组，该组由以下组成：2h、3h、
11
c、
13
c和
18
f。优选地，同位素选自下组，该组由以下组成：2h、3h、
11
c和
18
f。更优选地，同位素是2h、3h、或
13
c。更优选地，同位素是2h或
13
c。更优选地，同位素是2h。特别地，氘化的化合物和富含
13
c的化合物旨在包括在本发明的范围内。特别地，氘化的化合物旨在包括在本发明的范围内。
[0099]
本发明的某些同位素标记的化合物(例如，用3h和
14
c标记的那些)例如在底物组织分布测定中可以是有用的。氚化(3h)和碳-l4(
14
c)同位素是有用的，因为它们易于制备和检测。此外，用更重同位素(如氘)(即，2h)取代可以提供由于更大的代谢稳定性而产生的某些治疗优点(例如，增加的体内半衰期或降低的剂量需求)并且因此在一些环境下可以是优选的。正电子发射同位素(诸如
15
o、
13
n、
11
c和
18
f)对于正电子发射断层术(pet)研究是有用的。癌症中的pet成像在帮助定位和鉴定肿瘤、对疾病分阶段并确定适合的治疗方法中有效用。人癌细胞过量表达许多潜在的疾病特异性分子靶的受体或蛋白质。以高亲和力和特异性结合肿瘤细胞上的此类受体或蛋白质的放射标记的示踪剂具有诊断成像和靶向放射性核素治疗的巨大潜力(charron，carlie l.等人，tetrahedron lett.[四面体通讯]2016,57(37),4119-4127)。另外，靶特异性pet放射性示踪剂可以用作生物标志物来检查和评估病理学，例如通过测量靶标表达和治疗应答(austin r.等人，cancer letters[癌症通讯](2016)，doi:10.1016/j.canlet.2016.05.008)。
[0100]
本发明特别涉及如本文定义的具有式(i)的化合物、及其互变异构体和立体异构形式，其中
[0101]r1a
表示-c(＝o)-nr
xarxb
；het；或
[0102]
het表示含有一个、两个或三个氮原子和任选地羰基部分的5元或6元单环芳香族环；
[0103]
其中所述5元或6元单环芳香族环任选地被选自下组的一个或两个取代基取代，该组由以下组成：c
3-6
环烷基和c
1-4
烷基；
[0104]rxa
和r
xb
各自独立地选自下组，该组由以下组成：氢、c
1-4
烷基和c
3-6
环烷基；
[0105]r1b
表示f或cl；
[0106]
y1表示-cr
5ar5b-、-o-或-nr
5c-；
[0107]
r2选自下组，该组由以下组成：氢、卤代、c
1-4
烷基、-o-c
1-4
烷基和-nr
7ar7b
；
[0108]
u表示n或ch；
[0109]
n1、n2、n3和n4各自独立地选自1和2；
[0110]
x1表示ch，并且x2表示n；
[0111]
r4表示异丙基；
[0112]r5a
、r
5b
、r
5c
、r
7a
、和r
7b
各自独立地选自下组，该组由以下组成：氢、c
1-4
烷基和c
3-6
环烷基；
[0113]
r3表示-c
1-6
烷基-nr
8ar8b
、-c
1-6
烷基-c(＝o)-nr
9ar9b
、-c
1-6
烷基-oh、或-c
1-6
烷基-nr
11-c(＝o)-o-c
1-4
烷基-o-c(＝o)-c
1-4
烷基；
[0114]
其中r3定义中的c
1-4
烷基或c
1-6
烷基部分中的每一个各自独立地可被一个、两个、或三个取代基取代，这些取代基各自独立地选自下组，该组由以下组成：氰基、卤代或-o-c
1-4
烷基；
[0115]r8a
和r
8b
各自独立地选自下组，该组由以下组成：氢；c
1-6
烷基；-c(＝o)-c
1-4
烷基；-c(＝o)-o-c
1-4
烷基；-c(＝o)-nr
12ar12b
；和被一个、两个、或三个取代基取代的c
1-6
烷基，这些取代基各自独立地选自下组，该组由以下组成：氰基、卤代、-s(＝o)
2-c
1-4
烷基、-o-c
1-4
烷基、和-c(＝o)-nr
10ar10b
；
[0116]r9a
、r
9b
、r
10a
、r
10b
、r
11
、r
12a
、和r
12b
各自独立地选自下组，该组由以下组成：氢和c
1-6
烷基；
[0117]
及其药学上可接受的盐和溶剂化物。
[0118]
本发明特别涉及如本文定义的具有式(i)的化合物、及其互变异构体和立体异构形式，其中
[0119]r1a
表示-c(＝o)-nr
xarxb
；het；或
[0120]
het表示含有一个、两个或三个氮原子和任选地羰基部分的5元或6元单环芳香族环；
[0121]
其中所述5元或6元单环芳香族环任选地被选自下组的一个或两个取代基取代，该组由以下组成：c
3-6
环烷基和c
1-4
烷基；
[0122]rxa
和r
xb
各自独立地选自下组，该组由以下组成：氢、c
1-4
烷基和c
3-6
环烷基；
[0123]r1b
表示f或cl；
[0124]
y1表示-cr
5ar5b-、-o-或-nr
5c-；
[0125]
r2选自下组，该组由以下组成：氢、卤代、c
1-4
烷基、-o-c
1-4
烷基和-nr
7ar7b
；
[0126]
u表示n或ch；
[0127]
n1、n2、n3和n4各自独立地选自1和2；
[0128]
x1表示ch，并且x2表示n；
[0129]
r4表示异丙基；
[0130]r5a
、r
5b
、r
5c
、r
7a
、和r
7b
各自独立地选自下组，该组由以下组成：氢、c
1-4
烷基和c
3-6
环烷基；
[0131]
r3表示-c
1-6
烷基-nr
8ar8b
；
[0132]
其中r3定义中的c
1-6
烷基部分可被一个、两个、或三个取代基取代，这些取代基各自独立地选自下组，该组由以下组成：氰基、卤代、oh、和-o-c
1-4
烷基；
[0133]r8a
和r
8b
各自独立地选自下组，该组由以下组成：氢；c
1-6
烷基；和被一个、两个、或三个取代基取代的c
1-6
烷基，这些取代基各自独立地选自下组，该组由以下组成：-oh、氰基、卤代、-s(＝o)
2-c
1-4
烷基、-o-c
1-4
烷基、-c(＝o)-nr
10ar10b
、和-nr
10c-c(＝o)-c
1-4
烷基；
[0134]r10a
、r
10b
、r
10c
各自独立地选自下组，该组由以下组成：氢和c
1-6
烷基；
[0135]
及其药学上可接受的盐和溶剂化物。
[0136]
本发明特别涉及如本文定义的具有式(i)的化合物、及其互变异构体和立体异构形式，其中
[0137]r1a
表示-c(＝o)-nr
xarxb
；het；或
[0138]
het表示含有一个、两个或三个氮原子和任选地羰基部分的5元或6元单环芳香族环；
[0139]
其中所述5元或6元单环芳香族环任选地被选自下组的一个或两个取代基取代，该组由以下组成：c
3-6
环烷基和c
1-4
烷基；
[0140]rxa
和r
xb
各自独立地选自下组，该组由以下组成：氢、c
1-4
烷基和c
3-6
环烷基；
[0141]r1b
表示f或cl；
[0142]
y1表示-cr
5ar5b-、-o-或-nr
5c-；
[0143]
r2选自下组，该组由以下组成：氢、卤代、c
1-4
烷基、-o-c
1-4
烷基和-nr
7ar7b
；
[0144]
u表示n或ch；
[0145]
n1、n2、n3和n4各自独立地选自1和2；
[0146]
x1表示ch，并且x2表示n；
[0147]
r4表示异丙基；
[0148]r5a
、r
5b
、r
5c
、r
7a
、和r
7b
各自独立地选自下组，该组由以下组成：氢、c
1-4
烷基和c
3-6
环烷基；
[0149]
r3表示-c
1-6
烷基-nr
8ar8b
；
[0150]
其中r3定义中的c
1-6
烷基部分可被一个、两个、或三个取代基取代，这些取代基各自独立地选自下组，该组由以下组成：氰基、卤代和-o-c
1-4
烷基；
[0151]r8a
和r
8b
各自独立地选自下组，该组由以下组成：氢；c
1-6
烷基；和被一个、两个、或三个取代基取代的c
1-6
烷基，这些取代基各自独立地选自下组，该组由以下组成：氰基、卤代、-s(＝o)
2-c
1-4
烷基、-o-c
1-4
烷基、和-c(＝o)-nr
10ar10b
；
[0152]r10a
和r
10b
各自独立地选自下组，该组由以下组成：氢和c
1-6
烷基；
[0153]
及其药学上可接受的盐和溶剂化物。
[0154]
本发明特别涉及如本文定义的具有式(i)的化合物、及其互变异构体和立体异构
形式，其中
[0155]r1a
表示-c(＝o)-nr
xarxb
或het；
[0156]
het表示含有两个氮原子的6元单环芳香族环；
[0157]
其中所述6元单环芳香族环被一个c
3-6
环烷基取代；
[0158]rxa
和r
xb
表示c
1-4
烷基；
[0159]r1b
表示f；
[0160]
y1表示-o-；
[0161]
r2表示氢；
[0162]
u表示n或ch；
[0163]
n1、n2、n3和n4各自独立地选自1和2；
[0164]
x1表示ch，并且x2表示n；
[0165]
r4表示异丙基；
[0166]
r3表示-c
1-6
烷基-nr
8ar8b
、-c
1-6
烷基-c(＝o)-nr
9ar9b
、-c
1-6
烷基-oh、或-c
1-6
烷基-nr
11-c(＝o)-o-c
1-4
烷基-o-c(＝o)-c
1-4
烷基；
[0167]
其中r3定义中的c
1-4
烷基或c
1-6
烷基部分中的每一个各自独立地可被一个、两个、或三个取代基取代，这些取代基各自独立地选自下组，该组由以下组成：-oh和-o-c
1-4
烷基；
[0168]r8a
和r
8b
各自独立地选自下组，该组由以下组成：氢；c
1-6
烷基；-c(＝o)-c
1-4
烷基；-c(＝o)-o-c
1-4
烷基；-c(＝o)-nr
12ar12b
；和被一个、两个、或三个取代基取代的c
1-6
烷基，这些取代基各自独立地选自下组，该组由以下组成：-oh、氰基、卤代、-s(＝o)
2-c
1-4
烷基、-o-c
1-4
烷基、-c(＝o)-nr
10ar10b
、和-nr
10c-c(＝o)-c
1-4
烷基；
[0169]r9a
、r
9b
、r
10a
、r
10b
、r
10c
、r
11
、r
12a
和r
12b
各自独立地选自下组，该组由以下组成：氢和c
1-6
烷基；
[0170]
及其药学上可接受的盐和溶剂化物。
[0171]
本发明特别涉及如本文定义的具有式(i)的化合物、及其互变异构体和立体异构形式，其中
[0172]r1a
表示-c(＝o)-nr
xarxb
或het；
[0173]
het表示含有两个氮原子的6元单环芳香族环；
[0174]
其中所述6元单环芳香族环被一个c
3-6
环烷基取代；
[0175]rxa
和r
xb
表示c
1-4
烷基；
[0176]r1b
表示f；
[0177]
y1表示-o-；
[0178]
r2表示氢；
[0179]
u表示n或ch；
[0180]
n1、n2、n3和n4各自独立地选自1和2；
[0181]
x1表示ch，并且x2表示n；
[0182]
r4表示异丙基；
[0183]
r3表示-c
1-6
烷基-nr
8ar8b
；
[0184]
其中r3定义中的c
1-6
烷基部分可被一个、两个、或三个取代基取代，这些取代基各自独立地选自下组，该组由以下组成：-oh和-o-c
1-4
烷基；
[0185]r8a
和r
8b
各自独立地选自下组，该组由以下组成：氢；c
1-6
烷基；和被一个、两个、或三个取代基取代的c
1-6
烷基，这些取代基各自独立地选自下组，该组由以下组成：-oh、氰基、卤代、-s(＝o)
2-c
1-4
烷基、-o-c
1-4
烷基、-c(＝o)-nr
10ar10b
、和-nr
10c-c(＝o)-c
1-4
烷基；
[0186]r10a
、r
10b
、和r
10c
各自独立地选自下组，该组由以下组成：氢和c
1-6
烷基；
[0187]
及其药学上可接受的盐和溶剂化物。
[0188]
本发明特别涉及如本文定义的具有式(i)的化合物、及其互变异构体和立体异构形式，其中
[0189]r1a
表示-c(＝o)-nr
xarxb
；
[0190]rxa
和r
xb
表示c
1-4
烷基；
[0191]r1b
表示f；
[0192]
y1表示-o-；
[0193]
r2表示氢；
[0194]
u表示n或ch；
[0195]
n1、n2、n3和n4各自独立地选自1和2；
[0196]
x1表示ch，并且x2表示n；
[0197]
r4表示异丙基；
[0198]
r3表示-c
1-6
烷基-nr
8ar8b
；
[0199]
其中r3定义中的c
1-6
烷基部分可被一个、两个、或三个取代基取代，这些取代基各自独立地选自下组，该组由以下组成：-oh和-o-c
1-4
烷基；
[0200]r8a
和r
8b
各自独立地选自下组，该组由以下组成：氢；c
1-6
烷基；和被一个、两个、或三个取代基取代的c
1-6
烷基，这些取代基各自独立地选自下组，该组由以下组成：-oh、氰基、卤代、-s(＝o)
2-c
1-4
烷基、-o-c
1-4
烷基、-c(＝o)-nr
10ar10b
、和-nr
10c-c(＝o)-c
1-4
烷基；
[0201]r10a
、r
10b
、和r
10c
各自独立地选自下组，该组由以下组成：氢和c
1-6
烷基；
[0202]
及其药学上可接受的盐和溶剂化物。
[0203]
本发明特别涉及如本文定义的具有式(i)的化合物、及其互变异构体和立体异构形式，其中
[0204]r1a
表示-c(＝o)-nr
xarxb
或het；
[0205]
het表示被一个c
3-6
环烷基取代的嘧啶基；
[0206]rxa
和r
xb
表示c
1-4
烷基；
[0207]r1b
表示f；
[0208]
y1表示-o-；
[0209]
r2表示氢；
[0210]
u表示n；
[0211]
n1、n2、n3和n4各自独立地选自1和2；
[0212]
x1表示ch，并且x2表示n；
[0213]
r4表示异丙基；
[0214]
r3表示-c
1-6
烷基-nr
8ar8b
；
[0215]
其中r3定义中的c
1-6
烷基部分可被一个-oh取代；
[0216]r8a
和r
8b
各自独立地选自下组，该组由以下组成：氢；c
1-6
烷基；和被各自独立地选
自由以下组成的组的一个或两个取代基取代的c
1-6
烷基：卤代、-o-c
1-4
烷基、和-nr
10c-c(＝o)-c
1-4
烷基；
[0217]r10a
、r
10b
、和r
10c
各自独立地选自下组，该组由以下组成：氢和c
1-6
烷基；
[0218]
及其药学上可接受的盐和溶剂化物。
[0219]
本发明特别涉及如本文定义的具有式(i)的化合物、及其互变异构体和立体异构形式，其中
[0220]r1a
表示-c(＝o)-nr
xarxb
或het；
[0221]
het表示被一个c
3-6
环烷基取代的嘧啶基；
[0222]rxa
和r
xb
表示c
1-4
烷基；
[0223]r1b
表示f；
[0224]
y1表示-o-；
[0225]
r2表示氢；
[0226]
u表示n；
[0227]
n2是2；
[0228]
n1、n3和n4是1；
[0229]
x1表示ch，并且x2表示n；
[0230]
r4表示异丙基；
[0231]
r3表示-c
1-6
烷基-nr
8ar8b
；
[0232]
其中r3定义中的c
1-6
烷基部分可被一个-oh取代；
[0233]r8a
和r
8b
各自独立地选自下组，该组由以下组成：氢；c
1-6
烷基；和被各自独立地选自由以下组成的组的一个或两个取代基取代的c
1-6
烷基：卤代、-o-c
1-4
烷基、和-nr
10c-c(＝o)-c
1-4
烷基；
[0234]r10a
、r
10b
、和r
10c
各自独立地选自下组，该组由以下组成：氢和c
1-6
烷基；
[0235]
及其药学上可接受的盐和溶剂化物。
[0236]
本发明特别涉及如本文定义的具有式(i)的化合物、及其互变异构体和立体异构形式，其中
[0237]r1a
表示-c(＝o)-nr
xarxb
；
[0238]rxa
和r
xb
表示c
1-4
烷基；
[0239]r1b
表示f；
[0240]
y1表示-o-；
[0241]
r2表示氢；
[0242]
u表示n；
[0243]
n2是2；
[0244]
n1、n3和n4是1；
[0245]
x1表示ch，并且x2表示n；
[0246]
r4表示异丙基；
[0247]
r3表示-c
1-6
烷基-nr
8ar8b
；
[0248]r8a
和r
8b
各自独立地选自下组，该组由以下组成：氢；c
1-6
烷基；和被各自独立地选自由以下组成的组的一个或两个取代基取代的c
1-6
烷基：卤代、-o-c
1-4
烷基、和-nr
10c-c(＝
o)-c
1-4
烷基；
[0249]r10a
、r
10b
、和r
10c
各自独立地选自下组，该组由以下组成：氢和c
1-6
烷基；
[0250]
及其药学上可接受的盐和溶剂化物。
[0251]
本发明特别涉及如本文定义的具有式(i)的化合物、及其互变异构体和立体异构形式，其中
[0252]r1a
表示-c(＝o)-nr
xarxb
；
[0253]rxa
和r
xb
表示c
1-4
烷基；
[0254]r1b
表示f；
[0255]
y1表示-o-；
[0256]
r2表示氢；
[0257]
u表示n；
[0258]
n2是2；
[0259]
n1、n3和n4是1；
[0260]
x1表示ch，并且x2表示n；
[0261]
r4表示异丙基；
[0262]
r3表示-ch
2-ch
2-ch
2-nr
8ar8b
；
[0263]r8a
和r
8b
各自独立地选自下组，该组由以下组成：氢；c
1-6
烷基；和被各自独立地选自由以下组成的组的一个或两个取代基取代的c
1-6
烷基：卤代、-o-c
1-4
烷基、和-nr
10c-c(＝o)-c
1-4
烷基；
[0264]r10a
、r
10b
、和r
10c
各自独立地选自下组，该组由以下组成：氢和c
1-6
烷基；
[0265]
及其药学上可接受的盐和溶剂化物。
[0266]
本发明特别涉及如本文定义的具有式(i)的化合物、及其互变异构体和立体异构形式，其中
[0267]r1a
表示-c(＝o)-nr
xarxb
；
[0268]rxa
和r
xb
表示c
1-4
烷基；
[0269]r1b
表示f；
[0270]
y1表示-o-；
[0271]
r2表示氢；
[0272]
u表示n；
[0273]
n1、n2、n3和n4各自独立地选自1和2；
[0274]
x1表示ch，并且x2表示n；
[0275]
r4表示异丙基；
[0276]
r3表示-c
1-6
烷基-nr
8ar8b
；
[0277]r8a
和r
8b
各自独立地选自下组，该组由以下组成：氢；c
1-6
烷基；和被一个、两个、或三个取代基取代的c
1-6
烷基，这些取代基各自独立地选自下组，该组由以下组成：-oh、氰基、卤代、-s(＝o)
2-c
1-4
烷基、-o-c
1-4
烷基、和-c(＝o)-nr
10ar10b
；
[0278]r10a
和r
10b
各自独立地选自下组，该组由以下组成：氢和c
1-6
烷基；
[0279]
及其药学上可接受的盐和溶剂化物。
[0280]
本发明特别涉及如本文定义的具有式(i)的化合物、及其互变异构体和立体异构
形式，其中
[0281]r1a
表示-c(＝o)-nr
xarxb
；
[0282]rxa
和r
xb
表示c
1-4
烷基；
[0283]r1b
表示f；
[0284]
y1表示-o-；
[0285]
r2表示氢；
[0286]
u表示n；
[0287]
n1、n2、n3和n4各自独立地选自1和2；
[0288]
x1表示ch，并且x2表示n；
[0289]
r4表示异丙基；
[0290]
r3表示-ch
2-ch
2-ch
2-nr
8ar8b
；
[0291]r8a
和r
8b
各自独立地选自下组，该组由以下组成：氢；c
1-6
烷基；和被一个、两个、或三个取代基取代的c
1-6
烷基，这些取代基各自独立地选自下组，该组由以下组成：-oh、氰基、卤代、-s(＝o)
2-c
1-4
烷基、-o-c
1-4
烷基、和-c(＝o)-nr
10ar10b
；
[0292]r10a
和r
10b
各自独立地选自下组，该组由以下组成：氢和c
1-6
烷基；
[0293]
及其药学上可接受的盐和溶剂化物。
[0294]
本发明特别涉及如本文定义的具有式(i)的化合物、及其互变异构体和立体异构形式，其中
[0295]r1a
表示-c(＝o)-nr
xarxb
；
[0296]rxa
和r
xb
表示氢或c
1-4
烷基；
[0297]r1b
表示f；
[0298]
y1表示-o-；
[0299]
r2表示氢；
[0300]
u表示n；
[0301]
n1、n2、n3和n4各自独立地选自1和2；
[0302]
x1表示ch，并且x2表示n；
[0303]
r4表示异丙基；
[0304]
r3表示-ch
2-ch
2-ch
2-nr
8ar8b
；
[0305]r8a
和r
8b
各自独立地选自下组，该组由以下组成：氢；c
1-6
烷基；和被一个、两个、或三个取代基取代的c
1-6
烷基，这些取代基各自独立地选自下组，该组由以下组成：-oh、氰基、卤代、-s(＝o)
2-c
1-4
烷基、-o-c
1-4
烷基、和-c(＝o)-nr
10ar10b
；
[0306]r10a
和r
10b
各自独立地选自下组，该组由以下组成：氢和c
1-6
烷基；
[0307]
及其药学上可接受的盐和溶剂化物。
[0308]
本发明特别涉及如本文定义的具有式(i)的化合物、及其互变异构体和立体异构形式，其中
[0309]r1a
表示-c(＝o)-nr
xarxb
；
[0310]rxa
和r
xb
表示氢或c
1-4
烷基；
[0311]r1b
表示f；
[0312]
y1表示-o-；
[0313]
r2表示氢；
[0314]
u表示n；
[0315]
n1、n2、n3和n4各自独立地选自1和2；
[0316]
x1表示ch，并且x2表示n；
[0317]
r4表示异丙基；
[0318]
r3表示-ch
2-ch
2-ch
2-nr
8ar8b
；
[0319]r8a
和r
8b
各自独立地选自下组，该组由以下组成：氢；c
1-6
烷基；和被一个、两个或三个各自独立地选自由-oh和-o-c
1-4
烷基组成的组的取代基取代的c
1-6
烷基；
[0320]
及其药学上可接受的盐和溶剂化物。
[0321]
本发明特别涉及如本文定义的具有式(i)的化合物、及其互变异构体和立体异构形式，其中
[0322]r1a
表示-c(＝o)-nr
xarxb
；
[0323]rxa
和r
xb
表示c
1-4
烷基；
[0324]r1b
表示f；
[0325]
y1表示-o-；
[0326]
r2表示氢；
[0327]
u表示n；
[0328]
n1、n2、n3和n4各自独立地选自1和2；
[0329]
x1表示ch，并且x2表示n；
[0330]
r4表示异丙基；
[0331]
r3表示-c
1-6
烷基-nr
8ar8b
；
[0332]r8a
和r
8b
各自独立地选自下组，该组由以下组成：c
1-6
烷基；和被一个-o-c
1-4
烷基取代的c
1-6
烷基；
[0333]
及其药学上可接受的盐和溶剂化物。
[0334]
本发明特别涉及如本文定义的具有式(i)的化合物、及其互变异构体和立体异构形式，其中
[0335]r1a
表示-c(＝o)-nr
xarxb
；
[0336]rxa
和r
xb
表示c
1-4
烷基；
[0337]r1b
表示f；
[0338]
y1表示-o-；
[0339]
r2表示氢；
[0340]
u表示n；
[0341]
n1、n2、n3和n4各自独立地选自1和2；
[0342]
x1表示ch，并且x2表示n；
[0343]
r4表示异丙基；
[0344]
r3表示-ch
2-ch
2-ch
2-nr
8ar8b
；
[0345]r8a
和r
8b
各自独立地选自下组，该组由以下组成：c
1-6
烷基；和被一个-o-c
1-4
烷基取代的c
1-6
烷基；
[0346]
及其药学上可接受的盐和溶剂化物。
[0347]
本发明特别涉及如本文定义的具有式(i)的化合物、及其互变异构体和立体异构形式，其中
[0348]r1a
表示-c(＝o)-nr
xarxb
；或het；
[0349]
het表示含有两个氮原子的6元单环芳香族环；
[0350]
其中所述6元单环芳香族环任选地被一个c
3-6
环烷基取代；
[0351]rxa
和r
xb
表示c
1-4
烷基；
[0352]r1b
表示f；
[0353]
y1表示-o-；
[0354]
r2是氢；
[0355]
u表示n；
[0356]
n1、n2、n3和n4各自独立地选自1和2；
[0357]
x1表示ch，并且x2表示n；
[0358]
r4表示异丙基；
[0359]
r3表示-c
1-6
烷基-nr
8ar8b
、-c
1-6
烷基-c(＝o)-nr
9ar9b
、-c
1-6
烷基-oh、或-c
1-6
烷基-nr
11-c(＝o)-o-c
1-4
烷基-o-c(＝o)-c
1-4
烷基；
[0360]r8a
和r
8b
各自独立地选自下组，该组由以下组成：氢；c
1-6
烷基；-c(＝o)-c
1-4
烷基；-c(＝o)-o-c
1-4
烷基；-c(＝o)-nr
12ar12b
；和被一个、两个、或三个取代基取代的c
1-6
烷基，这些取代基各自独立地选自下组，该组由以下组成：氰基、卤代、-s(＝o)
2-c
1-4
烷基、和-o-c
1-4
烷基；
[0361]r9a
、r
9b
、r
12a
、和r
12b
各自独立地选自下组，该组由以下组成：氢和c
1-6
烷基；
[0362]
及其药学上可接受的盐和溶剂化物。
[0363]
本发明特别涉及如本文定义的具有式(i)的化合物、及其互变异构体和立体异构形式，其中
[0364]r1a
表示-c(＝o)-nr
xarxb
；
[0365]rxa
和r
xb
表示c
1-4
烷基；
[0366]r1b
表示f；
[0367]
y1表示-o-；
[0368]
r2是氢；
[0369]
u表示n；
[0370]
n1、n2、n3和n4各自独立地选自1和2；
[0371]
x1表示ch，并且x2表示n；
[0372]
r4表示异丙基；
[0373]
r3表示-c
1-6
烷基-nr
8ar8b
、-c
1-6
烷基-c(＝o)-nr
9ar9b
、或-c
1-6
烷基-oh；
[0374]r8a
和r
8b
各自独立地选自下组，该组由以下组成：氢；c
1-6
烷基；-c(＝o)-c
1-4
烷基；-c(＝o)-o-c
1-4
烷基；-c(＝o)-nr
12ar12b
；和被一个、两个、或三个取代基取代的c
1-6
烷基，这些取代基各自独立地选自下组，该组由以下组成：氰基、卤代、-s(＝o)
2-c
1-4
烷基、和-o-c
1-4
烷基；
[0375]r9a
、r
9b
、r
12a
、和r
12b
各自独立地选自下组，该组由以下组成：氢和c
1-6
烷基；
[0376]
及其药学上可接受的盐和溶剂化物。
[0377]
在一个实施例中，本发明涉及如其他实施例中任一项所提及的那些具有式(i)的化合物及其药学上可接受的盐和溶剂化物或其任何子组，其中
[0378]r1b
表示f。
[0379]
在一个实施例中，本发明涉及如其他实施例中任一项所提及的那些具有式(i)的化合物及其药学上可接受的盐和溶剂化物或其任何子组，其中
[0380]
r2表示氢。
[0381]
在一个实施例中，本发明涉及如在任何其他实施例中所提及的具有式(i)的那些化合物及其药学上可接受的盐和溶剂化物，或其任何子组，其中n1是1，n2是2，n3是1，并且n4是1。
[0382]
在一个实施例中，本发明涉及如其他实施例中任一项所提及的那些具有式(i)的化合物及其药学上可接受的盐和溶剂化物或其任何子组，其中
[0383]
y1表示-o-。
[0384]
在一个实施例中，本发明涉及如其他实施例中任一项所提及的那些具有式(i)的化合物及其药学上可接受的盐和溶剂化物或其任何子组，其中
[0385]
y1表示-o-；并且
[0386]
u表示n。
[0387]
在一个实施例中，本发明涉及如其他实施例中任一项所提及的那些具有式(i)的化合物及其药学上可接受的盐和溶剂化物或其任何子组，其中
[0388]
y1表示-o-；
[0389]
u表示n；
[0390]r1b
表示f；并且
[0391]
r2表示氢。
[0392]
在一个实施例中，本发明涉及如在任何其他实施例中所提及的具有式(i)的那些化合物及其药学上可接受的盐和溶剂化物，或其任何子组，其中het表示
[0393][0394]
在一个实施例中，本发明涉及如在任何其他实施例中所提及的具有式(i)的那些化合物及其药学上可接受的盐和溶剂化物，或其任何子组，其中het表示含有一个或两个氮原子的单环5元或6元芳香族环；其中所述单环5元或6元芳香族环被一个c
3-6
环烷基取代。
[0395]
在一个实施例中，本发明涉及如在任何其他实施例中所提及的具有式(i)的那些化合物及其药学上可接受的盐和溶剂化物，或其任何子组，其中het表示含有一个或两个氮原子的单环5元或6元芳香族环；其中所述单环5元或6元芳香族环被一个c
3-6
环烷基取代；并且
[0396]r1b
表示f。
[0397]
在一个实施例中，本发明涉及如在任何其他实施例中所提及的具有式(i)的那些化合物及其药学上可接受的盐和溶剂化物，或其任何子组，其中het表示含有一个或两个氮原子的单环6元芳香族环；其中所述单环6元芳香族环被一个c
3-6
环烷基取代。
[0398]
在一个实施例中，本发明涉及如在任何其他实施例中所提及的具有式(i)的那些
化合物及其药学上可接受的盐和溶剂化物，或其任何子组，其中het表示含有一个或两个氮原子的单环6元芳香族环；其中所述单环6元芳香族环被一个c
3-6
环烷基取代；并且
[0399]r1b
表示f。
[0400]
在一个实施例中，本发明涉及如其他实施例中任一项所提及的那些具有式(i)的化合物及其药学上可接受的盐和溶剂化物或其任何子组，其中
[0401]
r3表示-c
1-6
烷基-nr
8ar8b
；
[0402]
其中r3定义中的c
1-6
烷基部分可被一个、两个、或三个取代基取代，这些取代基各自独立地选自下组，该组由以下组成：氰基、卤代和-o-c
1-4
烷基。
[0403]
在一个实施例中，本发明涉及如其他实施例中任一项所提及的那些具有式(i)的化合物及其药学上可接受的盐和溶剂化物或其任何子组，其中
[0404]
r3表示-c
1-6
烷基-nr
8ar8b
；
[0405]
其中r3定义中的c
1-6
烷基部分可被一个、两个、或三个取代基取代，这些取代基各自独立地选自下组，该组由以下组成：氰基、卤代、-oh、和-o-c
1-4
烷基。
[0406]
在一个实施例中，本发明涉及如其他实施例中任一项所提及的那些具有式(i)的化合物及其药学上可接受的盐和溶剂化物或其任何子组，其中
[0407]
r3表示-c
1-6
烷基-nr
8ar8b
。
[0408]
在一个实施例中，本发明涉及如其他实施例中任一项所提及的那些具有式(i)的化合物及其药学上可接受的盐和溶剂化物或其任何子组，其中
[0409]
r3表示-c
1-6
烷基-nr
8ar8b
；
[0410]
其中r3定义中的c
1-6
烷基部分可被一个、两个、或三个取代基取代，这些取代基各自独立地选自下组，该组由以下组成：氰基、卤代和-o-c
1-4
烷基；
[0411]r8a
和r
8b
各自独立地选自下组，该组由以下组成：氢；c
1-6
烷基；和被一个、两个、或三个取代基取代的c
1-6
烷基，这些取代基各自独立地选自下组，该组由以下组成：-oh、氰基、卤代、-s(＝o)
2-c
1-4
烷基、-o-c
1-4
烷基、-c(＝o)-nr
10ar10b
、和-nr
10c-c(＝o)-c
1-4
烷基。
[0412]
在一个实施例中，本发明涉及如其他实施例中任一项所提及的那些具有式(i)的化合物及其药学上可接受的盐和溶剂化物或其任何子组，其中
[0413]
r3表示-c
1-6
烷基-nr
8ar8b
；
[0414]
其中r3定义中的c
1-6
烷基部分可被一个、两个、或三个取代基取代，这些取代基各自独立地选自下组，该组由以下组成：氰基、卤代、-oh、和-o-c
1-4
烷基；
[0415]r8a
和r
8b
各自独立地选自下组，该组由以下组成：氢；c
1-6
烷基；和被一个、两个、或三个取代基取代的c
1-6
烷基，这些取代基各自独立地选自下组，该组由以下组成：-oh、氰基、卤代、-s(＝o)
2-c
1-4
烷基、-o-c
1-4
烷基、-c(＝o)-nr
10ar10b
、和-nr
10c-c(＝o)-c
1-4
烷基。
[0416]
在一个实施例中，本发明涉及如其他实施例中任一项所提及的那些具有式(i)的化合物及其药学上可接受的盐和溶剂化物或其任何子组，其中
[0417]
r3表示-c
1-6
烷基-nr
8ar8b
；
[0418]
其中r3定义中的c
1-6
烷基部分可被一个、两个、或三个取代基取代，这些取代基各自独立地选自下组，该组由以下组成：氰基、卤代和-o-c
1-4
烷基；
[0419]r8a
和r
8b
各自独立地选自下组，该组由以下组成：氢；c
1-6
烷基；和被一个、两个、或三个取代基取代的c
1-6
烷基，这些取代基各自独立地选自下组，该组由以下组成：氰基、卤
代、-s(＝o)
2-c
1-4
烷基、-o-c
1-4
烷基、和-c(＝o)-nr
10ar10b
。
[0420]
在一个实施例中，本发明涉及如其他实施例中任一项所提及的那些具有式(i)的化合物及其药学上可接受的盐和溶剂化物或其任何子组，其中
[0421]
r3表示-c
1-6
烷基-nr
8ar8b
；
[0422]
其中r3定义中的c
1-6
烷基部分可被一个、两个、或三个取代基取代，这些取代基各自独立地选自下组，该组由以下组成：氰基、卤代和-o-c
1-4
烷基；
[0423]r8a
和r
8b
各自独立地选自下组，该组由以下组成：氢；c
1-6
烷基；和被一个、两个、或三个取代基取代的c
1-6
烷基，这些取代基各自独立地选自下组，该组由以下组成：氰基、卤代、-s(＝o)
2-c
1-4
烷基、-o-c
1-4
烷基、-c(＝o)-nr
10ar10b
、和-nr
10c-c(＝o)-c
1-4
烷基。
[0424]
在一个实施例中，本发明涉及如其他实施例中任一项所提及的那些具有式(i)的化合物及其药学上可接受的盐和溶剂化物或其任何子组，其中
[0425]
r3表示-c
1-6
烷基-nr
8ar8b
；
[0426]
其中r3定义中的c
1-6
烷基部分可被一个、两个、或三个取代基取代，这些取代基各自独立地选自下组，该组由以下组成：氰基、卤代、-oh、和-o-c
1-4
烷基；
[0427]r8a
和r
8b
各自独立地选自下组，该组由以下组成：氢；c
1-6
烷基；和被一个、两个、或三个取代基取代的c
1-6
烷基，这些取代基各自独立地选自下组，该组由以下组成：氰基、卤代、-s(＝o)
2-c
1-4
烷基、-o-c
1-4
烷基、和-c(＝o)-nr
10ar10b
。
[0428]
在一个实施例中，本发明涉及如其他实施例中任一项所提及的那些具有式(i)的化合物及其药学上可接受的盐和溶剂化物或其任何子组，其中
[0429]
r3表示-c
1-6
烷基-nr
8ar8b
；
[0430]
其中r3定义中的c
1-6
烷基部分可被一个、两个、或三个取代基取代，这些取代基各自独立地选自下组，该组由以下组成：氰基、卤代、-oh、和-o-c
1-4
烷基；
[0431]r8a
和r
8b
各自独立地选自下组，该组由以下组成：氢；c
1-6
烷基；和被一个、两个、或三个取代基取代的c
1-6
烷基，这些取代基各自独立地选自下组，该组由以下组成：氰基、卤代、-s(＝o)
2-c
1-4
烷基、-o-c
1-4
烷基、-c(＝o)-nr
10ar10b
、和-nr
10c-c(＝o)-c
1-4
烷基。
[0432]
在一个实施例中，本发明涉及如其他实施例中任一项所提及的那些具有式(i)的化合物及其药学上可接受的盐和溶剂化物或其任何子组，其中
[0433]
r3表示-c
2-6
烷基-nr
8ar8b
；
[0434]
其中r3定义中的c
2-6
烷基部分可被一个、两个、或三个取代基取代，这些取代基各自独立地选自下组，该组由以下组成：氰基、卤代和-o-c
1-4
烷基。
[0435]
在一个实施例中，本发明涉及如其他实施例中任一项所提及的那些具有式(i)的化合物及其药学上可接受的盐和溶剂化物或其任何子组，其中
[0436]
r3表示-c
2-6
烷基-nr
8ar8b
；
[0437]
其中r3定义中的c
2-6
烷基部分可被一个、两个、或三个取代基取代，这些取代基各自独立地选自下组，该组由以下组成：氰基、卤代、-oh、和-o-c
1-4
烷基。
[0438]
在一个实施例中，本发明涉及如其他实施例中任一项所提及的那些具有式(i)的化合物及其药学上可接受的盐和溶剂化物或其任何子组，其中
[0439]
r3表示-c
2-6
烷基-nr
8ar8b
；
[0440]
其中r3定义中的c
2-6
烷基部分可被一个、两个、或三个取代基取代，这些取代基各
自独立地选自下组，该组由以下组成：氰基、卤代、和-o-c
1-4
烷基；
[0441]r8a
和r
8b
各自独立地选自下组，该组由以下组成：氢；c
1-6
烷基；和被一个、两个、或三个取代基取代的c
1-6
烷基，这些取代基各自独立地选自下组，该组由以下组成：-oh、氰基、卤代、-s(＝o)
2-c
1-4
烷基、-o-c
1-4
烷基、-c(＝o)-nr
10ar10b
、和-nr
10c-c(＝o)-c
1-4
烷基。
[0442]
在一个实施例中，本发明涉及如其他实施例中任一项所提及的那些具有式(i)的化合物及其药学上可接受的盐和溶剂化物或其任何子组，其中
[0443]
r3表示-c
2-6
烷基-nr
8ar8b
；
[0444]
其中r3定义中的c
2-6
烷基部分可被一个、两个、或三个取代基取代，这些取代基各自独立地选自下组，该组由以下组成：氰基、卤代、-oh、和-o-c
1-4
烷基；
[0445]r8a
和r
8b
各自独立地选自下组，该组由以下组成：氢；c
1-6
烷基；和被一个、两个、或三个取代基取代的c
1-6
烷基，这些取代基各自独立地选自下组，该组由以下组成：-oh、氰基、卤代、-s(＝o)
2-c
1-4
烷基、-o-c
1-4
烷基、-c(＝o)-nr
10ar10b
、和-nr
10c-c(＝o)-c
1-4
烷基。
[0446]
在一个实施例中，本发明涉及如其他实施例中任一项所提及的那些具有式(i)的化合物及其药学上可接受的盐和溶剂化物或其任何子组，其中
[0447]
r3表示-c
2-6
烷基-nr
8ar8b
；
[0448]
其中r3定义中的c
2-6
烷基部分可被一个、两个、或三个取代基取代，这些取代基各自独立地选自下组，该组由以下组成：氰基、卤代、-oh、和-o-c
1-4
烷基；
[0449]r8a
和r
8b
各自独立地选自下组，该组由以下组成：氢；c
1-6
烷基；和被一个、两个、或三个取代基取代的c
1-6
烷基，这些取代基各自独立地选自下组，该组由以下组成：氰基、卤代、-s(＝o)
2-c
1-4
烷基、-o-c
1-4
烷基、和-c(＝o)-nr
10ar10b
。
[0450]
在一个实施例中，本发明涉及如其他实施例中任一项所提及的那些具有式(i)的化合物及其药学上可接受的盐和溶剂化物或其任何子组，其中
[0451]
r3表示-c
2-6
烷基-nr
8ar8b
；
[0452]
其中r3定义中的c
2-6
烷基部分可被一个、两个、或三个取代基取代，这些取代基各自独立地选自下组，该组由以下组成：氰基、卤代、和-o-c
1-4
烷基；
[0453]r8a
和r
8b
各自独立地选自下组，该组由以下组成：氢；c
1-6
烷基；和被一个、两个、或三个取代基取代的c
1-6
烷基，这些取代基各自独立地选自下组，该组由以下组成：氰基、卤代、-s(＝o)
2-c
1-4
烷基、-o-c
1-4
烷基、和-c(＝o)-nr
10ar10b
。
[0454]
在一个实施例中，本发明涉及如其他实施例中任一项所提及的那些具有式(i)的化合物及其药学上可接受的盐和溶剂化物或其任何子组，其中
[0455]
r3表示-c
1-6
烷基-nr
8ar8b
；
[0456]r8a
和r
8b
各自独立地选自下组，该组由以下组成：c
1-6
烷基；和被一个、两个、或三个取代基取代的c
1-6
烷基，这些取代基各自独立地选自下组，该组由以下组成：-oh、氰基、卤代、-s(＝o)
2-c
1-4
烷基、-o-c
1-4
烷基、和-c(＝o)-nr
10ar10b
。
[0457]
在一个实施例中，本发明涉及如其他实施例中任一项所提及的那些具有式(i)的化合物及其药学上可接受的盐和溶剂化物或其任何子组，其中
[0458]
r3表示-c
2-6
烷基-nr
8ar8b
；
[0459]
其中r3定义中的c
2-6
烷基部分可被一个、两个、或三个取代基取代，这些取代基各自独立地选自下组，该组由以下组成：氰基、卤代、-oh、和-o-c
1-4
烷基；
[0460]r8a
和r
8b
各自独立地选自下组，该组由以下组成：氢；c
1-6
烷基；和被一个、两个、或三个取代基取代的c
1-6
烷基，这些取代基各自独立地选自下组，该组由以下组成：氰基、卤代、-s(＝o)
2-c
1-4
烷基、-o-c
1-4
烷基、-c(＝o)-nr
10ar10b
、和-nr
10c-c(＝o)-c
1-4
烷基。
[0461]
在一个实施例中，本发明涉及如其他实施例中任一项所提及的那些具有式(i)的化合物及其药学上可接受的盐和溶剂化物或其任何子组，其中
[0462]
r3表示-c
2-6
烷基-nr
8ar8b
；
[0463]
其中r3定义中的c
2-6
烷基部分可被一个、两个、或三个取代基取代，这些取代基各自独立地选自下组，该组由以下组成：氰基、卤代、和-o-c
1-4
烷基；
[0464]r8a
和r
8b
各自独立地选自下组，该组由以下组成：氢；c
1-6
烷基；和被一个、两个、或三个取代基取代的c
1-6
烷基，这些取代基各自独立地选自下组，该组由以下组成：氰基、卤代、-s(＝o)
2-c
1-4
烷基、-o-c
1-4
烷基、-c(＝o)-nr
10ar10b
、和-nr
10c-c(＝o)-c
1-4
烷基。
[0465]
在一个实施例中，本发明涉及如其他实施例中任一项所提及的那些具有式(i)的化合物及其药学上可接受的盐和溶剂化物或其任何子组，其中
[0466]
r3表示-c
1-6
烷基-nr
8ar8b
；
[0467]r8a
和r
8b
各自独立地选自下组，该组由以下组成：c
1-6
烷基；和被一个、两个、或三个取代基取代的c
1-6
烷基，这些取代基各自独立地选自下组，该组由以下组成：-oh、氰基、卤代、-s(＝o)
2-c
1-4
烷基、-o-c
1-4
烷基、-c(＝o)-nr
10ar10b
、和-nr
10c-c(＝o)-c
1-4
烷基。
[0468]
在一个实施例中，本发明涉及如其他实施例中任一项所提及的那些具有式(i)的化合物及其药学上可接受的盐和溶剂化物或其任何子组，其中
[0469]
r3表示-c
1-6
烷基-nr
8ar8b
；
[0470]r8a
表示c
1-6
烷基；并且
[0471]r8b
表示被一个-o-c
1-4
烷基取代的c
1-6
烷基。
[0472]
在一个实施例中，本发明涉及如其他实施例中任一项所提及的那些具有式(i)的化合物及其药学上可接受的盐和溶剂化物或其任何子组，其中
[0473]
r3表示-c
1-6
烷基-nr
8ar8b
、-c
1-6
烷基-c(＝o)-nr
9ar9b
、-c
1-6
烷基-oh、或-c
1-6
烷基-nr
11-c(＝o)-o-c
1-4
烷基-o-c(＝o)-c
1-4
烷基；
[0474]
其中r3定义中的c
1-4
烷基或c
1-6
烷基部分中的每一个各自独立地可被一个、两个、或三个取代基取代，这些取代基各自独立地选自下组，该组由以下组成：氰基、卤代或-o-c
1-4
烷基。
[0475]
在一个实施例中，本发明涉及如其他实施例中任一项所提及的那些具有式(i)的化合物及其药学上可接受的盐和溶剂化物或其任何子组，其中
[0476]
r3表示-c
1-6
烷基-nr
8ar8b
、-c
1-6
烷基-c(＝o)-nr
9ar9b
、或-c
1-6
烷基-nr
11-c(＝o)-o-c
1-4
烷基-o-c(＝o)-c
1-4
烷基；
[0477]
其中r3定义中的c
1-4
烷基或c
1-6
烷基部分中的每一个各自独立地可被一个、两个、或三个取代基取代，这些取代基各自独立地选自下组，该组由以下组成：氰基、卤代、-oh、和-o-c
1-4
烷基。
[0478]
在一个实施例中，本发明涉及如其他实施例中任一项所提及的那些具有式(i)的化合物及其药学上可接受的盐和溶剂化物或其任何子组，其中
[0479]
r3表示-ch
2-ch
2-ch
2-nr
8ar8b
。
[0480]
在一个实施例中，本发明涉及如其他实施例中任一项所提及的那些具有式(i)的化合物及其药学上可接受的盐和溶剂化物或其任何子组，其中
[0481]
r3表示-ch
2-ch
2-ch
2-nr
8ar8b
；
[0482]r8a
表示甲基；并且
[0483]r8b
表示-ch
2-ch
2-och3。
[0484]
在一个实施例中，本发明涉及如在任何其他实施例中所提及的具有式(i)的那些化合物及其药学上可接受的盐和溶剂化物，或其任何子组，其中r3定义中的c
1-6
烷基-c
1-6
烷基-nr
8ar8b
被限制为-ch
2-ch
2-ch
2-。
[0485]
在一个实施例中，本发明涉及如其他实施例中任一项所提及的那些具有式(i)的化合物及其药学上可接受的盐和溶剂化物或其任何子组，其中具有式(i)的化合物限于具有式(i-y)的化合物：
[0486][0487]
其中r3如针对如在任何其他实施例中所提及的具有式(i)的化合物或其任何子组进行定义。
[0488]
在式(i-y)中，n1是1，n2是2，n3是1，并且n4是1。
[0489]
在一个实施例中，具有式(i)的化合物是
[0490][0491]
及其药学上可接受的加成盐和溶剂化物。
[0492]
在一个实施例中，具有式(i)的化合物是
[0493][0494]
在一个实施例中，具有式(i)的化合物是
[0495][0496]
在一个实施例中，具有式(i)的化合物是
[0497][0498]
在一个实施例中，本发明涉及如在通用反应方案中所定义的具有式(i)的亚组。
[0499]
在一个实施例中，具有式(i)的化合物选自由以下组成的组：示例性化合物中的任一者，
[0500]
其互变异构体和立体异构形式，
[0501]
及其游离碱、任何药学上可接受的盐以及溶剂化物。
[0502]
以上表示的实施例的所有可能组合都视为包含在本发明的范围内。
[0503]
在另一个实施例中，本发明的涉及中间体
[0504][0505]
其互变异构体和立体异构形式，
[0506]
及其任何药学上可接受的盐和溶剂化物。
[0507]
在另一个实施例中，本发明涉及中间体的制备方法，该方法包括以下步骤：
[0508][0509]
其中pg是适合的保护基团，例如苄基；
[0510]
其中n1和n2是按针对式(i)所定义的；
[0511]
步骤23：在适合的温度下，如例如从-78℃至-25℃，在适合的碱存在下，如例如diea和n-buli，在适合的溶剂中，如例如thf；
[0512]
步骤24：在适合的温度下，如例如在-55℃与-65℃之间，在适合的还原剂存在下，如例如dibal-h，在适合的溶剂中，如例如甲苯，在适合的流动化学系统中进行。
[0513]
在另一个实施例中，本发明涉及中间体的制备方法，该方法包括以下步骤：
[0514][0515]
第一反应，在适合的温度(如例如从-78℃至-25℃)下，在适合的碱(如例如diea和n-buli)存在下，在适合的溶剂(如例如thf)中；
[0516]
然后，反应在适合的温度(如例如在-55℃与-65℃之间)下，在适合的还原剂(如例如dibal-h)存在下，在适合的溶剂(如例如甲苯)中，在适合的流动化学系统中进行。
[0517]
在另一个实施例中，本发明涉及中间体的制备方法，该方法包括以下步骤：
[0518][0519]
pg是适合的保护基团，例如苄基；
[0520]
其他变量是按针对式(i)所定义的。
[0521]
在另一个实施例中，本发明涉及中间体的制备方法，该方法包括以下步骤：
[0522][0523]
pg是适合的保护基团，例如苄基；
[0524]
其他变量是按针对式(i)所定义的；
[0525]
步骤30：在适合的温度(如例如从5℃至30℃)下，在适合的碱(如例如tea)存在下，在适合的还原剂(如例如nabh(oac)3)存在下，在适合的溶剂(如例如甲苯)中；
[0526]
步骤31：在适合的温度下，如例如从50℃至55℃，在适合的碱存在下，如例如k2hpo4，在适合的溶剂中，如例如h2o；
[0527]
步骤32：在适合的温度下，如例如从-5℃至45℃，在适合的压力范围内的氢气氛下，如例如从0.27mpa至0.40mpa，在氢氧化钯炭存在下，在msa存在下，在适合的溶剂中，如etoh；
[0528]
步骤33：在适合的温度下，如例如从-50℃至-40℃，在适合的碱存在下，如例如tea，在适合的溶剂中，如2-甲基四氢呋喃；
[0529]
步骤34：在适合的温度(如例如从20℃至30℃)下，在适合的碱(如例如tmg)存在下，在适合的溶剂(如2-甲基四氢呋喃)中；
[0530]
步骤35：在适合的温度(如例如从20℃至30℃)下，在适合的压力范围(如例如从0.20至0.30mpa)内的氢气氛下，在适合的催化剂(如例如钯炭)存在下，在适合的溶剂(如meoh)中。
[0531]
在另一个实施例中，本发明涉及化合物的制备方法，该方法包括以下步骤：
[0532][0533]
在另一个实施例中，本发明涉及化合物的制备方法，该方法包括以下步骤：
[0534][0535]
在另一个实施例中，本发明涉及化合物的制备方法，该方法包括以下步骤：
[0536][0537]
在另一个实施例中，本发明涉及化合物的制备方法，该方法包括以下步骤：
[0538][0539]
在另一个实施例中，本发明涉及化合物的制备方法，该方法包括以下步骤：
[0540][0541]
在第一步中，在适合的温度(如例如从-5℃至45℃)下，在适合的压力范围(如例如从0.27至0.40mpa)内的氢气氛下，在氢氧化钯炭存在下，在msa存在下，在适合的溶剂(如etoh)中；
[0542]
在下一步中，在适合的温度(如例如从-50℃至-40℃)下，在适合的碱(如例如tea)存在下，在适合的溶剂(如2-甲基四氢呋喃)中；
[0543]
在下一步中，在适合的温度(如例如从20℃至30℃)下，在适合的碱(如例如tmg)存在下，在适合的溶剂(如2-甲基四氢呋喃)中；
[0544]
在下一步中，在适合的温度(如例如从20℃至30℃)下，在适合的压力范围(如例如从0.20至0.30mpa)内的氢气氛下，在适合的催化剂(如例如钯炭)存在下，在适合的溶剂(如meoh)中。
[0545]
在另一个实施例中，本发明涉及化合物的制备方法，该方法包括以下步骤：
[0546][0547]
在第一步中，首先在适合的温度(如例如从5℃至30℃)下，在适合的碱(如例如tea)存在下，在适合的还原剂(如例如nabh(oac)3)存在下，在适合的溶剂(如例如甲苯)中；并且然后在适合的温度(如例如从50℃至55℃)下，在适合的碱(如例如k2hpo4)存在下，在适合的溶剂(如例如h2o)中；
[0548]
在下一步中，在适合的温度(如例如从-5℃至45℃)下，在适合的压力范围(如例如从0.27至0.40mpa)内的氢气氛下，在氢氧化钯炭存在下，在msa存在下，在适合的溶剂(如etoh)中；
[0549]
在下一步中，在适合的温度(如例如从-50℃至-40℃)下，在适合的碱(如例如tea)存在下，在适合的溶剂(如2-甲基四氢呋喃)中；
[0550]
在下一步中，在适合的温度(如例如从20℃至30℃)下，在适合的碱(如例如tmg)存在下，在适合的溶剂(如2-甲基四氢呋喃)中；
[0551]
在下一步中，在适合的温度(如例如从20℃至30℃)下，在适合的压力范围(如例如从0.20至0.30mpa)内的氢气氛下，在适合的催化剂(如例如钯炭)存在下，在适合的溶剂(如meoh)中。
[0552]
用于制备具有式(i)的化合物的方法
[0553]
在这一部分中，如在所有其他部分中，除非上下文另外指明，否则对式(i)的提及还包括如本文定义的所有其他的其子组和实例。
[0554]
具有式(i)的化合物的一些典型实例的一般制备在下文以及在特定实例中进行了描述，并且通常制备自可商购的或通过有机化学领域的技术人员常用的标准合成工艺制备
的起始材料。以下方案仅意在代表本发明的实例并且决不意在限制本发明。
[0555]
可替代地，还可以通过将如在下面的通用方案中所述的类似反应试验方案与本领域技术人员常用的标准合成工艺组合来制备本发明的化合物。
[0556]
技术人员将认识到，在方案中描述的反应中，尽管并不总是明确地显示，但是保护在终产物中所希望的反应性官能团(例如羟基、氨基、或羧基基团)可能是必要的，以避免它们参与所不希望的反应。通常，可根据标准实践使用常规保护基团(pg)。可使用本领域已知的方法在方便的后续阶段除去保护基团。
[0557]
技术人员将认识到，在方案里所描述的反应中，在惰性气氛(如例如在n2气氛)下进行反应或许是可取的或必要的。
[0558]
技术人员将清楚的是，在反应处理(指的是分离和纯化化学反应的一种或多种产物所必须的一系列操作，例如像淬灭、柱色谱法、萃取)前，冷却反应混合物可能是必要的。
[0559]
技术人员将认识到，在搅拌下加热所述反应混合物可增加反应产出。在一些反应中，可使用微波加热替换常规的加热以缩短整个反应时间。
[0560]
技术人员将认识到，在以下方案中示出的化学反应的另一种顺序也可以产生所希望的具有式(i)的化合物。
[0561]
技术人员将认识到，在以下方案中示出的中间体和最终化合物可以根据本领域的技术人员熟知的方法进一步功能化。本文所述的中间体和化合物可以按游离形式或以其盐或溶剂化物进行分离。本文所述的中间体和化合物可以合成为互变异构体和立体异构形式的混合物的形式，这些互变异构体和立体异构形式可以遵循本领域中已知的拆分程序相互分离。
[0562]
通用合成方案
[0563]
通用方案中使用的所有缩写词如实例部分中的表中定义。变量如范围内定义或如通用方案中特别定义。
[0564]
部分a)方案1a、1b、1c、2a、2b和3
[0565]
rn＝c
1-6
烷基-nr
8a
pg或c
1-6
烷基-opg或c
1-6
烷基-c(＝o)or
9a
，pg＝保护基团
[0566][0567]
在方案1a、1b和1c中，以下反应条件适用：
[0568]
步骤1：在适合的温度(如例如-70℃)下，在适合的碱(如例如tmeda)和适合的有机金属试剂(如例如异丙基溴化镁)存在下，在适合的溶剂(如例如thf)中；
[0569]
步骤2：在适合的温度(如例如从0℃至rt)下，在适合的氧化试剂(如例如dmp)存在下，在适合的溶剂(如例如dcm)中；
[0570]
步骤3：在适合的温度(如例如从-20℃至rt)下，在适合的有机金属试剂(如例如异丙基溴化镁)存在下，在适合的溶剂(如例如thf)中；
[0571]
步骤4：在适合的温度(如例如80℃)下，在适合的碱(如例如naoh)存在下，在适合的溶剂(如例如thf和h2o)中；
[0572]
步骤5：在适合的温度(如例如rt)下，在适合的酰胺缩合试剂(如例如edci和hobt)存在下，在适合的碱(如例如nmm)存在下，在适合的溶剂(如例如dcm)中；
[0573]
步骤6：在适合的温度(如例如-70℃)下，在适合的有机金属试剂(如例如异丙基锂)存在下，在适合的溶剂(如例如thf)中；
[0574]
步骤7：在适合的温度(如例如90℃)下，在适合的有机金属催化剂(如例如pd(dppf)cl2)存在下，在适合的碱(如例如na2co3)存在下，在适合的溶剂(如例如1,4-二噁烷和h2o)中；
[0575]
步骤8：在适合的温度(如例如从0℃至rt)下，在适合的路易斯酸(如例如bbr3)存在下，在适合的溶剂(如例如dcm)中；
[0576]
步骤9：在适合的温度(如例如从-78℃至40℃，特别是从0℃至rt)下，在适合的碱(如例如tea、dbu或k2co3)存在下，在适合的溶剂(如例如dcm、thf、或dmf)中；
[0577]
方案2a
[0578][0579]
方案2b
[0580][0581]
在方案2a和2b中，以下反应条件适用：
[0582]
步骤9：参见方案1中的步骤9；
[0583]
步骤10：在适合的温度(如例如rt)下，在适合的催化剂(如例如pd/c)存在下，在适合的还原剂(如例如h2)存在下，任选地在适合的碱(如例如tea)存在下，在适合的溶剂(如例如thf)中；
[0584]
可替代地，在适合的温度(如rt)下，在适合的催化剂(如例如pd(dppf)cl2·
dcm复
合物)，适合的还原剂(如nabh4)，适合的碱(如例如tmeda)存在下，在适合的溶剂(如例如thf)中。
[0585]
步骤11：对于n去保护，在适合的温度(如例如rt)下，在适合的酸(如例如tfa)存在下，在适合的溶剂(如例如dcm)中；对于o去保护，在适合的温度(如例如rt)下，在适合的酸(如例如4-甲基苯磺酸)存在下，在适合的溶剂(如例如meoh)中；
[0586]
步骤12：在适合的温度(如例如80℃)下，任选地在适合的路易斯酸(如例如zncl2)存在下，在适合的还原剂(如例如nabh3cn)存在下，在适合的溶剂(如例如meoh)中；
[0587]
步骤13：在适合的温度(如例如rt)下，在适合的有机金属催化剂(如例如ag(phen)2otf)存在下，在适合的溴化试剂(如例如1,3-二溴-1,3,5-三嗪烷-2,4,6-三酮)存在下，在适合的溶剂(如例如dce)中；
[0588]
步骤14：在适合的温度(如例如rt)下，在适合的氯化试剂(如例如草酰氯)存在下，在dmf存在下，在适合的溶剂(如例如dcm)中。
[0589]
方案3
[0590][0591]
在方案3中，以下反应条件适用：
[0592]
步骤11-12：参见方案2中的步骤11-12；
[0593]
步骤15：在适合的温度(如例如80℃)下，在适合的碱(如例如cs2co3)存在下，在适合的溶剂(如例如dmf)中；
[0594]
步骤16：在适合的温度(如例如40℃)下，在适合的碱(如例如氨)存在下，在适合的溶剂(如例如1,4-二噁烷)中。
[0595]
部分b)方案4、5、6、7、8、9、10、11和12
[0596][0597]
在方案4中，以下反应条件适用：
[0598]
步骤1：在适合的温度(如例如90℃)下，在适合的有机金属催化剂(如例如pd(dppf)cl2)存在下，在适合的碱(如例如na2co3)存在下，在适合的溶剂(如例如1,4-二噁烷和h2o)中；
[0599]
步骤2：在适合的温度(如例如rt)下，在适合的酰胺缩合试剂(如例如hatu)存在下，在适合的碱(如例如diea)存在下，在适合的溶剂(如例如dcm)中；
[0600]
步骤3：在适合的温度(如例如从-78℃至rt)下，在适合的路易斯酸(如例如bbr3)存在下，在适合的溶剂(如例如dcm)中；
[0601]
步骤4：在适合的温度(如例如从-78℃至40℃，特别是从0℃至rt)下，在适合的碱(如例如tea、dbu或k2co3)存在下，在适合的溶剂(如例如dcm、thf、或dmf)中；
[0602]
步骤5：在适合的温度(如例如rt)下，在适合的碱(如例如lioh
·
h2o)存在下，在适合的溶剂(如例如thf和h2o)中；
[0603]
步骤6：在适合的温度(如例如rt)下，在适合的有机金属催化剂(如例如ag(phen)2otf)存在下，在适合的溴化试剂(如例如1,3-二溴-1,3,5-三嗪烷-2,4,6-三酮)存在下，在适合的溶剂(如例如dce)中；
[0604]
步骤7：在适合的温度(如例如rt)下，在适合的溴化试剂(如1,3-二溴-1,3,5-三嗪烷-2,4,6-三酮)存在下，在作为溶剂的2,2,2-三氟乙烷-1-醇存在下。
[0605]
方案5
[0606][0607]
在方案5中，以下反应条件适用：
[0608]
步骤8：在适合的温度(如例如从-78℃至40℃，特别是从0℃至rt)下，在适合的碱(如例如tea、dbu或k2co3)存在下，在适合的溶剂(如例如dcm、thf、或dmf)中；
[0609]
步骤9：在适合的温度(如例如从-78℃至40℃，特别是从0℃至rt)下，在适合的碱(如例如tea、dbu或k2co3)存在下，在适合的溶剂(如例如dcm、thf、或dmf)中；
[0610]
步骤10：在适合的温度(如例如rt)下，在适合的有机金属催化剂(如例如pd/c)和适合的碱(如例如tea)存在下，在适合的溶剂如例如meoh中，在h2气氛下；
[0611]
步骤11：当pg是boc时，在适合的温度(如例如rt)下，在适合的酸(如例如tfa)存在下，在适合的溶剂(如例如dcm)中。
[0612]
方案6
[0613][0614]
在方案6中，以下反应条件适用：
[0615]
步骤12：还原氨化条件，在适合的温度(如例如从rt至80℃)下，在适合的路易斯酸(如例如zncl2)或酸(例如acoh)存在或不存在下，在适合的还原剂(如例如nabh3cn)存在下，在适合的溶剂(如例如meoh)中；
[0616]
步骤13：在适合的温度(如例如0℃)下，在适合的亲电子剂(如例如mscl)存在下，在适合的碱(如例如tea)存在下，在适合的溶剂(如例如dcm)中；
[0617]
步骤14：在适合的温度(如例如从0℃至rt)下，在适合的氧化剂(如例如dmp)存在下，在适合的溶剂(如例如dcm)中；
[0618]
步骤15：在适合的温度(如例如50℃)下，在适合的酸(如例如hcl)存在下，在适合的溶剂(如例如acn)中；
[0619]
步骤16：在适合的温度(如例如rt)下，在适合的碱(如例如tea)存在或不存在下，在适合的溶剂(如例如thf)中。
[0620]
方案7
[0621]
m＝1，2，3
[0622]
rw＝h，cn，卤代，oh，o-c
1-4
烷基
[0623][0624]
在方案7中，以下反应条件适用：
[0625]
步骤11：当pg是boc时，在适合的温度(如例如rt)下，在适合的酸(如例如tfa)存在下，在适合的溶剂(如例如dcm)中；
[0626]
步骤12：还原氨化条件，在适合的温度(如例如从rt至80℃)下，在适合的路易斯酸(如例如zncl2)或酸(例如acoh)存在或不存在下，在适合的还原剂(如例如nabh3cn)存在下，在适合的溶剂(如例如meoh)中；
[0627]
步骤17：在适合的温度(如例如从rt至80℃)下，在适合的碱(如例如diea或cs2co3)存在下，在适合的溶剂(如例如dcm或dmf)中；
[0628]
步骤18：在适合的温度(如例如40℃)下，在适合的碱(如例如氨)存在下，在适合的溶剂(如1，4-二噁烷)中。
[0629]
方案8
[0630][0631]
在方案8中，以下反应条件适用：
[0632]
步骤9：在适合的温度(如例如从-78℃至40℃，特别是从0℃至rt)下，在适合的碱(如例如tea、dbu或k2co3)存在下，在适合的溶剂(如例如dcm、thf、或dmf)中；
[0633]
步骤10：在适合的温度(如例如rt)下，在适合的有机金属催化剂(如例如pd/c)存在下，任选地在适合的碱(如例如tea)存在下，在适合的溶剂(如例如meoh)中，在h2气氛下；
[0634]
步骤19：在适合的温度(如例如rt)下，在适合的氯化试剂(如例如草酰氯)存在下，在dmf存在下，在适合的溶剂(如例如dcm)中；
[0635]
步骤20：在适合的温度(如例如90℃)下，在适合的亲核胺存在下，在适合的溶剂(如例如etoh)中；
[0636]
步骤21：在适合的温度(如例如rt)下，在适合的酸(如例如二噁烷中的hcl)存在下，在适合的溶剂(如例如meoh)中；
[0637]
步骤22：在适合的温度(如例如110℃)下，在适合的硼试剂(如例如三甲基硼氧六环)存在下，在适合的有机金属催化剂(如例如四(三苯基膦)钯(0))存在下，在适合的碱(如例如k2co3)存在下，在适合的溶剂(如例如1,4-二噁烷)中；
[0638]
方案9
[0639][0640]
在方案9中，以下反应条件适用：
[0641]
步骤23：在适合的温度下，如例如从-78℃至-25℃，在适合的碱存在下，如例如diea和n-buli，在适合的溶剂中，如例如thf；s
[0642]
步骤24：在适合的温度(如例如在-65℃和-55℃之间)下，在适合的还原剂(如例如dibal-h)存在下，在适合的溶剂(如例如甲苯)中，优选在适合的流动化学系统中进行；
[0643]
步骤25：首先在适合的温度(如例如从-10℃至10℃)下，在适合的碱(如例如dmap)存在下，在适合的缩合剂(如例如dcc)存在下，在适合的溶剂(如例如dcm)中；然后，在适合的温度(如例如从-10℃至0℃)下，在适合的酸(如例如acoh)存在下，在适合的还原剂(如例如nabh4)存在下，在适合的溶剂(如例如dcm)中；
[0644]
步骤26：在适合的溶剂(如例如甲苯)中并且加热至回流；
[0645]
步骤27：在适合的温度(如例如从-5℃至5℃)下，在适合的还原剂(如例如libh4)存在下，在适合的溶剂(如例如2-甲基四氢呋喃)中；
[0646]
步骤28：在适合的温度(如例如从15℃至25℃)下，在适合的还原剂(如例如nabh(oac)3)存在下，在适合的溶剂(如例如dcm)中；
[0647]
步骤29：在适合的温度(如例如从15℃至25℃)下，在适合的酸(如hcl)存在下，在适合的溶剂(如例如ipa)中；
[0648]
步骤30：在适合的温度(如例如从5℃至30℃)下，在适合的碱(如例如tea)存在下，
在适合的还原剂(如例如nabh(oac)3)存在下，在适合的溶剂(如例如甲苯)中；
[0649]
步骤31：在适合的温度下，如例如从50℃至55℃，在适合的碱存在下，如例如k2hpo4，在适合的溶剂中，如例如h2o；
[0650]
步骤32：当pg是bn时，在适合的温度(如例如从-5℃至45℃)下，在适合的压力范围(如例如从0.27至0.40mpa)内的氢气氛下，在适合的催化剂(如例如氢氧化钯炭)存在下，在适合的酸(如例如msa)存在下，在适合的溶剂(如etoh)中；
[0651]
步骤33：在适合的温度下，如例如从-50℃至-40℃，在适合的碱存在下，如例如tea，在适合的溶剂中，如2-甲基四氢呋喃；
[0652]
步骤34：在适合的温度(如例如从20℃至30℃)下，在适合的碱(如例如tmg)存在下，在适合的溶剂(如2-甲基四氢呋喃)中；
[0653]
步骤35：在适合的温度(如例如从20℃至30℃)下，在适合的压力范围(如例如从0.20至0.30mpa)内的氢气氛下，在适合的催化剂(如例如钯炭)存在下，在适合的溶剂(如meoh)中；
[0654]
可替代地，在适合的温度(如室温)下，在适合的催化剂(如例如1,1'-双(二苯基膦基)二茂铁-二氯钯(ii)二氯甲烷复合物)，适合的还原剂(如硼氢化钠)，适合的碱(如例如n,n,n',n'-四甲基乙二胺)存在下，在适合的溶剂(如例如四氢呋喃)中。
[0655]
方案10
[0656]
通常，具有式(i)的化合物(其中y1被限制为-ch
2-，且r2被限制为w1，在此命名为具有式(ia)的化合物)可以根据以下反应方案10来制备。在方案10中，w1表示氯、溴或碘；所有其他变量根据本发明的范围进行定义。
[0657]
方案10
[0658][0659]
在方案10中，以下反应条件适用：
[0660]
步骤36：在合适的温度范围(从60℃至100℃)下，在合适的催化剂(如乙酸钯(pd(oac)2)或三(二亚苄基丙酮)二钯(0)(pd2(dba)3)或四(三苯基膦)钯(0))的存在下，在合适的溶剂(如例如四氢呋喃或二噁烷)中。
[0661]
技术人员将认识到，可以起始于化合物(ia)进行如方案5中步骤10和方案8中步骤20、21和22中所报告的类似化学过程。
[0662]
方案11
[0663]
通常，具有式(i)的化合物(其中y1被限制为-cr
5ar5b-，且r2被限制为w1，在此命名为具有式(ib)的化合物)可以根据以下反应方案11来制备。在方案11中，r
5a
和r
5b
中的至少一个不是氢。所有其他变量根据本发明的范围进行定义。
[0664]
方案11
[0665][0666]
在方案11中，以下反应条件适用：
[0667]
步骤37：在合适的温度范围(从80℃至200℃)下，在合适的催化剂(如乙酸钯(pd(oac)2))的存在下，在合适的配体(如例如三苯基膦或三环己基膦)存在下，在合适的溶剂(例如像二噁烷)中，优选地在密封条件下，任选地在微波辐射下。
[0668]
技术人员将认识到，可以起始于化合物(ib)进行如方案5中步骤10和方案8中步骤20、21和22中所报告的类似化学过程。
[0669]
方案12
[0670]
方案12
[0671][0672]
在方案12中，以下反应条件适用：
[0673]
步骤38：在适合的温度(如例如从rt至80℃)下，在适合的碱(如例如diea、cs2co3、或dbu)存在下，在适合的溶剂(如例如dcm、thf或dmf)中；
[0674]
可替代地，在适合的温度(如例如rt至100℃)下，在适合的催化剂(如例如pd2dba3)存在下，在适合的配体(如例如xantphos)存在下，在适合的碱(如cs2co3或na2co3)存在下，在适合的溶剂(如二噁烷或二噁烷和水的混合物)中。
[0675]
技术人员将认识到，可以起始于中间体a进行如在y1表示o情况下所报告的类似化学过程。
[0676]
将理解的是，在存在适当官能团的情况下，具有不同式的化合物或用于其制备的任何中间体可以通过一种或多种标准合成方法采用缩合、取代、氧化、还原或裂解反应来进一步衍生。特定取代方法包括常规烷基化、芳基化、杂芳基化、酰化、磺酰化、卤化、硝化、甲酰化以及偶合程序。
[0677]
具有式(i)的化合物能以对映异构体的可以遵循领域已知的拆分程序与彼此分离
的外消旋混合物形式合成。具有式(i)的外消旋化合物(含有基础氮原子)可以通过与适合的手性酸反应而转化成相应的非对映异构盐形式。所述非对映盐形式随后例如通过选择性或分步结晶而分离，并且对映异构体通过碱由其释放。分离具有式(i)的化合物的对映异构形式的替代性方式涉及使用手性固定相的液相色谱法。所述纯立体化学异构形式还可以来源于适当起始材料的相应的纯立体化学异构形式，条件是反应立体定向地发生。
[0678]
在制备本发明化合物的过程中，对中间体的远端官能团(例如伯胺或仲胺)的保护可能是必要的。对这种保护的需要将取决于远端官能团的性质和制备方法的条件。适合的氨基保护基(nh-pg)包括乙酰基、三氟乙酰基、叔丁氧基羰基(boc)、苯甲氧基羰基(cbz)以及9-芴基亚甲基氧基羰基(fmoc)。对这种保护的需要易于由本领域的技术人员确定。关于保护基团及其用途的一般说明，参见t.w.greene和p.g.m.wuts,protective groups in organic synthesis[有机合成中的保护基团],第4版,威利出版社(wiley),新泽西州霍博肯(hoboken，new jersey),2007年。
[0679]
药理学
[0680]
已经发现，本发明的化合物本身阻断了menin与mll蛋白质和致癌mll融合蛋白的相互作用，或者可在体内代谢成(更)有活性的形式(前药)。因此，根据本发明的化合物和包含此类化合物的药物组合物可用于治疗或预防(特别是治疗)疾病如癌症，包括但不限于白血病、骨髓增生异常综合征(mds)、和骨髓增生性肿瘤(mpn)；和糖尿病。
[0681]
特别地，根据本发明的化合物及其药物组合物可用于治疗或预防癌症。根据一个实施例，可以受益于用本发明的menin/mll抑制剂治疗的癌症包含白血病、淋巴瘤、骨髓瘤或实体瘤癌症(例如，前列腺癌、肺癌、乳腺癌、胰腺癌、结肠癌、肝癌、黑色素瘤和胶质母细胞瘤等)。在一些实施例中，白血病包括急性白血病、慢性白血病、骨髓白血病、髓性白血病、成淋巴细胞白血病、淋巴细胞白血病、急性髓性白血病(aml)、慢性髓性白血病(cml)、急性成淋巴细胞白血病(all)、慢性淋巴细胞白血病(cll)、t细胞前淋巴细胞白血病(t-pll)、大颗粒淋巴细胞白血病、毛细胞白血病(hcl)、mll-重排白血病、mll-ptd白血病、mll扩增的白血病、mll-阳性白血病，展示hox/meis1基因表达标记等的白血病。
[0682]
特别地，根据本发明的化合物及其药物组合物可用于治疗或预防骨髓增生异常综合征(mds)或骨髓增生性肿瘤(mpn)。
[0683]
特别地，根据本发明的化合物和其药物组合物可用于治疗或预防白血病，特别地核磷蛋白(npm1)-突变白血病，例如npm1c。
[0684]
特别地，根据本发明的化合物和其药物组合物可用于治疗或预防aml，特别地核磷蛋白(npm1)-突变aml(即，npm1
mut
aml)，更特别地理论的npm1-突变aml。
[0685]
特别地，根据本发明的化合物和其药物组合物可用于治疗或预防mll-重排白血病，特别地mll-重排aml或all。
[0686]
特别地，根据本发明的化合物和其药物组合物可用于治疗或预防具有mll基因改变的白血病，特别地具有mll基因改变aml或all。
[0687]
特别地，根据本发明的化合物及其药物组合物可适于q.d.给药(每日一次)。
[0688]
特别地，根据本发明的化合物及其药物组合物可用于治疗或预防受试者中的血液癌症，该受试者展示npm1基因突变和/或混合谱系白血病基因(mll；mll1；kmt2a)改变，混合谱系白血病(mll)，mll-相关的白血病，mll-关联的白血病，mll-阳性白血病，mll-诱导的白
血病，重排混合谱系白血病，与mll、重排/改变、或mll基因的重排/改变关联的白血病，急性白血病，慢性白血病，骨髓增生异常综合征(mds)，骨髓增生性肿瘤(mpn)，胰岛素抗性，前驱糖尿病，糖尿病，或糖尿病的风险，高血糖症，染色体11q23上的染色体重排，1型糖尿病，2型糖尿病；用于促进胰腺细胞的增殖，其中胰腺细胞是胰岛细胞、β细胞，该β细胞增殖是通过β细胞产生或胰岛素产生增加证实的；以及用于抑制menin-mll相互作用，其中该mll融合蛋白靶基因是人中的hox或meis1。
[0689]
因此，本发明涉及具有化学式(i)的化合物、其互变异构体和立体异构形式以及其药学上可接受的盐和溶剂化物，用作药剂。
[0690]
本发明还涉及具有式(i)的化合物、其互变异构体或立体异构形式或其药学上可接受的盐或溶剂化物或根据本发明的药物组合物的用途，用于制造药物。
[0691]
本发明还涉及根据本发明的具有式(i)的化合物、其互变异构体或立体异构形式，或其药学上可接受的盐或溶剂化物，或药物组合物，用于在治疗、预防、改善、控制或降低哺乳动物(包括人)的与menin和mll蛋白质以及致癌mll融合蛋白的相互作用相关的障碍的风险中使用，这些障碍的治疗或预防通过阻断menin和mll蛋白质以及致癌mll融合蛋白的相互作用来影响或促进。
[0692]
同样，本发明涉及根据本发明的具有式(i)的化合物、其互变异构体或立体异构形式、或其药学上可接受的盐或溶剂化物，或药物组合物，用于生产用于治疗、预防、改善、控制或降低哺乳动物(包括人)的与menin和mll蛋白质以及致癌mll融合蛋白的相互作用相关的障碍的风险的药物的用途，这些障碍的治疗或预防通过阻断menin和mll蛋白质以及致癌mll融合蛋白的相互作用来影响或促进。
[0693]
本发明还涉及具有式(i)的化合物、其互变异构体或立体异构形式或其药学上可接受的盐或溶剂化物，用于在治疗或预防上文中提及的疾病中任一者中使用。
[0694]
本发明还涉及具有式(i)的化合物、其互变异构体或立体异构形式或其药学上可接受的盐或溶剂化物，用于在治疗或预防上文中提及的疾病中任一者中使用。
[0695]
本发明还涉及具有式(i)的化合物、其互变异构体或立体异构形式或其药学上可接受的盐或溶剂化物的用途，用于制造用于治疗或预防上文中提及的疾病病症中任一者的药物。
[0696]
可以将本发明的化合物施用至哺乳动物(优选地人)以便治疗或预防上文中提及的疾病中任一者。
[0697]
鉴于具有式(i)的化合物、其互变异构体或立体异构形式，和其药学上可接受的盐和溶剂化物的效用，提供了治疗罹患上文中提及的疾病中任一者的温血动物(包括人)的方法。
[0698]
所述方法包括向温血动物(包括人)施用(即全身性或局部施用)治疗有效量的具有式(i)的化合物、其互变异构体或立体异构形式、或其药学上可接受的盐或溶剂化物。
[0699]
因此，本发明还涉及用于治疗或预防上文中提及的疾病中任一者的方法，所述方法包括向有需要的患者施用治疗有效量的根据本发明的化合物。
[0700]
本领域的技术人员将认识到，本发明的化合物的治疗有效量是足以具有治疗活性的量，并且这个量取决于疾病类型、治疗性配制品中化合物的浓度以及患者的病症而特别不同。有效治疗日用量是从约0.005mg/kg至100mg/kg。根据本发明的化合物(本文也称为活
性成分)的达到治疗作用所需的量可以根据情况随例如特定化合物、施用途径、接受者的年龄和病症以及所治疗的特定障碍或疾病而不同。治疗方法还可包括以每天一到四次摄入之间的方案施用活性成分。在这些治疗方法中，根据本发明的化合物优选地在施用之前进行配制。
[0701]
本发明还提供了用于预防或治疗本文提及的障碍的组合物。所述组合物包含治疗有效量的具有式(i)的化合物、其互变异构体或立体异构形式、或其药学上可接受的盐或溶剂化物，以及药学上可接受的载体或稀释剂。
[0702]
虽然活性成分可以单独施用，但优选地其作为药物组合物呈现。因此，本发明进一步提供了药物组合物，该药物组合物包含根据本发明的化合物以及药学上可接受的载体或稀释剂。载体或稀释剂必须在与组合物的其他成分相容的意义上是“可接受的”并且对其接受者是无害的。
[0703]
这些药物组合物可以通过药学领域中熟知的任何方法来制备，例如使用如gennaro等人remington's pharmaceutical sciences[雷明顿药物科学](第18版,mack publishing company[马克出版公司],1990，尤其参见part 8:pharmaceutical preparations and their manufacture[部分8：药物制剂及其制造])中所描述的那些方法。
[0704]
本发明的化合物可以单独或与一种或多种另外的治疗剂组合施用。组合疗法包括施用含有根据本发明的化合物和一种或多种另外的治疗剂的单一药物剂量配制品，以及施用根据本发明的化合物和每种另外的治疗剂(呈其自身单独药物剂量配制品形式)。
[0705]
因此，本发明的实施例涉及产品，所述产品含有根据本发明的化合物作为第一活性成分和一种或多种抗癌剂作为另一种活性成分，以组合制剂用于同时、单独或连续用于治疗罹患癌症的患者。
[0706]
一种或多种其他医药剂与根据本发明的化合物可以同时施用(例如以单独组合物或整体组合物的形式)或以任一顺序相继施用。在后一种情况下，两种或更多种化合物将在一个时间段内并且以足以确保实现有利或协同作用的量和方式施用。将理解的是，组合的每种组分的优选施用方法和顺序以及对应的剂量和方案将取决于所施用的特定其他医药剂和本发明的化合物、其施用途径、所治疗的具体病症(特别是肿瘤)、以及所治疗的具体宿主。
[0707]
以下实例进一步说明了本发明。
[0708]
实例
[0709]
在以下实例中说明了几种用于制备本发明的化合物的方法。除非另外指明，否则所有起始材料都从商业供应商获得并且不经进一步纯化而使用，或可替代地可由技术人员通过使用熟知的方法合成。
[0710]
[0711]
[0712]
[0713]
[0714][0715]
如本领域技术人员所理解的，使用所示方案合成的化合物可以作为溶剂化物(例如水合物)存在和/或含有残留溶剂或微量杂质。以盐形式分离的化合物或中间体可以是整数化学计量的，即单盐或二盐，或以中间化学计量。当在以下实验部分中的中间体或化合物被表示为
‘
hcl盐’，没有表示hcl的当量数时，这意指没有确定hcl的当量数。同样的规则适用于实验部分提及的所有其他盐形式，如例如
‘
草酸盐’，
‘
甲酸盐’或
[0716]
当一种或多种混合物被分离并且绝对立体化学是已知的时，或当仅获得一个对映异构体并且绝对立体化学是已知的时，将一些化合物中的中心立体化学构型指定为“r”或“s”；对于一些化合物，当绝对立体化学是未确定的(即使这些键被立体定向地绘制出)，尽管化合物本身已被分离为单一的立体异构体并且是对映异构体纯的，将在指定中心处的立体化学构型指定为“*r”(首先在合成方案描述的分离的柱条件的情况下并且当仅存在或指定一种立体中心时从柱中洗脱出来)或“*s”(第二次在合成方案描述的分离的柱条件的情况下并且当仅存在或指定一种立体中心时从柱中洗脱出来)。在指定为“*r”的化合物转换为另一种化合物的情况下，所得化合物的“*r”指示是源自其起始材料。
[0717]
例如，将清楚的是，化合物25
[0718]
是
[0719][0720]
当“*r”或“*s”与相同分子中的第二立体中心(表示为“r”或“s”(已知的第二立体中心的绝对立体化学))一起发生时，尽管化合物本身已被分离为单一的立体异构体并且是对映异构体纯的，但表示为“*r”或“*s”的立体中心的绝对立体化学是未确定的(即使这些键被立体定向地绘制出)。对于此类分子，“*r”或“*s”是随机分配的。例如，将清楚的是，化合物340
[0721]
是
[0722][0723]
对于其中两个立体中心的立体化学构型由*(例如，*r或*s)表示的化合物，尽管化合物本身已被分离为单一的立体异构体并且是对映异构体纯的，但这些立体中心的绝对立体化学是未确定的(即使键被立体定向性地绘制出)。在这种情况下，在相同的化合物中，第一个立体中心的构型独立于第二个立体中心的构型。对于此类分子，“*r”或“*s”是随机分
配的。
[0724]
例如，对于化合物306
[0725][0726]
这意指所述化合物是
[0727][0728]
技术人员将意识到，以上关于立体化学构型的段落还适用于中间体。
[0729]
技术人员将意识到，即使在下面的实验方案中没有明确提及的情况下，典型地在柱色谱法纯化之后，收集所希望的级分并蒸发溶剂。
[0730]
在没有指示立体化学的情况下，这意指它是立体异构体的混合物，除非另外指明或从上下文是清楚的。
[0731]
当用
‘
rs’表示立体中心时，这意指在指定中心获得了外消旋混合物，除非另外指明。
[0732]
中间体的制备
[0733]
对于在下一反应步骤中用作粗品或用作部分纯化中间体的中间体，在一些情况下，在下一反应步骤中未提及此类中间体的摩尔量，或者在以下描述的反应方案中指示在下一反应步骤中的此中间体的可替代估计摩尔量或理论摩尔量。
[0734]
中间体27的制备
[0735]
n-乙基-5-氟-n-异丙基-2-甲氧基苯甲酰胺
[0736][0737]
向在0℃下冷却的5-氟-2-甲氧基苯甲酸(8.00g，47.0mmol)和n-乙基丙-2-胺(8.19g，94.0mmol)在干dcm(150ml)中的混合物中分批缓慢添加hatu(21.5g，56.5mmol)和diea(9.10g，70.4mmol)。将所得混合物缓慢温热至rt并搅拌8h。将有机层用水(20ml x 3)洗涤，并且经无水na2so4干燥。过滤后，将溶剂在减压下去除并且将粗产物通过fcc(etoac/pe＝0％至20％)纯化，以得到呈白色固体的标题中间体(12.0g，96％产率)。
[0738]
中间体67、235、246的制备
[0739]
5-氟-n,n-二异丙基-2-甲氧基苯甲酰胺
[0740]
5-氟-2-甲氧基-n-(丙-2-基-13
c3)苯甲酰胺
[0741]
5-氟-n-异丙基-2-甲氧基-n-甲基苯甲酰胺
[0742]
通过针对中间体27的如上所述的类似方法合成以下中间体
[0743][0744]
中间体28的制备
[0745]
n-乙基-5-氟-2-羟基-n-异丙基苯甲酰胺
[0746][0747]
向在-78℃下冷却的n-乙基-5-氟-n-异丙基-2-甲氧基苯甲酰胺(中间体27)
(12.0g，50.1mmol)在干dcm(100ml)中的溶液中缓慢添加bbr3(14.4ml，152mmol)，将所得混合物缓慢温热至rt并搅拌8h。将混合物再次冷却至-78℃并且滴加meoh(5ml)以淬灭反应。将所得混合物缓慢温热至rt并且通过添加饱和水性nahco3溶液将ph值调节至约8。将水层通过dcm(50ml x 3)萃取并且将合并的有机层经无水na2so4干燥，过滤并且在减压下浓缩以给出粗产物，将该粗产物通过fcc(etoac/pe＝0％至20％)纯化，以得到呈白色固体的标题中间体(9.0g，78％产率)。
[0748]
中间体68、237、247的制备
[0749]
5-氟-2-羟基-n,n-二异丙基苯甲酰胺
[0750]
n-(乙基-13
c2)-5-氟-2-羟基-n-(丙-2-基-13
c3)苯甲酰胺
[0751]
5-氟-2-羟基-n-异丙基-n-甲基苯甲酰胺
[0752]
通过针对中间体28的如上所述的类似方法合成以下中间体
[0753][0754][0755]
中间体60的制备
[0756]
5-溴-4-环丙基嘧啶
[0757][0758]
在0℃下在n2气氛下，向5-溴嘧啶(30g，189mmol)在thf(1000ml)中的溶液中添加环丙基溴化镁(396ml，198mmol，thf中的0.5m)。添加后，将反应混合物在rt下搅拌4h，然后在0℃下将ddq在thf(500ml)中的溶液(42.8g，189mmol)滴加至反应混合物中。添加后，将反
应混合物在rt下搅拌16h。将反应混合物在真空中浓缩并且将残余物在etoac(200ml)和水(200ml)之间分配，并将水层通过etoac(200ml x 3)萃取。将合并的有机层用1n naoh(200ml x 2)，盐水(200ml)洗涤，经na2so4干燥，过滤。将滤液在真空中浓缩并且将残余物通过fcc(etoac/pe＝0％至15％)纯化，以得到呈白色固体的标题中间体(21.4g，55％产率)。
[0759]
中间体61的制备
[0760]
2-(4-环丙基嘧啶-5-基)-4-氟苯酚
[0761][0762]
在n2气氛下，将5-溴-4-环丙基嘧啶(中间体60)(20.0g，100mmol)、(5-氟-2-羟基苯基)硼酸(18.7g，120mmol)、pd(dppf)cl2(3.68g，5.03mmol)、和na2co3(2m在h2o中，101ml，202mmol)在1,4-二噁烷(350ml)中的混合物在90℃下加热12h。在冷却至rt后，将反应混合物通过硅藻土垫过滤，将滤液悬浮于水(400ml)中并且用etoac(200ml x 3)萃取。将合并的有机层经无水na2so4干燥，过滤并在减压下浓缩，以给出粗产物，将该粗产物通过硅胶上的fcc(pe/etoac＝1:0至3:1)纯化，以得到呈棕色固体的标题中间体(24.0g，95％纯度，98.6％产率)。
[0763]
中间体13的制备
[0764]
叔丁基6-(3,6-二氯-1,2,4-三嗪-5-基)-2,6-二氮杂螺[3.4]辛烷-2-甲酸酯
[0765][0766]
向在0℃下冷却的3,5,6-三氯-1,2,4-三嗪(10.0g，54.2mmol)和tea(15.2ml，109mmol)在dcm(100ml)中的溶液中添加叔丁基2,6-二氮杂螺[3.4]辛烷-2-甲酸酯(9.21g，43.4mmol)，将该混合物温热至rt并搅拌1h。将混合物用水(20ml)稀释并用dcm(30ml x 3)萃取。将合并的有机层用盐水洗涤，经na2so4干燥，过滤并在减压下浓缩，以给出粗产物，将该粗产物通过硅胶上的fcc(pe/etoac＝1:0至3:1)纯化，以得到呈黄色固体的标题中间体(12.0g，58％产率)。
[0767]
中间体69的制备
[0768]
叔丁基6-(3-氯哒嗪-4-基)-2,6-二氮杂螺[3.4]辛烷-2-甲酸酯
[0769]
通过针对中间体13的如上所述的类似方法合成以下中间体
[0770][0771]
中间体14的制备
[0772]
叔丁基6-(3-氯-6-(2-(乙基(异丙基)氨基甲酰基)-4-氟苯氧基)-1,2,4-三嗪-5-基)-2,6-二氮杂螺[3.4]辛烷-2-甲酸酯
[0773][0774]
将叔丁基6-(3,6-二氯-1,2,4-三嗪-5-基)-2,6-二氮杂螺[3.4]辛烷-2-甲酸酯(中间体13)(12.0g，33.3mmol)、n-乙基-5-氟-2-羟基-n-异丙基苯甲酰胺(中间体28)(7.5g，33.3mmol)和dbu(6.1g，40.1mmol)在thf(120ml)中的混合物在25℃下搅拌8h。将混合物用水(30ml)稀释并用dcm(30ml x 3)萃取。将合并的有机层用盐水洗涤，经na2so4干燥，过滤并在减压下浓缩，以给出粗产物，将该粗产物通过fcc纯化(pe/etoac＝1:0至3:1)以得到呈绿色固体的标题中间体(14.0g，73％产率)。
[0775]
中间体57、74、70和83的制备
[0776]
叔丁基6-(3-氯-6-(2-(4-环丙基嘧啶-5-基)-4-氟苯氧基)-1,2,4-三嗪-5-基)-2,6-二氮杂螺[3.4]辛烷-2-甲酸酯
[0777]
叔丁基6-(3-(2-(乙基(异丙基)氨基甲酰基)-4-氟苯氧基)哒嗪-4-基)-2,6-二氮杂螺[3.4]辛烷-2-甲酸酯
[0778]
叔丁基6-(3-(2-(二异丙基氨基甲酰基)-4-氟苯氧基)哒嗪-4-基)-2,6-二氮杂螺[3.4]辛烷-2-甲酸酯
[0779]
叔丁基6-(3-氯-6-(2-(二异丙基氨基甲酰基)-4-氟苯氧基)-1,2,4-三嗪-5-基)-2,6-二氮杂螺[3.4]辛烷-2-甲酸酯
[0780]
通过针对中间体14的如上所述的类似方法合成以下中间体
异丙基苯甲酰胺
[0797][0798]
向叔丁基6-(6-(2-(乙基(异丙基)氨基甲酰基)-4-氟苯氧基)-1,2,4-三嗪-5-基)-2,6-二氮杂螺[3.4]辛烷-2-甲酸酯(中间体2)(300mg，0.583mmol)在dcm(5ml)中的溶液中添加tfa(0.5ml，6.4mmol)，将所得混合物在rt下搅拌3h。然后将10％naoh(5ml)溶液缓慢添加进混合物中以调节ph值至约12，将所得混合物用dcm(10ml x 3)萃取。将合并的有机层经无水na2so4干燥，过滤并在真空中浓缩，以得到呈白色固体的标题中间体(220mg，90％产率)。
[0799]
中间体59、75、85的制备
[0800]
6-(6-(2-(4-环丙基嘧啶-5-基)-4-氟苯氧基)-1,2,4-三嗪-5-基)-2,6-二氮杂螺[3.4]辛烷
[0801]
2-((4-(2,6-二氮杂螺[3.4]辛-6-基)哒嗪-3-基)氧基)-n-乙基-5-氟-n-异丙基苯甲酰胺
[0802]
2-((5-(2,6-二氮杂螺[3.4]辛-6-基)-1,2,4-三嗪-6-基)氧基)-5-氟-n,n-二异丙基苯甲酰胺
[0803]
通过针对中间体3的以上所述的类似方法合成以下中间体
[0804][0805]
中间体160的制备
[0806]
n-甲氧基-n-甲基-4-(甲基氨基)丁酰胺盐酸盐
[0807][0808]
在0℃下，向叔丁基(4-(甲氧基(甲基)氨基)-4-氧代丁基)(甲基)氨基甲酸酯(中间体8)(220g，粗品)在dcm(200ml)中的溶液中缓慢添加hcl/1,4-二噁烷(750ml，3mol)。将所得混合物缓慢温热至rt并且在此温度下搅拌2h。将混合物在真空中浓缩以得到标题中间体(197g，粗品)，将其不经进一步纯化而直接用于下一步骤。
[0809]
中间体164、238、243、244
[0810]
n-(2-甲氧基乙基)-n,5-二甲基-4-(2,6-二氮杂螺[3.4]辛-6-基)己-1-胺盐酸盐
[0811]
2-((3-氯-5-(2,6-二氮杂螺[3.4]辛-6-基)-1,2,4-三嗪-6-基)氧基)-n-乙基-5-氟-n-异丙基苯甲酰胺盐酸盐
[0812]
2-((5-(2,6-二氮杂螺[3.4]辛-6-基)-1,2,4-三嗪-6-基)氧基)-5-氟-n,n-二异丙基苯甲酰胺盐酸盐
[0813]
2-((5-(2,6-二氮杂螺[3.4]辛-6-基)-1,2,4-三嗪-6-基)氧基)-n-乙基-5-氟-n-异丙基苯甲酰胺盐酸盐
[0814]
通过针对中间体160的以上所述的类似方法合成以下中间体
[0815][0816][0817]
中间体71的制备
[0818]
2-((4-(2,6-二氮杂螺[3.4]辛-6-基)哒嗪-3-基)氧基)-5-氟-n,n-二异丙基苯甲酰胺
[0819]
[0820]
向在0℃下冷却的叔丁基6-(3-(2-(二异丙基氨基甲酰基)-4-氟苯氧基)哒嗪-4-基)-2,6-二氮杂螺[3.4]辛烷-2-甲酸酯(中间体70)(5.0g，9.4mmol)在1,4-二噁烷(30ml)中的溶液中缓慢添加1.4-二噁烷中的hcl(20ml，4m，80mmol)，将所得混合物在rt下搅拌2h。然后，浓缩混合物并且将残余物重新溶解在dcm(50ml)中，向其中缓慢添加1m naoh(20ml)并且将ph值调节至12，将所得混合物通过dcm(30ml x 3)萃取。将合并的有机层经无水na2so4干燥，过滤，并且在真空中浓缩以得到呈黄色固体的标题中间体(4g，粗品)，将其不经进一步纯化而用于下一步。
[0821]
中间体29的制备
[0822]
叔丁基2,2-二甲基-5-氧代吡咯烷-1-甲酸酯
[0823][0824]
向5,5-二甲基吡咯烷-2-酮(3.00g，26.5mmol)在dcm(30ml)中的溶液中添加tea(8.10g，80.0mmol)和dmap(325mg，2.66mmol)，并且随后添加二碳酸二叔丁酯(8.70g，39.8mmol)。将反应在40℃下搅拌过夜。在冷却至rt后，将反应混合物用盐水(30ml x 2)洗涤，经na2so4干燥，过滤并在减压下浓缩以给出粗产物。将粗产物通过硅胶上的fcc(pe/etoac＝100:0至3:1)进一步纯化，以得到呈黄色粉末的标题中间体(2.8g，50％产率)。
[0825]
中间体1的制备
[0826]
叔丁基(5-甲基-4-氧代己基)氨基甲酸酯
[0827][0828]
向在-70℃下冷却的叔丁基2-氧代吡咯烷-1-甲酸酯(5.0g，27mmol)和tmeda(5.0ml，33mmol)在thf(60ml)中的溶液中缓慢添加异丙基溴化镁溶液(19ml，55mmol，2-甲基四氢呋喃中的2.9m)，将所得混合物缓慢温热至rt并搅拌12h。将混合物倒入饱和水性nh4cl(50ml)溶液中并且用etoac(50ml x 3)萃取。将合并的有机层经无水na2so4干燥，过滤并在减压下浓缩，以给出粗产物，将该粗产物通过fcc(pe/etoac＝1:0至100:1)进一步纯化，以得到呈黄色油状物的标题中间体(3.7g，60％产率)。
[0829]
中间体30、110、141的制备
[0830]
叔丁基(2,6-二甲基-5-氧代庚-2-基)氨基甲酸酯
[0831]
叔丁基(6-甲基-5-氧代庚基)氨基甲酸酯
[0832]
6-羟基-2,4-二甲基己-3-酮
[0833]
通过针对中间体1的以上所述的类似方法合成以下中间体
[0834][0835]
中间体34的制备
[0836]
苄基2,2-二甲基-5-氧代吡咯烷-1-甲酸酯
[0837][0838]
向在0℃下冷却的5,5-二甲基吡咯烷-2-酮(5.00g，44.2mmol)在thf(150ml)中的溶液中添加nah(1.94g，48.5mmol，60％)，将所得混合物在此温度下搅拌30min。随后，添加n-(苄基氧基羰基氧基)琥珀酰亚胺(12.1g，48.6mmol)并且将反应混合物缓慢温热至rt并再搅拌16h。将溶剂在减压下蒸发，添加饱和水性nh4cl溶液(30ml)并且用etoac(2x30ml)萃取。将合并的有机层用盐水(40ml)洗涤，经na2so4干燥，过滤并在减压下浓缩，以得到粗产物，将该粗产物通过fcc(pe/etoac＝1:0至3:1)进一步纯化，以得到呈无色油状物的标题中间体(5.16g，39％产率)。
[0839]
中间体35的制备
[0840]
4-(((苄基氧基)羰基)氨基)-4-甲基戊酸
[0841][0842]
将naoh(4.18g，16.9mmol)添加至苄基2,2-二甲基-5-氧代吡咯烷-1-甲酸酯(中间体34)(5.16g，20.9mmol)在thf(60ml)和h2o(15ml)中的溶液中。将该混合物在80℃下搅拌16h。将反应混合物冷却至25℃并且通过1m hcl酸化以调节ph值至约3，然后将混合物通过etoac(20x2ml)萃取。将合并的有机层用盐水(20ml)洗涤，经na2so4干燥，过滤并在真空中浓缩，以得到呈无色油状物的标题中间体(4.48g，粗品)，将其不经进一步纯化而直接用于下一步骤。
[0843]
中间体7的制备
[0844]
4-((叔丁氧基羰基)(甲基)氨基)丁酸
[0845]
[0846]
向4-(甲基氨基)丁酸盐酸盐(3.0g，19.5mmol)和tea(7.78ml，58.6mmol)在meoh(30ml)中的溶液中滴加boc2o(4.69g，21.5mmol)。将混合物在rt下搅拌2h。将混合物在减压下浓缩并且将残余物用etoac(100ml)稀释，用冷却的0.1n hcl(70ml x 2)，h2o(50ml x 2)和盐水(50ml)洗涤，经na2so4干燥，过滤并浓缩以得到呈无色油状物的标题中间体(1.80g，粗品)。
[0847]
中间体8的制备
[0848]
叔丁基(4-(甲氧基(甲基)氨基)-4-氧代丁基)(甲基)氨基甲酸酯
[0849][0850]
向4-((叔丁氧基羰基)(甲基)氨基)丁酸(中间体7)(1.80g，粗品)在chcl3(30ml)中的溶液中添加n,o-二甲基羟基胺盐酸盐(960mg，9.84mmol)，hobt(1.24g，9.18mmol)和nmm(2.80ml，25.1mmol)。并且，然后添加edci(2.23g，11.6mmol)以及将该反应混合物在rt下搅拌4h。将反应混合物用dcm(100ml)稀释，用1n hcl(30ml x 3)，饱和水性nahco3(30ml x 3)和盐水(30ml)洗涤，经na2so4干燥，过滤并在真空中浓缩以得到呈无色油状物的标题中间体(1.70g，粗品)。
[0851]
中间体19、36、189、190、203、204的制备
[0852]
叔丁基(3-(甲氧基(甲基)氨基)-3-氧代丙基)氨基甲酸酯
[0853]
苄基(5-(甲氧基(甲基)氨基)-2-甲基-5-氧代戊-2-基)氨基甲酸酯
[0854]
(s)-3-((叔丁基二苯基甲硅烷基)氧基)-4-(乙基(甲基)氨基)-n-甲氧基-n-甲基丁酰胺
[0855]
(r)-3-((叔丁基二苯基甲硅烷基)氧基)-4-(乙基(甲基)氨基)-n-甲氧基-n-甲基丁酰胺
[0856]
(s)-3-((叔丁基二苯基甲硅烷基)氧基)-n-甲氧基-4-((2-甲氧基乙基)(甲基)氨基)-n-甲基丁酰胺
[0857]
(r)-3-((叔丁基二苯基甲硅烷基)氧基)-n-甲氧基-4-((2-甲氧基乙基)(甲基)氨基)-n-甲基丁酰胺
[0858]
通过针对中间体8的以上所述的类似方法合成以下中间体
[0859][0860][0861]
中间体37的制备
[0862]
苄基(5-(甲氧基(甲基)氨基)-2-甲基-5-氧代戊-2-基)(甲基)氨基甲酸酯
[0863][0864]
在n2气氛下，向在0℃下冷却的苄基(5-(甲氧基(甲基)氨基)-2-甲基-5-氧代戊-2-基)氨基甲酸酯(中间体36)(2.30g，7.46mmol)在dmf(30ml)中的溶液中添加nah(358mg，8.95mmol，60％)。然后，添加mei(8.87g，62.5mmol)并且将混合物在25℃下搅拌12h。将混合物用饱和水性nh4cl(30ml)淬灭并且用etoac(30ml x 2)萃取。将合并的有机层用盐水(40ml)洗涤，经na2so4干燥，过滤并在真空中浓缩，以给出粗产物，将该粗产物通过硅胶上的fcc(pe/etoac＝1:0至3:1)进一步纯化，以得到呈黄色油状物的标题中间体(2.15g，76％产率)。
[0865]
中间体236的制备
[0866]
n-(乙基-13
c2)-5-氟-2-甲氧基-n-(丙-2-基-13
c3)苯甲酰胺
[0867]
通过针对中间体37的如上所述的类似方法合成以下中间体
[0868][0869]
中间体9的制备
[0870]
叔丁基甲基(5-甲基-4-氧代己基)氨基甲酸酯
[0871][0872]
在n2气氛下，向在-70℃下冷却的叔丁基(4-(甲氧基(甲基)氨基)-4-氧代丁基)(甲基)氨基甲酸酯(中间体8)(200mg，粗品)在thf(5ml)中的溶液中滴加异丙基锂(3.2ml，2.24mmol，戊烷中的0.7m)。将所得混合物在-70℃下搅拌2h。将混合物用饱和水性nh4cl(15ml)淬灭，用etoac(30ml x 2)萃取。将合并的有机层用盐水(30ml)洗涤，经na2so4干燥，过滤并在减压下浓缩以给出粗产物。将粗产物通过fcc(pe/etoac＝10:1)进一步纯化，以得到呈无色油状物的标题中间体(60mg)。
[0873]
中间体20、38、162、191、192、205、206的制备
[0874]
叔丁基(4-甲基-3-氧代戊基)氨基甲酸酯
[0875]
苄基(2,6-二甲基-5-氧代庚-2-基)(甲基)氨基甲酸酯
[0876]
6-((2-甲氧基乙基)(甲基)氨基)-2-甲基己-3-酮
[0877]
(s)-5-((叔丁基二苯基甲硅烷基)氧基)-6-(乙基(甲基)氨基)-2-甲基己-1-烯-3-酮
[0878]
(r)-5-((叔丁基二苯基甲硅烷基)氧基)-6-(乙基(甲基)氨基)-2-甲基己-1-烯-3-酮
[0879]
(s)-5-((叔丁基二苯基甲硅烷基)氧基)-6-((2-甲氧基乙基)(甲基)氨基)-2-甲基己-1-烯-3-酮
[0880]
(r)-5-((叔丁基二苯基甲硅烷基)氧基)-6-((2-甲氧基乙基)(甲基)氨基)-2-甲基己-1-烯-3-酮
[0881]
通过针对中间体9的以上所述的类似方法合成以下中间体
[0882][0883]
中间体15的制备
[0884]
2-(3-甲基-2-氧代丁基)异吲哚啉-1,3-二酮
[0885][0886]
向1-溴-3-甲基丁-2-酮(200mg，1.21mmol)在dmf(4ml)中的溶液中添加邻苯二甲酰亚胺钾(1.12g，6.05mmol)，并且将混合物在80℃下搅拌12小时。冷却至rt后，添加水(15ml)，并且用etoac(40ml x 3)萃取混合物。将合并的有机层经无水na2so4干燥，过滤并在减压下浓缩，以得到粗产物，将该粗产物通过制备型tlc(pe/etoac＝3:1)进一步纯化，以得到呈白色固体的标题中间体(200mg，69％产率)。
[0887]
中间体46的制备
[0888]
甲基5-甲基-4-氧代己酸酯
[0889][0890]
在0℃下在n2下，向znet2(104ml，104mmol)在dcm(150ml)中的溶液中经注射器滴加tfa(11.9g，104mmol)，并且将混合物在0℃搅拌30min。然后，在搅拌下滴加二碘甲烷(27.9g，104mmol)，并且将悬浮液再搅拌30min。并且，然后通过注射器快速添加甲基4-甲基-3-氧代戊酸酯(5.00g，34.7mmol)，并且将所得混合物在rt下搅拌16h，以及在50℃下回流20h。在冷却至rt后，将反应混合物用饱和水性nh4cl(50ml)淬灭并且用etoac(30ml x 3)萃取。将合并的有机层用盐水洗涤，经mgso4干燥，并在减压下浓缩至油状残余物，将该油状残余物通过fcc(pe/etoac＝1:0至20:1)纯化，以得到呈黄色油状物的标题中间体(300mg，5％产率)。
[0891]
中间体22的制备
[0892]
叔丁基(4-甲基-3-(2,6-二氮杂螺[3.4]辛-2-基)戊基)氨基甲酸酯盐酸盐
[0893][0894]
在ar下，向苄基2-(1-((叔丁氧基羰基)氨基)-4-甲基戊-3-基)-2,6-二氮杂螺[3.4]辛烷-6-甲酸酯(中间体21)(0.580g，1.30mmol)在meoh(50ml)中的溶液中添加1,1,2-三氯乙烷(0.260g，1.95mmol)和pd/c(0.05g，10％)，并且在h2(15psi)气氛下将反应在35℃下搅拌8h。将反应混合物过滤。将滤液在真空中浓缩以得到呈无色油状物标题中间体(280mg，粗品)。
[0895]
中间体23的制备
[0896]
乙基6-(2-(乙基(异丙基)氨基甲酰基)-4-氟苯氧基)-1,2,4-三嗪-5-甲酸酯
[0897][0898]
向乙基6-氯-1,2,4-三嗪-5-甲酸酯(13g，69mmol)和n-乙基-5-氟-2-羟基-n-异丙基苯甲酰胺(中间体28)(15.6g，69.3mmol)在dmf(150ml)中的混合物中添加k2co3(28.6g，204mmol)。将所得混合物在rt下搅拌2h。将反应混合物过滤并且将滤液在减压下浓缩以给出粗残余物，将该粗残余物用水(100ml)稀释并且用etoac(100ml x 2)萃取。将合并的有机层经无水na2so4干燥，过滤并在减压下浓缩，以给出粗产物，将该粗产物通过fcc(pe/etoac＝1:0至1:1)进一步纯化，以得到呈黄色固体的标题中间体(30g，81％纯度，92％产率)。
[0899]
中间体24的制备
[0900]
6-(2-(乙基(异丙基)氨基甲酰基)-4-氟苯氧基)-1,2,4-三嗪-5-甲酸
[0901][0902]
向乙基6-(2-(乙基(异丙基)氨基甲酰基)-4-氟苯氧基)-1,2,4-三嗪-5-甲酸酯(中间体23)(8.6g，23mmol)在thf(100ml)和h2o(25ml)中的混合物中添加lioh
·
h2o(2.0g，48mmol)，并且将该反应混合物在rt下搅拌1h。将混合物用0.5m hcl酸化至调节ph值至5至6，并且用etoac(150ml)进一步萃取。将水相通过制备型hplc经boston prime(柱：c18 150x30mm 5um；洗脱液：acn/h2o(0.225％fa)从19％至49％，v/v)纯化，以得到标题中间体(5.0g，62％产率)。
[0903]
中间体187、188、201、202的制备
[0904]
(s)-3-((叔丁基二苯基甲硅烷基)氧基)-4-(乙基(甲基)氨基)丁酸
[0905]
(r)-3-((叔丁基二苯基甲硅烷基)氧基)-4-(乙基(甲基)氨基)丁酸
[0906]
(s)-3-((叔丁基二苯基甲硅烷基)氧基)-4-((2-甲氧基乙基)(甲基)氨基)丁酸
[0907]
(r)-3-((叔丁基二苯基甲硅烷基)氧基)-4-((2-甲氧基乙基)(甲基)氨基)丁酸
[0908]
通过针对中间体24的如上所述的类似方法合成以下中间体
[0909][0910]
中间体25的制备
[0911]
n-乙基-5-氟-2-((5-羟基-1,2,4-三嗪-6-基)氧基)-n-异丙基苯甲酰胺
[0912]
[0913]
向6-(2-(乙基(异丙基)氨基甲酰基)-4-氟苯氧基)-1,2,4-三嗪-5-甲酸(中间体24)(50mg，0.14mmol)和1,3-二溴-1,3,5-三嗪烷-2,4,6-三酮(50mg，0.17mmol)在dce(1ml)中的溶液中添加ag(phen)2otf(30mg，0.049mmol)，并且将所得混合物在rt下搅拌2h。将反应混合物通过硅藻土垫过滤，并且用acn(10ml)洗涤。将滤液在减压下浓缩以得到粗产物，将该粗产物通过制备型hplc使用xtimate(柱：c18 150x40mm 10μm；洗脱液：acn/h2o(0.2％fa)从20％至50％v/v)进一步纯化，以得到呈白色固体的标题中间体(20mg，41％)。
[0914]
中间体159的制备
[0915]
n-乙基-5-氟-n-异丙基-2-((5-(2,2,2-三氟乙氧基)-1,2,4-三嗪-6-基)氧基)苯甲酰胺
[0916][0917]
将分子筛(8g)添加至6-(2-(乙基(异丙基)氨基甲酰基)-4-氟苯氧基)-1,2,4-三嗪-5-甲酸(中间体24)(8.0g，23.0mmol)在2,2,2-三氟乙-1-醇(100ml)中的混合物中。在n2气氛下，将所得混合物在70℃下搅拌1h。然后冷却至rt并且将1,3-二溴-1,3,5-三嗪烷-2,4,6-三酮(13.1g，45.7mmol)添加至以上混合物。将所得混合物在n2气氛下在rt下再搅拌过夜。将反应混合物经硅藻土垫过滤。将滤液在减压下浓缩并且将粗残余物通过fcc(pe:etoac从1:0至2:1)纯化，以得到呈黄色固体的标题中间体(3.1g，84％纯度，28％产率)。
[0918]
中间体51的制备
[0919]
4-((叔丁基二甲基甲硅烷基)氧基)丁-1-醇
[0920][0921]
向在0℃下冷却的丁-1,4-二醇(5.00g，55.5mmol)在thf(100ml)中的溶液中添加nah(1.55g，38.8mmol，60％)，将所得混合物在0℃下搅拌20min。然后将tbdmscl(5.85g，38.8mmol)添加至反应混合物，并且将该反应在0℃下进一步再搅拌1h。将混合物用水(80ml)淬灭，并用etoac(80ml x 3)萃取。将合并的有机层经无水na2so4干燥，过滤并在减压下浓缩，以得到粗产物，将该粗产物通过fcc(pe/etoac＝1:0至10:1)进一步纯化，以得到呈无色液体的标题中间体(7.2g，63％)。
[0922]
中间体183、184的制备
[0923]
乙基(s)-3-((叔丁基二苯基甲硅烷基)氧基)-4-碘丁酸酯
[0924]
乙基(r)-3-((叔丁基二苯基甲硅烷基)氧基)-4-碘丁酸酯
[0925]
通过针对中间体51的如上所述的类似方法合成以下中间体
[0926][0927]
中间体52的制备
[0928]
4-((叔丁基二甲基甲硅烷基)氧基)丁醛
[0929][0930]
向在0℃下冷却的4-((叔丁基二甲基甲硅烷基)氧基)丁-1-醇(中间体51)(7.20g，35.2mmol)在dcm(200ml)中的溶液中添加dmp(22.4g，52.8mmol)，并且将反应混合物缓慢温热至rt并搅拌2h。将反应混合物用dcm(100ml)稀释并且与饱和水性(nahco3/na2so3＝1/1,100ml)一起搅拌2min，将分离的有机层用盐水(100ml x 3)洗涤，经无水na2so4干燥，过滤，并在减压下浓缩以给出粗产物，将该粗产物通过fcc(pe/etoac＝1:0至12:1)进一步纯化，以得到呈无色液体的标题中间体(2.95g，41％)。
[0931]
中间体54、145、146、158的制备
[0932]
6-((叔丁基二甲基甲硅烷基)氧基)-2-甲基己-3-酮
[0933]
2-((5-(2-(2,4-二甲基-6-氧代己-3-基)-2,6-二氮杂螺[3.4]辛-6-基)-1,2,4-三嗪-6-基)氧基)-n-乙基-5-氟-n-异丙基苯甲酰胺(r,s和s,r的混合物；或r,r和s,s的混合物)
[0934]
2-((5-(2-(2,4-二甲基-6-氧代己-3-基)-2,6-二氮杂螺[3.4]辛-6-基)-1,2,4-三嗪-6-基)氧基)-n-乙基-5-氟-n-异丙基苯甲酰胺(r,r和s,s的混合物；或r,s和s,r的混合物)
[0935]
(r)-n-乙基-5-氟-n-异丙基-2-((5-(2-(2-甲基-6-氧代庚-3-基)-2,6-二氮杂螺[3.4]辛-6-基)-1,2,4-三嗪-6-基)氧基)苯甲酰胺
[0936]
通过针对中间体52的以上所述的类似方法合成以下中间体
[0937][0938][0939]
中间体53的制备
[0940]
6-((叔丁基二甲基甲硅烷基)氧基)-2-甲基己-3-醇
[0941][0942]
在n2气氛下，向在-20℃下冷却的4-((叔丁基二甲基甲硅烷基)氧基)丁醛(中间体
52)(1.00g，4.94mmol)在thf(4.9ml)中的溶液中滴加异丙基溴化镁(4.94ml，14.8mmol，在thf中的3m)，并且将反应混合物缓慢温热至rt并搅拌2h。将混合物用饱和水性nh4cl(20ml)淬灭，并且用etoac(50ml x 3)萃取。将合并的有机层经无水na2so4干燥，过滤并在真空中浓缩，以给出粗产物，将该粗产物通过fcc(pe/etoac＝1:0至20:1)进一步纯化，以得到呈白色油状物的标题中间体(580mg，48％)。
[0943]
中间体16、21、39、47、55、94、98、161、163的制备
[0944]
2-((5-(2-(1-(1,3-二氧代异吲哚啉-2-基)-3-甲基丁-2-基)-2,6-二氮杂螺[3.4]辛-6-基)-1,2,4-三嗪-6-基)氧基)-n-乙基-5-氟-n-异丙基苯甲酰胺
[0945]
苄基2-(1-((叔丁氧基羰基)氨基)-4-甲基戊-3-基)-2,6-二氮杂螺[3.4]辛烷-6-甲酸酯
[0946]
苄基(5-(6-(6-(2-(乙基(异丙基)氨基甲酰基)-4-氟苯氧基)-1,2,4-三嗪-5-基)-2,6-二氮杂螺[3.4]辛-2-基)-2,6-二甲基庚-2-基)(甲基)氨基甲酸酯
[0947]
甲基4-(6-(6-(2-(4-环丙基嘧啶-5-基)-4-氟苯氧基)-1,2,4-三嗪-5-基)-2,6-二氮杂螺[3.4]辛-2-基)-5-甲基己酸酯
[0948]
2-((5-(2-(6-((叔丁基二甲基甲硅烷基)氧基)-2-甲基己-3-基)-2,6-二氮杂螺[3.4]辛-6-基)-1,2,4-三嗪-6-基)氧基)-n-乙基-5-氟-n-异丙基苯甲酰胺
[0949]
2-((5-(2-(1-(1,3-二氧戊环-2-基)-4-甲基戊-3-基)-2,6-二氮杂螺[3.4]辛-6-基)-1,2,4-三嗪-6-基)氧基)-n-乙基-5-氟-n-异丙基苯甲酰胺
[0950]
2-((5-(2-(1-(1,3-二氧戊环-2-基)-4-甲基戊-3-基)-2,6-二氮杂螺[3.4]辛-6-基)-1,2,4-三嗪-6-基)氧基)-5-氟-n,n-二异丙基苯甲酰胺
[0951]
n-甲氧基-4-((2-甲氧基乙基)(甲基)氨基)-n-甲基丁酰胺
[0952]
叔丁基6-(6-((2-甲氧基乙基)(甲基)氨基)-2-甲基己-3-基)-2,6-二氮杂螺[3.4]辛烷-2-甲酸酯
[0953]
通过针对化合物60和化合物61的如上所述的类似方法合成以下中间体
[0954]
[0955]
[0956][0957]
中间体17和18的制备
[0958]
(*r)-2-((5-(2-(1-(1,3-二氧代异吲哚啉-2-基)-3-甲基丁-2-基)-2,6-二氮杂螺[3.4]辛-6-基)-1,2,4-三嗪-6-基)氧基)-n-乙基-5-氟-n-异丙基苯甲酰胺
[0959]
(*s)-2-((5-(2-(1-(1,3-二氧代异吲哚啉-2-基)-3-甲基丁-2-基)-2,6-二氮杂螺[3.4]辛-6-基)-1,2,4-三嗪-6-基)氧基)-n-乙基-5-氟-n-异丙基苯甲酰胺
[0960][0961]
将2-((5-(2-(1-(1,3-二氧代异吲哚啉-2-基)-3-甲基丁-2-基)-2,6-二氮杂螺[3.4]辛-6-基)-1,2,4-三嗪-6-基)氧基)-n-乙基-5-氟-n-异丙基苯甲酰胺(中间体16)(200mg，0.254mmol)通过sfc经大赛璐(daicel)chiralcel od(柱：250x50mm 10μm；流动相：
a：超临界co2，b：ipa(0.1％氨)，a:b＝65:35，70ml/min；柱温：38℃；喷嘴压力：100巴；喷嘴温度：60℃；蒸发器温度：20℃；微调器温度：25℃；波长：220nm)纯化，以得到均呈无色油状物的标题中间体中间体17(100mg，95％纯度，42％产率)和中间体18(100mg，99％纯度，44％产率)。
[0962]
中间体40和41的制备
[0963]
苄基(*r)-(5-(6-(6-(2-(乙基(异丙基)氨基甲酰基)-4-氟苯氧基)-1,2,4-三嗪-5-基)-2,6-二氮杂螺[3.4]辛-2-基)-2,6-二甲基庚-2-基)(甲基)氨基甲酸酯
[0964]
苄基(*s)-(5-(6-(6-(2-(乙基(异丙基)氨基甲酰基)-4-氟苯氧基)-1,2,4-三嗪-5-基)-2,6-二氮杂螺[3.4]辛-2-基)-2,6-二甲基庚-2-基)(甲基)氨基甲酸酯
[0965][0966]
将苄基(5-(6-(6-(2-(乙基(异丙基)氨基甲酰基)-4-氟苯氧基)-1,2,4-三嗪-5-基)-2,6-二氮杂螺[3.4]辛-2-基)-2,6-二甲基庚-2-基)(甲基)氨基甲酸酯(中间体39)(650mg，0.923mmol)通过sfc经大赛璐chiralpak ad-h(柱：250x30mm 5μm；洗脱液：在etoh(0.1％氨)中的30％(v/v)超临界co2，流速：60ml/min)分离，以得到均呈无色油状物的标题中间体中间体40(250mg，96％纯度，37％产率)和中间体41(220mg，99.9％纯度，34％产率)。
[0967]
中间体48和49的制备
[0968]
甲基(*r)-4-(6-(6-(2-(4-环丙基嘧啶-5-基)-4-氟苯氧基)-1,2,4-三嗪-5-基)-2,6-二氮杂螺[3.4]辛-2-基)-5-甲基己酸酯
[0969]
甲基(*s)-4-(6-(6-(2-(4-环丙基嘧啶-5-基)-4-氟苯氧基)-1,2,4-三嗪-5-基)-2,6-二氮杂螺[3.4]辛-2-基)-5-甲基己酸酯
[0970][0971]
将甲基4-(6-(6-(2-(4-环丙基嘧啶-5-基)-4-氟苯氧基)-1,2,4-三嗪-5-基)-2,6-二氮杂螺[3.4]辛-2-基)-5-甲基己酸酯(中间体47)(360mg，0.513mmol)通过sfc经菲罗门-纤维素-2(phenomenex-cellulose-2)(柱：250x30mm，10μm；洗脱液：在具有0.1％氨的meoh中的35％(v/v)超临界co2)纯化，以得到均呈白色固体的标题中间体中间体48(110mg，35％产率)和中间体49(90mg，31％产率)。
[0972]
中间体93的制备
[0973]
1-(1,3-二氧戊环-2-基)-4-甲基戊-3-酮
[0974][0975]
在25℃下，向镁(6.0g，247mmol)和碘(100mg，0.394mmol)在thf(70ml)中的混合物中缓慢添加2-(2-溴乙基)-1,3-二氧戊环(20.0g，110mmol)在thf(30ml)中的溶液，将所得混合物在25℃下搅拌1h。然后，将混合物缓慢添加至在0℃下冷却的n-甲氧基-n-甲基异丁酰胺(10g，76.2mmol)在thf(100ml)中的溶液中。将反应混合物缓慢温热至25℃并且在此温度下搅拌8h。将混合物通过饱和水性nh4cl(300ml)淬灭，用mtbe(200ml x 3)萃取。将合并的有机层经na2so4干燥，过滤并在减压下浓缩以给出粗产物，将该粗产物通过fcc(pe:etoac＝1:0至20:1)纯化，以得到呈无色油状物的标题中间体(13g，粗品)，将其不经进一步纯化而直接用于下一步骤。
[0976]
中间体95和96的制备
[0977]
(r)-2-((5-(2-(1-(1,3-二氧戊环-2-基)-4-甲基戊-3-基)-2,6-二氮杂螺[3.4]辛-6-基)-1,2,4-三嗪-6-基)氧基)-n-乙基-5-氟-n-异丙基苯甲酰胺
[0978]
(s)-2-((5-(2-(1-(1,3-二氧戊环-2-基)-4-甲基戊-3-基)-2,6-二氮杂螺[3.4]辛-6-基)-1,2,4-三嗪-6-基)氧基)-n-乙基-5-氟-n-异丙基苯甲酰胺
[0979][0980]
将2-((5-(2-(1-(1,3-二氧戊环-2-基)-4-甲基戊-3-基)-2,6-二氮杂螺[3.4]辛-6-基)-1,2,4-三嗪-6-基)氧基)-n-乙基-5-氟-n-异丙基苯甲酰胺(中间体94)(4.00g，7.01mmol)通过sfc经大赛璐chiralcel od(柱：250x50mm 10um；流动相：a：超临界co2，b：meoh(0.1％氨)，a:b＝75:25，200ml/min；柱温：38℃；喷嘴压力：100巴；喷嘴温度：60℃；蒸发器温度：20℃；微调器温度：25℃；波长：220nm)分离，以得到呈白色固体的标题中间体中间体95(1.72g，98.76％纯度，42.5％产率)和中间体96(1.57g，98.09％纯度，38.5％产率)。
[0981]
中间体99和100的制备
[0982]
(*r)-2-((5-(2-(1-(1,3-二氧戊环-2-基)-4-甲基戊-3-基)-2,6-二氮杂螺[3.4]辛-6-基)-1,2,4-三嗪-6-基)氧基)-5-氟-n,n-二异丙基苯甲酰胺
[0983]
(*s)-2-((5-(2-(1-(1,3-二氧戊环-2-基)-4-甲基戊-3-基)-2,6-二氮杂螺[3.4]辛-6-基)-1,2,4-三嗪-6-基)氧基)-5-氟-n,n-二异丙基苯甲酰胺
[0984][0985]
将2-((5-(2-(1-(1,3-二氧戊环-2-基)-4-甲基戊-3-基)-2,6-二氮杂螺[3.4]辛-6-基)-1,2,4-三嗪-6-基)氧基)-5-氟-n,n-二异丙基苯甲酰胺(中间体98)(6.5g)通过sfc经大赛璐chiralpak ig(柱：250x50mm10um；流动相：a：超临界co2，b：meoh(0.1％氨)，a:b＝65:35，200ml/min；柱温：38；喷嘴压力：100巴；喷嘴温度：60℃；蒸发器温度：20℃；微调器温
度：25℃；波长：220nm)分离，以得到标题中间体中间体99(2.7g)和中间体100(2.8g)。
[0986]
中间体97的制备
[0987]
(r)-n-乙基-5-氟-n-异丙基-2-((5-(2-(2-甲基-6-氧代己-3-基)-2,6-二氮杂螺[3.4]辛-6-基)-1,2,4-三嗪-6-基)氧基)苯甲酰胺
[0988][0989]
向(r)-2-((5-(2-(1-(1,3-二氧戊环-2-基)-4-甲基戊-3-基)-2,6-二氮杂螺[3.4]辛-6-基)-1,2,4-三嗪-6-基)氧基)-n-乙基-5-氟-n-异丙基苯甲酰胺(中间体95)(1.00g，1.75mmol)在acn(10ml)中的溶液中添加1m hcl(10.0ml，10.0mmol)，并且将所得混合物在50℃下搅拌1h。冷却至rt后，将反应混合物在减压下浓缩。将所得残余物用dcm(50ml)稀释并且通过10％水性naoh碱化至ph＝14。将混合物通过dcm(30ml x 3)进一步萃取并且将合并的有机层经无水na2so4干燥，过滤并在真空中浓缩以得到呈白色固体的标题中间体(900mg，87％纯度，85％产率)，将其不经进一步纯化而直接用于下一步骤。
[0990]
中间体101、102、103的制备
[0991]
(*r)-5-氟-n,n-二异丙基-2-((5-(2-(2-甲基-6-氧代己-3-基)-2,6-二氮杂螺[3.4]辛-6-基)-1,2,4-三嗪-6-基)氧基)苯甲酰胺
[0992]
(*s)-5-氟-n,n-二异丙基-2-((5-(2-(2-甲基-6-氧代己-3-基)-2,6-二氮杂螺[3.4]辛-6-基)-1,2,4-三嗪-6-基)氧基)苯甲酰胺
[0993]
n-乙基-5-氟-n-异丙基-2-((5-(2-(2-甲基-6-氧代己-3-基)-2,6-二氮杂螺[3.4]辛-6-基)-1,2,4-三嗪-6-基)氧基)苯甲酰胺
[0994]
通过针对中间体97所述的类似方法合成以下中间体
[0995]
[0996][0997]
中间体114的制备
[0998]
甲基2-(2-异丙基-1,3-二氧戊环-2-基)乙酸酯
[0999][1000]
在配备迪恩-斯塔克(dean-stark)装置的1000ml烧瓶中，将甲基4-甲基-3-氧代戊酸酯(50g，347mmol)添加至由乙烷-1,2-二醇(43g，693mmol)、对甲苯磺酸水合物(597mg，3.47mmol)和甲苯(500ml)组成的溶液中。将混合物在135℃下搅拌18h。在冷却至rt后，将1m na2co3(300ml)水溶液添加至反应混合物。分离有机层并且用h2o(100ml)洗涤，经无水na2so4干燥，过滤并在真空中浓缩以得到呈黄色油状物的标题中间体(41g，粗品)，将其不经进一步纯化而直接用于下一步骤。
[1001]
中间体115的制备
[1002]
2-(2-异丙基-1,3-二氧戊环-2-基)乙-1-醇
[1003][1004]
在n2气氛下，将lialh4(2.5g，66mmol)分批添加至在0℃下冷却的thf(250ml)中。在0℃下，在n2气氛下，将甲基2-(2-异丙基-1,3-二氧戊环-2-基)乙酸酯(中间体114)(10g，粗品)在thf(20ml)中的溶液滴加至以上混合物。在n2气氛下，将所得混合物缓慢温热至rt并且在此温度下搅拌18h。然后将2.5ml h2o缓慢添加至以上混合物，随后添加水性naoh溶液(15％,7.5ml)。将所得混合物在rt下搅拌0.5h。然后将无水mgso4添加至以上混合物。将悬
浮液通过硅藻土垫过滤，并且用thf(200ml)洗涤。将滤液在真空中浓缩以得到呈黄色油状物的标题中间体(6.8g，粗品)，将其不经进一步纯化而直接用于下一步骤。
[1005]
中间体116的制备
[1006]
1-羟基-4-甲基戊-3-酮
[1007][1008]
将草酸(4.2ml，在水中的10％，4.7mmol)添加至在dcm(230ml)中的硅胶(27g，449mmol)的混合物。一旦水层消失，添加2-(2-异丙基-1,3-二氧戊环-2-基)乙-1-醇(中间体115)(3.7g，粗品)在dcm(7ml)中的溶液并且将该反应混合物在rt下搅拌5h。然后添加nahco3(800mg)。将所得混合物过滤，并用dcm(50ml x 3)洗涤。将滤液在真空中浓缩以得到呈无色油状物的标题中间体(2.4g，粗品)，将其不经进一步纯化而直接用于下一步骤。
[1009]
中间体124的制备
[1010]
(*r)-3-(6-(6-(2-(乙基(异丙基)氨基甲酰基)-4-氟苯氧基)-1,2,4-三嗪-5-基)-2,6-二氮杂螺[3.4]辛-2-基)-4-甲基戊基甲磺酸酯
[1011][1012]
在n2气氛下，将mscl(250mg，2.18mmol)滴加至在0℃下冷却的n-乙基-5-氟-2-((5-(2-(1-羟基-4-甲基戊-3-基)-2,6-二氮杂螺[3.4]辛-6-基)-1,2,4-三嗪-6-基)氧基)-n-异丙基苯甲酰胺(化合物213)(500mg，0.972mmol)和tea(0.27ml，1.9mmol)在dcm(10ml)中的溶液中。将所得混合物在0℃下在n2下搅拌45min。然后，将反应混合物用h2o(5ml)淬灭，并用dcm(10ml x 3)萃取。将合并的有机层用盐水(5ml)洗涤，经无水na2so4干燥并过滤。将滤液在真空中浓缩以得到呈黄色油状物的标题中间体(400mg，粗品)，将其不经进一步纯化而直接用于下一步骤。
[1013]
中间体130、139的制备
[1014]
甲基3-甲基-4-(甲苯磺酰基氧基)丁酸酯
[1015]
2-甲氧基丙基4-甲基苯磺酸酯
[1016]
通过针对中间体124的如上所述的类似方法合成以下中间体
[1017][1018]
中间体125的制备
[1019]
n-苄基-2-甲氧基-n-甲基乙酰胺
[1020][1021]
向在0℃下冷却的n-甲基-1-苯基甲胺(5.5g，45.4mmol)和tea(14g，138.4mmol)在dcm(60ml)中的溶液中滴加2-甲氧基乙酰氯(5g，46.073mmol)。将所得混合物缓慢温热至25℃并且在此温度下搅拌1h。然后，将水性饱和nahco3溶液(50ml)添加至混合物，并且用dcm(50ml x 3)萃取。将合并的有机层用盐水(100ml)洗涤，经na2so4干燥，过滤并在真空中浓缩，以得到粗残余物，将该粗残余物通过fcc(ea:pe＝从0至80％)纯化，以得到呈无色油状物的标题中间体(3.4g，34％产率)。
[1022]
中间体126的制备
[1023]
n-苄基-2-甲氧基-n-甲基乙-1-胺-1,1-d2[1024][1025]
在n2气氛下，向在0℃下冷却的liald4(1.5g，35.732mmol)在thf(25ml)中的混合物中滴加n-苄基-2-甲氧基-n-甲基乙酰胺(中间体125)(3.4g，17.6mmol)在thf(25ml)中的溶液。将反应混合物在25℃下先搅拌1h并在50℃下再搅拌2h。然后将反应混合物冷却至0℃并用水性naoh(1m，10ml)逐滴淬灭。过滤所得混合物并用etoac(100ml)洗涤滤饼。将滤液用h2o(50ml)和盐水(50ml)洗涤，经na2so4干燥，并且过滤。将溶剂在减压下浓缩以得到残余物，将该残余物通过fcc(etoac:pe＝从0至100％)纯化，以得到呈无色油状物的标题中间体(2.0g，60％产率)。
[1026]
中间体127的制备
[1027]
2-甲氧基-n-甲基乙-1,1-d
2-1-胺,盐酸盐
[1028][1029]
向n-苄基-2-甲氧基-n-甲基乙-1-胺-1,1-d2(800mg，4.413mmol)在meoh(20ml)和thf(60ml)中的溶液中添加1,1,2-三氯乙烷(1.2g，9.0mmol)和pd/c(湿，10％，0.5g)。将所得混合物在50℃下在h2气氛(50psi)下搅拌18h。在冷却至rt后，将反应混合物通过硅藻土过滤，并且将滤液在真空中浓缩以得到呈黄色油状物的标题中间体(600mg，粗品)，将其不经进一步纯化而直接用于下一步骤。
[1030]
中间体128的制备
[1031]
甲基4-羟基-3-甲基丁-2-烯酸酯
[1032][1033]
将t-buok(16.0g，143mmol)添加至(2-甲氧基-2-氧代乙基)三苯基溴化磷(59.0g，142mmol)在thf(220ml)中的溶液中。将所得混合物在50℃下搅拌1h。然后，将在thf(30ml)中的1-羟基丙-2-酮(7.2g，97mmol)添加至以上混合物，并且将反应混合物在50℃下再搅拌16h。冷却至rt后，添加h2o(200ml)，并且用etoac(200ml x 3)萃取混合物。将合并的有机层用h2o(300ml)洗涤，经无水na2so4干燥并过滤。将滤液在真空中浓缩以得到粗化合物，将该粗化合物通过fcc(pe:etoac＝1:0至1:1)纯化，以得到呈浅黄色油状物的标题中间体(3.4g，27％产率)。
[1034]
中间体129的制备
[1035]
甲基4-羟基-3-甲基丁酸酯
[1036][1037]
向甲基4-羟基-3-甲基丁-2-烯酸酯(中间体128)(3.4g，26mmol)在meoh(100ml)中的溶液添加干pd/c(500mg，10％)，并且将悬浮液在rt下在h2(15psi)气氛下搅拌4h。然后将反应混合物通过硅藻土垫过滤并且用meoh(200ml)洗涤。将滤液在真空中浓缩以得到呈黄色油状物的标题中间体(2.3g，67％产率)，将其不经进一步纯化而直接用于下一步骤。
[1038]
中间体193、194、207、208的制备
[1039]
(s)-5-((叔丁基二苯基甲硅烷基)氧基)-6-(乙基(甲基)氨基)-2-甲基己-3-酮
[1040]
(r)-5-((叔丁基二苯基甲硅烷基)氧基)-6-(乙基(甲基)氨基)-2-甲基己-3-酮
[1041]
(s)-5-((叔丁基二苯基甲硅烷基)氧基)-6-((2-甲氧基乙基)(甲基)氨基)-2-甲基己-3-酮
[1042]
(r)-5-((叔丁基二苯基甲硅烷基)氧基)-6-((2-甲氧基乙基)(甲基)氨基)-2-甲
基己-3-酮
[1043]
通过针对中间体129所述的类似方法合成以下中间体
[1044][1045][1046]
中间体131和132的制备
[1047]
甲基(*r)-3-甲基-4-(甲苯磺酰基氧基)丁酸酯
[1048]
甲基(*s)-3-甲基-4-(甲苯磺酰基氧基)丁酸酯
[1049][1050]
将甲基3-甲基-4-(甲苯磺酰基氧基)丁酸酯(中间体130)(3.3g)通过sfc经大赛璐chiralpak ay-h(柱：250x30mm 5um；流动相：a：超临界co2，b：etoh(0.1％氨)，a:b＝90:10，60ml/min)纯化，以得到均呈白色固体的标题中间体(中间体131)(1.28g，97％纯度，36％产率)和(中间体132)(1.27g，85％纯度，33％产率)。
[1051]
中间体134的制备
[1052]
甲基(*s)-4-((2-甲氧基乙基)(甲基)氨基)-3-甲基丁酸酯
[1053][1054]
将甲基(*s)-3-甲基-4-(甲苯磺酰基氧基)丁酸酯(中间体132)(1.27g，4.44mmol)、2-甲氧基-n-甲基乙-1-胺(593mg，6.65mmol)、和k2co3(1.23mg，8.87mmol)在acn
(5ml)中的混合物在90℃下搅拌过夜。在冷却至rt后，将反应混合物过滤，并且将滤液在真空中浓缩以得到呈棕色油状物的标题中间体(670mg，粗品)，将其不经进一步纯化而直接用于下一步骤。
[1055]
中间体133、185、186、199、200、219的制备
[1056]
甲基(*r)-4-((2-甲氧基乙基)(甲基)氨基)-3-甲基丁酸酯
[1057]
乙基(s)-3-((叔丁基二苯基甲硅烷基)氧基)-4-(乙基(甲基)氨基)丁酸酯
[1058]
乙基(r)-3-((叔丁基二苯基甲硅烷基)氧基)-4-(乙基(甲基)氨基)丁酸酯
[1059]
乙基(s)-3-((叔丁基二苯基甲硅烷基)氧基)-4-((2-甲氧基乙基)(甲基)氨基)丁酸酯
[1060]
乙基(r)-3-((叔丁基二苯基甲硅烷基)氧基)-4-((2-甲氧基乙基)(甲基)氨基)丁酸酯
[1061]
n-(2-甲氧基乙基)-n,2-二甲基丙-2-烯-1-胺
[1062]
通过针对中间体134所述的类似方法合成以下中间体
[1063][1064]
中间体136的制备
[1065]
(*s)-6-((2-甲氧基乙基)(甲基)氨基)-2,5-二甲基己-3-酮
[1066]
[1067]
在n2下，向在0℃下冷却的甲基(*s)-4-((2-甲氧基乙基)(甲基)氨基)-3-甲基丁酸酯(中间体134)(670mg，粗品)在thf(5ml)中的溶液中滴加异丙基氯化镁(4.94ml，9.88mmol，thf中的2m)。将所得混合物在50℃下在n2下搅拌5h。在冷却至rt后，将反应混合物用饱和水性nh4cl溶液(1.5ml)淬灭并过滤。将滤液在真空中浓缩以得到呈黄色油状物的标题中间体(507.1mg，粗品)，将其不经进一步纯化而直接用于下一步骤。
[1068]
中间体135的制备
[1069]
(*r)-6-((2-甲氧基乙基)(甲基)氨基)-2,5-二甲基己-3-酮
[1070]
通过针对中间体136所述的类似方法合成以下中间体
[1071][1072]
中间体165的制备
[1073]
叔丁基(2-羟基-5-甲基-4-氧代己基)(甲基)氨基甲酸酯
[1074][1075]
在n2气氛下，向在-40℃下冷却的3-甲基丁-2-酮(6.0g，70.0mmol)在thf(150ml)中的溶液中滴加lda(40ml，thf中的2m，80.0mmol)。将所得混合物在-40℃下搅拌1h。然后，将叔丁基甲基(2-氧代乙基)氨基甲酸酯(8.0g，46.2mmol)在thf(50ml)中的溶液滴加至以上混合物并且将反应在-40℃下搅拌2h。在-40℃下通过滴加h2o(20ml)淬灭反应。然后，将混合物温热至rt并在减压下浓缩。将粗残余物用h2o(200ml)稀释并用etoac(200ml
×
2)萃取。将合并的有机层用盐水(200ml)洗涤，经无水na2so4干燥，过滤并浓缩。将粗产物通过fcc(pe/etoac＝20/1至3/1)纯化，以得到呈无色油状物的标题中间体(8.8g，85％纯度，62％产率)。
[1076]
通过针对中间体165所述的类似方法合成以下中间体
[1077][1078]
中间体166的制备
[1079]
叔丁基(2-甲氧基-5-甲基-4-氧代己基)(甲基)氨基甲酸酯
[1080]
[1081]
在n2气氛下，向叔丁基(2-羟基-5-甲基-4-氧代己基)(甲基)氨基甲酸酯(中间体165)(4.00g，15.4mmol)在dcm(200ml)中的溶液中添加分子筛(4g)，并且将混合物在25℃下搅拌10min。然后，添加1,8-双(二甲基氨基)萘(8.26g，38.6mmol)并且将混合物冷却至0℃，随后添加三甲基氧鎓四氟硼酸盐(5.93g，40.1mmol)。将反应混合物在0℃下先搅拌2h，然后温热至25℃并且在此温度下再搅拌16h。将悬浮液过滤并且用dcm(40ml
×
2)洗涤。将滤液在真空中浓缩并且将残余物通过fcc(pe/etoac＝5/1至4/1)纯化，以得到呈无色油状物的标题中间体(2.00g，44％产率)。
[1082]
中间体181的制备
[1083]
乙基(s)-3-羟基-4-碘丁酸酯
[1084][1085]
在n2气氛下，向(s)-4-羟基二氢呋喃-2(3h)-酮(5g，50.0mmol)在etoh(8.6ml)中在dcm(20ml)中的溶液中缓慢添加tmsi(14.8g，74.0mmol)。将所得混合物在rt下搅拌16h。添加饱和na2so3(40ml)溶液。将有机层分离并且在真空中浓缩以得到呈黄色油状物的标题中间体(8.8g，粗品)，将其不经进一步纯化而直接用于下一步骤。
[1086]
中间体182的制备
[1087]
乙基(r)-3-羟基-4-碘丁酸酯
[1088]
通过针对中间体181的如上所述的类似方法合成以下中间体
[1089][1090]
中间体195的制备
[1091]
(s)-6-(乙基(甲基)氨基)-5-羟基-2-甲基己-3-酮
[1092][1093]
在n2气氛下，向(s)-5-((叔丁基二苯基甲硅烷基)氧基)-6-(乙基(甲基)氨基)-2-甲基己-3-酮(中间体193)(2.33g，5.04mmol)在thf(3ml)中的溶液中添加tbaf(0.65ml，thf中的1.0m，0.65mmol)。将所得混合物在rt下搅拌16h。将反应混合物在减压下浓缩并且将粗残余物用h2o(25ml)稀释并且用dcm(60ml
×
3)萃取。将合并的有机层用盐水(40ml
×
2)洗涤，经na2so4干燥并过滤。将滤液在真空中浓缩以得到呈黄色油状物的标题中间体(2.2g，粗品)，将其不经进一步纯化而直接用于下一步骤。
[1094]
中间体196、209、210的制备
[1095]
(r)-6-(乙基(甲基)氨基)-5-羟基-2-甲基己-3-酮
[1096]
(s)-5-羟基-6-((2-甲氧基乙基)(甲基)氨基)-2-甲基己-3-酮
[1097]
(r)-5-羟基-6-((2-甲氧基乙基)(甲基)氨基)-2-甲基己-3-酮
[1098]
通过针对中间体195的如上所述的类似方法合成以下中间体
[1099][1100]
中间体220的制备
[1101]
n-((3-异丙基-5-甲基-4,5-二氢异噁唑-5-基)甲基)-2-甲氧基-n-甲基乙-1-胺
[1102][1103]
向在0℃下冷却的n-(2-甲氧基乙基)-n,2-二甲基丙-2-烯-1-胺(中间体219)(2.90g，20.2mmol)在dmf(50ml)中的溶液中添加nahco3(6.82g，81.2mmol)和(z)-n-羟基异丁酰亚胺基氯(2.47g，20.3mmol)。将反应混合物在0℃下搅拌30min，并且然后在rt下搅拌16h。将反应混合物通过h2o(50ml)淬灭，并用etoac(30ml
×
2)萃取。将合并的有机层用饱和水性licl溶液(50ml)洗涤，经无水na2so4干燥并过滤。将滤液在真空中浓缩以给出粗产物，将该粗产物通过fcc(meoh:dcm＝1:10)纯化，以得到呈棕色油状物的标题中间体(1.20g，89.9％纯度，25.9％产率)。
[1104]
中间体221的制备
[1105]
5-羟基-6-((2-甲氧基乙基)(甲基)氨基)-2,5-二甲基己-3-酮
[1106][1107]
向n-((3-异丙基-5-甲基-4,5-二氢异噁唑-5-基)甲基)-2-甲氧基-n-甲基乙-1-胺(中间体220)(1.20g，5.26mmol)在meoh和thf(40ml，meoh/thf＝1/2)中的溶液中添加acoh(3.15g，52.5mmol)和h2o(9.50ml，572.3mmol)。在n2气氛下，在0℃下，将雷尼镍(750mg)添加至溶液。将悬浮液脱气并且用h2吹扫3次，并且将混合物在h2气氛(30psi)下在25℃下搅拌过夜。
[1108]
将反应混合物通过硅藻土垫过滤并且将滤液用dcm萃取。将合并的有机层用nahco3(20ml
×
2)和盐水(20ml
×
2)洗涤，经na2so4干燥，并且过滤。将滤液在真空中浓缩以得到呈棕色油状物的标题中间体(1.10g，粗品)，将其不经进一步纯化而直接用于下一步骤。
[1109]
中间体227的制备
[1110]
叔丁基(r)-(1-(2,2-二甲基-4,6-二氧代-1,3-二噁烷-5-基)-3-甲基丁-2-基)氨基甲酸酯
[1111][1112]
将在-10℃至0℃下预冷却的boc-l-缬氨酸(44.9kg)、2,2-二甲基-1,3-二噁烷-4,6-二酮(32.9kg)和dmap(35.5kg)在dcm(607kg)中的溶液中经3h添加至dcc(55.5kg)在dcm(613kg)中的溶液中并且在-10℃至0℃下老化16h。添加10％柠檬酸水溶液(449kg)，同时将温度维持在10℃以下。将所得浆液在0℃至10℃下老化2h，然后过滤。将滤饼用dcm(91kg)洗涤。分离滤液并且将有机层用10％柠檬酸水溶液(两次450kg)和10％nacl水溶液(449kg)洗涤。向有机相中(1200kg)添加乙酸(75.0kg)同时维持温度在-10℃至0℃之间。将硼氢化钠(18.0kg)经5h分批添加同时维持温度在-10℃至0℃的范围内并且然后将所得混合物在-10℃至0℃下老化另外的16h。将混合物温热至15℃至25℃，并老化2h。然后将混合物用14％nacl水溶液(450kg)洗涤随后用14％nacl水溶液(432kg)二次洗涤，以及最后用水洗涤(444kg)。将有机相在减压下浓缩至2-4个体积。将异丙醇(143kg)添加至残余物并在减压下浓缩至4-5个体积。在冷却至-10℃至0℃并且老化8h小时后，将所得浆液过滤，用ipa(38kg)洗涤并且干燥以得到呈白色固体的标题中间体(46.7kg，69％产率)。
[1113]
中间体228的制备
[1114]
叔丁基(r)-2-异丙基-5-氧代吡咯烷-1-甲酸酯
[1115][1116]
将在甲苯(333kg)中的叔丁基(r)-(1-(2,2-二甲基-4,6-二氧代-1,3-二噁烷-5-基)-3-甲基丁-2-基)氨基甲酸酯(中间体227)(46.7kg)加热至回流并老化4h。将混合物冷却到环境温度，过滤，并用甲苯(20kg)洗涤。将合并的滤液在减压下浓缩至干燥以得到呈油状物的所希望的化合物(31.05kg，96％产率)，将其不经进一步纯化而直接使用。
[1117]
中间体229的制备
[1118]
叔丁基(5r)-2-羟基-5-异丙基吡咯烷-1-甲酸酯
[1119][1120]
将在2-methf(26.7kg)中的叔丁基(r)-2-异丙基-5-氧代吡咯烷-1-甲酸酯(中间
60℃下填充氯碘甲烷(1.81kg，1.2当量)。将反应混合物在-60℃至-40℃下老化2h。在0℃至10℃之间的温度下，向反应混合物中添加柠檬酸水溶液(6l h2o中的660g)并且在20℃至30℃下将所得混合物老化另外的20min。在分离各层之后，将水层用etoac(6l)萃取并且将合并的有机层用盐水(6l)洗涤然后温热至50℃至60℃。在50℃至60℃下填充草酸(2.22kg)。将所得混合物在50℃至60℃下搅拌3h然后冷却至20℃至30℃并老化过夜。过滤所得固体并且将饼用乙酸乙酯(2l)洗涤。将湿饼添加至甲苯(4l)、h2o(8l)和k3po4(1.5当量)并且将所得混合物在20℃至30℃下老化20min。在分离各层之后，将水层用甲苯(2l)萃取。合并有机层，并用水(2l)洗涤两次。将有机相在减压下浓缩以得到4.2kg呈甲苯溶液的所希望的化合物(测定为46wt％，给出的测定产率是80％)。
[1133]
中间体233的制备
[1134]
1-苄基-3-(氯甲基)吡咯烷-3-甲醛
[1135][1136]
在流动的化学系统中进行反应：将乙基1-苄基-3-(氯甲基)吡咯烷-3-甲酸酯(中间体232)(4.4kg)在甲苯(26l)中的溶液以26.7ml/min泵入并且冷却至-60℃。在冷却后，然后在-60℃下，在32.1ml/min的泵入速率下，将其与dibal-h(28.1mol)在甲苯中的冷却溶液(28l)混合。在-60℃下，将混合物通过全氟烷氧基(pfa)盘管反应器(总流速58.8ml/min，停留时间为5秒)。将所得混合物与冷却的meoh(-60℃)(以15.2ml/min的速率泵入)混合。在-60℃下，将此混合溶液泵入另一个pfa盘管反应器(总流速74ml/min，停留时间为5秒)。将所得混合物收集到接收器(其含有20wt％罗谢尔盐水溶液(20v))中。将各层分离并将有机相用水(2x44l)洗涤两次。将有机相与另一个以类似方式制备的3.0kg的批次合并并在减压下浓缩以得到20.8kg所希望的化合物的甲苯溶液(通过hplc测定为25.5wt％，给出的测定产率为85％)，将其不经进一步纯化而直接使用。
[1137]1h nmr(300mhz，氯仿-d)：δ9.62(s,1h),7.39-7.20(m,5h),3.83-3.57(m,4h),2.96(d,j＝10.2hz,1h),2.80-2.55(m,3h),2.17(ddd,j＝13.9,7.9,6.1hz,1h),1.83(ddd,j＝13.4,7.8,5.5hz,1h)。
[1138]
中间体234的制备
[1139]
(r)-4-(6-苄基-2,6-二氮杂螺[3.4]辛-2-基)-n-(2-甲氧基乙基)-n,5-二甲基己-1-胺
[1140][1141]
在20℃至30℃下，向1-苄基-3-(氯甲基)吡咯烷-3-甲醛(中间体233)在甲苯中的溶液(3.0kg，10wt％)(用甲苯(30l)稀释)和(r)-n
1-(2-甲氧基乙基)-n1,5-二甲基己烷-1,
4-二胺，二盐酸盐(中间体231)(3.47kg)中添加三乙基胺(2.55kg，25.2mol)。将所得混合物在20℃至30℃下老化2小时。然后，在20℃至30℃下填充三乙酰氧基硼氢化钠(9.0kg)并且将混合物老化12h。将反应混合物冷却至5℃至15℃并且添加25wt％naoh水溶液(25l，约16.75当量)(维持温度在35℃以下)。将所得混合物在20℃至30℃下老化25min并且分离各层。将有机层用15wt％水性nacl(10l)洗涤并且将各层再次分离，并将水(18l)填充至有机相。用4m水性hcl将水相的ph调节至6至7同时维持内部温度低于35℃。然后丢弃有机相并且用k2hpo4将水相分离并且碱化至ph 8至9。
[1142]
将所得混合物温热至50℃至55℃并且老化3h。然后将反应混合物冷却至环境温度并且与其他两个批次(2.4kg+3.0kg)合并。将合并的流用甲基叔丁基醚洗涤三次(3x40l)。向所得的水层中添加另外的甲基叔丁基醚(83l)并使用8wt％水性naoh将水相碱化至ph 9至10同时维持温度在15℃至35℃之间。分离水层，并且将有机层用水洗涤三次(3x30l)。然后将有机层在减压下浓缩至约3个体积并且然后用甲醇冲洗三次(3x30l)并浓缩至干燥以得到呈浅黄色油状物的所希望的化合物(12.4kg，90％分离产率)，将其不经进一步纯化而直接使用。
[1143]
中间体224的制备
[1144]
(r)-n-(2-甲氧基乙基)-n,5-二甲基-4-(2,6-二氮杂螺[3.4]辛-2-基)己-1-胺
[1145][1146]
向冷却至-5℃至5℃的etoh(1.47kg)中的氢氧化钯炭(1.2kg)中添加甲磺酸(msa)(11kg)、(r)-4-(6-苄基-2,6-二氮杂螺[3.4]辛-2-基-n-(2-甲氧基乙基)-n,5-二甲基己-1-胺(中间体234)(10kg)和etoh(250l)。将混合物温热至35℃-45℃并且在氢气氛下(0.27至0.40mpa)搅拌16-20h。将混合物经硅藻土(20kg)过滤并且将垫用etoh(24l)洗涤。将滤液在减压下浓缩(《40℃)至2至3个体积并且然后用2-methf(73kg和47kg)冲洗两次以给出2至3个体积的溶液。在用2-methf(65kg)稀释后，添加10％水性硫酸钠(30kg)并且将混合物冷却至0℃至10℃，随后添加16％水性naoh(50kg)以调节ph至13至14。将温度调节至15℃至25℃并搅拌30至60min。将水层分离并且用2-methf(47kg x 2)萃取。将合并的有机层在减压下浓缩(《40℃)至3至4个体积，并添加和2-methf(950g)。在减压下浓缩(《40℃)至3至4个体积后，将所得溶液用2-methf(30kg)稀释，通过穿过4a分子筛(25kg)干燥并用2-methf(30kg)洗涤。将最终溶液浓缩以得到以79％校正产率的具有90.1％测定纯度的呈油状物的所希望的化合物(6.7kg)。
[1147]
中间体225的制备
[1148]
(r)-4-(6-(3,6-二氯-1,2,4-三嗪-5-基)-2,6-二氮杂螺[3.4]辛-2-基)-n-(2-甲氧基乙基)-n,5-二甲基己-1-胺
[1149][1150]
向(r)-n-(2-甲氧基乙基)-n,5-二甲基-4-(2,6-二氮杂螺[3.4]辛-2-基)己-1-胺(中间体224)(100g)中添加2-methf(430g)和tea(68g)并将混合物冷却至-50℃至-40℃。添加在2-methf(172g)中的3,5,6-三氯-1,2,4-三嗪(62g)并且将混合物搅拌1至3h。将所得混合物温热至-20℃至-10℃并添加7％nahco3水溶液，将混合物温热至20℃至30℃并搅拌30至60min。去除水层并将有机层用10％na2so4(500g)洗涤。将有机层通过穿过分子筛(220g)干燥并用2-methf(180g)洗涤。以90％测定产率得到呈在2-methf中14.8wt％的溶液的标题中间体。
[1151]
中间体245的制备
[1152]
(r)-2-((5-(2-(6-((2-((叔丁基二甲基甲硅烷基)氧基)乙基)(甲基)氨基)-2-甲基己-3-基)-2,6-二氮杂螺[3.4]辛-6-基)-1,2,4-三嗪-6-基)氧基)-n-乙基-5-氟-n-异丙基苯甲酰胺
[1153][1154]
将nabh3cn(23.2mg，0.37mmol)添加至(r)-n-乙基-5-氟-n-异丙基-2-((5-(2-(2-甲基-6-(甲基氨基)己-3-基)-2,6-二氮杂螺[3.4]辛-6-基)-1,2,4-三嗪-6-基)氧基)苯甲酰胺盐酸盐(化合物19)(100mg，0.18mmol)、2-((叔丁基二甲基甲硅烷基)氧基)乙醛(71μl，0.37mmol)和acoh(11μl，0.18mmol)在meoh(2ml)中的溶液中。然后，将反应混合物在rt下搅拌24h。将反应混合物倒如水中，用k2co3的水溶液碱化并添加dcm。分离有机层，经mgso4干燥，过滤并蒸发至干燥以给出粗品(152mg)，将该粗品通过硅胶色谱法(固定相：不规则裸二氧化硅4g，流动相：0.5％nh4oh，95％dcm，5％meoh)纯化。将含有产物的级分混合并浓缩以得到标题中间体(46mg，36％产率)。
[1155]
化合物的制备
[1156]
化合物61的制备
[1157]
叔丁基(4-(6-(6-(2-(乙基(异丙基)氨基甲酰基)-4-氟苯氧基)-1,2,4-三嗪-5-基)-2,6-二氮杂螺[3.4]辛-2-基)-5-甲基己基)氨基甲酸酯
[1158][1159]
将2-((5-(2,6-二氮杂螺[3.4]辛-6-基)-1,2,4-三嗪-6-基)氧基)-n-乙基-5-氟-n-异丙基苯甲酰胺(中间体3)(1.0g，2.4mmol)、叔丁基(5-甲基-4-氧代己基)氨基甲酸酯(中间体1)(830mg，3.62mmol)和zncl2(660mg，4.84mmol)在meoh(15ml)中的混合物在80℃下搅拌0.5h。然后添加nabh3cn(310mg，4.93mmol)并将所得混合物在80℃下搅拌6h。在冷却至rt后，将混合物在减压下浓缩以给出粗产物，将该粗产物通过制备型hplc使用沃特世(waters)xbridge prep obd(柱：c18 150x40mm 10um；洗脱液：acn/h2o(0.05％氨)从45％至75％v/v)进一步纯化，以得到呈无色油状物的标题化合物(700mg，46％产率)。
[1160]
化合物62和63的制备
[1161]
叔丁基(r)-(4-(6-(6-(2-(乙基(异丙基)氨基甲酰基)-4-氟苯氧基)-1,2,4-三嗪-5-基)-2,6-二氮杂螺[3.4]辛-2-基)-5-甲基己基)氨基甲酸酯
[1162]
叔丁基(s)-(4-(6-(6-(2-(乙基(异丙基)氨基甲酰基)-4-氟苯氧基)-1,2,4-三嗪-5-基)-2,6-二氮杂螺[3.4]辛-2-基)-5-甲基己基)氨基甲酸酯
[1163][1164]
将叔丁基(4-(6-(6-(2-(乙基(异丙基)氨基甲酰基)-4-氟苯氧基)-1,2,4-三嗪-5-基)-2,6-二氮杂螺[3.4]辛-2-基)-5-甲基己基)氨基甲酸酯(化合物61)(200mg，0.319mmol)通过sfc经大赛璐chiralpak ig(柱：250x30mm 10um；等度洗脱：etoh(含有25％氨的0.1％)：超临界co2，40％:60％(v/v))纯化，以得到均呈浅黄色油状物的标题化合物
(化合物62)(85mg，42％产率)和(化合物63)(80mg，40％产率)。
[1165]
化合物207和208
[1166]
叔丁基(*r)-(5-(6-(6-(2-(乙基(异丙基)氨基甲酰基)-4-氟苯氧基)-1,2,4-三嗪-5-基)-2,6-二氮杂螺[3.4]辛-2-基)-6-甲基庚基)氨基甲酸酯
[1167]
叔丁基(*s)-(5-(6-(6-(2-(乙基(异丙基)氨基甲酰基)-4-氟苯氧基)-1,2,4-三嗪-5-基)-2,6-二氮杂螺[3.4]辛-2-基)-6-甲基庚基)氨基甲酸酯
[1168][1169]
将叔丁基(5-(6-(6-(2-(乙基(异丙基)氨基甲酰基)-4-氟苯氧基)-1,2,4-三嗪-5-基)-2,6-二氮杂螺[3.4]辛-2-基)-6-甲基庚基)氨基甲酸酯(化合物206)(1.4g)通过sfc经大赛璐chiralpak ig(柱：250
×
30mm，10μm；流动相：a：超临界co2，b：meoh(0.1％氨)，a:b＝55:45，200ml/min)纯化，以得到均呈白色固体的标题化合物(化合物207)(700mg)和(化合物208)(700mg)。
[1170]
化合物304和305
[1171]
叔丁基((4*r)-4-(6-(6-(2-(乙基(异丙基)氨基甲酰基)-4-氟苯氧基)-1,2,4-三嗪-5-基)-2,6-二氮杂螺[3.4]辛-2-基)-2-甲氧基-5-甲基己基)(甲基)氨基甲酸酯
[1172]
叔丁基((4*s)-4-(6-(6-(2-(乙基(异丙基)氨基甲酰基)-4-氟苯氧基)-1,2,4-三嗪-5-基)-2,6-二氮杂螺[3.4]辛-2-基)-2-甲氧基-5-甲基己基)(甲基)氨基甲酸酯
[1173][1174]
将叔丁基(4-(6-(6-(2-(乙基(异丙基)氨基甲酰基)-4-氟苯氧基)-1,2,4-三嗪-5-基)-2,6-二氮杂螺[3.4]辛-2-基)-2-甲氧基-5-甲基己基)(甲基)氨基甲酸酯(化合物303)(250mg)通过sfc经大赛璐chiralpak ig(柱：250
×
30mm，10μm；流动相：a：超临界co2，b：meoh(0.1％氨)，a:b＝60:40；流速：80ml/min)分离，以得到均呈无色粘性油状物的标题化合物(化合物304)(124mg)和(化合物305)(124mg)。
[1175]
化合物306和307
[1176]
叔-丁基((2*r,4*r)-4-(6-(6-(2-(乙基(异丙基)氨基甲酰基)-4-氟苯氧基)-1,2,4-三嗪-5-基)-2,6-二氮杂螺[3.4]辛-2-基)-2-甲氧基-5-甲基己基)(甲基)氨基甲酸酯
[1177]
叔-丁基((2*s,4*r)-4-(6-(6-(2-(乙基(异丙基)氨基甲酰基)-4-氟苯氧基)-1,2,4-三嗪-5-基)-2,6-二氮杂螺[3.4]辛-2-基)-2-甲氧基-5-甲基己基)(甲基)氨基甲酸酯
[1178][1179]
将叔丁基((4*r)-4-(6-(6-(2-(乙基(异丙基)氨基甲酰基)-4-氟苯氧基)-1,2,4-三嗪-5-基)-2,6-二氮杂螺[3.4]辛-2-基)-2-甲氧基-5-甲基己基)(甲基)氨基甲酸酯(化合物304)(120mg)通过sfc经大赛璐chiralpak ig(柱：250
×
30mm，10um；流动相：a：超临界co2，b：meoh(0.1％氨)，a:b＝70:30，80ml/min)分离，以得到均呈无色粘性油状物的标题化合物(化合物306)(45mg)和(化合物307)(46mg)。
[1180]
化合物371和372
[1181]
叔丁基((2*s,4*s)-4-(6-(6-(2-(乙基(异丙基)氨基甲酰基)-4-氟苯氧基)-1,2,4-三嗪-5-基)-2,6-二氮杂螺[3.4]辛-2-基)-2-甲氧基-5-甲基己基)(甲基)氨基甲酸酯
[1182]
叔丁基((2*r,4*s)-4-(6-(6-(2-(乙基(异丙基)氨基甲酰基)-4-氟苯氧基)-1,2,4-三嗪-5-基)-2,6-二氮杂螺[3.4]辛-2-基)-2-甲氧基-5-甲基己基)(甲基)氨基甲酸酯
[1183][1184]
将叔丁基((4*s)-4-(6-(6-(2-(乙基(异丙基)氨基甲酰基)-4-氟苯氧基)-1,2,4-三嗪-5-基)-2,6-二氮杂螺[3.4]辛-2-基)-2-甲氧基-5-甲基己基)(甲基)氨基甲酸酯(化合物305)(120mg)通过sfc经大赛璐chiralpak ig(柱：250
×
30mm，10μm；流动相：a：超临界co2，b：ipa(0.1％氨)，a:b＝60:40；流速：80ml/min)分离，以得到均呈无色粘性油状物的标题化合物(化合物371)(45mg)和(化合物372)(46mg)。
[1185]
化合物404和405
[1186]
叔丁基(r)-(4-(6-(3-氯-6-(2-(乙基(异丙基)氨基甲酰基)-4-氟苯氧基)-1,2,4-三嗪-5-基)-2,6-二氮杂螺[3.4]辛-2-基)-5-甲基己基)氨基甲酸酯
[1187]
叔丁基(s)-(4-(6-(3-氯-6-(2-(乙基(异丙基)氨基甲酰基)-4-氟苯氧基)-1,2,4-三嗪-5-基)-2,6-二氮杂螺[3.4]辛-2-基)-5-甲基己基)氨基甲酸酯
[1188][1189]
将叔丁基(4-(6-(3-氯-6-(2-(乙基(异丙基)氨基甲酰基)-4-氟苯氧基)-1,2,4-三嗪-5-基)-2,6-二氮杂螺[3.4]辛-2-基)-5-甲基己基)氨基甲酸酯(化合物403)(19.5g)通过sfc经大赛璐chiralpak ig(柱：250
×
30mm，10um；流动相：a：超临界co2，b：meoh(0.1％氨)，a:b＝55:45，80ml/min；柱温：38℃；喷嘴压力：100巴；喷嘴温度：60℃；蒸发器温度：20℃；微调器温度：25℃；波长：220nm)分离，以得到均呈粘性油状物的标题化合物(化合物404)(8.00g)和(化合物405)(7.00g)。
[1190]
化合物1
[1191]
(r)-2-((5-(2-(6-氨基-2-甲基己-3-基)-2,6-二氮杂螺[3.4]辛-6-基)-1,2,4-三嗪-6-基)氧基)-n-乙基-5-氟-n-异丙基苯甲酰胺甲酸酯
[1192][1193]
将hcl/1,4-二噁烷(0.5ml，2.0mmol)添加至叔丁基(r)-(4-(6-(6-(2-(乙基(异丙基)氨基甲酰基)-4-氟苯氧基)-1,2,4-三嗪-5-基)-2,6-二氮杂螺[3.4]辛-2-基)-5-甲基己基)氨基甲酸酯(化合物62)(85mg，0.14mmol)在1,4-二噁烷(2ml)中的溶液中。将反应混合物在rt下搅拌4h。将混合物在减压下浓缩并将残余物首先通过氨(5ml)中和并通过制备型hplc使用welch xtimate c18(柱：150x25mm 5μm；洗脱液：acn/h2o(0.225％fa)从1％至31％(v/v))进一步纯化，以得到呈无色油状物的标题化合物(32mg，41％产率)。
[1194]1h nmr(400mhz，甲醇-d4)：δ＝8.45-8.41(m,3h),7.48-7.13(m,3h),4.50-4.01(m,6h),3.98-3.66(m,3h),3.56-3.38(m,1h),3.25-3.12(m,1h),3.10-3.01(m,1h),2.99-2.87(m,2h),2.43-2.18(m,2h),2.13-1.96(m,1h),1.84-1.44(m,4h),1.25-0.92(m,13h),0.87-0.69(m,2h)。
[1195]
lc-ms(esi)(方法1)：r
t
＝2.957min，m/z发现值528.3[m+h]
+
。
[1196]
sfc(方法12)：r
t
＝1.151min。
[1197]
化合物60的制备
[1198]
叔丁基(4-(6-(6-(2-(乙基(异丙基)氨基甲酰基)-4-氟苯氧基)-1,2,4-三嗪-5-基)-2,6-二氮杂螺[3.4]辛-2-基)-5-甲基己基)(甲基)氨基甲酸酯
[1199][1200]
向2-((5-(2,6-二氮杂螺[3.4]辛-6-基)-1,2,4-三嗪-6-基)氧基)-n-乙基-5-氟-n-异丙基苯甲酰胺(中间体3)(600mg，1.45mmol)和叔丁基甲基(5-甲基-4-氧代己基)氨基甲酸酯(中间体9)(330mg，1.37mmol)在meoh(50ml)中的溶液中添加zncl2(789mg，5.79mmol)。将所得混合物在80℃下搅拌2h。然后添加nabh3cn(729mg，11.6mmol)并将反应混合物在80℃下搅拌过夜。在冷却至rt后，将混合物在减压下浓缩以给出粗残余物，将该粗残余物用dcm(50ml)稀释，用饱和水性nh4cl(50ml)淬灭并用dcm(50ml x 3)萃取。将合并的有机层用盐水(50ml)洗涤，经na2so4干燥，过滤并将滤液在减压下浓缩以给出粗产物，将该粗产物通过fcc(dcm/meoh＝10:1)进一步纯化，以得到呈白色固体的标题化合物(400mg，42％产率)。
[1201]
化合物56和57
[1202]
叔丁基(r)-(4-(6-(6-(2-(乙基(异丙基)氨基甲酰基)-4-氟苯氧基)-1,2,4-三嗪-5-基)-2,6-二氮杂螺[3.4]辛-2-基)-5-甲基己基)(甲基)氨基甲酸酯
[1203]
叔丁基(s)-(4-(6-(6-(2-(乙基(异丙基)氨基甲酰基)-4-氟苯氧基)-1,2,4-三嗪-5-基)-2,6-二氮杂螺[3.4]辛-2-基)-5-甲基己基)(甲基)氨基甲酸酯
[1204][1205]
将叔丁基(4-(6-(6-(2-(乙基(异丙基)氨基甲酰基)-4-氟苯氧基)-1,2,4-三嗪-5-基)-2,6-二氮杂螺[3.4]辛-2-基)-5-甲基己基)(甲基)氨基甲酸酯(化合物60)(419mg，0.653mmol)通过sfc经大赛璐chiralpak ad(柱：250x30mm 10μm；流动相：a：超临界co2，b：ipa(0.1％氨)，a:b＝80:20，60ml/min；柱温：38℃；喷嘴压力：100巴；喷嘴温度：60℃；蒸发器温度：20℃；微调器温度：25℃；波长：220nm)纯化，以得到均呈白色固体的标题化合物(化合物56)(146mg，34％产率)和(化合物57)(149mg，36％产率)。
[1206]
化合物19
[1207]
(r)-n-乙基-5-氟-n-异丙基-2-((5-(2-(2-甲基-6-(甲基氨基)己-3-基)-2,6-二氮杂螺[3.4]辛-6-基)-1,2,4-三嗪-6-基)氧基)苯甲酰胺盐酸盐
[1208][1209]
向叔丁基(r)-(4-(6-(6-(2-(乙基(异丙基)氨基甲酰基)-4-氟苯氧基)-1,2,4-三嗪-5-基)-2,6-二氮杂螺[3.4]辛-2-基)-5-甲基己基)(甲基)氨基甲酸酯(化合物56)(130mg，0.203mmol)在1,4-二噁烷(3ml)中的溶液中添加hcl/1,4-二噁烷(5ml，20.0mmol)，并将该反应混合物在rt下搅拌1h。将反应混合物在真空中浓缩并将残余物通过制备型hplc经菲罗门gemini-nx(柱：150x30mm 5um，流动相a：水(0.05％hcl)，流动相b：acn，流速：25ml/min，梯度条件b/a从0％b至26％(0％b至26％b))纯化，以得到呈无色油状物的标题化合物(105mg，84％产率)。
[1210]
lc-ms(esi)(方法1)：r
t
＝2.939min，m/z发现值542.4[m+h]
+
。
[1211]
sfc(方法1)：r
t
＝1.201min。
[1212]
化合物398
[1213]
(r)-n-乙基-5-氟-n-异丙基-2-((5-(2-(2-甲基-6-(甲基氨基)己-3-基)-2,6-二
氮杂螺[3.4]辛-6-基)-1,2,4-三嗪-6-基)氧基)苯甲酰胺
[1214][1215]
在5℃下，将tfa(0.51ml，6.7mmol)滴加至叔丁基(r)-(4-(6-(6-(2-(乙基(异丙基)氨基甲酰基)-4-氟苯氧基)-1,2,4-三嗪-5-基)-2,6-二氮杂螺[3.4]辛-2-基)-5-甲基己基)(甲基)氨基甲酸酯(化合物56)(287mg，0.45mmol)在dcm(7.5ml)中的溶液中，并将反应混合物搅拌过夜。将反应混合物蒸发至干燥以给出粗混合物(540mg)，将该粗混合物通过硅胶色谱法(固定相：不规则裸二氧化硅12g，流动相：梯度从95％dcm，5％meoh(+10％nh4oh)至90％dcm，10％meoh(+10％nh4oh))纯化。将纯的级分混合并浓缩以得到173mg中间体级分，将该中间体级分用acn/h2o(20/80，v/v)冷冻干燥以得到标题化合物(170mg，70％产率)。
[1216]
lc-ms(esi)(方法4)：r
t
＝2.08min，m/z发现值542.6[m+h]
+
。
[1217]
化合物51
[1218]
叔丁基(3-(6-(6-(2-(乙基(异丙基)氨基甲酰基)-4-氟苯氧基)-1,2,4-三嗪-5-基)-2,6-二氮杂螺[3.4]辛-2-基)-4-甲基戊基)氨基甲酸酯
[1219][1220]
向n-乙基-5-氟-2-((5-羟基-1,2,4-三嗪-6-基)氧基)-n-异丙基苯甲酰胺(中间体25)(0.100g，0.312mmol)在dcm(12ml)中的溶液中添加草酰氯(0.079g，0.624mmol)，随后在rt下添加dmf(0.046g，0.624mmol)。将混合物在此温度下搅拌1小时。然后，将混合物添加至叔丁基(4-甲基-3-(2,6-二氮杂螺[3.4]辛-2-基)戊基)氨基甲酸酯盐酸盐(中间体22)(0.272g，粗品)和tea(0.158g，1.56mmol)在dcm(3ml)中的溶液中。将所得混合物在25℃下搅拌0.5h。将反应混合物在减压下浓缩并将残余物在dcm(35ml)和h2o(35ml)之间分配，用dcm(35ml x 3)萃取。将合并的有机层经na2so4干燥，过滤并浓缩。将残余物通过fcc(pe/etoac(0.5％氨)＝1/1)纯化，以得到呈无色油状物的标题化合物(100mg，89％纯度，46％产率)。
[1221]
化合物52和53
[1222]
叔丁基(*r)-(5-(6-(6-(2-(4-环丙基嘧啶-5-基)-4-氟苯氧基)-1,2,4-三嗪-5-基)-2,6-二氮杂螺[3.4]辛-2-基)-2,6-二甲基庚-2-基)氨基甲酸酯
[1223]
叔丁基(*s)-(5-(6-(6-(2-(4-环丙基嘧啶-5-基)-4-氟苯氧基)-1,2,4-三嗪-5-基)-2,6-二氮杂螺[3.4]辛-2-基)-2,6-二甲基庚-2-基)氨基甲酸酯
[1224][1225]
将叔丁基(5-(6-(6-(2-(4-环丙基嘧啶-5-基)-4-氟苯氧基)-1,2,4-三嗪-5-基)-2,6-二氮杂螺[3.4]辛-2-基)-2,6-二甲基庚-2-基)氨基甲酸酯(化合物58)(150mg，0.227mmol)通过sfc经大赛璐chiralpak ad-h(柱：250x30mm 5μm；流动相：a：超临界co2，b：ipa(0.1％氨)，a:b＝4:1，60ml/min)纯化，以得到均呈白色固体的标题化合物化合物52(47mg，96.3％纯度，30.2％产率)和化合物53(56mg，97.7％纯度，36.5％产率)。
[1226]
化合物54和55
[1227]
叔丁基(*r)-(5-(6-(6-(2-(乙基(异丙基)氨基甲酰基)-4-氟苯氧基)-1,2,4-三嗪-5-基)-2,6-二氮杂螺[3.4]辛-2-基)-2,6-二甲基庚-2-基)氨基甲酸酯
[1228]
叔丁基(*s)-(5-(6-(6-(2-(乙基(异丙基)氨基甲酰基)-4-氟苯氧基)-1,2,4-三嗪-5-基)-2,6-二氮杂螺[3.4]辛-2-基)-2,6-二甲基庚-2-基)氨基甲酸酯
[1229][1230]
将叔丁基(5-(6-(6-(2-(乙基(异丙基)氨基甲酰基)-4-氟苯氧基)-1,2,4-三嗪-5-基)-2,6-二氮杂螺[3.4]辛-2-基)-2,6-二甲基庚-2-基)氨基甲酸酯(化合物59)(1.70g，2.59mmol)通过sfc经大赛璐chiralpak ig(柱：250x50mm 10μm))；流动相：a：超临界co2，b：
etoh(0.1％氨)，a:b＝3:2，150ml/min)分离，以得到均呈白色固体的标题化合物化合物54(700mg，90％纯度，37％产率)和化合物55(700mg，纯度：96％纯度，40％产率)。
[1231]
化合物408
[1232]
叔丁基(r)-(4-(6-(6-(2-(乙基(异丙基)氨基甲酰基)-4-氟苯氧基)-3-(甲基氨基)-1,2,4-三嗪-5-基)-2,6-二氮杂螺[3.4]辛-2-基)-5-甲基己基)氨基甲酸酯
[1233]
通过针对化合物395的如上所述的类似方法合成以下化合物
[1234][1235]
化合物412
[1236]
叔丁基(r)-(4-(6-(6-(2-(乙基(异丙基)氨基甲酰基)-4-氟苯氧基)-3-甲基-1,2,4-三嗪-5-基)-2,6-二氮杂螺[3.4]辛-2-基)-5-甲基己基)氨基甲酸酯
[1237][1238]
向叔丁基(r)-(4-(6-(3-氯-6-(2-(乙基(异丙基)氨基甲酰基)-4-氟苯氧基)-1,2,4-三嗪-5-基)-2,6-二氮杂螺[3.4]辛-2-基)-5-甲基己基)氨基甲酸酯(化合物404)(50.0mg，0.076mmol)、2,4,6-三甲基-1,3,5,2,4,6-三氧杂三硼杂环己烷(76.0mg，0.303mmol，thf中的50％)和k2co3(21.0mg，0.152mmol)在无水二噁烷(1ml)中的混合物中添加pd(pph3)4(8.7mg，0.008mmol)并将所得混合物在n2气氛下在110℃下搅拌8h。在冷却至rt后，将混合物用h2o(40ml)稀释并用etoac(20ml
×
3)萃取。将合并的有机层经无水na2so4干燥并过滤。将滤液在减压下浓缩以给出粗产物，将该粗产物通过制备型tlc(dcm/meoh＝10/1)纯化，以得到呈黄色固体的标题化合物(30.0mg，59.7％产率)。
[1239]
化合物2、3、20、30、31、37、38、26、80、209、210、218、220、221、308、309、317、328、359、373、374、409、413
[1240]
(s)-2-((5-(2-(6-氨基-2-甲基己-3-基)-2,6-二氮杂螺[3.4]辛-6-基)-1,2,4-三嗪-6-基)氧基)-n-乙基-5-氟-n-异丙基苯甲酰胺甲酸酯
[1241]
2-((5-(2-(6-氨基-2-甲基己-3-基)-2,6-二氮杂螺[3.4]辛-6-基)-1,2,4-三嗪-6-基)氧基)-n-乙基-5-氟-n-异丙基苯甲酰胺甲酸酯
[1242]
(s)-n-乙基-5-氟-n-异丙基-2-((5-(2-(2-甲基-6-(甲基氨基)己-3-基)-2,6-二氮杂螺[3.4]辛-6-基)-1,2,4-三嗪-6-基)氧基)苯甲酰胺盐酸盐
1,2,4-三嗪-6-基)氧基)-n-乙基-5-氟-n-异丙基苯甲酰胺甲酸酯
[1263]
通过针对化合物1和19的以上所述的类似方法合成以下化合物
[1264]
[1265]
[1266]
[1267]
[1268]
[1269]
[1270]
[1271][1272]
化合物4
[1273]
(r)-2-((5-(2-(6-(二甲基氨基)-2-甲基己-3-基)-2,6-二氮杂螺[3.4]辛-6-基)-1,2,4-三嗪-6-基)氧基)-n-乙基-5-氟-n-异丙基苯甲酰胺
二氮杂螺[3.4]辛-6-基)-1,2,4-三嗪-6-基)氧基)-n-乙基-5-氟-n-异丙基苯甲酰胺
[1290]
(r)-2-((5-(2-(6-(二甲基氨基)-2-甲基己-3-基)-2,6-二氮杂螺[3.4]辛-6-基)-3-甲氧基-1,2,4-三嗪-6-基)氧基)-n-乙基-5-氟-n-异丙基苯甲酰胺甲酸酯
[1291]
通过针对化合物4的以上所述的类似方法合成以下化合物
[1292]
[1293]
[1294]
[1295][1296]
化合物75、76
[1297]
(*r)-2-((4-(2-(6-(二甲基氨基)-2-甲基己-3-基)-2,6-二氮杂螺[3.4]辛-6-基)哒嗪-3-基)氧基)-5-氟-n,n-二异丙基苯甲酰胺
[1298]
(*s)-2-((4-(2-(6-(二甲基氨基)-2-甲基己-3-基)-2,6-二氮杂螺[3.4]辛-6-基)哒嗪-3-基)氧基)-5-氟-n,n-二异丙基苯甲酰胺
[1299][1300]
将2-((4-(2-(6-(二甲基氨基)-2-甲基己-3-基)-2,6-二氮杂螺[3.4]辛-6-基)哒嗪-3-基)氧基)-5-氟-n,n-二异丙基苯甲酰胺(化合物74)(600mg)通过手性hplc经大赛璐chiralpak ig(柱：250x30mm 10um；流动相：a：庚烷，b：etoh，a:b从20％至70％(v/v)；流速：25ml/min)分离，以得到呈白色固体的标题化合物化合物75(92mg，15％)和化合物76(84mg)。
[1301]
化合物75
[1302]
lc-ms(esi)(方法2)：r
t
＝1.915min，m/z发现值569.3[m+h]
+
。
基)-2,6-二氮杂螺[3.4]辛-6-基)-1,2,4-三嗪-6-基)氧基)-5-氟-n,n-二异丙基苯甲酰胺富马酸酯
[1345]
(*s)-2-((5-(2-(6-((3-(二甲基氨基)-3-氧代丙基)(甲基)氨基)-2-甲基己-3-基)-2,6-二氮杂螺[3.4]辛-6-基)-1,2,4-三嗪-6-基)氧基)-5-氟-n,n-二异丙基苯甲酰胺富马酸酯
[1346]
(r)-n-乙基-5-氟-n-异丙基-2-((5-(2-(2-甲基-6-(甲基(2-(n-甲基乙酰胺基)乙基)氨基)己-3-基)-2,6-二氮杂螺[3.4]辛-6-基)-1,2,4-三嗪-6-基)氧基)苯甲酰胺富马酸酯
[1347]
(r)-2-((5-(2-(6-((2,2-二甲氧基乙基)(甲基)氨基)-2-甲基己-3-基)-2,6-二氮杂螺[3.4]辛-6-基)-1,2,4-三嗪-6-基)氧基)-n-乙基-5-氟-n-异丙基苯甲酰胺富马酸酯
[1348]
(r)-2-((5-(2-(6-((4-(二甲基氨基)-4-氧代丁基)(甲基)氨基)-2-甲基己-3-基)-2,6-二氮杂螺[3.4]辛-6-基)-1,2,4-三嗪-6-基)氧基)-n-乙基-5-氟-n-异丙基苯甲酰胺富马酸酯
[1349]
n-乙基-5-氟-n-异丙基-2-((5-(2-((r)-6-(((r)-1-甲氧基丙-2-基)(甲基)氨基)-2-甲基己-3-基)-2,6-二氮杂螺[3.4]辛-6-基)-1,2,4-三嗪-6-基)氧基)苯甲酰胺富马酸酯
[1350]
n-乙基-5-氟-n-异丙基-2-((5-(2-((r)-6-(((s)-1-甲氧基丙-2-基)(甲基)氨基)-2-甲基己-3-基)-2,6-二氮杂螺[3.4]辛-6-基)-1,2,4-三嗪-6-基)氧基)苯甲酰胺富马酸酯
[1351]
(r)-2-((5-(2-(6-((1,3-二甲氧基丙-2-基)氨基)-2-甲基己-3-基)-2,6-二氮杂螺[3.4]辛-6-基)-1,2,4-三嗪-6-基)氧基)-n-乙基-5-氟-n-异丙基苯甲酰胺富马酸酯
[1352]
(r)-2-((5-(2-(6-((1,3-二甲氧基丙-2-基)(甲基)氨基)-2-甲基己-3-基)-2,6-二氮杂螺[3.4]辛-6-基)-1,2,4-三嗪-6-基)氧基)-n-乙基-5-氟-n-异丙基苯甲酰胺富马酸酯
[1353]
n-乙基-5-氟-2-((5-(2-((r)-6-(((r)-1-羟基-3-甲氧基丙-2-基)(甲基)氨基)-2-甲基己-3-基)-2,6-二氮杂螺[3.4]辛-6-基)-1,2,4-三嗪-6-基)氧基)-n-异丙基苯甲酰胺富马酸酯
[1354]
n-乙基-5-氟-2-((5-(2-((r)-6-(((s)-1-羟基-3-甲氧基丙-2-基)(甲基)氨基)-2-甲基己-3-基)-2,6-二氮杂螺[3.4]辛-6-基)-1,2,4-三嗪-6-基)氧基)-n-异丙基苯甲酰胺富马酸酯
[1355]
n-乙基-5-氟-2-((5-(2-((3r)-6-((3-羟基-2-甲氧基丙基)(甲基)氨基)-2-甲基己-3-基)-2,6-二氮杂螺[3.4]辛-6-基)-1,2,4-三嗪-6-基)氧基)-n-异丙基苯甲酰胺富马酸酯
[1356]
2-((5-(2-((3r)-6-((2,3-二甲氧基丙基)氨基)-2-甲基己-3-基)-2,6-二氮杂螺[3.4]辛-6-基)-1,2,4-三嗪-6-基)氧基)-n-乙基-5-氟-n-异丙基苯甲酰胺富马酸酯
[1357]
2-((5-(2-((r)-6-(((*r)-2,3-二甲氧基丙基)(甲基)氨基)-2-甲基己-3-基)-2,6-二氮杂螺[3.4]辛-6-基)-1,2,4-三嗪-6-基)氧基)-n-乙基-5-氟-n-异丙基苯甲酰胺富马酸酯
[1358]
2-((5-(2-((r)-6-(((*s)-2,3-二甲氧基丙基)(甲基)氨基)-2-甲基己-3-基)-2,6-二氮杂螺[3.4]辛-6-基)-1,2,4-三嗪-6-基)氧基)-n-乙基-5-氟-n-异丙基苯甲酰胺富马酸酯
[1359]
2-((5-(2-((3r)-6-((4-(二甲基氨基)-4-氧代丁-2-基)(甲基)氨基)-2-甲基己-3-基)-2,6-二氮杂螺[3.4]辛-6-基)-1,2,4-三嗪-6-基)氧基)-n-乙基-5-氟-n-异丙基苯甲酰胺富马酸酯
[1360]
2-((5-(2-((3r)-6-((3-(二甲基氨基)-2-甲基-3-氧代丙基)(甲基)氨基)-2-甲基己-3-基)-2,6-二氮杂螺[3.4]辛-6-基)-1,2,4-三嗪-6-基)氧基)-n-乙基-5-氟-n-异丙基苯甲酰胺富马酸酯
[1361]
2-((5-(2-((r)-6-(((*r)-4-(二甲基氨基)-4-氧代丁-2-基)(甲基)氨基)-2-甲基己-3-基)-2,6-二氮杂螺[3.4]辛-6-基)-1,2,4-三嗪-6-基)氧基)-n-乙基-5-氟-n-异丙基苯甲酰胺富马酸酯
[1362]
2-((5-(2-((r)-6-(((*s)-4-(二甲基氨基)-4-氧代丁-2-基)(甲基)氨基)-2-甲基己-3-基)-2,6-二氮杂螺[3.4]辛-6-基)-1,2,4-三嗪-6-基)氧基)-n-乙基-5-氟-n-异丙基苯甲酰胺富马酸酯
[1363]
2-((5-(2-((r)-6-(((*r)-3-(二甲基氨基)-2-甲基-3-氧代丙基)(甲基)氨基)-2-甲基己-3-基)-2,6-二氮杂螺[3.4]辛-6-基)-1,2,4-三嗪-6-基)氧基)-n-乙基-5-氟-n-异丙基苯甲酰胺富马酸酯
[1364]
2-((5-(2-((r)-6-(((*s)-3-(二甲基氨基)-2-甲基-3-氧代丙基)(甲基)氨基)-2-甲基己-3-基)-2,6-二氮杂螺[3.4]辛-6-基)-1,2,4-三嗪-6-基)氧基)-n-乙基-5-氟-n-异丙基苯甲酰胺富马酸酯
[1365]
n-乙基-5-氟-n-异丙基-2-((5-(2-((r)-2-甲基-6-(甲基((r)-4-(甲基氨基)-4-氧代丁-2-基)氨基)己-3-基)-2,6-二氮杂螺[3.4]辛-6-基)-1,2,4-三嗪-6-基)氧基)苯甲酰胺富马酸酯
[1366]
n-乙基-5-氟-n-异丙基-2-((5-(2-((r)-2-甲基-6-(甲基((s)-4-(甲基氨基)-4-氧代丁-2-基)氨基)己-3-基)-2,6-二氮杂螺[3.4]辛-6-基)-1,2,4-三嗪-6-基)氧基)苯甲酰胺富马酸酯
[1367]
n-乙基-5-氟-n-异丙基-2-((5-(2-((r)-2-甲基-6-(甲基((r)-2-甲基-3-(甲基氨基)-3-氧代丙基)氨基)己-3-基)-2,6-二氮杂螺[3.4]辛-6-基)-1,2,4-三嗪-6-基)氧基)苯甲酰胺富马酸酯
[1368]
n-乙基-5-氟-n-异丙基-2-((5-(2-((r)-2-甲基-6-(甲基((s)-2-甲基-3-(甲基氨基)-3-氧代丙基)氨基)己-3-基)-2,6-二氮杂螺[3.4]辛-6-基)-1,2,4-三嗪-6-基)氧基)苯甲酰胺富马酸酯
[1369]
2-((5-(2-((*r)-6-(((r)-4-氨基-4-氧代丁-2-基)(甲基)氨基)-2-甲基己-3-基)-2,6-二氮杂螺[3.4]辛-6-基)-1,2,4-三嗪-6-基)氧基)-5-氟-n,n-二异丙基苯甲酰胺富马酸酯
[1370]
2-((5-(2-((*r)-6-(((s)-4-氨基-4-氧代丁-2-基)(甲基)氨基)-2-甲基己-3-基)-2,6-二氮杂螺[3.4]辛-6-基)-1,2,4-三嗪-6-基)氧基)-5-氟-n,n-二异丙基苯甲酰胺富马酸酯
[1371]
2-((5-(2-((*r)-6-(((r)-3-氨基-2-甲基-3-氧代丙基)(甲基)氨基)-2-甲基己-3-基)-2,6-二氮杂螺[3.4]辛-6-基)-1,2,4-三嗪-6-基)氧基)-5-氟-n,n-二异丙基苯甲酰胺富马酸酯
[1372]
2-((5-(2-((*r)-6-(((s)-3-氨基-2-甲基-3-氧代丙基)(甲基)氨基)-2-甲基己-3-基)-2,6-二氮杂螺[3.4]辛-6-基)-1,2,4-三嗪-6-基)氧基)-5-氟-n,n-二异丙基苯甲酰胺富马酸酯
[1373]
(*r)-2-((5-(2-(1-氨基-4-甲基戊-3-基)-2,6-二氮杂螺[3.4]辛-6-基)-1,2,4-三嗪-6-基)氧基)-n-乙基-5-氟-n-异丙基苯甲酰胺富马酸酯
[1374]
(*r)-2-((5-(2-(1-(二甲基氨基)-4-甲基戊-3-基)-2,6-二氮杂螺[3.4]辛-6-基)-1,2,4-三嗪-6-基)氧基)-n-乙基-5-氟-n-异丙基苯甲酰胺富马酸酯
[1375]
(*s)-2-((5-(2-(1-(二甲基氨基)-4-甲基戊-3-基)-2,6-二氮杂螺[3.4]辛-6-基)-1,2,4-三嗪-6-基)氧基)-n-乙基-5-氟-n-异丙基苯甲酰胺富马酸酯
[1376]
(*r)-n-乙基-5-氟-n-异丙基-2-((5-(2-(1-((2-甲氧基乙基)氨基)-4-甲基戊-3-基)-2,6-二氮杂螺[3.4]辛-6-基)-1,2,4-三嗪-6-基)氧基)苯甲酰胺富马酸酯
[1377]
(r)-n-乙基-5-氟-n-异丙基-2-((5-(2-(6-((2-甲氧基乙基-1,1-d2)(甲基)氨基)-2-甲基己-3-基)-2,6-二氮杂螺[3.4]辛-6-基)-1,2,4-三嗪-6-基)氧基)苯甲酰胺富马酸酯
[1378]
n-乙基-5-氟-n-异丙基-2-((5-(2-((3*r,5*r)-6-((2-甲氧基乙基)(甲基)氨基)-2,5-二甲基己-3-基)-2,6-二氮杂螺[3.4]辛-6-基)-1,2,4-三嗪-6-基)氧基)苯甲酰胺富马酸酯
[1379]
n-乙基-5-氟-n-异丙基-2-((5-(2-((3*s,5*r)-6-((2-甲氧基乙基)(甲基)氨基)-2,5-二甲基己-3-基)-2,6-二氮杂螺[3.4]辛-6-基)-1,2,4-三嗪-6-基)氧基)苯甲酰胺富马酸酯
[1380]
n-乙基-5-氟-n-异丙基-2-((5-(2-((3*r,5*s)-6-((2-甲氧基乙基)(甲基)氨基)-2,5-二甲基己-3-基)-2,6-二氮杂螺[3.4]辛-6-基)-1,2,4-三嗪-6-基)氧基)苯甲酰胺富马酸酯
[1381]
n-乙基-5-氟-n-异丙基-2-((5-(2-((3*s,5*s)-6-((2-甲氧基乙基)(甲基)氨基)-2,5-二甲基己-3-基)-2,6-二氮杂螺[3.4]辛-6-基)-1,2,4-三嗪-6-基)氧基)苯甲酰胺富马酸酯
[1382]
(r)-2-((5-(2-(6-((2-乙酰胺基乙基)(甲基)氨基)-2-甲基己-3-基)-2,6-二氮杂螺[3.4]辛-6-基)-1,2,4-三嗪-6-基)氧基)-n-乙基-5-氟-n-异丙基苯甲酰胺富马酸酯
[1383]
(r)-2-((5-(2-(6-((1,3-二羟基丙-2-基)(甲基)氨基)-2-甲基己-3-基)-2,6-二氮杂螺[3.4]辛-6-基)-1,2,4-三嗪-6-基)氧基)-n-乙基-5-氟-n-异丙基苯甲酰胺富马酸酯
[1384]
n-乙基-5-氟-n-异丙基-2-((5-(2-(6-((2-甲氧基乙基)(甲基)氨基)-2,4-二甲基己-3-基)-2,6-二氮杂螺[3.4]辛-6-基)-1,2,4-三嗪-6-基)氧基)苯甲酰胺(r,s和s,r的混合物；或r,r和s,s的混合物)富马酸酯
[1385]
n-乙基-5-氟-n-异丙基-2-((5-(2-(6-((2-甲氧基乙基)(甲基)氨基)-2,4-二甲基己-3-基)-2,6-二氮杂螺[3.4]辛-6-基)-1,2,4-三嗪-6-基)氧基)苯甲酰胺(r,r和s,s的
混合物；或r,s和s,r的混合物)富马酸酯
[1386]
(*r)-n-乙基-5-氟-2-((5-(2-(1-((2-羟基乙基)氨基)-4-甲基戊-3-基)-2,6-二氮杂螺[3.4]辛-6-基)-1,2,4-三嗪-6-基)氧基)-n-异丙基苯甲酰胺富马酸酯
[1387]
(*r)-n-乙基-5-氟-2-((5-(2-(1-((2-羟基乙基)(甲基)氨基)-4-甲基戊-3-基)-2,6-二氮杂螺[3.4]辛-6-基)-1,2,4-三嗪-6-基)氧基)-n-异丙基苯甲酰胺富马酸酯
[1388]
(*r)-2-((5-(2-(1-((3-氨基-3-氧代丙基)氨基)-4-甲基戊-3-基)-2,6-二氮杂螺[3.4]辛-6-基)-1,2,4-三嗪-6-基)氧基)-n-乙基-5-氟-n-异丙基苯甲酰胺富马酸酯
[1389]
(*r)-2-((5-(2-(1-((3-氨基-3-氧代丙基)(甲基)氨基)-4-甲基戊-3-基)-2,6-二氮杂螺[3.4]辛-6-基)-1,2,4-三嗪-6-基)氧基)-n-乙基-5-氟-n-异丙基苯甲酰胺富马酸酯
[1390]
n-乙基-5-氟-2-((5-(2-((r)-6-(((r)-2-羟基-3-甲氧基丙基)(甲基)氨基)-2-甲基己-3-基)-2,6-二氮杂螺[3.4]辛-6-基)-1,2,4-三嗪-6-基)氧基)-n-异丙基苯甲酰胺富马酸酯
[1391]
(r)-n-乙基-5-氟-2-((5-(2-(6-((2-羟基乙基)(甲基)氨基)-2-甲基己-3-基)-2,6-二氮杂螺[3.4]辛-6-基)-1,2,4-三嗪-6-基)氧基)-n-异丙基苯甲酰胺富马酸酯
[1392]
(r)-2-((5-(2-(6-((2,2-二甲氧基乙基)氨基)-2-甲基己-3-基)-2,6-二氮杂螺[3.4]辛-6-基)-1,2,4-三嗪-6-基)氧基)-n-乙基-5-氟-n-异丙基苯甲酰胺富马酸酯
[1393]
(*r)-n-乙基-5-氟-n-异丙基-2-((5-(2-(1-(异丙基氨基)-4-甲基戊-3-基)-2,6-二氮杂螺[3.4]辛-6-基)-1,2,4-三嗪-6-基)氧基)苯甲酰胺富马酸酯
[1394]
n-乙基-5-氟-n-异丙基-2-((5-(2-((3r)-6-((2-甲氧基乙基)(甲基)氨基)-2-甲基庚-3-基)-2,6-二氮杂螺[3.4]辛-6-基)-1,2,4-三嗪-6-基)氧基)苯甲酰胺富马酸酯
[1395]
n-乙基-5-氟-n-异丙基-2-((5-(6-(6-((2-甲氧基乙基)(甲基)氨基)-2-甲基己-3-基)-2,6-二氮杂螺[3.4]辛-2-基)-1,2,4-三嗪-6-基)氧基)苯甲酰胺富马酸酯
[1396]
2-((5-(2-((3*r,5*r)-6-(二甲基氨基)-5-甲氧基-2-甲基己-3-基)-2,6-二氮杂螺[3.4]辛-6-基)-1,2,4-三嗪-6-基)氧基)-n-乙基-5-氟-n-异丙基苯甲酰胺富马酸酯
[1397]
2-((5-(2-((3*r,5*s)-6-(二甲基氨基)-5-甲氧基-2-甲基己-3-基)-2,6-二氮杂螺[3.4]辛-6-基)-1,2,4-三嗪-6-基)氧基)-n-乙基-5-氟-n-异丙基苯甲酰胺富马酸酯
[1398]
n-乙基-5-氟-2-((5-(2-((3*r,5*r)-5-羟基-6-(异丙基(甲基)氨基)-2-甲基己-3-基)-2,6-二氮杂螺[3.4]辛-6-基)-1,2,4-三嗪-6-基)氧基)-n-异丙基苯甲酰胺富马酸酯
[1399]
n-乙基-5-氟-2-((5-(2-((3*s,5*s)-5-羟基-6-(异丙基(甲基)氨基)-2-甲基己-3-基)-2,6-二氮杂螺[3.4]辛-6-基)-1,2,4-三嗪-6-基)氧基)-n-异丙基苯甲酰胺富马酸酯
[1400]
n-乙基-5-氟-2-((5-(2-((3*r,5*s)-5-羟基-6-(异丙基(甲基)氨基)-2-甲基己-3-基)-2,6-二氮杂螺[3.4]辛-6-基)-1,2,4-三嗪-6-基)氧基)-n-异丙基苯甲酰胺富马酸酯
[1401]
n-乙基-5-氟-2-((5-(2-((3*s,5*r)-5-羟基-6-(异丙基(甲基)氨基)-2-甲基己-3-基)-2,6-二氮杂螺[3.4]辛-6-基)-1,2,4-三嗪-6-基)氧基)-n-异丙基苯甲酰胺富马酸酯
[1402]
2-((5-(2-((3*r,5*r)-6-(二乙基氨基)-5-羟基-2-甲基己-3-基)-2,6-二氮杂螺[3.4]辛-6-基)-1,2,4-三嗪-6-基)氧基)-n-乙基-5-氟-n-异丙基苯甲酰胺富马酸酯
[1403]
2-((5-(2-((3*s,5*s)-6-(二乙基氨基)-5-羟基-2-甲基己-3-基)-2,6-二氮杂螺[3.4]辛-6-基)-1,2,4-三嗪-6-基)氧基)-n-乙基-5-氟-n-异丙基苯甲酰胺富马酸酯
[1404]
2-((5-(2-((3*s,5*r)-6-(二乙基氨基)-5-羟基-2-甲基己-3-基)-2,6-二氮杂螺[3.4]辛-6-基)-1,2,4-三嗪-6-基)氧基)-n-乙基-5-氟-n-异丙基苯甲酰胺富马酸酯
[1405]
2-((5-(2-((3*r,5*s)-6-(二乙基氨基)-5-羟基-2-甲基己-3-基)-2,6-二氮杂螺[3.4]辛-6-基)-1,2,4-三嗪-6-基)氧基)-n-乙基-5-氟-n-异丙基苯甲酰胺富马酸酯
[1406]
n-乙基-2-((5-(2-((3*r,5s)-6-(乙基(甲基)氨基)-5-羟基-2-甲基己-3-基)-2,6-二氮杂螺[3.4]辛-6-基)-1,2,4-三嗪-6-基)氧基)-5-氟-n-异丙基苯甲酰胺富马酸酯
[1407]
n-乙基-2-((5-(2-((3*s,5s)-6-(乙基(甲基)氨基)-5-羟基-2-甲基己-3-基)-2,6-二氮杂螺[3.4]辛-6-基)-1,2,4-三嗪-6-基)氧基)-5-氟-n-异丙基苯甲酰胺富马酸酯
[1408]
n-乙基-2-((5-(2-((3*r,5r)-6-(乙基(甲基)氨基)-5-羟基-2-甲基己-3-基)-2,6-二氮杂螺[3.4]辛-6-基)-1,2,4-三嗪-6-基)氧基)-5-氟-n-异丙基苯甲酰胺富马酸酯
[1409]
n-乙基-5-氟-2-((5-(2-((3*r,5s)-5-羟基-6-((2-甲氧基乙基)(甲基)氨基)-2-甲基己-3-基)-2,6-二氮杂螺[3.4]辛-6-基)-1,2,4-三嗪-6-基)氧基)-n-异丙基苯甲酰胺富马酸酯
[1410]
n-乙基-5-氟-2-((5-(2-((3*s,5s)-5-羟基-6-((2-甲氧基乙基)(甲基)氨基)-2-甲基己-3-基)-2,6-二氮杂螺[3.4]辛-6-基)-1,2,4-三嗪-6-基)氧基)-n-异丙基苯甲酰胺富马酸酯
[1411]
n-乙基-5-氟-2-((5-(2-((3*r,5r)-5-羟基-6-((2-甲氧基乙基)(甲基)氨基)-2-甲基己-3-基)-2,6-二氮杂螺[3.4]辛-6-基)-1,2,4-三嗪-6-基)氧基)-n-异丙基苯甲酰胺富马酸酯
[1412]
n-乙基-5-氟-2-((5-(2-((3*s,5r)-5-羟基-6-((2-甲氧基乙基)(甲基)氨基)-2-甲基己-3-基)-2,6-二氮杂螺[3.4]辛-6-基)-1,2,4-三嗪-6-基)氧基)-n-异丙基苯甲酰胺富马酸酯
[1413]
2-((5-(2-((3*r,5*r)-6-(二甲基氨基)-5-羟基-2-甲基己-3-基)-2,6-二氮杂螺[3.4]辛-6-基)-1,2,4-三嗪-6-基)氧基)-5-氟-n,n-二异丙基苯甲酰胺富马酸酯
[1414]
2-((5-(2-((3*r,5*s)-6-(二甲基氨基)-5-羟基-2-甲基己-3-基)-2,6-二氮杂螺[3.4]辛-6-基)-1,2,4-三嗪-6-基)氧基)-5-氟-n,n-二异丙基苯甲酰胺富马酸酯
[1415]
2-((5-(2-((3*s,5*s)-6-(二甲基氨基)-5-羟基-2-甲基己-3-基)-2,6-二氮杂螺[3.4]辛-6-基)-1,2,4-三嗪-6-基)氧基)-5-氟-n,n-二异丙基苯甲酰胺富马酸酯
[1416]
2-((5-(2-((3*s,5*r)-6-(二甲基氨基)-5-羟基-2-甲基己-3-基)-2,6-二氮杂螺[3.4]辛-6-基)-1,2,4-三嗪-6-基)氧基)-5-氟-n,n-二异丙基苯甲酰胺富马酸酯
[1417]
2-((5-(2-((3*s,5*s)-6-(二甲基氨基)-5-甲氧基-2-甲基己-3-基)-2,6-二氮杂螺[3.4]辛-6-基)-1,2,4-三嗪-6-基)氧基)-n-乙基-5-氟-n-异丙基苯甲酰胺富马酸酯
[1418]
2-((5-(2-((3*s,5*r)-6-(二甲基氨基)-5-甲氧基-2-甲基己-3-基)-2,6-二氮杂螺[3.4]辛-6-基)-1,2,4-三嗪-6-基)氧基)-n-乙基-5-氟-n-异丙基苯甲酰胺富马酸酯
[1419]
n-乙基-5-氟-2-((5-(2-(5-羟基-6-((2-甲氧基乙基)(甲基)氨基)-2,5-二甲基
己-3-基)-2,6-二氮杂螺[3.4]辛-6-基)-1,2,4-三嗪-6-基)氧基)-n-异丙基苯甲酰胺富马酸酯
[1420]
n-乙基-5-氟-2-((5-(2-((3*r,5*r)-5-羟基-2-甲基-6-(甲基(丙基)氨基)己-3-基)-2,6-二氮杂螺[3.4]辛-6-基)-1,2,4-三嗪-6-基)氧基)-n-异丙基苯甲酰胺富马酸酯
[1421]
n-乙基-5-氟-2-((5-(2-((3*s,5*s)-5-羟基-2-甲基-6-(甲基(丙基)氨基)己-3-基)-2,6-二氮杂螺[3.4]辛-6-基)-1,2,4-三嗪-6-基)氧基)-n-异丙基苯甲酰胺富马酸酯
[1422]
2-((5-(2-((3*r,5*s)-6-(乙基(甲基)氨基)-5-羟基-2-甲基己-3-基)-2,6-二氮杂螺[3.4]辛-6-基)-1,2,4-三嗪-6-基)氧基)-5-氟-n,n-二异丙基苯甲酰胺富马酸酯
[1423]
2-((5-(2-((3*s,5*s)-6-(乙基(甲基)氨基)-5-羟基-2-甲基己-3-基)-2,6-二氮杂螺[3.4]辛-6-基)-1,2,4-三嗪-6-基)氧基)-5-氟-n,n-二异丙基苯甲酰胺富马酸酯
[1424]
(r)-2-((3-氯-5-(2-(6-((2-甲氧基乙基)(甲基)氨基)-2-甲基己-3-基)-2,6-二氮杂螺[3.4]辛-6-基)-1,2,4-三嗪-6-基)氧基)-n-乙基-5-氟-n-异丙基苯甲酰胺富马酸酯
[1425]
(r)-n-乙基-5-氟-n-异丙基-2-((5-(2-(6-((2-甲氧基乙基)氨基)-2-甲基己-3-基)-2,6-二氮杂螺[3.4]辛-6-基)-1,2,4-三嗪-6-基)氧基)苯甲酰胺富马酸酯
[1426]
通过针对化合物102的以上所述的类似方法合成以下化合物
[1427]
[1428]
[1429]
[1430]
[1431]
[1432]
[1433]
[1434]
[1435]
[1436]
[1437]
[1438]
[1439]
[1440]
[1441]
[1442]
[1443]
[1444]
[1445]
[1446]
[1447]
[1448][1449]
化合物6
[1450]
(r)-2-((5-(2-(6-乙酰胺基-2-甲基己-3-基)-2,6-二氮杂螺[3.4]辛-6-基)-1,2,4-三嗪-6-基)氧基)-n-乙基-5-氟-n-异丙基苯甲酰胺甲酸酯
[1451][1452]
向在0℃下冷却的(r)-2-((5-(2-(6-氨基-2-甲基己-3-基)-2,6-二氮杂螺[3.4]辛-6-基)-1,2,4-三嗪-6-基)氧基)-n-乙基-5-氟-n-异丙基苯甲酰胺甲酸酯(化合物1)(30mg，0.057mmol)和tea(60ul，0.43mmol)在dcm(1ml)中的溶液中添加ac2o(20ul，0.21mmol)，将所得混合物在rt下在n2气氛下搅拌0.5h。将反应混合物在减压下浓缩并将残余物通过制备型hplc使用welch xtimate(柱：c18 150x25mm 5um；洗脱液：acn/h2o(0.225％fa)从30％至50％(v/v))纯化，以得到呈白色固体的标题化合物(3.31mg，9％产率)。
[1453]
lc-ms(esi)(方法5)：r
t
＝0.633min，m/z发现值570.4[m+h]
+
。
[1454]
sfc(方法5)：r
t
＝1.191min。
[1455]
化合物7、29、34
[1456]
(s)-2-((5-(2-(6-乙酰胺基-2-甲基己-3-基)-2,6-二氮杂螺[3.4]辛-6-基)-1,2,4-三嗪-6-基)氧基)-n-乙基-5-氟-n-异丙基苯甲酰胺
[1457]
2-((5-(2-(1-乙酰胺基-4-甲基戊-3-基)-2,6-二氮杂螺[3.4]辛-6-基)-1,2,4-三嗪-6-基)氧基)-n-乙基-5-氟-n-异丙基苯甲酰胺
[1458]
(*r)-2-((5-(2-(6-乙酰胺基-2,6-二甲基庚-3-基)-2,6-二氮杂螺[3.4]辛-6-基)-1,2,4-三嗪-6-基)氧基)-n-乙基-5-氟-n-异丙基苯甲酰胺
[1459]
通过针对化合物6的以上所述的类似方法合成以下化合物
[1460][1461]
化合物8
[1462]
(r)-n-乙基-5-氟-n-异丙基-2-((5-(2-(2-甲基-6-(3-甲基脲基)己-3-基)-2,6-二氮杂螺[3.4]辛-6-基)-1,2,4-三嗪-6-基)氧基)苯甲酰胺
[1463]
向在0℃下冷却的(r)-2-((5-(2-(6-氨基-2-甲基己-3-基)-2,6-二氮杂螺[3.4]辛-6-基)-1,2,4-三嗪-6-基)氧基)-n-乙基-5-氟-n-异丙基苯甲酰胺甲酸酯(化合物1)(70mg，0.12mmol)和tea(0.35ml，2.5mmol)在dcm(10ml)中的溶液中添加甲基氨基甲酰氯(18mg，0.19mmo)，并且将所得混合物在0℃下搅拌2h。将反应混合物在减压下浓缩并将残余物通过制备型hplc经菲罗门gemini-nx(柱：150x30mm5um；洗脱液：acn/h2o(0.04％氨+10mm nh4hco3)从35％至65％，v/v)纯化，以得到呈白色固体的标题化合物(50mg，70％产率)。
[1464]
lc-ms(esi)(方法1)：r
t
＝3.34min，m/z发现值585.3[m+h]
+
。
[1465]
sfc(方法6)：r
t
＝2.222min。
[1466]
化合物9
[1467]
(s)-n-乙基-5-氟-n-异丙基-2-((5-(2-(2-甲基-6-(3-甲基脲基)己-3-基)-2,6-二氮杂螺[3.4]辛-6-基)-1,2,4-三嗪-6-基)氧基)苯甲酰胺
[1468]
通过针对化合物8的以上所述的类似方法合成以下化合物
[1469][1470]
化合物10
[1471]
甲基(r)-(4-(6-(6-(2-(乙基(异丙基)氨基甲酰基)-4-氟苯氧基)-1,2,4-三嗪-5-基)-2,6-二氮杂螺[3.4]辛-2-基)-5-甲基己基)氨基甲酸酯
[1472][1473]
向在0℃下冷却的(r)-2-((5-(2-(6-氨基-2-甲基己-3-基)-2,6-二氮杂螺[3.4]辛-6-基)-1,2,4-三嗪-6-基)氧基)-n-乙基-5-氟-n-异丙基苯甲酰胺盐酸盐(化合物65)(0.100g，粗品)在thf/h2o(2ml/2ml)中的混合物中添加2m naoh(0.15ml，0.30mmol)和甲基氯甲酸酯(0.030g，0.317mmol，在0.1ml dcm中)。将所得混合物在0℃下搅拌0.5h。将混合物用水(10ml)和饱和水性nahco3(15ml)稀释，用etoac(15ml x 3)进一步萃取。将合并的有机层经(na2so4)干燥，过滤并在真空中蒸发以给出粗产物，将该粗产物通过制备型hplc使用菲罗门gemini nx(柱：c18 75x30mm 3um；洗脱液：acn/h2o(0.05％氨+10mm nh4hco3)35％至65％(v/v))进一步纯化，以得到呈粘性油状物的标题化合物(11.53mg)。
[1474]
lc-ms(esi)(方法1)：r
t
＝3.283min，m/z发现值586.3[m+h]
+
。
[1475]
化合物22
[1476]
甲基(r)-(4-(6-(6-(2-(乙基(异丙基)氨基甲酰基)-4-氟苯氧基)-1,2,4-三嗪-5-基)-2,6-二氮杂螺[3.4]辛-2-基)-5-甲基己基)(甲基)氨基甲酸酯
[1477]
通过针对化合物10的以上所述的类似方法合成以下化合物
[1478]
化合物11
[1479]
(r)-n-乙基-5-氟-n-异丙基-2-((5-(2-(6-((2-甲氧基乙基)氨基)-2-甲基己-3-基)-2,6-二氮杂螺[3.4]辛-6-基)-1,2,4-三嗪-6-基)氧基)苯甲酰胺
[1480][1481]
将(r)-2-((5-(2-(6-氨基-2-甲基己-3-基)-2,6-二氮杂螺[3.4]辛-6-基)-1,2,4-三嗪-6-基)氧基)-n-乙基-5-氟-n-异丙基苯甲酰胺(化合物64)(120mg，粗品)、1-溴-2-甲氧基乙烷(32mg，0.23mmol)、cs2co3(222mg，0.681mmol)、nai(102mg，0.680mmol)在dmf(1ml)中的混合物在80℃下经微波辐射搅拌1h。在冷却至rt后，将混合物用h2o(10ml)稀释并用etoac(3x10ml)萃取。将合并的有机层用h2o(10ml)洗涤，经na2so4干燥，过滤并在减压下浓缩以得到粗产物，将该粗产物通过hplc经菲罗门gemini-nx(柱：150x30mm 5μm；洗脱液：acn/h2o(10mm nh4hco3)从51％至71％(v/v))进一步纯化并通过sfc经大赛璐chiralcel od-h(柱：250x30mm 5um；洗脱液：在etoh(0.1％v/v氨)25/25，v/v中的超临界co2)进一步纯化，以得到呈黄色固体的标题化合物(5.13mg，96％纯度)。
[1482]
lc-ms(esi)(方法1)：r
t
＝2.997min，m/z发现值586.3[m+h]
+
。
[1483]
化合物28、90、93、287、149、226、257、228
[1484]
(s)-n-乙基-5-氟-n-异丙基-2-((5-(2-(6-((2-甲氧基乙基)(甲基)氨基)-2-甲基己-3-基)-2,6-二氮杂螺[3.4]辛-6-基)-1,2,4-三嗪-6-基)氧基)苯甲酰胺
[1485]
(r)-2-((5-(2-(6-(双(2-甲氧基乙基)氨基)-2-甲基己-3-基)-2,6-二氮杂螺[3.4]辛-6-基)-1,2,4-三嗪-6-基)氧基)-n-乙基-5-氟-n-异丙基苯甲酰胺甲酸酯
[1486]
5-氟-n,n-二异丙基-2-((5-(2-(6-((2-甲氧基乙基)(甲基)氨基)-2-甲基己-3-基)-2,6-二氮杂螺[3.4]辛-6-基)-1,2,4-三嗪-6-基)氧基)苯甲酰胺甲酸酯
[1487]
(r)-2-((5-(2-(6-((2,2-二甲氧基乙基)氨基)-2-甲基己-3-基)-2,6-二氮杂螺[3.4]辛-6-基)-1,2,4-三嗪-6-基)氧基)-n-乙基-5-氟-n-异丙基苯甲酰胺
[1488]
(r)-2-((5-(2-(6-((2,2-二甲氧基乙基)(甲基)氨基)-2-甲基己-3-基)-2,6-二氮杂螺[3.4]辛-6-基)-1,2,4-三嗪-6-基)氧基)-n-乙基-5-氟-n-异丙基苯甲酰胺
[1489]
(*r)-n-乙基-5-氟-n-异丙基-2-((5-(2-(1-((2-甲氧基乙基)氨基)-4-甲基戊-3-基)-2,6-二氮杂螺[3.4]辛-6-基)-1,2,4-三嗪-6-基)氧基)苯甲酰胺
[1490]
(r)-2-((5-(2-(6-((2-乙氧基乙基)(甲基)氨基)-2-甲基己-3-基)-2,6-二氮杂螺[3.4]辛-6-基)-1,2,4-三嗪-6-基)氧基)-n-乙基-5-氟-n-异丙基苯甲酰胺
[1491]
(*r)-n-乙基-5-氟-n-异丙基-2-((5-(2-(1-(异丙基氨基)-4-甲基戊-3-基)-2,6-二氮杂螺[3.4]辛-6-基)-1,2,4-三嗪-6-基)氧基)苯甲酰胺
[1492]
通过针对化合物11的以上所述的类似方法合成以下化合物
[1493]
[1494]
[1495][1496]
化合物12
[1497]
(r)-2-((5-(2-(6-((2-氰基乙基)氨基)-2-甲基己-3-基)-2,6-二氮杂螺[3.4]辛-6-基)-1,2,4-三嗪-6-基)氧基)-n-乙基-5-氟-n-异丙基苯甲酰胺
[1498][1499]
在0℃下，向(r)-2-((5-(2-(6-氨基-2-甲基己-3-基)-2,6-二氮杂螺[3.4]辛-6-基)-1,2,4-三嗪-6-基)氧基)-n-乙基-5-氟-n-异丙基苯甲酰胺盐酸盐(化合物65)(260mg，粗品)和diea(200mg，1.98mmol)在meoh(15ml)中的溶液中添加丙烯腈(580mg，10.9mmol)。添加后，将反应混合物在rt下搅拌18h。将反应混合物在真空中浓缩并将残余物通过制备型hplc经boston prime(柱：c18 150x30mm5um，流动相a：水(0.04％氨+10mm nh4hco3)，流动相b：acn，流速：25ml/min，梯度条件b/a从40％至70％)纯化，以得到呈无色油状物的标题化合物(120mg)。
3-基)-2,6-二氮杂螺[3.4]辛-6-基)-1,2,4-三嗪-6-基)氧基)苯甲酰胺(化合物11)(40.0mg，0.068mmol)、甲醛(55.4mg，0.683mol，水中的37％)和acoh(8.2mg，0.137mmol)在无水meoh(2ml)中的混合物在45℃下搅拌1h。然后，将nabh3cn(8.6mg，0.137mmol)添加至混合物并将所得混合物在45℃下再搅拌1h。在冷却至rt后，将反应混合物用饱和水性nahco3(40ml)处理以调节ph值至约8，并用dcm(20ml x 3)进一步萃取。将合并的有机层经无水na2so4干燥，过滤并在减压下浓缩以给出粗品，将该粗品通过制备型hplc经boston prime(柱：c18 150x30mm 5um，流动相a：h2o(0.04％氨+10mm nh4hco3)，流动相b：acn，流速：25ml/min，梯度条件b/a从50％至80％(50％b至80％b))纯化，以得到呈黄色油状物的标题化合物(9.62mg，99.10％纯度，23.3％产率)。
[1512]
制备方法b：
[1513][1514]
向n-乙基-5-氟-n-异丙基-2-((5-(2-(2-甲基-6-(甲基氨基)己-3-基)-2,6-二氮杂螺[3.4]辛-6-基)-1,2,4-三嗪-6-基)氧基)苯甲酰胺盐酸盐(化合物67)(480mg，粗品)、k2co3(700mg，5.07mmol)和nai(400mg，2.67mmol)在dmf(5ml)中的混合物中添加1-溴-2-甲氧基乙烷(230mg，1.65mmol)。将所得混合物在50℃下搅拌过夜。在冷却至rt后，将反应混合物用h2o(30ml)淬灭，并用dcm(30ml x 3)萃取。将合并的有机层用盐水(30ml x 3)洗涤，经na2so4干燥，过滤并浓缩以给出粗残余物。将残余物通过fcc(dcm/meoh＝10:1)纯化，以得到呈黄色油状物的n-乙基-5-氟-n-异丙基-2-((5-(2-(6-((2-甲氧基乙基)(甲基)氨基)-2-甲基己-3-基)-2,6-二氮杂螺[3.4]辛-6-基)-1,2,4-三嗪-6-基)氧基)苯甲酰胺(化合物68)(250mg，48％产率)。
[1515]
将n-乙基-5-氟-n-异丙基-2-((5-(2-(6-((2-甲氧基乙基)(甲基)氨基)-2-甲基己-3-基)-2,6-二氮杂螺[3.4]辛-6-基)-1,2,4-三嗪-6-基)氧基)苯甲酰胺(化合物68)(960mg，通过方法b获得的几个批次合并的)首先通过sfc使用大赛璐chiralpak ig(柱：250x30mm 10um；流动相：a：超临界co2，b：etoh(0.1％氨)，a:b＝40:60，60ml/min)分离并通过制备型hplc使用boston prime(柱：150x30mm5um，流动相a：h2o(10mm nh4hco3)，流动相b：acn，流速：25ml/min，梯度条件b/a从55％至85％)进一步纯化，以得到呈无色油状物的标题化合物(270mg)。
[1516]1h nmr(400mhz，甲醇-d4)：δ＝8.40(s,1h),7.47-7.32(m,1h),7.30-7.10(m,2h),4.24-4.01(m,2h),3.89-3.60(m,3h),3.48(br s,3h),2.63-2.51(m,2h),2.43-2.32(m,2h),2.29-2.07(m,6h),1.86-1.72(m,1h),1.62-1.44(m,2h),1.39-1.02(m,10h),0.99-0.66(m,9h)。一些质子被溶剂峰隐藏且未报道。
[1517]
lcms(esi)(方法2)：r
t
＝1.965min，m/z发现值600.3[m+h]
+
。
[1518]
sfc(方法11)：r
t
＝4.904min。
[1519]
制备方法c：
[1520][1521]
将(r)-2-((3-氯-5-(2-(6-((2-甲氧基乙基)(甲基)氨基)-2-甲基己-3-基)-2,6-二氮杂螺[3.4]辛-6-基)-1,2,4-三嗪-6-基)氧基-n-乙基-5-氟-n-异丙基苯甲酰胺(化合物393)(在meoh中的163.93g 60.1wt％溶液，100g校正的化合物393)、钯炭(10g)和meoh(316g)的甲醇溶液在20℃至30℃下在氢气氛(0.20至0.30mpa)下搅拌18h。将混合物经硅藻土(75g)过滤并将滤饼用meoh(158g)洗涤。将滤液在减压下浓缩(≤40℃)至约3个体积，然后用异丙基乙酸酯(ipac，870g)冲洗浓缩至约3个体积。然后将混合物用ipac(696g)稀释并添加20％na2co3水溶液(500g)。将混合物搅拌30至60min。去除水层。将有机层用水(500g)洗涤然后在减压下《45℃浓缩至约3个体积。以约90％测定产率得到呈在ipac中的48.1wt％溶液的标题中间体。
[1522]
化合物70
[1523]
(r)-n-乙基-5-氟-n-异丙基-2-((5-(2-(6-((2-甲氧基乙基)(甲基)氨基)-2-甲基己-3-基)-2,6-二氮杂螺[3.4]辛-6-基)-1,2,4-三嗪-6-基)氧基)苯甲酰胺草酸酯
[1524][1525]
向(r)-n-乙基-5-氟-n-异丙基-2-((5-(2-(6-((2-甲氧基乙基)(甲基)氨基)-2-甲基己-3-基)-2,6-二氮杂螺[3.4]辛-6-基)-1,2,4-三嗪-6-基)氧基)苯甲酰胺(化合物27)(270mg，0.450mmol)在20ml acn(20ml)中的溶液中添加草酸(81.0mg，0.900mmol)。添加后，将反应混合物在rt下搅拌1h。然后，浓缩反应混合物，将残余物在acn和去离子水中再溶解，并冻干以得到呈白色固体的标题化合物(350mg)。
[1526]1h nmr(400mhz，甲醇-d4)：δ＝8.48(s,1h),7.52-7.11(m,3h),4.54-3.64(m,12h),3.40-3.34(m,5h),3.23-3.13(m,2h),2.90(s,3h),2.54-2.27(m,2h),2.19-2.03(m,1h),
1.97-1.77(m,2h),1.75-1.50(m,2h),1.35-0.65(m,17h)。
[1527]1h nmr(400mhz，dmso-d6)：δ＝8.51(s,1h),7.51-7.29(m,3h),4.29-3.34(m,12h),3.23-2.84(m,7h),2.70(s,3h),2.35-2.09(m,2h),2.05-1.85(m,1h),1.81-1.58(m,2h),1.56-1.33(m,2h),1.18-0.60(m,17h)。
[1528]
lcms(esi)(方法2)：r
t
＝1.969min，m/z发现值600.4[m+h]
+
。
[1529]
化合物70a的制备
[1530][1531]
在20℃至25℃下，向化合物27(207.90g的ipac中的48wt％溶液，100g的活性化合物27)在ipac(360g)中的溶液中添加etoh(63g)。然后将溶液用在etoh(49.5g)中的浓缩hcl(32.9g)处理约15min。将混合物用结晶化合物70a种子(2g，2％种子负载)接种然后老化18h。在20℃至25℃之间，将ipac(870g)经4h缓慢添加并将浆液搅拌另外的18h。在冷却至约5℃后，将产物过滤，用ipac(522g)洗涤并在20℃-30℃下在真空中干燥以得到呈白色固体的弱结晶的化合物70a(91.0％产率，115.4g)。(注意：反应中使用的少量种子材料通过类似的反应方案以小规模获得)
[1532]
重结晶：将弱结晶的化合物70a(100g)，etoh(166g)、纯水(21.5g)和ipac(178g)的溶液在20℃至30℃下搅拌0.5-2h以得到澄清溶液。经1至2h滴加额外的ipac(522g)，并且然后用结晶化合物70a种子(2g，2％种子负载)接种混合物。然后将混合物老化18至20h，在20℃至30℃之间，将ipac(348g)经12h缓慢添加并将浆液搅拌另外的55至60h。过滤产物，用ipac(158g)洗涤并在20℃至30℃下在真空中干燥以得到呈白色固体的化合物70a(85％产率，85.0g，净)。
[1533]1hnmr(dmso-d6，400mhz)：δ＝11.60(1h,brs),10.8(1h,brs),8.52(1h,s),7.36(3h,m),3.97-4.20(7h,m),3.64-3.71(4h,m),3.47(7h,m),3.25(2h,m),3.05(3h,m),2.73(3h,s),2.10-2.45(1h,m),1.99(1h,m),1.78(2h,m),1.55(2h,m),0.83-1.12(12h,m),0.70(2h,m)。
[1534]
lcms(方法7)：r
t
＝0.669min，m/z发现值600.5[m+h]
+
。
[1535]
化合物83、84、94、95、88、89、99、100、250、251、252、254、258、396、402
[1536]
(*r)-n-乙基-5-氟-n-异丙基-2-((4-(2-(6-((2-甲氧基乙基)(甲基)氨基)-2-甲基己-3-基)-2,6-二氮杂螺[3.4]辛-6-基)哒嗪-3-基)氧基)苯甲酰胺草酸酯
[1537]
(*s)-n-乙基-5-氟-n-异丙基-2-((4-(2-(6-((2-甲氧基乙基)(甲基)氨基)-2-甲基己-3-基)-2,6-二氮杂螺[3.4]辛-6-基)哒嗪-3-基)氧基)苯甲酰胺草酸酯
[1538]
(*r)-5-氟-n,n-二异丙基-2-((5-(2-(6-((2-甲氧基乙基)(甲基)氨基)-2-甲基己-3-基)-2,6-二氮杂螺[3.4]辛-6-基)-1,2,4-三嗪-6-基)氧基)苯甲酰胺草酸酯
[1539]
(*s)-5-氟-n,n-二异丙基-2-((5-(2-(6-((2-甲氧基乙基)(甲基)氨基)-2-甲基
己-3-基)-2,6-二氮杂螺[3.4]辛-6-基)-1,2,4-三嗪-6-基)氧基)苯甲酰胺草酸酯
[1540]
(*r)-5-氟-n,n-二异丙基-2-((4-(2-(6-((2-甲氧基乙基)(甲基)氨基)-2-甲基己-3-基)-2,6-二氮杂螺[3.4]辛-6-基)哒嗪-3-基)氧基)苯甲酰胺草酸酯
[1541]
(*s)-5-氟-n,n-二异丙基-2-((4-(2-(6-((2-甲氧基乙基)(甲基)氨基)-2-甲基己-3-基)-2,6-二氮杂螺[3.4]辛-6-基)哒嗪-3-基)氧基)苯甲酰胺草酸酯
[1542]
(*r)-5-氟-n,n-二异丙基-2-((5-(2-(6-((2-甲氧基乙基)氨基)-2-甲基己-3-基)-2,6-二氮杂螺[3.4]辛-6-基)-1,2,4-三嗪-6-基)氧基)苯甲酰胺草酸酯
[1543]
(*s)-5-氟-n,n-二异丙基-2-((5-(2-(6-((2-甲氧基乙基)氨基)-2-甲基己-3-基)-2,6-二氮杂螺[3.4]辛-6-基)-1,2,4-三嗪-6-基)氧基)苯甲酰胺草酸酯
[1544]
n-乙基-5-氟-n-异丙基-2-((5-(2-((r)-6-(((*r)-2-甲氧基丙基)(甲基)氨基)-2-甲基己-3-基)-2,6-二氮杂螺[3.4]辛-6-基)-1,2,4-三嗪-6-基)氧基)苯甲酰胺草酸酯
[1545]
n-乙基-5-氟-n-异丙基-2-((5-(2-((r)-6-(((*s)-2-甲氧基丙基)(甲基)氨基)-2-甲基己-3-基)-2,6-二氮杂螺[3.4]辛-6-基)-1,2,4-三嗪-6-基)氧基)苯甲酰胺草酸酯
[1546]
n-乙基-5-氟-n-异丙基-2-((5-(2-((3r)-6-((2-甲氧基丙基)(甲基)氨基)-2-甲基己-3-基)-2,6-二氮杂螺[3.4]辛-6-基)-1,2,4-三嗪-6-基)氧基)苯甲酰胺草酸酯
[1547]
n-乙基-5-氟-n-异丙基-2-((5-(2-((3s)-6-((2-甲氧基丙基)(甲基)氨基)-2-甲基己-3-基)-2,6-二氮杂螺[3.4]辛-6-基)-1,2,4-三嗪-6-基)氧基)苯甲酰胺草酸酯
[1548]
(r)-2-((5-(2-(6-((2-乙氧基乙基)(甲基)氨基)-2-甲基己-3-基)-2,6-二氮杂螺[3.4]辛-6-基)-1,2,4-三嗪-6-基)氧基)-n-乙基-5-氟-n-异丙基苯甲酰胺草酸酯
[1549]
(*r)-2-((5-(2-(6-(二甲基氨基)-2-甲基己-3-基)-2,6-二氮杂螺[3.4]辛-6-基)-1,2,4-三嗪-6-基)氧基)-5-氟-n,n-二异丙基苯甲酰胺草酸酯
[1550]
(r)-n-(乙基-13
c2)-5-氟-2-((5-(2-(6-((2-甲氧基乙基)(甲基)氨基)-2-甲基己-3-基)-2,6-二氮杂螺[3.4]辛-6-基)-1,2,4-三嗪-6-基)氧基)-n-(丙-2-基-13
c3)苯甲酰胺草酸酯
[1551]
通过针对化合物70的以上所述的类似方法合成以下化合物
[1552]
[1553]
[1554]
[1555][1556]
化合物13、16、71、136、139、153、156、160、164、166、169、173、274、275、276、279、282、285、178、180、190、192、194、196、198、200、202、204、310、311、312、313、318、329、360、375、376、379、380、383、388、411
[1557]
(r)-2-((5-(2-(6-((2-氰基乙基)(甲基)氨基)-2-甲基己-3-基)-2,6-二氮杂螺[3.4]辛-6-基)-1,2,4-三嗪-6-基)氧基)-n-乙基-5-氟-n-异丙基苯甲酰胺
[1558]
(r)-2-((5-(2-(6-((2,2-二氟乙基)(甲基)氨基)-2-甲基己-3-基)-2,6-二氮杂螺[3.4]辛-6-基)-1,2,4-三嗪-6-基)氧基)-n-乙基-5-氟-n-异丙基苯甲酰胺
[1559]
(r)-n-乙基-2-((5-(2-(6-(乙基(2-甲氧基乙基)氨基)-2-甲基己-3-基)-2,6-二氮杂螺[3.4]辛-6-基)-1,2,4-三嗪-6-基)氧基)-5-氟-n-异丙基苯甲酰胺
[1560]
(r)-n-乙基-5-氟-n-异丙基-2-((5-(2-(6-((2-甲氧基-2-甲基丙基)(甲基)氨基)-2-甲基己-3-基)-2,6-二氮杂螺[3.4]辛-6-基)-1,2,4-三嗪-6-基)氧基)苯甲酰胺
[1561]
(r)-n-乙基-5-氟-2-((5-(2-(6-((2-羟基-2-甲基丙基)(甲基)氨基)-2-甲基己-3-基)-2,6-二氮杂螺[3.4]辛-6-基)-1,2,4-三嗪-6-基)氧基)-n-异丙基苯甲酰胺
[1562]
n-乙基-5-氟-n-异丙基-2-((5-(2-((r)-6-(((r)-1-甲氧基丙-2-基)(甲基)氨基)-2-甲基己-3-基)-2,6-二氮杂螺[3.4]辛-6-基)-1,2,4-三嗪-6-基)氧基)苯甲酰胺
[1563]
n-乙基-5-氟-n-异丙基-2-((5-(2-((r)-6-(((s)-1-甲氧基丙-2-基)(甲基)氨基)-2-甲基己-3-基)-2,6-二氮杂螺[3.4]辛-6-基)-1,2,4-三嗪-6-基)氧基)苯甲酰胺
[1564]
(r)-2-((5-(2-(6-((1,3-二甲氧基丙-2-基)(甲基)氨基)-2-甲基己-3-基)-2,6-二氮杂螺[3.4]辛-6-基)-1,2,4-三嗪-6-基)氧基)-n-乙基-5-氟-n-异丙基苯甲酰胺
[1565]
n-乙基-5-氟-2-((5-(2-((r)-6-(((r)-1-羟基-3-甲氧基丙-2-基)(甲基)氨基)-2-甲基己-3-基)-2,6-二氮杂螺[3.4]辛-6-基)-1,2,4-三嗪-6-基)氧基)-n-异丙基苯甲酰胺
[1566]
n-乙基-5-氟-2-((5-(2-((r)-6-(((s)-1-羟基-3-甲氧基丙-2-基)(甲基)氨基)-2-甲基己-3-基)-2,6-二氮杂螺[3.4]辛-6-基)-1,2,4-三嗪-6-基)氧基)-n-异丙基苯甲酰胺
[1567]
n-乙基-5-氟-2-((5-(2-((3r)-6-((3-羟基-2-甲氧基丙基)(甲基)氨基)-2-甲基己-3-基)-2,6-二氮杂螺[3.4]辛-6-基)-1,2,4-三嗪-6-基)氧基)-n-异丙基苯甲酰胺
[1568]
2-((5-(2-((3r)-6-((2,3-二甲氧基丙基)(甲基)氨基)-2-甲基己-3-基)-2,6-二氮杂螺[3.4]辛-6-基)-1,2,4-三嗪-6-基)氧基)-n-乙基-5-氟-n-异丙基苯甲酰胺
[1569]
(*r)-n-乙基-5-氟-2-((5-(2-(1-((3-羟基丙基)(甲基)氨基)-4-甲基戊-3-基)-2,6-二氮杂螺[3.4]辛-6-基)-1,2,4-三嗪-6-基)氧基)-n-异丙基苯甲酰胺
[1570]
(*r)-n-乙基-5-氟-n-异丙基-2-((5-(2-(1-((3-甲氧基丙基)(甲基)氨基)-4-甲基戊-3-基)-2,6-二氮杂螺[3.4]辛-6-基)-1,2,4-三嗪-6-基)氧基)苯甲酰胺
[1571]
(*r)-n-乙基-5-氟-n-异丙基-2-((5-(2-(1-((2-甲氧基乙基)(甲基)氨基)-4-甲基戊-3-基)-2,6-二氮杂螺[3.4]辛-6-基)-1,2,4-三嗪-6-基)氧基)苯甲酰胺
[1572]
(*r)-2-((5-(2-(1-((3-氨基-3-氧代丙基)(甲基)氨基)-4-甲基戊-3-基)-2,6-二氮杂螺[3.4]辛-6-基)-1,2,4-三嗪-6-基)氧基)-n-乙基-5-氟-n-异丙基苯甲酰胺
[1573]
n-乙基-5-氟-2-((5-(2-((r)-6-(((r)-2-羟基-3-甲氧基丙基)(甲基)氨基)-2-甲基己-3-基)-2,6-二氮杂螺[3.4]辛-6-基)-1,2,4-三嗪-6-基)氧基)-n-异丙基苯甲酰胺
[1574]
n-乙基-5-氟-2-((5-(2-((r)-6-(((s)-2-羟基-3-甲氧基丙基)(甲基)氨基)-2-甲基己-3-基)-2,6-二氮杂螺[3.4]辛-6-基)-1,2,4-三嗪-6-基)氧基)-n-异丙基苯甲酰胺甲酸酯
[1575]
2-((5-(2-((3r)-6-((4-(二甲基氨基)-4-氧代丁-2-基)(甲基)氨基)-2-甲基己-3-基)-2,6-二氮杂螺[3.4]辛-6-基)-1,2,4-三嗪-6-基)氧基)-n-乙基-5-氟-n-异丙基苯甲酰胺
[1576]
2-((5-(2-((3r)-6-((3-(二甲基氨基)-2-甲基-3-氧代丙基)(甲基)氨基)-2-甲基己-3-基)-2,6-二氮杂螺[3.4]辛-6-基)-1,2,4-三嗪-6-基)氧基)-n-乙基-5-氟-n-异丙基苯甲酰胺
[1577]
n-乙基-5-氟-n-异丙基-2-((5-(2-((r)-2-甲基-6-(甲基((r)-4-(甲基氨基)-4-氧代丁-2-基)氨基)己-3-基)-2,6-二氮杂螺[3.4]辛-6-基)-1,2,4-三嗪-6-基)氧基)苯甲
基)-2,6-二氮杂螺[3.4]辛-6-基)-1,2,4-三嗪-6-基)氧基)-5-氟-n-异丙基苯甲酰胺
[1595]
n-乙基-2-((5-(2-((3*s,5*r)-6-(乙基(甲基)氨基)-5-甲氧基-2-甲基己-3-基)-2,6-二氮杂螺[3.4]辛-6-基)-1,2,4-三嗪-6-基)氧基)-5-氟-n-异丙基苯甲酰胺
[1596]
n-乙基-5-氟-2-((5-(2-(5-羟基-2-甲基-6-(甲基(丙基)氨基)己-3-基)-2,6-二氮杂螺[3.4]辛-6-基)-1,2,4-三嗪-6-基)氧基)-n-异丙基苯甲酰胺
[1597]
2-((5-(2-(6-(乙基(甲基)氨基)-5-羟基-2-甲基己-3-基)-2,6-二氮杂螺[3.4]辛-6-基)-1,2,4-三嗪-6-基)氧基)-5-氟-n,n-二异丙基苯甲酰胺
[1598]
(r)-2-((3-氯-5-(2-(6-(二甲基氨基)-2-甲基己-3-基)-2,6-二氮杂螺[3.4]辛-6-基)-1,2,4-三嗪-6-基)氧基)-n-乙基-5-氟-n-异丙基苯甲酰胺甲酸酯
[1599]
通过针对化合物27(通过方法a)的以上所述的类似方法合成以下化合物
[1600]
[1601]
[1602]
[1603]
[1604]
[1605]
[1606]
[1607]
[1608][1609]
化合物401、415
[1610]
(r)-n-(乙基-13
c2)-5-氟-2-((5-(2-(6-((2-甲氧基乙基)(甲基)氨基)-2-甲基己-3-基)-2,6-二氮杂螺[3.4]辛-6-基)-1,2,4-三嗪-6-基)氧基)-n-(丙-2-基-13
c3)苯甲酰胺
[1611]
(r)-5-氟-n-异丙基-2-((5-(2-(6-((2-甲氧基乙基)(甲基)氨基)-2-甲基己-3-基)-2,6-二氮杂螺[3.4]辛-6-基)-1,2,4-三嗪-6-基)氧基)-n-甲基苯甲酰胺
[1612]
通过针对化合物27(通过方法c)的以上所述的类似方法合成以下化合物
[1613][1614]
化合物107、108
[1615]
(*r)-n-乙基-5-氟-n-异丙基-2-((4-(2-(6-((2-甲氧基乙基)(甲基)氨基)-2-甲基己-3-基)-2,6-二氮杂螺[3.4]辛-6-基)哒嗪-3-基)氧基)苯甲酰胺
[1616]
(*s)-n-乙基-5-氟-n-异丙基-2-((4-(2-(6-((2-甲氧基乙基)(甲基)氨基)-2-甲基己-3-基)-2,6-二氮杂螺[3.4]辛-6-基)哒嗪-3-基)氧基)苯甲酰胺
[1617][1618]
将n-乙基-5-氟-n-异丙基-2-((4-(2-(6-((2-甲氧基乙基)(甲基)氨基)-2-甲基己-3-基)-2,6-二氮杂螺[3.4]辛-6-基)哒嗪-3-基)氧基)苯甲酰胺(化合物82)(47.0mg)通过sfc经大赛璐chiralpak ie(柱：250x30mm 10um；洗脱液：100％meoh(0.1％氨)；流速：
25ml/min)纯化，以得到呈白色固体的标题化合物化合物107(19.0mg，40％)和化合物108(21.2mg，45％)。
[1619]
化合物117、118
[1620]
(*r)-5-氟-n,n-二异丙基-2-((4-(2-(6-((2-甲氧基乙基)(甲基)氨基)-2-甲基己-3-基)-2,6-二氮杂螺[3.4]辛-6-基)哒嗪-3-基)氧基)苯甲酰胺
[1621]
(*s)-5-氟-n,n-二异丙基-2-((4-(2-(6-((2-甲氧基乙基)(甲基)氨基)-2-甲基己-3-基)-2,6-二氮杂螺[3.4]辛-6-基)哒嗪-3-基)氧基)苯甲酰胺
[1622][1623]
将5-氟-n,n-二异丙基-2-((4-(2-(6-((2-甲氧基乙基)(甲基)氨基)-2-甲基己-3-基)-2,6-二氮杂螺[3.4]辛-6-基)哒嗪-3-基)氧基)苯甲酰胺(化合物87)(300mg)通过手性hplc经chiralpak ad-h(柱：5
×
25cm，10um；等度洗脱：正己烷/etoh/dea＝90/10/0.1(v/v/v)；流速：60ml/min，温度：35℃)纯化，以得到均呈白色固体的标题化合物化合物117(122.8mg)和化合物118(137.0mg)。
[1624]
化合物109、110
[1625]
(*r)-5-氟-n,n-二异丙基-2-((5-(2-(6-((2-甲氧基乙基)(甲基)氨基)-2-甲基己-3-基)-2,6-二氮杂螺[3.4]辛-6-基)-1,2,4-三嗪-6-基)氧基)苯甲酰胺
[1626]
(*s)-5-氟-n,n-二异丙基-2-((5-(2-(6-((2-甲氧基乙基)(甲基)氨基)-2-甲基己-3-基)-2,6-二氮杂螺[3.4]辛-6-基)-1,2,4-三嗪-6-基)氧基)苯甲酰胺
[1627][1628]
将5-氟-n,n-二异丙基-2-((5-(2-(6-((2-甲氧基乙基)(甲基)氨基)-2-甲基己-3-基)-2,6-二氮杂螺[3.4]辛-6-基)-1,2,4-三嗪-6-基)氧基)苯甲酰胺(化合物93)(110mg)首先通过制备型手性hplc经大赛璐chiralpak ad(柱：5
×
25cm 10um；流动相：a：正己烷，b：乙醇/dea＝10/0.1(v/v)，a:b＝90:10以60ml/min；柱温：38℃)分离并通过制备型hplc使用菲罗门gemini nx(柱：75x30mm 3um；流动相a：水(0.05％nh3h2o+10mm nh4hco3)，b：acn，梯度从50％b至80％b；流速：25ml/min)进一步纯化，以得到标题化合物化合物109(27mg)和化合物110(27mg)。
[1629]
化合物69
[1630]
n-乙基-5-氟-n-异丙基-2-((5-(2-(6-((2-甲氧基-2-甲基丙基)氨基)-2-甲基己-3-基)-2,6-二氮杂螺[3.4]辛-6-基)-1,2,4-三嗪-6-基)氧基)苯甲酰胺
[1631][1632]
将nabh3cn(42mg，0.666mmol)添加至2-((5-(2-(6-氨基-2-甲基己-3-基)-2,6-二氮杂螺[3.4]辛-6-基)-1,2,4-三嗪-6-基)氧基)-n-乙基-5-氟-n-异丙基苯甲酰胺(化合物3)(200mg，0.333mmol)和2-甲氧基-2-甲基丙醛(72mg，0.333mmol)在meoh(5ml)中的混合物中，并将反应混合物在rt下搅拌过夜。将反应混合物用dcm稀释并用10％水性k2co3溶液碱化。将有机层倾析，通过过滤并蒸发至干燥。将残余物通过硅胶色谱法(不规则sioh，24g；流动相：梯度从0.3％nh4oh，3％meoh，97％dcm至1％nh4oh，10％meoh，90％dcm)纯化两次。收集纯的级分并蒸发至干燥以得到标题化合物(68mg，33％产率)。
[1633]
lc-ms(esi)(方法4)：r
t
＝2.39min，m/z发现值614.8[m+h]
+
。
[1634]
化合物14、17、255、82、87
[1635]
(r)-n-乙基-5-氟-n-异丙基-2-((5-(2-(2-甲基-6-((3,3,3-三氟丙基)氨基)己-3-基)-2,6-二氮杂螺[3.4]辛-6-基)-1,2,4-三嗪-6-基)氧基)苯甲酰胺
[1636]
(r)-n-乙基-5-氟-n-异丙基-2-((5-(2-(2-甲基-6-((2,2,2-三氟乙基)氨基)己-3-基)-2,6-二氮杂螺[3.4]辛-6-基)-1,2,4-三嗪-6-基)氧基)苯甲酰胺
[1637]
(r)-2-((5-(2-(6-((1,3-二羟基丙-2-基)(甲基)氨基)-2-甲基己-3-基)-2,6-二氮杂螺[3.4]辛-6-基)-1,2,4-三嗪-6-基)氧基)-n-乙基-5-氟-n-异丙基苯甲酰胺
[1638]
n-乙基-5-氟-n-异丙基-2-((4-(2-(6-((2-甲氧基乙基)(甲基)氨基)-2-甲基己-3-基)-2,6-二氮杂螺[3.4]辛-6-基)哒嗪-3-基)氧基)苯甲酰胺
[1639]
5-氟-n,n-二异丙基-2-((4-(2-(6-((2-甲氧基乙基)(甲基)氨基)-2-甲基己-3-基)-2,6-二氮杂螺[3.4]辛-6-基)哒嗪-3-基)氧基)苯甲酰胺
[1640]
通过针对化合物69的以上所述的类似方法合成以下化合物
[1641]
[1642][1643]
化合物21
[1644]
(r)-n-乙基-5-氟-n-异丙基-2-((5-(2-(2-甲基-6-(甲基(2,2,2-三氟乙基)氨基)己-3-基)-2,6-二氮杂螺[3.4]辛-6-基)-1,2,4-三嗪-6-基)氧基)苯甲酰胺
[1645][1646]
将(r)-n-乙基-5-氟-n-异丙基-2-((5-(2-(2-甲基-6-(甲基氨基)己-3-基)-2,6-二氮杂螺[3.4]辛-6-基)-1,2,4-三嗪-6-基)氧基)苯甲酰胺盐酸盐(化合物19)(50mg，0.086mmol)、2,2,2-三氟乙基三氟甲磺酸酯(60.2mg，0.259mmol)和k2co3(112mg，0.865mmol)在acn(1ml)中的混合物在rt下搅拌16h。将反应混合物过滤并将滤液通过制备型hplc经菲罗门gemini-nx(柱：80x40mm 3um，流动相a：水(0.05％氨+10mm nh4hco3)，流动相b：acn，流速：25ml/min，梯度条件b/a从52％b至82％)纯化，以得到呈棕色油状物的标题化合物(12.06mg，97％纯度，22％产率)。
[1647]
lc-ms(esi)(方法2)：r
t
＝2.345min，m/z发现值624.3[m+h]
+
。
[1648]
化合物15、23、247、253
[1649]
(r)-2-((5-(2-(6-((2,2-二氟乙基)氨基)-2-甲基己-3-基)-2,6-二氮杂螺[3.4]辛-6-基)-1,2,4-三嗪-6-基)氧基)-n-乙基-5-氟-n-异丙基苯甲酰胺
[1650]
(r)-2-((5-(2-(6-((2-(二甲基氨基)-2-氧代乙基)(甲基)氨基)-2-甲基己-3-基)-2,6-二氮杂螺[3.4]辛-6-基)-1,2,4-三嗪-6-基)氧基)-n-乙基-5-氟-n-异丙基苯甲酰胺
[1651]
n-乙基-5-氟-n-异丙基-2-((5-(2-((3r)-6-((2-甲氧基丙基)(甲基)氨基)-2-甲基己-3-基)-2,6-二氮杂螺[3.4]辛-6-基)-1,2,4-三嗪-6-基)氧基)苯甲酰胺
[1652]
n-乙基-5-氟-n-异丙基-2-((5-(2-((3s)-6-((2-甲氧基丙基)(甲基)氨基)-2-甲基己-3-基)-2,6-二氮杂螺[3.4]辛-6-基)-1,2,4-三嗪-6-基)氧基)苯甲酰胺
[1653]
通过针对化合物21的以上所述的类似方法合成以下化合物
[1654][1655][1656]
化合物24
[1657]
(*s)-2-((5-(2-(1-氨基-3-甲基丁-2-基)-2,6-二氮杂螺[3.4]辛-6-基)-1,2,4-三嗪-6-基)氧基)-n-乙基-5-氟-n-异丙基苯甲酰胺
[1658][1659]
向(*s)-2-((5-(2-(1-(1,3-二氧代异吲哚啉-2-基)-3-甲基丁-2-基)-2,6-二氮杂螺[3.4]辛-6-基)-1,2,4-三嗪-6-基)氧基)-n-乙基-5-氟-n-异丙基苯甲酰胺(中间体18)(0.05g，0.079mmol)在etoh(2ml)中的溶液中添加氢氧化肼(0.127g，3.97mmol)。将所得混合物在25℃下搅拌8h。将反应在减压下浓缩并将残余物通过制备型hplc经boston prime(柱：c18 150x30mm 5um，流动相a：水(0.04％氨+10mm nh4hco3)，流动相b：acn，流速：30ml/min，梯度条件b/a从25％至55％)纯化，以得到呈白色固体的标题化合物(5.74mg，99.5％纯度，14.4％产率)。
[1660]
lc-ms(esi)(方法1)：r
t
＝2.94min，m/z发现值500.4[m+h]
+
。
[1661]
sfc(方法7)：r
t
＝5.183min。
[1662]
化合物25
[1663]
(*r)-2-((5-(2-(1-氨基-3-甲基丁-2-基)-2,6-二氮杂螺[3.4]辛-6-基)-1,2,4-三嗪-6-基)氧基)-n-乙基-5-氟-n-异丙基苯甲酰胺
[1664]
通过针对化合物24的以上所述的类似方法合成以下化合物
[1665]
化合物35
[1666]
(*r)-2-((5-(2-(2,6-二甲基-6-(甲基氨基)庚-3-基)-2,6-二氮杂螺[3.4]辛-6-基)-1,2,4-三嗪-6-基)氧基)-n-乙基-5-氟-n-异丙基苯甲酰胺盐酸盐
[1667][1668]
在ar下，向苄基(*r)-(5-(6-(6-(2-(乙基(异丙基)氨基甲酰基)-4-氟苯氧基)-1,
2,4-三嗪-5-基)-2,6-二氮杂螺[3.4]辛-2-基)-2,6-二甲基庚-2-基)(甲基)氨基甲酸酯(中间体40)(210mg，0.298mmol)和hcl(18μl，0.22mmol)在i-proh(5ml)中的混合物中添加pd/c(20mg，10％)。将所得混合物在25℃下在h2(15psi)气氛下搅拌12h。将混合物过滤并将滤液在减压下浓缩以给出粗产物，将该粗产物通过制备型hplc经菲罗门gemini-nx(柱：150x30mm 5um，流动相a：h2o(0.05％hcl)，流动相b：acn，流速：35ml/min，梯度条件b/a从3％至29％)进一步纯化，以得到呈白色固体的标题化合物(170mg，98％纯度，92％产率)。
[1669]
lc-ms(esi)(方法2)：r
t
＝2.040min，m/z发现值570.3[m+h]
+
。
[1670]
sfc(方法8)：r
t
＝2.145min。
[1671]
化合物36
[1672]
(*s)-2-((5-(2-(2,6-二甲基-6-(甲基氨基)庚-3-基)-2,6-二氮杂螺[3.4]辛-6-基)-1,2,4-三嗪-6-基)氧基)-n-乙基-5-氟-n-异丙基苯甲酰胺盐酸盐
[1673]
通过针对化合物35的以上所述的类似方法合成以下化合物
[1674]
化合物39
[1675]
1-((((r)-4-(6-(6-(2-(乙基(异丙基)氨基甲酰基)-4-氟苯氧基)-1,2,4-三嗪-5-基)-2,6-二氮杂螺[3.4]辛-2-基)-5-甲基己基)氨基甲酰基)氧基)乙基异丁酸酯
[1676][1677]
将(r)-2-((5-(2-(6-氨基-2-甲基己-3-基)-2,6-二氮杂螺[3.4]辛-6-基)-1,2,4-三嗪-6-基)氧基)-n-乙基-5-氟-n-异丙基苯甲酰胺(化合物64)(150mg，粗品)、1-(((4-硝基苯氧基)羰基)氧基)乙基异丁酸酯(102mg，0.343mmol)和tea(144mg，1.42mmol)在无水dmf(5ml)中的混合物在25℃下搅拌2h。将混合物在减压下浓缩以给出粗产物，将该粗产物通过制备型hplc经boston prime(柱：c18 150x30mm5um，流动相a：h2o(0.04％氨+10mm nh4hco3)，流动相b：acn，流速：25ml/min，梯度条件b/a从55％至85％)进一步纯化，以得到呈黄色固体的标题化合物(82.20mg)。
[1678]
lc-ms(esi)(方法1)：r
t
＝3.901min，m/z发现值686.3[m+h]
+
。
[1679]
化合物40、41、42
[1680]
1-((((r)-4-(6-(6-(2-(乙基(异丙基)氨基甲酰基)-4-氟苯氧基)-1,2,4-三嗪-5-基)-2,6-二氮杂螺[3.4]辛-2-基)-5-甲基己基)(甲基)氨基甲酰基)氧基)乙基异丁酸酯
[1681]
1-((((*r)-5-(6-(6-(2-(乙基(异丙基)氨基甲酰基)-4-氟苯氧基)-1,2,4-三嗪-5-基)-2,6-二氮杂螺[3.4]辛-2-基)-2,6-二甲基庚-2-基)氨基甲酰基)氧基)乙基异丁酸酯甲酸酯
[1682]
1-((((*s)-5-(6-(6-(2-(乙基(异丙基)氨基甲酰基)-4-氟苯氧基)-1,2,4-三嗪-5-基)-2,6-二氮杂螺[3.4]辛-2-基)-2,6-二甲基庚-2-基)氨基甲酰基)氧基)乙基异丁酸酯
[1683]
通过针对化合物39的以上所述的类似方法合成以下化合物
[1684][1685][1686]
化合物43
[1687]
(*r)-4-(6-(6-(2-(4-环丙基嘧啶-5-基)-4-氟苯氧基)-1,2,4-三嗪-5-基)-2,6-二氮杂螺[3.4]辛-2-基)-5-甲基己酰胺
[1688][1689]
向甲基(*r)-4-(6-(6-(2-(4-环丙基嘧啶-5-基)-4-氟苯氧基)-1,2,4-三嗪-5-基)-2,6-二氮杂螺[3.4]辛-2-基)-5-甲基己酸酯(中间体48)(110mg，0.178mmol)在nh4oh(10ml)和1,4-二噁烷(5ml)中的混合物中添加nh4cl(95mg，1.78mmol)。将所得混合物在40℃下搅拌16h。在冷却至rt后，将反应混合物在真空中浓缩并将残余物通过制备型hplc使用boston prime(柱：c18 150x30mm 5um；洗脱液：acn/h2o(0.04％氨+10mm nh4hco3)从30％至60％(v/v))纯化，以得到呈白色固体的标题化合物(34mg，34％)。
[1690]
lc-ms(esi)(方法1)：r
t
＝3.287min，m/z发现值547.2[m+h]
+
。
[1691]
sfc(方法9)：r
t
＝6.275min。
[1692]
化合物44
[1693]
通过针对化合物43的以上所述的类似方法合成以下化合物
[1694][1695]
化合物50
[1696]
4-(6-(6-(2-(4-环丙基嘧啶-5-基)-4-氟苯氧基)-1,2,4-三嗪-5-基)-2,6-二氮杂螺[3.4]辛-2-基)-n,5-二甲基己酰胺
[1697][1698]
将甲胺盐酸盐(600mg，8.89mmol)添加至由在menh2/etoh(33％，20ml)中的甲基4-(6-(6-(2-(4-环丙基嘧啶-5-基)-4-氟苯氧基)-1,2,4-三嗪-5-基)-2,6-二氮杂螺[3.4]辛-2-基)-5-甲基己酸酯(中间体47)(500mg，0.890mmol)组成的溶液中。将反应混合物在80
℃下搅拌5h。在冷却至rt后，将反应混合物在减压下浓缩以得到粗产物，将该粗产物通过fcc(dcm/meoh＝10:1)进一步纯化，以得到呈黄色固体的标题化合物(100mg，18％产率)。
[1699]
化合物45和46
[1700]
(*s)-4-(6-(6-(2-(4-环丙基嘧啶-5-基)-4-氟苯氧基)-1,2,4-三嗪-5-基)-2,6-二氮杂螺[3.4]辛-2-基)-n,5-二甲基己酰胺
[1701]
(*r)-4-(6-(6-(2-(4-环丙基嘧啶-5-基)-4-氟苯氧基)-1,2,4-三嗪-5-基)-2,6-二氮杂螺[3.4]辛-2-基)-n,5-二甲基己酰胺
[1702][1703]
将4-(6-(6-(2-(4-环丙基嘧啶-5-基)-4-氟苯氧基)-1,2,4-三嗪-5-基)-2,6-二氮杂螺[3.4]辛-2-基)-n,5-二甲基己酰胺(化合物50)(250mg，0.446mmol)通过sfc经大赛璐chiralpak as(250x30mm 10um)(洗脱液：在etoh(0.1％v/v氨)20/20，v/v中的超临界co2)纯化，以得到均呈白色固体的标题化合物化合物45(81.10mg，98％纯度，32％产率)和化合物46(72.53mg，98％纯度，28％产率)。
[1704]
化合物45
[1705]
lc-ms(esi)(方法1)：r
t
＝3.323min，m/z发现值561.2[m+h]
+
。
[1706]
sfc(方法10)：r
t
＝3.880min。
[1707]
化合物46
[1708]
lc-ms(esi)(方法1)：r
t
＝3.353min，m/z发现值561.2[m+h]
+
。
[1709]
sfc(方法10)：r
t
＝3.707min。
[1710]
化合物49
[1711]
n-乙基-5-氟-2-((5-(2-(6-羟基-2-甲基己-3-基)-2,6-二氮杂螺[3.4]辛-6-基)-1,2,4-三嗪-6-基)氧基)-n-异丙基苯甲酰胺
[1712][1713]
向2-((5-(2-(6-((叔丁基二甲基甲硅烷基)氧基)-2-甲基己-3-基)-2,6-二氮杂螺[3.4]辛-6-基)-1,2,4-三嗪-6-基)氧基)-n-乙基-5-氟-n-异丙基苯甲酰胺(中间体55)(217mg，0.338mmol)在meoh(2ml)中的溶液中添加4-甲基苯磺酸(203mg，1.18mmol)。将反应混合物在室温下搅拌过夜。将混合物在减压下浓缩，以给出粗产物，将该粗产物通过制备型hplc使用菲罗门gemini nx-c18(柱：75x30mm 3μm；洗脱液：acn/h2o(0.04％氨+10mm nh4hco3)从35％至60％(v/v))进一步纯化，以得到呈白色固体的标题化合物(45mg，25％产率)。
[1714]
化合物47和48
[1715]
(*r)-n-乙基-5-氟-2-((5-(2-(6-羟基-2-甲基己-3-基)-2,6-二氮杂螺[3.4]辛-6-基)-1,2,4-三嗪-6-基)氧基)-n-异丙基苯甲酰胺
[1716]
(*s)-n-乙基-5-氟-2-((5-(2-(6-羟基-2-甲基己-3-基)-2,6-二氮杂螺[3.4]辛-6-基)-1,2,4-三嗪-6-基)氧基)-n-异丙基苯甲酰胺
[1717][1718]
将n-乙基-5-氟-2-((5-(2-(6-羟基-2-甲基己-3-基)-2,6-二氮杂螺[3.4]辛-6-基)-1,2,4-三嗪-6-基)氧基)-n-异丙基苯甲酰胺(化合物49)(45.0mg，0.0850mmol)通过sfc经大赛璐chiralpak ig(250x30mm10um)(洗脱液：在具有0.1％氨的etoh中的40％至40％(v/v)的超临界co2)进一步纯化，以得到均呈白色固体的标题化合物化合物47(17.38mg，39％产率)和化合物48(15.79mg，35％产率)。
[1719]
化合物47
[1720]
lcms(esi)(方法1)：r
t
＝3.240min，m/z发现值529.2[m+h]
+
。
[1721]
sfc(方法11)：r
t
＝4.778min
[1722]
化合物48
[1723]
lcms(esi)(方法1)：r
t
＝3.212min，m/z发现值529.3[m+h]
+
。
[1724]
sfc(方法11)：r
t
＝5.161min。
[1725]
化合物64
[1726]
(r)-2-((5-(2-(6-氨基-2-甲基己-3-基)-2,6-二氮杂螺[3.4]辛-6-基)-1,2,4-三嗪-6-基)氧基)-n-乙基-5-氟-n-异丙基苯甲酰胺
[1727][1728]
向叔丁基(r)-(4-(6-(6-(2-(乙基(异丙基)氨基甲酰基)-4-氟苯氧基)-1,2,4-三嗪-5-基)-2,6-二氮杂螺[3.4]辛-2-基)-5-甲基己基)氨基甲酸酯(化合物62)(550mg，0.876mmol)在dcm(4ml)中的溶液中缓慢添加tfa(4ml)，并将所得混合物在25℃下搅拌1h。将反应混合物在减压下浓缩以给出残余物。将残余物在dcm(40ml)中稀释并将ph值通过水性naoh(2m，16ml)溶液调节至大约12。将水层用dcm(10ml x 2)萃取。将合并的有机层经无水na2so4干燥，过滤，并且在真空中浓缩以得到呈黄色固体的标题化合物(460mg，粗品)，将其不经进一步纯化而直接用于下一步。
[1729]
化合物97
[1730]
2-((5-(2-(6-氨基-2-甲基己-3-基)-2,6-二氮杂螺[3.4]辛-6-基)-1,2,4-三嗪-6-基)氧基)-5-氟-n,n-二异丙基苯甲酰胺
[1731]
通过针对化合物64的如上所述的类似方法合成以下化合物
[1732][1733]
化合物65
[1734]
(r)-2-((5-(2-(6-氨基-2-甲基己-3-基)-2,6-二氮杂螺[3.4]辛-6-基)-1,2,4-三嗪-6-基)氧基)-n-乙基-5-氟-n-异丙基苯甲酰胺盐酸盐
[1735]
向在1,4-二噁烷(5ml)中的叔丁基(r)-(4-(6-(6-(2-(乙基(异丙基)氨基甲酰基)-4-氟苯氧基)-1,2,4-三嗪-5-基)-2,6-二氮杂螺[3.4]辛-2-基)-5-甲基己基)氨基甲酸酯(化合物62)(250mg，0.398mmol)溶液中添加在二噁烷中的4m hcl溶液(10ml，40mmol)，将所得混合物在rt下搅拌16h。将反应混合物在真空中浓缩以得到呈黄色油状物的标题化合物(220mg，粗品，hcl盐)，将其不经进一步纯化而直接用于下一步骤。
[1736]
化合物67
[1737]
n-乙基-5-氟-n-异丙基-2-((5-(2-(2-甲基-6-(甲基氨基)己-3-基)-2,6-二氮杂螺[3.4]辛-6-基)-1,2,4-三嗪-6-基)氧基)苯甲酰胺盐酸盐
[1738][1739]
向叔丁基(4-(6-(6-(2-(乙基(异丙基)氨基甲酰基)-4-氟苯氧基)-1,2,4-三嗪-5-基)-2,6-二氮杂螺[3.4]辛-2-基)-5-甲基己基)(甲基)氨基甲酸酯(化合物60)(1g，1.56mmol)在dcm(10ml)中的溶液中添加在二噁烷中的4m hcl(5ml，20mmol)，将所得混合物在rt下搅拌1h。将反应混合物在真空中浓缩以得到标题化合物(960mg，粗品，hcl盐)，将其不经进一步纯化而直接用于下一步骤。
[1740]
化合物66、73、92
[1741]
(s)-2-((5-(2-(6-氨基-2-甲基己-3-基)-2,6-二氮杂螺[3.4]辛-6-基)-1,2,4-三嗪-6-基)氧基)-n-乙基-5-氟-n-异丙基苯甲酰胺盐酸盐
[1742]
2-((4-(2-(6-氨基-2-甲基己-3-基)-2,6-二氮杂螺[3.4]辛-6-基)哒嗪-3-基)氧基)-5-氟-n,n-二异丙基苯甲酰胺盐酸盐
[1743]
5-氟-n,n-二异丙基-2-((5-(2-(2-甲基-6-(甲基氨基)己-3-基)-2,6-二氮杂螺[3.4]辛-6-基)-1,2,4-三嗪-6-基)氧基)苯甲酰胺盐酸盐
[1744]
通过针对化合物65和化合物67的如上所述的类似方法合成以下化合物
[1745][1746][1747]
化合物86
[1748]
5-氟-n,n-二异丙基-2-((4-(2-(2-甲基-6-(甲基氨基)己-3-基)-2,6-二氮杂螺[3.4]辛-6-基)哒嗪-3-基)氧基)苯甲酰胺
[1749][1750]
向在0℃下冷却的叔丁基(4-(6-(3-(2-(二异丙基氨基甲酰基)-4-氟苯氧基)哒嗪-4-基)-2,6-二氮杂螺[3.4]辛-2-基)-5-甲基己基)(甲基)氨基甲酸酯(化合物85)(1.0g，1.5mmol)在1,4-二噁烷(10ml)中的溶液中分批添加4m hcl在1,4-二噁烷中的溶液
(5ml，20mmol)。将所得混合物缓慢温热至25℃并搅拌2h。将反应混合物在减压下浓缩，以给出残余物，将该残余物再溶于dcm(30ml)中。然后，添加1m naoh(20ml)以调节ph值至约12。将所得混合物用dcm(30ml x 3)进一步萃取。将合并的有机层经无水na2so4干燥，过滤，并在真空中浓缩以得到呈黄色固体的标题化合物(1.26g，粗品)，将其不经进一步纯化而直接用于下一步。
[1751]
化合物58、59、213、234、235、260、303、79、85、91、72、96、206、316、327、338、339、348、349、358、381、399、403
[1752]
叔丁基(5-(6-(6-(2-(4-环丙基嘧啶-5-基)-4-氟苯氧基)-1,2,4-三嗪-5-基)-2,6-二氮杂螺[3.4]辛-2-基)-2,6-二甲基庚-2-基)氨基甲酸酯
[1753]
叔丁基(5-(6-(6-(2-(乙基(异丙基)氨基甲酰基)-4-氟苯氧基)-1,2,4-三嗪-5-基)-2,6-二氮杂螺[3.4]辛-2-基)-2,6-二甲基庚-2-基)氨基甲酸酯
[1754]
n-乙基-5-氟-2-((5-(2-(1-羟基-4-甲基戊-3-基)-2,6-二氮杂螺[3.4]辛-6-基)-1,2,4-三嗪-6-基)氧基)-n-异丙基苯甲酰胺
[1755]
n-乙基-5-氟-n-异丙基-2-((5-(2-((5*r)-6-((2-甲氧基乙基)(甲基)氨基)-2,5-二甲基己-3-基)-2,6-二氮杂螺[3.4]辛-6-基)-1,2,4-三嗪-6-基)氧基)苯甲酰胺
[1756]
n-乙基-5-氟-n-异丙基-2-((5-(2-((5*s)-6-((2-甲氧基乙基)(甲基)氨基)-2,5-二甲基己-3-基)-2,6-二氮杂螺[3.4]辛-6-基)-1,2,4-三嗪-6-基)氧基)苯甲酰胺
[1757]
n-乙基-5-氟-2-((5-(2-(6-羟基-2,4-二甲基己-3-基)-2,6-二氮杂螺[3.4]辛-6-基)-1,2,4-三嗪-6-基)氧基)-n-异丙基苯甲酰胺
[1758]
叔丁基(4-(6-(6-(2-(乙基(异丙基)氨基甲酰基)-4-氟苯氧基)-1,2,4-三嗪-5-基)-2,6-二氮杂螺[3.4]辛-2-基)-2-甲氧基-5-甲基己基)(甲基)氨基甲酸酯
[1759]
叔丁基(4-(6-(3-(2-(乙基(异丙基)氨基甲酰基)-4-氟苯氧基)哒嗪-4-基)-2,6-二氮杂螺[3.4]辛-2-基)-5-甲基己基)(甲基)氨基甲酸酯
[1760]
叔丁基(4-(6-(3-(2-(二异丙基氨基甲酰基)-4-氟苯氧基)哒嗪-4-基)-2,6-二氮杂螺[3.4]辛-2-基)-5-甲基己基)(甲基)氨基甲酸酯
[1761]
叔丁基(4-(6-(6-(2-(二异丙基氨基甲酰基)-4-氟苯氧基)-1,2,4-三嗪-5-基)-2,6-二氮杂螺[3.4]辛-2-基)-5-甲基己基)(甲基)氨基甲酸酯
[1762]
叔丁基(4-(6-(3-(2-(二异丙基氨基甲酰基)-4-氟苯氧基)哒嗪-4-基)-2,6-二氮杂螺[3.4]辛-2-基)-5-甲基己基)氨基甲酸酯
[1763]
叔丁基(4-(6-(6-(2-(二异丙基氨基甲酰基)-4-氟苯氧基)-1,2,4-三嗪-5-基)-2,6-二氮杂螺[3.4]辛-2-基)-5-甲基己基)氨基甲酸酯
[1764]
叔丁基(5-(6-(6-(2-(乙基(异丙基)氨基甲酰基)-4-氟苯氧基)-1,2,4-三嗪-5-基)-2,6-二氮杂螺[3.4]辛-2-基)-6-甲基庚基)氨基甲酸酯
[1765]
叔丁基(4-(6-(6-(2-(乙基(异丙基)氨基甲酰基)-4-氟苯氧基)-1,2,4-三嗪-5-基)-2,6-二氮杂螺[3.4]辛-2-基)-2-羟基-5-甲基己基)(甲基)氨基甲酸酯
[1766]
叔丁基乙基(4-(6-(6-(2-(乙基(异丙基)氨基甲酰基)-4-氟苯氧基)-1,2,4-三嗪-5-基)-2,6-二氮杂螺[3.4]辛-2-基)-2-羟基-5-甲基己基)氨基甲酸酯
[1767]
n-乙基-2-((5-(2-((5s)-6-(乙基(甲基)氨基)-5-羟基-2-甲基己-3-基)-2,6-二氮杂螺[3.4]辛-6-基)-1,2,4-三嗪-6-基)氧基)-5-氟-n-异丙基苯甲酰胺
[1768]
n-乙基-2-((5-(2-((5r)-6-(乙基(甲基)氨基)-5-羟基-2-甲基己-3-基)-2,6-二氮杂螺[3.4]辛-6-基)-1,2,4-三嗪-6-基)氧基)-5-氟-n-异丙基苯甲酰胺
[1769]
n-乙基-5-氟-2-((5-(2-((5s)-5-羟基-6-((2-甲氧基乙基)(甲基)氨基)-2-甲基己-3-基)-2,6-二氮杂螺[3.4]辛-6-基)-1,2,4-三嗪-6-基)氧基)-n-异丙基苯甲酰胺
[1770]
n-乙基-5-氟-2-((5-(2-((5r)-5-羟基-6-((2-甲氧基乙基)(甲基)氨基)-2-甲基己-3-基)-2,6-二氮杂螺[3.4]辛-6-基)-1,2,4-三嗪-6-基)氧基)-n-异丙基苯甲酰胺
[1771]
叔丁基(4-(6-(6-(2-(二异丙基氨基甲酰基)-4-氟苯氧基)-1,2,4-三嗪-5-基)-2,6-二氮杂螺[3.4]辛-2-基)-2-羟基-5-甲基己基)(甲基)氨基甲酸酯
[1772]
n-乙基-5-氟-2-((5-(2-(5-羟基-6-((2-甲氧基乙基)(甲基)氨基)-2,5-二甲基己-3-基)-2,6-二氮杂螺[3.4]辛-6-基)-1,2,4-三嗪-6-基)氧基)-n-异丙基苯甲酰胺
[1773]
n-乙基-5-氟-n-异丙基-2-((5-(2-(6-((2-甲氧基乙基)(甲基)氨基)-2-甲基己-3-基-3-d)-2,6-二氮杂螺[3.4]辛-6-基)-1,2,4-三嗪-6-基)氧基)苯甲酰胺
[1774]
叔丁基(4-(6-(3-氯-6-(2-(乙基(异丙基)氨基甲酰基)-4-氟苯氧基)-1,2,4-三嗪-5-基)-2,6-二氮杂螺[3.4]辛-2-基)-5-甲基己基)氨基甲酸酯
[1775]
通过针对化合物60和化合物61的如上所述的类似方法合成以下化合物
[1776]
[1777]
[1778]
[1779]
[1780]
[1781][1782]
对于化合物编号399：lc-ms(esi)(方法8)：rt＝1.21min，m/z发现值601.6[m+h]
+
[1783]
化合物111
[1784]
n-乙基-5-氟-n-异丙基-2-((5-(2-((r)-6-(((r)-1-甲氧基丙-2-基)氨基)-2-甲基己-3-基)-2,6-二氮杂螺[3.4]辛-6-基)-1,2,4-三嗪-6-基)氧基)苯甲酰胺
[1785][1786]
将(r)-n-乙基-5-氟-n-异丙基-2-((5-(2-(2-甲基-6-氧代己-3-基)-2,6-二氮杂螺[3.4]辛-6-基)-1,2,4-三嗪-6-基)氧基)苯甲酰胺(中间体97)(150mg，0.285mmol)和(r)-1-甲氧基丙-2-胺盐酸盐(71.5mg，0.569mmol)和tea(288mg，2.85mmol)在dcm(2ml)中的混合物在25℃下搅拌2h。然后，将nabh(oac)3(181mg，0.854mmol)添加至以上混合物并将反应在25℃下进一步搅拌另外的8h。将混合物用h2o(20ml)淬灭，并用dcm(30ml*3)萃取。将合并的有机层经无水na2so4干燥，过滤并在减压下浓缩，以得到粗产物，将该粗产物通过制备型hplc(柱：boston green ods 150x30mm 5um，流动相：a：h2o(0.05％氨))，b：acn，流速：30ml/min，梯度条件：从45％b至85％b)纯化，以得到呈无色粘性油状物的标题化合物化合物111(63mg，98.5％纯度，36.3％产率)。
[1787]
化合物113
[1788]
(r)-2-((5-(2-(6-((3,3-二氟丙基)氨基)-2-甲基己-3-基)-2,6-二氮杂螺[3.4]辛-6-基)-1,2,4-三嗪-6-基)氧基)-n-乙基-5-氟-n-异丙基苯甲酰胺
[1789][1790]
将(r)-n-乙基-5-氟-n-异丙基-2-((5-(2-(2-甲基-6-氧代己-3-基)-2,6-二氮杂螺[3.4]辛-6-基)-1,2,4-三嗪-6-基)氧基)苯甲酰胺(中间体97)(160mg，0.304mmol)、3,3-二氟丙-1-胺盐酸盐(160mg，1.22mmol)和tea(128mg，1.27mmol)在meoh(5ml)中的混合物在
rt下首先搅拌10min。然后，添加acoh(39mg，0.649mmol)和nabh3cn(77mg，1.26mmol)，并将所得混合物在rt下搅拌另外的16h。将混合物在减压下浓缩以除去meoh。将所得残余物用h2o(30ml)稀释并用dcm(20ml x 3)萃取。将合并的有机层用盐水(10ml x2)洗涤，经na2so4干燥，过滤并浓缩以得到粗产物，将该粗产物通过制备型hplc(柱：boston prime c18 150x30 mm 5μm；流动相：a：水(0.05氨)，b：acn；梯度条件；46％b至76％b(v/v))纯化，以得到呈白色固体的标题化合物化合物113(32mg，17％产率)。
[1791]
化合物115、116、119、124、129、134、138、141、143、144、147、151、155、158、162、163、168、171、288、289、290、291、292、293、294、295、296、297、232、244、263、264、281、284、299
[1792]
(*r)-5-氟-n,n-二异丙基-2-((5-(2-(6-((2-甲氧基乙基)氨基)-2-甲基己-3-基)-2,6-二氮杂螺[3.4]辛-6-基)-1,2,4-三嗪-6-基)氧基)苯甲酰胺
[1793]
(*s)-5-氟-n,n-二异丙基-2-((5-(2-(6-((2-甲氧基乙基)氨基)-2-甲基己-3-基)-2,6-二氮杂螺[3.4]辛-6-基)-1,2,4-三嗪-6-基)氧基)苯甲酰胺
[1794]
n-乙基-5-氟-n-异丙基-2-((5-(2-(6-(异丙基(甲基)氨基)-2-甲基己-3-基)-2,6-二氮杂螺[3.4]辛-6-基)-1,2,4-三嗪-6-基)氧基)苯甲酰胺
[1795]
n-乙基-5-氟-n-异丙基-2-((5-(2-(2-甲基-6-(甲基(丙基)氨基)己-3-基)-2,6-二氮杂螺[3.4]辛-6-基)-1,2,4-三嗪-6-基)氧基)苯甲酰胺
[1796]
n-乙基-2-((5-(2-(6-(乙基(甲基)氨基)-2-甲基己-3-基)-2,6-二氮杂螺[3.4]辛-6-基)-1,2,4-三嗪-6-基)氧基)-5-氟-n-异丙基苯甲酰胺
[1797]
(r)-n-乙基-5-氟-n-异丙基-2-((5-(2-(6-((2-甲氧基-2-甲基丙基)氨基)-2-甲基己-3-基)-2,6-二氮杂螺[3.4]辛-6-基)-1,2,4-三嗪-6-基)氧基)苯甲酰胺
[1798]
(r)-n-乙基-5-氟-2-((5-(2-(6-((2-羟基-2-甲基丙基)氨基)-2-甲基己-3-基)-2,6-二氮杂螺[3.4]辛-6-基)-1,2,4-三嗪-6-基)氧基)-n-异丙基苯甲酰胺
[1799]
(r)-n-乙基-5-氟-n-异丙基-2-((5-(2-(6-((3-甲氧基丙基)(甲基)氨基)-2-甲基己-3-基)-2,6-二氮杂螺[3.4]辛-6-基)-1,2,4-三嗪-6-基)氧基)苯甲酰胺
[1800]
(*r)-2-((5-(2-(6-((3-(二甲基氨基)-3-氧代丙基)(甲基)氨基)-2-甲基己-3-基)-2,6-二氮杂螺[3.4]辛-6-基)-1,2,4-三嗪-6-基)氧基)-5-氟-n,n-二异丙基苯甲酰胺
[1801]
(*s)-2-((5-(2-(6-((3-(二甲基氨基)-3-氧代丙基)(甲基)氨基)-2-甲基己-3-基)-2,6-二氮杂螺[3.4]辛-6-基)-1,2,4-三嗪-6-基)氧基)-5-氟-n,n-二异丙基苯甲酰胺
[1802]
(r)-n-乙基-5-氟-n-异丙基-2-((5-(2-(2-甲基-6-(甲基(2-(n-甲基乙酰胺基)乙基)氨基)己-3-基)-2,6-二氮杂螺[3.4]辛-6-基)-1,2,4-三嗪-6-基)氧基)苯甲酰胺
[1803]
(r)-2-((5-(2-(6-((4-(二甲基氨基)-4-氧代丁基)(甲基)氨基)-2-甲基己-3-基)-2,6-二氮杂螺[3.4]辛-6-基)-1,2,4-三嗪-6-基)氧基)-n-乙基-5-氟-n-异丙基苯甲酰胺
[1804]
n-乙基-5-氟-n-异丙基-2-((5-(2-((r)-6-(((s)-1-甲氧基丙-2-基)氨基)-2-甲基己-3-基)-2,6-二氮杂螺[3.4]辛-6-基)-1,2,4-三嗪-6-基)氧基)苯甲酰胺
[1805]
(r)-2-((5-(2-(6-((1,3-二甲氧基丙-2-基)氨基)-2-甲基己-3-基)-2,6-二氮杂螺[3.4]辛-6-基)-1,2,4-三嗪-6-基)氧基)-n-乙基-5-氟-n-异丙基苯甲酰胺
[1806]
n-乙基-5-氟-2-((5-(2-((r)-6-(((r)-1-羟基-3-甲氧基丙-2-基)氨基)-2-甲基
己-3-基)-2,6-二氮杂螺[3.4]辛-6-基)-1,2,4-三嗪-6-基)氧基)-n-异丙基苯甲酰胺
[1807]
n-乙基-5-氟-2-((5-(2-((r)-6-(((s)-1-羟基-3-甲氧基丙-2-基)氨基)-2-甲基己-3-基)-2,6-二氮杂螺[3.4]辛-6-基)-1,2,4-三嗪-6-基)氧基)-n-异丙基苯甲酰胺
[1808]
n-乙基-5-氟-2-((5-(2-((3r)-6-((3-羟基-2-甲氧基丙基)氨基)-2-甲基己-3-基)-2,6-二氮杂螺[3.4]辛-6-基)-1,2,4-三嗪-6-基)氧基)-n-异丙基苯甲酰胺
[1809]
2-((5-(2-((3r)-6-((2,3-二甲氧基丙基)氨基)-2-甲基己-3-基)-2,6-二氮杂螺[3.4]辛-6-基)-1,2,4-三嗪-6-基)氧基)-n-乙基-5-氟-n-异丙基苯甲酰胺
[1810]
2-((5-(2-((3r)-6-((4-(二甲基氨基)-4-氧代丁-2-基)氨基)-2-甲基己-3-基)-2,6-二氮杂螺[3.4]辛-6-基)-1,2,4-三嗪-6-基)氧基)-n-乙基-5-氟-n-异丙基苯甲酰胺
[1811]
2-((5-(2-((3r)-6-((3-(二甲基氨基)-2-甲基-3-氧代丙基)氨基)-2-甲基己-3-基)-2,6-二氮杂螺[3.4]辛-6-基)-1,2,4-三嗪-6-基)氧基)-n-乙基-5-氟-n-异丙基苯甲酰胺
[1812]
n-乙基-5-氟-n-异丙基-2-((5-(2-((r)-2-甲基-6-(((r)-4-(甲基氨基)-4-氧代丁-2-基)氨基)己-3-基)-2,6-二氮杂螺[3.4]辛-6-基)-1,2,4-三嗪-6-基)氧基)苯甲酰胺
[1813]
n-乙基-5-氟-n-异丙基-2-((5-(2-((r)-2-甲基-6-(((s)-4-(甲基氨基)-4-氧代丁-2-基)氨基)己-3-基)-2,6-二氮杂螺[3.4]辛-6-基)-1,2,4-三嗪-6-基)氧基)苯甲酰胺
[1814]
n-乙基-5-氟-n-异丙基-2-((5-(2-((r)-2-甲基-6-(((r)-2-甲基-3-(甲基氨基)-3-氧代丙基)氨基)己-3-基)-2,6-二氮杂螺[3.4]辛-6-基)-1,2,4-三嗪-6-基)氧基)苯甲酰胺
[1815]
n-乙基-5-氟-n-异丙基-2-((5-(2-((r)-2-甲基-6-(((s)-2-甲基-3-(甲基氨基)-3-氧代丙基)氨基)己-3-基)-2,6-二氮杂螺[3.4]辛-6-基)-1,2,4-三嗪-6-基)氧基)苯甲酰胺
[1816]
2-((5-(2-((*r)-6-(((r)-4-氨基-4-氧代丁-2-基)氨基)-2-甲基己-3-基)-2,6-二氮杂螺[3.4]辛-6-基)-1,2,4-三嗪-6-基)氧基)-5-氟-n,n-二异丙基苯甲酰胺
[1817]
2-((5-(2-((*r)-6-(((s)-4-氨基-4-氧代丁-2-基)氨基)-2-甲基己-3-基)-2,6-二氮杂螺[3.4]辛-6-基)-1,2,4-三嗪-6-基)氧基)-5-氟-n,n-二异丙基苯甲酰胺
[1818]
2-((5-(2-((*r)-6-(((r)-3-氨基-2-甲基-3-氧代丙基)氨基)-2-甲基己-3-基)-2,6-二氮杂螺[3.4]辛-6-基)-1,2,4-三嗪-6-基)氧基)-5-氟-n,n-二异丙基苯甲酰胺
[1819]
2-((5-(2-((*r)-6-(((s)-3-氨基-2-甲基-3-氧代丙基)氨基)-2-甲基己-3-基)-2,6-二氮杂螺[3.4]辛-6-基)-1,2,4-三嗪-6-基)氧基)-5-氟-n,n-二异丙基苯甲酰胺
[1820]
(r)-n-乙基-5-氟-n-异丙基-2-((5-(2-(6-((2-甲氧基乙基-1,1-d2)(甲基)氨基)-2-甲基己-3-基)-2,6-二氮杂螺[3.4]辛-6-基)-1,2,4-三嗪-6-基)氧基)苯甲酰胺
[1821]
(r)-2-((5-(2-(6-((2-乙酰胺基乙基)(甲基)氨基)-2-甲基己-3-基)-2,6-二氮杂螺[3.4]辛-6-基)-1,2,4-三嗪-6-基)氧基)-n-乙基-5-氟-n-异丙基苯甲酰胺
[1822]
n-乙基-5-氟-n-异丙基-2-((5-(2-(6-((2-甲氧基乙基)(甲基)氨基)-2,4-二甲基己-3-基)-2,6-二氮杂螺[3.4]辛-6-基)-1,2,4-三嗪-6-基)氧基)苯甲酰胺(r,s和s,r的混合物；或r,r和s,s的混合物)
[1823]
n-乙基-5-氟-n-异丙基-2-((5-(2-(6-((2-甲氧基乙基)(甲基)氨基)-2,4-二甲基己-3-基)-2,6-二氮杂螺[3.4]辛-6-基)-1,2,4-三嗪-6-基)氧基)苯甲酰胺(r,r和s,s的
混合物；或r,s和s,r的混合物)
[1824]
n-乙基-5-氟-2-((5-(2-((r)-6-(((r)-2-羟基-3-甲氧基丙基)氨基)-2-甲基己-3-基)-2,6-二氮杂螺[3.4]辛-6-基)-1,2,4-三嗪-6-基)氧基)-n-异丙基苯甲酰胺甲酸酯
[1825]
n-乙基-5-氟-2-((5-(2-((r)-6-(((s)-2-羟基-3-甲氧基丙基)氨基)-2-甲基己-3-基)-2,6-二氮杂螺[3.4]辛-6-基)-1,2,4-三嗪-6-基)氧基)-n-异丙基苯甲酰胺甲酸酯
[1826]
n-乙基-5-氟-n-异丙基-2-((5-(2-((3r)-6-((2-甲氧基乙基)(甲基)氨基)-2-甲基庚-3-基)-2,6-二氮杂螺[3.4]辛-6-基)-1,2,4-三嗪-6-基)氧基)苯甲酰胺
[1827]
通过针对化合物111和113的如上所述的类似方法合成以下化合物
[1828]
[1829]
[1830]
[1831]
[1832]
[1833]
[1834]
[1835][1836]
[1837]
化合物120和121
[1838]
(*r)-n-乙基-5-氟-n-异丙基-2-((5-(2-(6-(异丙基(甲基)氨基)-2-甲基己-3-基)-2,6-二氮杂螺[3.4]辛-6-基)-1,2,4-三嗪-6-基)氧基)苯甲酰胺
[1839]
(*s)-n-乙基-5-氟-n-异丙基-2-((5-(2-(6-(异丙基(甲基)氨基)-2-甲基己-3-基)-2,6-二氮杂螺[3.4]辛-6-基)-1,2,4-三嗪-6-基)氧基)苯甲酰胺
[1840][1841]
将n-乙基-5-氟-n-异丙基-2-((5-(2-(6-(异丙基(甲基)氨基)-2-甲基己-3-基)-2,6-二氮杂螺[3.4]辛-6-基)-1,2,4-三嗪-6-基)氧基)苯甲酰胺(化合物119)(100mg)通过sfc经大赛璐chiralpak ig(柱：250x30mm 10um；流动相：a：超临界co2，b：meoh(0.1％氨)，a:b＝55:45，70ml/min；柱温：38℃；喷嘴压力：100巴；喷嘴温度：60℃；蒸发器温度：20℃；微调器温度：25℃；波长：220nm)分离，以得到均呈浅黄色固体的标题化合物(化合物120)(22.1mg)和(化合物121)(32.5mg)。
[1842]
化合物125和126
[1843]
(*r)-n-乙基-5-氟-n-异丙基-2-((5-(2-(2-甲基-6-(甲基(丙基)氨基)己-3-基)-2,6-二氮杂螺[3.4]辛-6-基)-1,2,4-三嗪-6-基)氧基)苯甲酰胺
[1844]
(*s)-n-乙基-5-氟-n-异丙基-2-((5-(2-(2-甲基-6-(甲基(丙基)氨基)己-3-基)-2,6-二氮杂螺[3.4]辛-6-基)-1,2,4-三嗪-6-基)氧基)苯甲酰胺
[1845][1846]
将n-乙基-5-氟-n-异丙基-2-((5-(2-(2-甲基-6-(甲基(丙基)氨基)己-3-基)-2,6-二氮杂螺[3.4]辛-6-基)-1,2,4-三嗪-6-基)氧基)苯甲酰胺(化合物124)(150mg)通过手性hplc经大赛璐chiralpak ig(柱：250x30mm 10um；流动相a：己烷；流动相b：etoh；流速：20ml/min，梯度条件从20％b至100％b)分离，以得到均呈浅黄色固体的标题化合物(化合物125)(38.0mg)和(化合物126)(27.2mg)。
[1847]
化合物130和131
[1848]
(*r)-n-乙基-2-((5-(2-(6-(乙基(甲基)氨基)-2-甲基己-3-基)-2,6-二氮杂螺[3.4]辛-6-基)-1,2,4-三嗪-6-基)氧基)-5-氟-n-异丙基苯甲酰胺
[1849]
(*s)-n-乙基-2-((5-(2-(6-(乙基(甲基)氨基)-2-甲基己-3-基)-2,6-二氮杂螺[3.4]辛-6-基)-1,2,4-三嗪-6-基)氧基)-5-氟-n-异丙基苯甲酰胺
[1850]
将n-乙基-2-((5-(2-(6-(乙基(甲基)氨基)-2-甲基己-3-基)-2,6-二氮杂螺[3.4]辛-6-基)-1,2,4-三嗪-6-基)氧基)-5-氟-n-异丙基苯甲酰胺(化合物129)(300mg)通过手性hplc经大赛璐chiralpak ig(柱：250x30mm 10um；流动相a：己烷；流动相b：etoh；流速：20ml/min；梯度条件从20％b至100％b)分离，以得到均呈浅黄色固体的标题化合物(化合物130)(68.4mg)和(化合物131)(54.8mg)。
[1851]
化合物174和175
[1852]
2-((5-(2-((r)-6-(((*r)-2,3-二甲氧基丙基)(甲基)氨基)-2-甲基己-3-基)-2,6-二氮杂螺[3.4]辛-6-基)-1,2,4-三嗪-6-基)氧基)-n-乙基-5-氟-n-异丙基苯甲酰胺
[1853]
2-((5-(2-((r)-6-(((*s)-2,3-二甲氧基丙基)(甲基)氨基)-2-甲基己-3-基)-2,6-二氮杂螺[3.4]辛-6-基)-1,2,4-三嗪-6-基)氧基)-n-乙基-5-氟-n-异丙基苯甲酰胺
[1854][1855]
将2-((5-(2-((3r)-6-((2,3-二甲氧基丙基)(甲基)氨基)-2-甲基己-3-基)-2,6-二氮杂螺[3.4]辛-6-基)-1,2,4-三嗪-6-基)氧基)-n-乙基-5-氟-n-异丙基苯甲酰胺(化合物173)(60mg)通过sfc经大赛璐chiralpak ad(柱：250x30mm 10um；流动相：a：超临界co2，b：ipa(0.1％氨)，a:b＝70％:30％等度(v/v)，70ml/min)纯化，以得到均呈无色粘性油状物的标题化合物(化合物174)(10mg)和(化合物175)(10mg)。
[1856]
化合物182和183
[1857]
2-((5-(2-((r)-6-(((*r)-4-(二甲基氨基)-4-氧代丁-2-基)(甲基)氨基)-2-甲基己-3-基)-2,6-二氮杂螺[3.4]辛-6-基)-1,2,4-三嗪-6-基)氧基)-n-乙基-5-氟-n-异丙基苯甲酰胺
[1858]
2-((5-(2-((r)-6-(((*s)-4-(二甲基氨基)-4-氧代丁-2-基)(甲基)氨基)-2-甲基己-3-基)-2,6-二氮杂螺[3.4]辛-6-基)-1,2,4-三嗪-6-基)氧基)-n-乙基-5-氟-n-异丙基苯甲酰胺
[1859][1860]
将2-((5-(2-((3r)-6-((4-(二甲基氨基)-4-氧代丁-2-基)(甲基)氨基)-2-甲基己-3-基)-2,6-二氮杂螺[3.4]辛-6-基)-1,2,4-三嗪-6-基)氧基)-n-乙基-5-氟-n-异丙基苯甲酰胺富马酸酯(化合物179)(58.0mg)通过sfc经大赛璐chiralpak ig(柱：250x30mm 10um；流动相：a：超临界co2，b：etoh(0.1％氨)，a:b＝45:55，80ml/min；柱温：38℃；喷嘴压力：100巴；喷嘴温度：60℃；蒸发器温度：20℃；微调器温度：25℃；波长：220nm)分离，以得到均呈无色粘性油状物的标题化合物(化合物182)(12.0mg)和(化合物183)(16.0mg)。
[1861]
化合物186和187
[1862]
2-((5-(2-((r)-6-(((*r)-3-(二甲基氨基)-2-甲基-3-氧代丙基)(甲基)氨基)-2-甲基己-3-基)-2,6-二氮杂螺[3.4]辛-6-基)-1,2,4-三嗪-6-基)氧基)-n-乙基-5-氟-n-异丙基苯甲酰胺
[1863]
2-((5-(2-((r)-6-(((*s)-3-(二甲基氨基)-2-甲基-3-氧代丙基)(甲基)氨基)-2-甲基己-3-基)-2,6-二氮杂螺[3.4]辛-6-基)-1,2,4-三嗪-6-基)氧基)-n-乙基-5-氟-n-异丙基苯甲酰胺
[1864][1865]
将2-((5-(2-((3r)-6-((3-(二甲基氨基)-2-甲基-3-氧代丙基)(甲基)氨基)-2-甲基己-3-基)-2,6-二氮杂螺[3.4]辛-6-基)-1,2,4-三嗪-6-基)氧基)-n-乙基-5-氟-n-异丙基苯甲酰胺(化合物180)(42.0mg)通过sfc经大赛璐chiralpak ad-h(柱：250x30mm 5um；流动相：a：超临界co2，b：ipa(0.1％氨)，a:b＝70:30，60ml/min；柱温：38℃；喷嘴压力：100巴；喷嘴温度：60℃；蒸发器温度：20℃；微调器温度：25℃；波长：220nm)分离，以得到均呈浅黄色粘性油状物的标题化合物(化合物186)(20.0mg)和(化合物187)(20.0mg)。
[1866]
化合物214和215
[1867]
(*r)-n-乙基-5-氟-2-((5-(2-(1-羟基-4-甲基戊-3-基)-2,6-二氮杂螺[3.4]辛-6-基)-1,2,4-三嗪-6-基)氧基)-n-异丙基苯甲酰胺
[1868]
(*s)-n-乙基-5-氟-2-((5-(2-(1-羟基-4-甲基戊-3-基)-2,6-二氮杂螺[3.4]辛-6-基)-1,2,4-三嗪-6-基)氧基)-n-异丙基苯甲酰胺
[1869][1870]
将n-乙基-5-氟-2-((5-(2-(1-羟基-4-甲基戊-3-基)-2,6-二氮杂螺[3.4]辛-6-基)-1,2,4-三嗪-6-基)氧基)-n-异丙基苯甲酰胺(化合物213)(300mg，粗品)首先通过制备型hplc经菲罗门gemini-nx(柱：c18 75x30mm 3um；洗脱液：acn/h2o(0.05％氨+10mm nh4hco3)从30％至60％，v/v)纯化，以得到纯产物(100mg)。将此纯产物通过sfc经大赛璐chiralpak ig(柱：250x30mm 10μm；流动相：a：超临界co2，b：meoh(含有0.1％氨)，a:b＝45％:55％等度洗脱)进一步纯化，以得到均呈白色固体的标题化合物(化合物214)(38.8mg)和(化合物215)(40.7mg)。
[1871]
化合物214
[1872]
lc-ms(esi)(方法1)：r
t
＝3.000min，m/z发现值515.2[m+h]
+
。
[1873]
sfc(方法22)：r
t
＝4.406min。
[1874]
化合物215
[1875]
lc-ms(esi)(方法1)：r
t
＝3.145min，m/z发现值515.2[m+h]
+
。
[1876]
sfc(方法22)：r
t
＝4.925min。
[1877]
化合物216和217
[1878]
叔丁基(*r)-(3-(6-(6-(2-(乙基(异丙基)氨基甲酰基)-4-氟苯氧基)-1,2,4-三嗪-5-基)-2,6-二氮杂螺[3.4]辛-2-基)-4-甲基戊基)氨基甲酸酯
[1879]
叔丁基(*s)-(3-(6-(6-(2-(乙基(异丙基)氨基甲酰基)-4-氟苯氧基)-1,2,4-三嗪-5-基)-2,6-二氮杂螺[3.4]辛-2-基)-4-甲基戊基)氨基甲酸酯
[1880][1881]
将叔丁基(3-(6-(6-(2-(乙基(异丙基)氨基甲酰基)-4-氟苯氧基)-1,2,4-三嗪-5-基)-2,6-二氮杂螺[3.4]辛-2-基)-4-甲基戊基)氨基甲酸酯(化合物51)(1.00g)通过sfc经大赛璐chiralpak ig(柱：250x30mm 10um；流动相：a：超临界co2，b：meoh(0.1％氨)，a:b＝60:40(v/v))纯化，以得到均呈白色固体的标题化合物(化合物216)(400mg)和(化合物217)(450mg)。
[1882]
化合物230
[1883]
(*r)-2-((5-(2-(1-((2-氨基-2-氧代乙基)氨基)-4-甲基戊-3-基)-2,6-二氮杂螺[3.4]辛-6-基)-1,2,4-三嗪-6-基)氧基)-n-乙基-5-氟-n-异丙基苯甲酰胺
[1884][1885]
将(*r)-3-(6-(6-(2-(乙基(异丙基)氨基甲酰基)-4-氟苯氧基)-1,2,4-三嗪-5-基)-2,6-二氮杂螺[3.4]辛-2-基)-4-甲基戊基甲磺酸酯(中间体124)(160mg，粗品)在thf(2ml)中的溶液添加至2-氨基乙酰胺(150mg，2.03mmol)在thf(5ml)中的溶液。将所得混合物在rt下搅拌2h。将反应混合物过滤并用thf(20ml)洗涤。将滤液在真空中浓缩以得到粗产物，将该粗产物通过制备型hplc经xtimate(柱：c18 150x40mm 5um；洗脱液：acn/h2o(0.05％氨)从25％至55％，v/v)纯化，以得到呈白色固体的标题化合物(22.1mg)。
[1886]
lc-ms(esi)(方法1)：r
t
＝2.849min，m/z发现值571.2[m+h]
+
。
[1887]
sfc(方法6)：r
t
＝1.598min。
[1888]
化合物267、269、271、272、273、277
[1889]
(*r)-n-乙基-5-氟-2-((5-(2-(1-((2-羟基乙基)氨基)-4-甲基戊-3-基)-2,6-二氮杂螺[3.4]辛-6-基)-1,2,4-三嗪-6-基)氧基)-n-异丙基苯甲酰胺
[1890]
(*r)-n-乙基-5-氟-2-((5-(2-(1-((2-羟基乙基)(甲基)氨基)-4-甲基戊-3-基)-2,6-二氮杂螺[3.4]辛-6-基)-1,2,4-三嗪-6-基)氧基)-n-异丙基苯甲酰胺
[1891]
(*r)-n-乙基-5-氟-n-异丙基-2-((5-(2-(1-((3-甲氧基丙基)氨基)-4-甲基戊-3-基)-2,6-二氮杂螺[3.4]辛-6-基)-1,2,4-三嗪-6-基)氧基)苯甲酰胺
[1892]
(*r)-n-乙基-2-((5-(2-(1-(乙基氨基)-4-甲基戊-3-基)-2,6-二氮杂螺[3.4]辛-6-基)-1,2,4-三嗪-6-基)氧基)-5-氟-n-异丙基苯甲酰胺甲酸酯
[1893]
(*r)-n-乙基-5-氟-2-((5-(2-(1-((3-羟基丙基)氨基)-4-甲基戊-3-基)-2,6-二氮杂螺[3.4]辛-6-基)-1,2,4-三嗪-6-基)氧基)-n-异丙基苯甲酰胺
[1894]
(*r)-2-((5-(2-(1-((3-氨基-3-氧代丙基)氨基)-4-甲基戊-3-基)-2,6-二氮杂螺[3.4]辛-6-基)-1,2,4-三嗪-6-基)氧基)-n-乙基-5-氟-n-异丙基苯甲酰胺
[1895]
通过针对化合物230的如上所述的类似方法合成以下化合物
[1896]
[1897][1898]
化合物236和237
[1899]
n-乙基-5-氟-n-异丙基-2-((5-(2-((3*r,5*r)-6-((2-甲氧基乙基)(甲基)氨基)-2,5-二甲基己-3-基)-2,6-二氮杂螺[3.4]辛-6-基)-1,2,4-三嗪-6-基)氧基)苯甲酰胺
[1900]
n-乙基-5-氟-n-异丙基-2-((5-(2-((3*s,5*r)-6-((2-甲氧基乙基)(甲基)氨基)-2,5-二甲基己-3-基)-2,6-二氮杂螺[3.4]辛-6-基)-1,2,4-三嗪-6-基)氧基)苯甲酰胺
[1901][1902]
将n-乙基-5-氟-n-异丙基-2-((5-(2-((5*r)-6-((2-甲氧基乙基)(甲基)氨基)-2,5-二甲基己-3-基)-2,6-二氮杂螺[3.4]辛-6-基)-1,2,4-三嗪-6-基)氧基)苯甲酰胺(化合物234)(89.0mg)通过sfc经大赛璐chiralpak ad(柱：250x30mm 10um；流动相：a：超临界co2，b：ipa(0.1％氨)，a:b＝80:20，60ml/min)纯化，以得到均呈黄色粘性固体的标题化合物(化合物236)(31.0mg，34％产率)和(化合物237)(24.7mg，27％产率)。
[1903]
化合物238和239
[1904]
n-乙基-5-氟-n-异丙基-2-((5-(2-((3*r,5*s)-6-((2-甲氧基乙基)(甲基)氨基)-2,5-二甲基己-3-基)-2,6-二氮杂螺[3.4]辛-6-基)-1,2,4-三嗪-6-基)氧基)苯甲酰胺
[1905]
n-乙基-5-氟-n-异丙基-2-((5-(2-((3*s,5*s)-6-((2-甲氧基乙基)(甲基)氨基)-2,5-二甲基己-3-基)-2,6-二氮杂螺[3.4]辛-6-基)-1,2,4-三嗪-6-基)氧基)苯甲酰胺
[1906][1907]
将n-乙基-5-氟-n-异丙基-2-((5-(2-((5*s)-6-((2-甲氧基乙基)(甲基)氨基)-2,5-二甲基己-3-基)-2,6-二氮杂螺[3.4]辛-6-基)-1,2,4-三嗪-6-基)氧基)苯甲酰胺(化合物235)(51mg)通过sfc经大赛璐chiralcel od-h(柱：250x30mm 5um；流动相：a：超临界co2，b：etoh(0.1％氨)，a:b＝85:15，60ml/min)纯化，以得到均呈白色固体标题化合物(化合物238)(17.9mg,35％)和(化合物239)(14.3mg，28％)。
[1908]
化合物248和249
[1909]
n-乙基-5-氟-n-异丙基-2-((5-(2-((r)-6-(((*r)-2-甲氧基丙基)(甲基)氨基)-2-甲基己-3-基)-2,6-二氮杂螺[3.4]辛-6-基)-1,2,4-三嗪-6-基)氧基)苯甲酰胺
[1910]
n-乙基-5-氟-n-异丙基-2-((5-(2-((r)-6-(((*s)-2-甲氧基丙基)(甲基)氨基)-2-甲基己-3-基)-2,6-二氮杂螺[3.4]辛-6-基)-1,2,4-三嗪-6-基)氧基)苯甲酰胺
[1911][1912]
将n-乙基-5-氟-n-异丙基-2-((5-(2-((3r)-6-((2-甲氧基丙基)(甲基)氨基)-2-甲基己-3-基)-2,6-二氮杂螺[3.4]辛-6-基)-1,2,4-三嗪-6-基)氧基)苯甲酰胺(化合物247)(70mg)通过sfc经大赛璐chiralpak ad-h(柱：250x30mm 5μm；流动相：a：超临界co2，b：ipa(0.1％氨)，a:b＝75％:25％，60ml/min)纯化，以得到均呈浅黄色粘性油状物的标题化合物(化合物248)(10mg)和(化合物249)(30mg)。
[1913]
化合物261和262
[1914]
n-乙基-5-氟-2-((5-(2-(6-羟基-2,4-二甲基己-3-基)-2,6-二氮杂螺[3.4]辛-6-基)-1,2,4-三嗪-6-基)氧基)-n-异丙基苯甲酰胺(r,s和s,r的混合物；或r,r和s,s的混合物)
[1915]
n-乙基-5-氟-2-((5-(2-(6-羟基-2,4-二甲基己-3-基)-2,6-二氮杂螺[3.4]辛-6-基)-1,2,4-三嗪-6-基)氧基)-n-异丙基苯甲酰胺(r,r和s,s的混合物；或r,s和s,r的混合物)
[1916][1917]
将n-乙基-5-氟-2-((5-(2-(6-羟基-2,4-二甲基己-3-基)-2,6-二氮杂螺[3.4]辛-6-基)-1,2,4-三嗪-6-基)氧基)-n-异丙基苯甲酰胺(化合物260)(5.0g，粗品)通过hplc(柱：xtimate c18 150x40mm 5μm；流动相：a：h2o(0.05％氨)，b：acn，流速：60ml/min，梯度：从40％b至60％b)纯化，以得到均呈白色固体的标题化合物(化合物261)(220mg)和(化合物262)(300mg)。
[1918]
化合物298
[1919]
n-乙基-5-氟-2-((5-(2-((3r)-6-羟基-2-甲基庚-3-基)-2,6-二氮杂螺[3.4]辛-6-基)-1,2,4-三嗪-6-基)氧基)-n-异丙基苯甲酰胺
[1920]
通过针对中间体53的以上所述的类似方法合成以下化合物
[1921][1922]
化合物301
[1923]
n-乙基-5-氟-n-异丙基-2-((5-(6-(6-((2-甲氧基乙基)(甲基)氨基)-2-甲基己-3-基)-2,6-二氮杂螺[3.4]辛-2-基)-1,2,4-三嗪-6-基)氧基)苯甲酰胺
[1924][1925]
在n2气氛下，向n-(2-甲氧基乙基)-n,5-二甲基-4-(2,6-二氮杂螺[3.4]辛-6-基)己-1-胺盐酸盐(中间体164)(2.10g，粗品)和dbu(1.80g，11.8mmol)在acn(40ml)中的溶液中添加n-乙基-5-氟-n-异丙基-2-((5-(2,2,2-三氟乙氧基)-1,2,4-三嗪-6-基)氧基)苯甲酰胺(中间体159)(600mg，88％纯度，1.31mmol)。将所得混合物在26℃下搅拌16h。将反应混合物在减压下浓缩并将残余物通过制备型hplc经菲罗门gemini-nx(柱：80
×
40mm 3μm，流动相：a：h2o(0.05％氨)，b：acn，流速：30ml/min，梯度条件：从29％b至99％b)纯化，以得到呈无色油状物的标题化合物(130mg)。
[1926]
化合物319、320、321和322
[1927]
n-乙基-5-氟-2-((5-(2-((3*r,5*r)-5-羟基-6-(异丙基(甲基)氨基)-2-甲基己-3-基)-2,6-二氮杂螺[3.4]辛-6-基)-1,2,4-三嗪-6-基)氧基)-n-异丙基苯甲酰胺
[1928]
n-乙基-5-氟-2-((5-(2-((3*s,5*s)-5-羟基-6-(异丙基(甲基)氨基)-2-甲基己-3-基)-2,6-二氮杂螺[3.4]辛-6-基)-1,2,4-三嗪-6-基)氧基)-n-异丙基苯甲酰胺
[1929]
n-乙基-5-氟-2-((5-(2-((3*r,5*s)-5-羟基-6-(异丙基(甲基)氨基)-2-甲基己-3-基)-2,6-二氮杂螺[3.4]辛-6-基)-1,2,4-三嗪-6-基)氧基)-n-异丙基苯甲酰胺
[1930]
n-乙基-5-氟-2-((5-(2-((3*s,5*r)-5-羟基-6-(异丙基(甲基)氨基)-2-甲基己-3-基)-2,6-二氮杂螺[3.4]辛-6-基)-1,2,4-三嗪-6-基)氧基)-n-异丙基苯甲酰胺
[1931][1932]
将n-乙基-5-氟-2-((5-(2-(5-羟基-6-(异丙基(甲基)氨基)-2-甲基己-3-基)-2,6-二氮杂螺[3.4]辛-6-基)-1,2,4-三嗪-6-基)氧基)-n-异丙基苯甲酰胺(化合物318)(235mg，91.5％纯度)首先通过制备型hplc经welch xtimate(柱：150
×
25mm 5μm，流动相a：h2o(0.2％fa)，流动相b：acn，流速：25ml/min，梯度条件：从2％b至32％)分离，以得到(化合
6-基)-1,2,4-三嗪-6-基)氧基)-n-乙基-5-氟-n-异丙基苯甲酰胺(化合物329)(450mg)首先通过sfc经大赛璐chiralpak ad(柱：250
×
30mm，10μm，流动相：a：超临界co2，b：etoh(0.1％氨)，a:b＝80:20，60ml/min)分离，以得到(化合物330和化合物331)的混合物(200mg)，化合物332(70mg，通过lcms的100％纯度)和化合物333(170mg，通过lcms的88.9％纯度)。
[1943]
将化合物333(170mg，通过lcms的88.9％纯度)通过制备型hplc经菲罗门gemini-nx(柱：75
×
30mm，3um，流动相：a：h2o(0.05％氨+10mm nh4hco3)，b：acn，梯度条件：从33％b至63％，流速：25ml/min)进一步纯化，以得到化合物333(69mg，通过lcms的97.5％纯度)。
[1944]
将(化合物330和化合物331)的混合物(200mg)通过手性hplc经大赛璐chiralpak ig(柱：250
×
30mm，10μm，流动相：a：庚烷，b：etoh(0.1％氨)，梯度从30％b至50％，流速：25ml/min)进一步分离，以得到化合物330(60mg，通过lcms的75％纯度)和化合物331(60mg，通过lcms的92％纯度)。
[1945]
将化合物330(60mg，通过lcms的75％纯度)和化合物331(60mg，通过lcms的92％纯度)通过制备型hplc经welch xtimate(柱：150
×
25mm，5μm；流动相：a：h2o(0.2％fa)，b：acn，流速：25ml/min，梯度条件：从2％b至32％b)进一步分离纯化，并用氨碱化以得到化合物330(29mg，通过lcms的100％纯度)和化合物331(23mg，通过lcms的100％纯度)。
[1946]
化合物340和341
[1947]
n-乙基-2-((5-(2-((3*r,5s)-6-(乙基(甲基)氨基)-5-羟基-2-甲基己-3-基)-2,6-二氮杂螺[3.4]辛-6-基)-1,2,4-三嗪-6-基)氧基)-5-氟-n-异丙基苯甲酰胺
[1948]
n-乙基-2-((5-(2-((3*s,5s)-6-(乙基(甲基)氨基)-5-羟基-2-甲基己-3-基)-2,6-二氮杂螺[3.4]辛-6-基)-1,2,4-三嗪-6-基)氧基)-5-氟-n-异丙基苯甲酰胺
[1949][1950]
将n-乙基-2-((5-(2-((5s)-6-(乙基(甲基)氨基)-5-羟基-2-甲基己-3-基)-2,6-二氮杂螺[3.4]辛-6-基)-1,2,4-三嗪-6-基)氧基)-5-氟-n-异丙基苯甲酰胺(化合物338)
(160mg)通过sfc经大赛璐chiralpak ig(柱：250
×
30mm，10μm；流动相：a：超临界co2，b：ipa(0.1％氨)，a:b＝55:45，80ml/min)分离，以得到均呈无色油状物标题化合物(化合物340)(30mg)和(化合物341)(66mg)。
[1951]
化合物344和345
[1952]
n-乙基-2-((5-(2-((3*r,5r)-6-(乙基(甲基)氨基)-5-羟基-2-甲基己-3-基)-2,6-二氮杂螺[3.4]辛-6-基)-1,2,4-三嗪-6-基)氧基)-5-氟-n-异丙基苯甲酰胺
[1953]
n-乙基-2-((5-(2-((3*s,5r)-6-(乙基(甲基)氨基)-5-羟基-2-甲基己-3-基)-2,6-二氮杂螺[3.4]辛-6-基)-1,2,4-三嗪-6-基)氧基)-5-氟-n-异丙基苯甲酰胺
[1954][1955]
将n-乙基-2-((5-(2-((5r)-6-(乙基(甲基)氨基)-5-羟基-2-甲基己-3-基)-2,6-二氮杂螺[3.4]辛-6-基)-1,2,4-三嗪-6-基)氧基)-5-氟-n-异丙基苯甲酰胺(化合物339)(200mg)通过sfc经大赛璐chiralpak ig(柱：250
×
30mm，10μm；流动相：a：超临界co2，b：etoh(0.1％氨)，a:b＝45:55，80ml/min)分离，以得到均呈无色粘性固体的化合物344(100mg，通过lcms的98.4％纯度)和化合物345(70mg，通过lcms的76％纯度)。
[1956]
化合物347
[1957]
n-乙基-2-((5-(2-((3*s,5r)-6-(乙基(甲基)氨基)-5-羟基-2-甲基己-3-基)-2,6-二氮杂螺[3.4]辛-6-基)-1,2,4-三嗪-6-基)氧基)-5-氟-n-异丙基苯甲酰胺甲酸酯
[1958][1959]
将n-乙基-2-((5-(2-((3*s,5r)-6-(乙基(甲基)氨基)-5-羟基-2-甲基己-3-基)-2,6-二氮杂螺[3.4]辛-6-基)-1,2,4-三嗪-6-基)氧基)-5-氟-n-异丙基苯甲酰胺(化合物345)(70mg，通过lcms的76％纯度)通过制备型hplc经菲罗门gemini-nx(柱：150
×
30mm，5um；流动相a：h2o(0.225％fa)，流动相b：acn，流速：35ml/min，梯度条件：从15％b至45％b)进一步纯化，以得到呈白色固体的标题化合物(40.0mg，通过lcms的99.6％纯度)。
[1960]
lc-ms(esi)(方法1)：r
t
＝2.891min，m/z发现值586.4[m+h]
+
。
[1961]
sfc(方法8)：r
t
＝2.652min。
[1962]
化合物350和351
[1963]
n-乙基-5-氟-2-((5-(2-((3*r,5s)-5-羟基-6-((2-甲氧基乙基)(甲基)氨基)-2-甲基己-3-基)-2,6-二氮杂螺[3.4]辛-6-基)-1,2,4-三嗪-6-基)氧基)-n-异丙基苯甲酰胺
[1964]
n-乙基-5-氟-2-((5-(2-((3*s,5s)-5-羟基-6-((2-甲氧基乙基)(甲基)氨基)-2-甲基己-3-基)-2,6-二氮杂螺[3.4]辛-6-基)-1,2,4-三嗪-6-基)氧基)-n-异丙基苯甲酰胺
[1965][1966]
将n-乙基-5-氟-2-((5-(2-((5s)-5-羟基-6-((2-甲氧基乙基)(甲基)氨基)-2-甲基己-3-基)-2,6-二氮杂螺[3.4]辛-6-基)-1,2,4-三嗪-6-基)氧基)-n-异丙基苯甲酰胺(化合物348)(60mg)通过sfc经大赛璐chiralpak ig(柱：250
×
30mm，10um；流动相：a：超临界co2，b：etoh(0.1％氨)，a:b＝55:45，80ml/min)分离，以得到标题化合物(化合物350)
(22mg)和(化合物351)(27.7mg)。
[1967]
化合物354和355
[1968]
n-乙基-5-氟-2-((5-(2-((3*r,5r)-5-羟基-6-((2-甲氧基乙基)(甲基)氨基)-2-甲基己-3-基)-2,6-二氮杂螺[3.4]辛-6-基)-1,2,4-三嗪-6-基)氧基)-n-异丙基苯甲酰胺
[1969]
n-乙基-5-氟-2-((5-(2-((3*s,5r)-5-羟基-6-((2-甲氧基乙基)(甲基)氨基)-2-甲基己-3-基)-2,6-二氮杂螺[3.4]辛-6-基)-1,2,4-三嗪-6-基)氧基)-n-异丙基苯甲酰胺
[1970][1971]
将n-乙基-5-氟-2-((5-(2-((5r)-5-羟基-6-((2-甲氧基乙基)(甲基)氨基)-2-甲基己-3-基)-2,6-二氮杂螺[3.4]辛-6-基)-1,2,4-三嗪-6-基)氧基)-n-异丙基苯甲酰胺(化合物349)(200mg)通过sfc经大赛璐chiralpak ig(柱：250
×
30mm，10um；流动相：a：超临界co2，b：etoh(0.1％氨)，a:b＝50:50，80ml/min)分离，以得到均呈无色粘性固体的标题化合物(化合物354)(100mg)和(化合物355)(70mg)。
[1972]
化合物361和362
[1973]
2-((5-(2-((3*r)-6-(二甲基氨基)-5-羟基-2-甲基己-3-基)-2,6-二氮杂螺[3.4]辛-6-基)-1,2,4-三嗪-6-基)氧基)-5-氟-n,n-二异丙基苯甲酰胺
[1974]
2-((5-(2-((3*s)-6-(二甲基氨基)-5-羟基-2-甲基己-3-基)-2,6-二氮杂螺[3.4]辛-6-基)-1,2,4-三嗪-6-基)氧基)-5-氟-n,n-二异丙基苯甲酰胺
[1975][1976]
将2-((5-(2-(6-(二甲基氨基)-5-羟基-2-甲基己-3-基)-2,6-二氮杂螺[3.4]辛-6-基)-1,2,4-三嗪-6-基)氧基)-5-氟-n,n-二异丙基苯甲酰胺(化合物360)(250mg)通过sfc经大赛璐chiralpak ig(柱：250
×
30mm，10um；流动相：a：超临界co2，b：ipa(0.1％氨)，a:b＝40:40，80ml/min)分离，以得到均呈白色固体的标题化合物(化合物361)(105mg)和(化合物362)(120mg)。
[1977]
化合物363和364
[1978]
2-((5-(2-((3*r,5*r)-6-(二甲基氨基)-5-羟基-2-甲基己-3-基)-2,6-二氮杂螺[3.4]辛-6-基)-1,2,4-三嗪-6-基)氧基)-5-氟-n,n-二异丙基苯甲酰胺
[1979]
2-((5-(2-((3*r,5*s)-6-(二甲基氨基)-5-羟基-2-甲基己-3-基)-2,6-二氮杂螺[3.4]辛-6-基)-1,2,4-三嗪-6-基)氧基)-5-氟-n,n-二异丙基苯甲酰胺
[1980][1981]
将2-((5-(2-((3*r)-6-(二甲基氨基)-5-羟基-2-甲基己-3-基)-2,6-二氮杂螺[3.4]辛-6-基)-1,2,4-三嗪-6-基)氧基)-5-氟-n,n-二异丙基苯甲酰胺(化合物361)(105mg)通过sfc经菲罗门-纤维素-2(柱：250x30mm，10um；流动相：a：超临界co2，b：0.1％nh3h2o etoh(0.1％氨)，a:b＝65:35，80ml/min)分离，以得到均呈无色粘性固体的标题化合物(化合物363)(45mg)和(化合物364)(35mg)。
[1982]
化合物367和368
[1983]
2-((5-(2-((3*s,5*s)-6-(二甲基氨基)-5-羟基-2-甲基己-3-基)-2,6-二氮杂螺[3.4]辛-6-基)-1,2,4-三嗪-6-基)氧基)-5-氟-n,n-二异丙基苯甲酰胺
[1984]
2-((5-(2-((3*s,5*r)-6-(二甲基氨基)-5-羟基-2-甲基己-3-基)-2,6-二氮杂螺[3.4]辛-6-基)-1,2,4-三嗪-6-基)氧基)-5-氟-n,n-二异丙基苯甲酰胺
[1985][1986]
将2-((5-(2-((3*s)-6-(二甲基氨基)-5-羟基-2-甲基己-3-基)-2,6-二氮杂螺[3.4]辛-6-基)-1,2,4-三嗪-6-基)氧基)-5-氟-n,n-二异丙基苯甲酰胺(化合物362)(120mg)通过sfc经大赛璐chiralpak as(柱：250
×
30mm，10um；流动相：a：超临界co2，b：etoh(0.1％氨)，a:b＝75:25，60ml/min)分离，以得到均呈无色油状物的标题化合物(化合物367)(48mg)和(化合物368)(34mg)。
[1987]
化合物384和385
[1988]
n-乙基-5-氟-2-((5-(2-((3*r,5*r)-5-羟基-2-甲基-6-(甲基(丙基)氨基)己-3-基)-2,6-二氮杂螺[3.4]辛-6-基)-1,2,4-三嗪-6-基)氧基)-n-异丙基苯甲酰胺
[1989]
n-乙基-5-氟-2-((5-(2-((3*s,5*s)-5-羟基-2-甲基-6-(甲基(丙基)氨基)己-3-基)-2,6-二氮杂螺[3.4]辛-6-基)-1,2,4-三嗪-6-基)氧基)-n-异丙基苯甲酰胺
[1990][1991]
将n-乙基-5-氟-2-((5-(2-(5-羟基-2-甲基-6-(甲基(丙基)氨基)己-3-基)-2,6-二氮杂螺[3.4]辛-6-基)-1,2,4-三嗪-6-基)氧基)-n-异丙基苯甲酰胺(化合物383)(432mg)通过制备型hplc经welch xtimate(柱：c18 100
×
40mm 3μm，流动相a：h2o(0.075％tfa)，流动相b：acn，流速：30ml/min，梯度条件：从10％b至40％b)纯化，以得到化合物384和化合物385的混合物(166mg，呈tfa盐)。
[1992]
将化合物384和化合物385(166mg，tfa盐)的混合物通过手性hplc经大赛璐chiralpak ig(柱：250
×
30mm，10μm；流动相：a：庚烷，b：etoh(0.1％氨)，流速：25ml/min，梯度条件：从20％b至50％b)进一步分离，以得到均呈无色粘性油状物的标题化合物(化合物384)(30.7mg)和(化合物385)(14.4mg)。
[1993]
化合物389和390
[1994]
2-((5-(2-((3*r,5*s)-6-(乙基(甲基)氨基)-5-羟基-2-甲基己-3-基)-2,6-二氮杂螺[3.4]辛-6-基)-1,2,4-三嗪-6-基)氧基)-5-氟-n,n-二异丙基苯甲酰胺
[1995]
2-((5-(2-((3*s,5*s)-6-(乙基(甲基)氨基)-5-羟基-2-甲基己-3-基)-2,6-二氮杂螺[3.4]辛-6-基)-1,2,4-三嗪-6-基)氧基)-5-氟-n,n-二异丙基苯甲酰胺
[1996][1997]
将2-((5-(2-(6-(乙基(甲基)氨基)-5-羟基-2-甲基己-3-基)-2,6-二氮杂螺[3.4]辛-6-基)-1,2,4-三嗪-6-基)氧基)-5-氟-n,n-二异丙基苯甲酰胺(化合物388)(190mg)首先通过sfc经大赛璐chiralpak ig(柱：250
×
30mm，10μm；流动相：a：超临界co2，b：etoh(0.1％氨)，a:b＝60:40；流速：80ml/min)分离，以得到化合物390(45mg)和3个非对映异构体的混合物。(120mg)。
[1998]
将3个非对映异构体的混合物(120mg)通过手性hplc经大赛璐大赛璐chiralpak ig(柱：250
×
30mm，10μm)，流动相：a：庚烷，b：etoh(0.1％氨)，a:b＝从70:30至50:50，流速：25ml/min)进一步分离，以得到化合物389(22.0mg，通过lcms的86.6％纯度)。
[1999]
将化合物389(22.0mg，通过lcms的86.6％纯度)通过制备型hplc经welch xtimate(柱：c18 150
×
25mm 5μm，流动相：a：h2o(0.2％fa)，b：acn，梯度条件：从2％b至32％，流速：25ml/min)进一步纯化，并用氨碱化以得到化合物389(15.0mg，通过lcms的100％纯度)。
[2000]
化合物393
[2001]
(r)-2-((3-氯-5-(2-(6-((2-甲氧基乙基)(甲基)氨基)-2-甲基己-3-基)-2,6-二氮杂螺[3.4]辛-6-基)-1,2,4-三嗪-6-基)氧基)-n-乙基-5-氟-n-异丙基苯甲酰胺
[2002]
制备方法a：
[2003][2004]
将n-乙基-5-氟-2-羟基-n-异丙基苯甲酰胺(中间体28)(1.10g，4.88mmol)、(r)-4-(6-(3,6-二氯-1,2,4-三嗪-5-基)-2,6-二氮杂螺[3.4]辛-2-基)-n-(2-甲氧基乙基)-n,5-二甲基己-1-胺(中间体225)(1.70g，3.82mmol)和dbu(750mg，4.93mmol)在无水thf
(15ml)中的混合物在40℃下搅拌8h。在冷却至rt后，将混合物在减压下浓缩，将所得残余物用dcm(60ml)稀释并用h2o(20ml
×
3)洗涤。将有机层经无水na2so4干燥，过滤，并在减压下浓缩，以给出粗产物，将该粗产物通过fcc(meoh/dcm＝0％至10％)纯化，以得到黄色油状物(1.40g)，将该黄色油状物通过sfc经大赛璐chiralpak ad(柱：250
×
50mm，10um；流动相：a：超临界co2，b：etoh(0.1％氨)，a:b＝50:50，70ml/min；柱温：38℃；喷嘴压力：100巴；喷嘴温度：60℃；蒸发器温度：20℃；微调器温度：25℃；波长：220nm)进一步分离，以得到标题化合物(1.0g)。
[2005]
制备方法b：
[2006][2007]
在20℃至30℃下，向(r)-4-(6-(3,6-二氯-1,2,4-三嗪-5-基)-2,6-重氮基螺[3.4]辛-2-基)-n-(2-甲氧基乙基)-n,5-二甲基己-1-胺(中间体225)(676g在2-methf中的14.8wt％溶液，100g校正的中间体225)和n-乙基-5-氟-2-羟基-n-异丙基苯甲酰胺(中间体28)(50.6g)在2-methf(40g)中的2-methf溶液中添加四甲基胍(31g)并将混合物搅拌40至48h。添加7％nahco3水溶液(500g)并将混合物搅拌30至60min。去除水层并将有机层用4％naoh水溶液(2x500g)洗涤两次和用10％na2so4水溶液(500g)洗涤一次。将有机层在减压下(《40℃)浓缩至2.2至3.0个体积，并用meoh(1
×
790g和2
×
395g)冲洗三次直到2-methf和水的含量两者均《1.0％，以得到以86％测定产率的呈在甲醇中60.1wt％溶液的所希望的化合物。
[2008]
化合物400、414
[2009]
(r)-2-((3-氯-5-(2-(6-((2-甲氧基乙基)(甲基)氨基)-2-甲基己-3-基)-2,6-二氮杂螺[3.4]辛-6-基)-1,2,4-三嗪-6-基)氧基)-n-(乙基-13
c2)-5-氟-n-(丙-2-基-13
c3)苯甲酰胺
[2010]
(r)-2-((3-氯-5-(2-(6-((2-甲氧基乙基)(甲基)氨基)-2-甲基己-3-基)-2,6-二氮杂螺[3.4]辛-6-基)-1,2,4-三嗪-6-基)氧基)-5-氟-n-异丙基-n-甲基苯甲酰胺
[2011]
通过针对化合物393(通过方法a)的以上所述的类似方法合成以下化合物
[2012]
[2013][2014]
化合物395
[2015]
(r)-n-乙基-5-氟-n-异丙基-2-((5-(2-(6-((2-甲氧基乙基)(甲基)氨基)-2-甲基己-3-基)-2,6-二氮杂螺[3.4]辛-6-基)-3-(甲基氨基)-1,2,4-三嗪-6-基)氧基)苯甲酰胺甲酸酯
[2016][2017]
将(r)-2-((3-氯-5-(2-(6-((2-甲氧基乙基)(甲基)氨基)-2-甲基己-3-基)-2,6-二氮杂螺[3.4]辛-6-基)-1,2,4-三嗪-6-基)氧基)-n-乙基-5-氟-n-异丙基苯甲酰胺(化合物393)(100mg，0.158mmol)和甲胺(1ml，在etoh中的33％)的混合物在90℃下搅拌1h。在冷却至rt后，将混合物在减压下浓缩以给出粗产物，将该粗产物通过制备型hplc(柱：welch xtimate c18 150
×
25mm 5um，流动相a：h2o(0.2％fa)，流动相b：acn，流速：25ml/min，梯度条件：从5％b至35％)纯化，以得到呈粘性固体的标题化合物(49.8mg，43.6％产率)。
[2018]
lc-ms(esi)(方法2)：r
t
＝1.997min，m/z发现值629.4[m+h]
+
。
[2019]
sfc(方法6)：r
t
＝1.228min。
[2020]
化合物406和407
[2021]
(r)-2-((5-(2-(6-氨基-2-甲基己-3-基)-2,6-二氮杂螺[3.4]辛-6-基)-3-氯-1,2,4-三嗪-6-基)氧基)-n-乙基-5-氟-n-异丙基苯甲酰胺甲酸酯
[2022]
(r)-2-((5-(2-(6-氨基-2-甲基己-3-基)-2,6-二氮杂螺[3.4]辛-6-基)-3-甲氧基-1,2,4-三嗪-6-基)氧基)-n-乙基-5-氟-n-异丙基苯甲酰胺甲酸酯
[2023]
向叔丁基(r)-(4-(6-(3-氯-6-(2-(乙基(异丙基)氨基甲酰基)-4-氟苯氧基)-1,2,4-三嗪-5-基)-2,6-二氮杂螺[3.4]辛-2-基)-5-甲基己基)氨基甲酸酯(化合物404)(1.10g，1.66mmol)在meoh(15.0ml)中的溶液中添加hcl/二噁烷(15.0ml，60.0mmol，4m)，并
将所得混合物在20℃下搅拌12h。将反应混合物在减压下浓缩以给出残余物，将该残余物通过制备型hplc经welch xtimate(柱：c18 150
×
25mm，5um，流动相a：h2o(0.2％fa)，流动相b：acn，流速：25ml/min，梯度条件从3％b至33％b)纯化，以得到均呈粘性油状物的标题化合物(化合物406)(360mg)和(化合物407)(160mg)。
[2024]
将(化合物406)(60mg)通过制备型hplc经boston green ods(柱：150
×
30mm，5um；流动相a：h2o(0.225％fa)，流动相b：acn，流速：35ml/min，梯度条件从5％b至35％b)进一步纯化，以得到标题化合物(化合物406)(40mg)。
[2025]
化合物406
[2026]
lc-ms(esi)(方法1)：r
t
＝3.400min，m/z发现值562.3[m+h]
+
。
[2027]
sfc(方法32)：r
t
＝2.093min。
[2028]
化合物407
[2029]
lc-ms(esi)(方法1)：r
t
＝2.028min，m/z发现值558.3[m+h]
+
。
[2030]
sfc(方法6)：r
t
＝1.42min。
[2031]
化合物416
[2032]
(r)-n-乙基-5-氟-n-异丙基-2-((3-甲氧基-5-(2-(6-((2-甲氧基乙基)(甲基)氨基)-2-甲基己-3-基)-2,6-二氮杂螺[3.4]辛-6-基)-1,2,4-三嗪-6-基)氧基)苯甲酰胺甲酸酯
[2033][2034]
向(r)-2-((3-氯-5-(2-(6-((2-甲氧基乙基)(甲基)氨基)-2-甲基己-3-基)-2,6-二氮杂螺[3.4]辛-6-基)-1,2,4-三嗪-6-基)氧基)-n-乙基-5-氟-n-异丙基苯甲酰胺(化合物393)(100mg，0.158mmol)在无水meoh(2ml)中的溶液中添加hcl(1.6ml，6.40mmol，在二噁烷中的4m)。将所得混合物在25℃下搅拌60h。将混合物在减压下浓缩以给出残余物，将该残余物通过制备型hplc(柱：boston green ods 150
×
30mm 5um，流动相a：h2o(0.225％fa)，流动相：acn，流速：35ml/min，梯度条件从12％b至42％b)纯化，以得到呈黄色粘性固体的标题化合物(70.6mg，65.2％产率)。
[2035]
lc-ms(esi)(方法2)：rt＝2.096min，m/z发现值630.4[m+h]
+
。
[2036]
sfc(方法33)：rt＝2.587min。
[2037]
化合物286
[2038]
(r)-n-乙基-5-氟-2-((5-(2-(6-((2-羟基乙基)(甲基)氨基)-2-甲基己-3-基)-2,6-二氮杂螺[3.4]辛-6-基)-1,2,4-三嗪-6-基)氧基)-n-异丙基苯甲酰胺
[2039][2040]
在rt下，将tbaf(79μl；0.079mmol)滴加至(r)-2-((5-(2-(6-((2-((叔丁基二甲基甲硅烷基)氧基)乙基)(甲基)氨基)-2-甲基己-3-基)-2,6-二氮杂螺[3.4]辛-6-基)-1,2,4-三嗪-6-基)氧基)-n-乙基-5-氟-n-异丙基苯甲酰胺(中间体245)(46mg，0.066mmol)在thf(2ml)中的溶液中。将反应混合物在rt下搅拌20h，然后倾倒入冰水中，并添加etoac。将混合物用10％的k2co3水溶液碱化并将有机层分离，用盐水洗涤，经mgso4干燥并过滤。将溶剂蒸发至干燥以给出粗品，将该粗品(45mg)通过硅胶色谱法(固定相：不规则裸二氧化硅4g，流动相：0.7％nh4oh，93％dcm，7％meoh)纯化。将含有产物的级分混合并浓缩。将所得产物用acn/h2o 20/80冷冻干燥以给出标题化合物(30mg，78％产率)。
[2041]
lc-ms(esi)(方法4)：r
t
＝3.048min，m/z发现值586.6[m+h]
+
；644.6[m+ch3coo]-[2042]
分析方法
[2043]
以上化合物中或下表中的分析信息通过使用以下所述的分析方法产生。
[2044]
nmr方法
[2045]
一些nmr试验使用以下仪器进行：在环境温度下(298.6k)使用bruker avance iii 400光谱仪，使用内部氘锁，并且配备有具有z梯度的bbo 400mhz s1 5mm探头，并且针对质子在400mhz下工作，并且针对碳在100mhz下工作。化学位移(δ)以百万分率(ppm)报告。j值以hz表示。
[2046]
一些nmr试验使用以下仪器进行：在环境温度下(298.6k)使用varian 400-mr光谱仪，使用内部氘锁，并且配备有具有z梯度的varian 400 4nuc pfg探头，并且针对质子在400mhz下工作，并且针对碳在100mhz下工作。化学位移(δ)以百万分率(ppm)报告。j值以hz表示。
[2047]
一些nmr试验使用以下仪器进行：在环境温度下(298.6k)使用varian 400-vnmrs光谱仪，使用内部氘锁，并且配备有具有z梯度的varian 400asw pfg探头，并且针对质子在400mhz下工作，并且针对碳在100mhz下工作。化学位移(δ)以百万分率(ppm)报告。j值以hz表示。
[2048]
一些nmr试验使用以下仪器进行：在环境温度下(298.6k)使用bruker avance iii hd 300光谱仪，使用内部氘锁，并且配备有具有z梯度的pa bbo 300s1 bbf-h-d-05z 5mm探头，并且针对质子在300mhz下工作，并且针对碳在75mhz下工作。化学位移(d)以百万分率(ppm)报告。j值以hz表示。
[2049]
lcms(液相色谱法/质谱法)
[2050]
通用程序
[2051]
使用lc泵、二极管阵列(dad)或uv检测器以及如在对应的方法中所指定的柱进行高效液相色谱法(hplc)测量。如果必要的话，包括其他检测器(参见下文的方法表格)。
[2052]
将来自柱的流带至配置有大气压离子源的质谱仪(ms)。设置调谐参数(例如扫描
范围、停留时间等)以便获得允许鉴定化合物的标称单一同位素分子量(mw)的离子在技术人员的知识内。利用适当的软件进行数据采集。
[2053]
通过其实验保留时间(r
t
)和离子描述化合物。如果未在数据表中不同地指定，那么报道的分子离子对应于[m+h]
+
(质子化的分子)和/或[m-h]-(去质子的分子)。在化合物不是直接可电离的情况下，指定加合物类型(即[m+nh4]
+
、[m+hcoo]-等)。对于具有多种同位素模式的分子(br、cl等)来说，报道的值是针对最低同位素质量获得的值。获得的所有结果具有通常与所使用的方法相关的实验不确定性。
[2054]
在下文中，“sqd”意指单四极检测器，“rt”室温，“beh”桥连的乙基硅氧烷/二氧化硅杂合体，“hss”高强度二氧化硅，“dad”二极管阵列检测器。
[2055]
表1a.lcms方法代码(以ml/min表示流量；以℃表示柱温(t)；以分钟表示运行时间)。
[2056]
意指乙醇；“dea”意指二乙胺。下表中使用的所有其他使用的缩写词如前文的定义)
[2062]
[2063]
[2064]
[2065]
[2066]
[2067][2068]
分析型手性hplc
[2069]
通用方法
[2070]
如在对应的方法中指定的，使用手性高效液相色谱法(手性hplc)系统进行手性hplc测量，所述系统由以下构成：lc泵、二极管阵列(dad)或uv检测器和手性柱。利用适当的软件进行数据采集。
[2071]
表2b.分析型手性hplc方法(以ml/min表示流量；以℃表示柱温(t)；以分钟表示运行时间，以巴或磅力/平方英寸(psi)表示背压(bpr)。“acn”意指乙腈；“meoh”意指甲醇；“etoh”意指乙醇；“dea”意指二乙胺。下表中使用的所有其他使用的缩写词如前文的定义)
[2072]
[2073][2074]
药理学部分
[2075]
1)menin/mll均相时间分辨荧光(htrf)测定
[2076]
向未经处理的，白色384-孔微量滴定板中添加在dmso中的40nl 200x测试化合物和在测定缓冲液(40mm tris
·
hcl，ph 7.5，50mm nacl，1mm dtt(二硫苏糖醇)和0.05％普朗尼克f-127)中的4μl2x铽螯合标记的menin(见下文用于制备)。在环境温度下，将测试化合物和铽螯合标记的menin孵育30min之后，添加在测定缓冲液中的4μl 2x fitc-mbm1肽
(fitc-β-丙氨酸-sarwrfparpgt-nh2)(“fitc”意指异硫氰酸荧光素)，在1000rpm下将微量滴定板离心1min，并且将测定混合物在环境温度下孵育15min。在环境温度下，使用envision微孔板读数仪(ex.337nm/铽em.490nm/fitc em.520nm)，通过测量铽/fitc供体/受体荧光对的均相时间分辨荧光(htrf)来确定存在于测定混合物中的menin
·
fitc-mbm1复合物的相对量。将荧光共振能量转移(htrf值)度表示为fitc的荧光发射强度和铽荧光(f
em
520nm/f
em
490nm)的比率。在结合测定中试剂的终浓度是在测定缓冲液中200pm铽螯合标记的menin、75nm fitc-mbm1肽和0.5％dmso。使用11个点，四倍连续稀释方案，典型地在10μm处开始进行测试化合物的剂量-应答滴定。
[2077]
根据以下公式1通过首先计算在每个化合物浓度处的％抑制来确定化合物效能：
[2078]
％抑制＝((hc-lc)-(htrf
化合物-lc))/(hc-lc)*100
ꢀꢀꢀꢀ
(公式1)
[2079]
其中化合物的饱和浓度存在或缺失的情况下测定的lc和hc是htrf值，所述化合物与fitc-mbm1竞争对menin结合，并且在测试化合物的存在下用htrf
化合物
测量htrf值。hc和lc htrf值代表至少10个重复/板的平均值。对于每种测试化合物，对比测试化合物浓度的对数绘制％抑制值，并且ic
50
值来源于将这些数据根据公式2拟合：
[2080]
％抑制＝底部+(顶部-底部)/(1+10^((logic
50-log[cmpd])*h))
ꢀꢀꢀꢀ
(公式2)
[2081]
其中底部和顶部分别是剂量-应答曲线的较低和较高的渐近线，ic
50
是产生50％信号抑制的化合物浓度，并且h是希尔系数。
[2082]
menin的铽穴状化合物标记的制备：将menin(a.a 1-610-6xhis标签，2.3mg/ml在20mm hepes(2-[4-(2-羟基乙基)-1-哌嗪基]乙磺酸)、80mm nacl、5mm dtt(二硫苏糖醇)中，ph 7.5)用铽穴状化合物标记如下。将200μg的minin缓冲液交换为1x hepes缓冲液。将6.67μm menin与8倍摩尔过量的nhs(n-羟基琥珀酰亚胺)-铽穴状化合物在室温下孵育40分钟。通过用洗脱缓冲液(0.1mhepes，ph 7+0.1％bsa(牛血清白蛋白))在nap5柱上进行反应，将一半经标记的蛋白质从游离标记中纯化出来。将另一半用0.1m磷酸盐缓冲盐水(pbs)(ph 7)洗脱。各自收集400μl的洗脱液，等分并在-80℃下冷冻。铽标记的menin蛋白质的最终浓度分别为在hepes缓冲液中为115μg/ml，在pbs缓冲液中为85μg/ml。
[2083]
menin蛋白质序列(seq id no:1)：
[2084]
mglkaaqktlfplrsiddvvrlfaaelgreepdlvllslvlgfvehflavnrviptnvpeltfqpspapdppggltyfpvadlsiiaalyarftaqirgavdlslypreggvssrelvkkvsdviwnslsrsyfkdrahiqslfsfitgtkldssgvafavvgacqalglrdvhlalsedhawvvfgpngeqtaevtwhgkgnedrrgqtvnagvaerswlylkgsymrcdrkmevafmvcainpsidlhtdslellqlqqkllwllydlghlerypmalgnladleeleptpgrpdpltlyhkgiasaktyyrdehiypymylagyhcrnrnvrealqawadtatviqdynycredeeiykeffevandvipnllkeaaslleageerpgeqsqgtqsqgsalqdpecfahllrfydgickweegsptpvlhvgwatflvqslgrfegqvrqkvrivsreaeaaeaeepwgeearegrrrgprreskpeeppppkkpaldkglgtgqgavsgpprkppgtvagtargpeggstaqvpapaaspppegpvltfqsekmkgmkellvatkinssaiklqltaqsqvqmkkqkvstpsdytlsflkrqrkglhhhhhh
[2085]
2a)增殖测定
[2086]
在人白血病细胞系中评价menin/mll蛋白质/蛋白质相互作用抑制剂测试化合物的抗增殖效应。细胞系molm14带有mll易位并且分别表达mll融合蛋白mll-af9，以及来自第二个等位基因的野生型蛋白质。还测试了携带npm1c基因突变的oci-aml3细胞。mll重排的
细胞系(例如molm14)和npm1c突变细胞系展现干细胞样hoxa/meis1基因表达标记。将ko-52用作含有两种mll(kmt2a)野生型等位基因的对照细胞系，以便于排除显示一般细胞毒性效应的化合物。
[2087]
将molm14细胞在补充有10％热灭活的胎牛血清(海克隆公司(hyclone))、2mm l-谷氨酰胺(西格玛奥德里奇公司(sigma aldrich))和50μg/ml庆大霉素(博科公司(gibco))的rpmi-1640(西格玛奥德里奇公司)中进行培养。将ko-52和oci-aml3细胞系在补充有20％热灭活的胎牛血清(海克隆公司)、2mm l-谷氨酰胺(西格玛奥德里奇公司)和50μg/ml庆大霉素(博科公司)的α-mem(西格玛奥德里奇公司)中进行培养。在培养过程中将细胞保持在30万至250万细胞/ml，并且传代数不超过20。
[2088]
为了评价抗增殖效应，将200molm14细胞、200oci-aml3细胞或300ko-52细胞以200μl培养基/孔接种在96孔圆底，超低附接板中(科斯塔尔(costar)，目录编号7007)。基于生长曲线选择细胞接种数，以确保贯穿实验中的线性增长。在不同的浓度下添加测试化合物，并且将dmso含量标准化至0.3％。在37℃和5％co2条件下，将细胞孵育8天。通过活细胞成像(incucytezoom，埃森生物公司(essenbio)，4x物镜)实时测量球体样生长，在第8天获取图像。使用整合的分析工具确定作为球体尺寸度量的融合度(％)。
[2089]
为了确定测试化合物随时间的效应，计算每个孔中作为球体尺寸度量的融合度。参考化合物最高剂量的融合度被用作基线lc(低对照)并将dmso处理细胞的融合度用作0％细胞毒性(高对照，hc)。
[2090]
绝对ic
50
值计算为如下融合度中百分比的变化：
[2091]
lc＝低对照：用例如1μm的细胞毒性剂星形孢菌素处理的细胞，或例如用高浓度替代参考化合物处理的细胞
[2092]
hc＝高对照：平均融合度(％)(dmso处理的细胞)
[2093]
％效应＝100-(100*(样品-lc)/(hc-lc))
[2094]
graphpad prism(7.00版)被用于计算ic
50
。剂量-应答公式被用于具有可变斜率并将最大值固定到100％且最小值固定到0％的％效应相对于log10化合物浓度的图。
[2095]
2b)meis1 mrna表达测定
[2096]
通过quantigene singleplex测定(赛默飞世尔科技公司(thermo fisher scientific))检测经化合物处理后的meis1 mrna表达。此技术允许使用与定义的目标靶序列杂交的探针直接定量mrna靶标并使用多模式酶标仪(珀金埃尔默公司(perkinelmer))检测信号。molm14细胞系被用于此实验。在增加浓度的化合物存在下将细胞以3,750个细胞/孔接种在96孔板内。在用化合物孵育48小时后，将细胞在裂解缓冲液中裂解并在55℃下孵育45分钟。将细胞裂解物与人meis1特异性捕获探针或人rpl28(核糖体蛋白l28)特异性探针(作为归一化对照)以及阻断探针混合。然后将细胞裂解物转移至定制测定杂交板(赛默飞世尔科技公司)并在55℃下孵育18至22小时。随后，洗涤板，以去除未结合的材料，随后顺序添加前置放大器、放大器、和标记探针。用多模式酶标仪envision测量信号(＝基因计数)。使用适当的软件通过剂量-应答模拟计算ic
50
。对于所有非持家基因，针对背景和相对表达校正应答相等计数。对每个样品，将每个测试基因信号(减去背景)除以归一化基因信号(rpl28：减去背景)。通过将处理样品的归一化值除以dmso处理样品的归一化值来计算倍数变化。每个靶基因的倍数变化被用于计算ic
50
。
[2097]
表3.生物学数据-htrf测定、增殖测定、和meis1 mrna表达测定
[2098]
[2099]
[2100]
[2101]
[2102]
[2103]
[2104]
[2105][2106]
3)小鼠pk(体内t1/2和口服生物利用度)
[2107]
在禁食的雄性cd-1小鼠(6-8周龄)中，在单次静脉内(iv，以2.5ml/kg施用的0.5或1.0mg/kg)或口服(po，以10ml溶液/kg施用的5mg/kg)给药在20％(w:vol)hp-β-cd溶液或在无热原水中配制的测试品后，评估体内药代动力学(pk)。
[2108]
在希望的时间点，使用edta作为抗凝血剂，经连续毛细管微量采样(约0.03ml)，从跖背静脉收集血浆和/或全血样品。使用定量lc-ms/ms方法分析在血浆和/或全血样品中的化合物浓度。使用winnonlin(phoenixtm，6.1版)或相似软件进行主要药代动力学参数的计算机分析。(结果参见表4)
[2109]
4)人/小鼠肝微粒体中的代谢稳定性
[2110]
实验程序
[2111]
此研究的目的是测量人/小鼠肝微粒体中的一种或多种测试化合物的体外代谢稳定性并提供代谢转换率的定量信息(即测试的表观固有清除率的测定)。
[2112]
在10mm的储备溶液(dmso中)浓度下制备测试项目。对于代谢转换的测定，通过将测试化合物或阳性对照化合物的2μl 10mm dmso储备溶液添加至198μl乙腈(100μm最终浓度)中制备最终工作溶液。
[2113]
如下进行孵育：首先，将肝微粒体在冰上解冻并在100mm pbs(磷酸盐缓冲盐水)中在ph 7.4下制备含有肝微粒体的主溶液。接下来，将肝微粒体溶液添加至孵育板并添加10mm nadph(烟酰胺腺嘌呤二核苷酸磷酸)(mw：833.4g/mol；roche diagnostics gmbh，德国。在磷酸盐缓冲液(100mmol/l,ph 7.4)溶解)。将混合物混合10秒并在孵育板上在37℃下预温热10分钟。向孵育板中添加5μl 100μm用于测试化合物或阳性对照化合物的工作溶液(最终测试项目浓度＝1μm)引发代谢反应。反应最终混合物应在100mm pbs中在ph 7.4下含有1mm nadph，0.5mg/ml微粒体蛋白质和1μm测试化合物或阳性对照化合物。孵育混合物的有机溶剂百分比是1％，dmso≤0.02％。
[2114]
通过在选择的时间点处将50μl孵育混合物转移至含有200μl冷甲醇淬灭板中淬灭反应。在所有时间点采样后，将淬灭板在4000rpm离心40分钟，以沉淀蛋白质。将总共90μl的上清转移至分析板，并将超纯h2o水添加至每个孔，以用于lc/ms/ms分析。所有孵育和分析一式两份进行。
[2115]
数据分析
[2116]
所有计算均使用microsoft excel进行。通过亲本药物的剩余百分比相对于孵育时间曲线的自然对数的线性回归确定斜率值，k。
[2117]
体外半衰期(体外t
1/2
)由斜率值确定：
[2118]
体外t
1/2
＝-(0.693/k)
[2119]
使用以下方程将体外t
1/2
(以min计)转化为体外固有清除率(体外cl
int
，以μl/min/mg蛋白质计)：
[2120][2121]
结果参见表4
[2122]
表4：小鼠pk和代谢稳定性(“na”意指未分析的)
[2123]
[2124]
5)molm-14或oci-aml3细胞的皮下(sc或sc)异种移植物中的药效动力学(pd)活性的方案
[2125]
测试试剂和对照
[2126]
将化合物70配制在20％羟基丙基-β-环糊精(hp-β-cd)中，并制备为对于20g动物，接近0.2ml(10ml/kg)/剂量的总体积。每天通过个体体重调整剂量。每周为每次研究准备一次化合物70的工作储备溶液，并在室温下保存。每天口服(po)施用化合物70。
[2127]
测定
[2128]
在molm14细胞或oci-aml3的皮下(sc)异种移植物中评估化合物的体内药效动力学(pd)活性。用媒介物或化合物的3个日剂量处理带有molm14或oci-aml3肿瘤的裸nmri小鼠(crl:nmri-foxn1nu/-)。在第2天给药后23小时，最终剂量后0.5小时和最终剂量后16小时收集血浆样品，并在最终剂量后16小时收集肿瘤样品。使用quantigene plex技术(赛默飞世尔科技公司)检查化合物对多menin-mll靶基因(例如meis1，mef2c，flt3)的表达的影响。将冷冻的肿瘤匀浆化并转移至在裂解缓冲液中的单个裂解基质管中，并在55℃下孵育30分钟。将细胞裂解物与靶特异性捕获探针、luminex珠、和阻断探针混合，转移至定制的测定杂交板(赛默飞世尔科技公司)并在54℃下孵育18至22小时。随后，将板转移到磁分离板上，并洗涤以从珠子上除去未结合的材料，随后依次杂交前置放大器、放大器和标记探针，以及随后的链霉亲和素藻红蛋白结合。用luminex flexmap三维仪器测量来自珠的信号。对于所有非持家基因，针对背景和相对表达校正应答相等计数。对每个样品，将每个测试基因信号(减去背景)除以归一化基因信号(rpl19，rpl28，atp6v1a：减去背景)。通过将处理样品的归一化值除以dmso处理样品的归一化值来计算倍数变化。
[2129]
表5：来自molm14 sc模型的选择基因的表达水平(％相对于媒介物)(平均值和标准偏差)。
[2130][2131][2132]
表6：来自oci-aml3 sc模型的选择基因的表达水平(％相对于媒介物)(平均值和标准偏差)。
[2133][2134]
6)molm-14皮下模型中的功效研究
[2135]
测试试剂和对照
[2136]
将化合物70配制在20％羟基丙基-β-环糊精(hp-β-cd)中，并制备为对于20g动物，接近0.2ml(10ml/kg)/剂量的总体积。每天通过个体体重调整剂量。每周为每次研究准备一次化合物70的工作储备溶液，并在25℃下保存。
[2137]
动物
[2138]
使用约6至8周龄且重约25g的雌性nmri裸鼠(molm-14sc)。在实验使用前最少7天，所有动物都可以适应运输相关的压力并恢复。提供任意量的高压蒸汽处理的水和经辐射的食物，并将动物维持在12小时昼夜循环下。在使用之前将笼、垫料、和水瓶高压灭菌并每周更换。
[2139][2140][2141]
肿瘤模型和细胞培养方法
[2142]
将人aml细胞molm-14在37℃，5％co2下，在指定的完全培养基(rpmi 1640+10％hi-fbs+2mm l-谷氨酰胺+50ug/ml庆大霉素)中培养。将细胞从对数生长期中收获并在冷的(4℃)roswell park memorial institute(rpmi)1640中在无血清培养基中重悬。
[2143]
每个小鼠在右侧腹，接受在50％matrigel中的5
×
106molm-14个细胞(0.2ml的总体积)(使用1cc注射器和27号针头)。
[2144]
研究设计
[2145]
每天口服(po)施用化合物70。
[2146]
第0天是肿瘤细胞植入和研究起始的一天。
[2147]
将携带sc molm-14肿瘤的小鼠在肿瘤植入后第16天随机化并根据肿瘤体积(平均
值约130mm3；n＝10/组)分配至处理组。用媒介物或化合物70(30和100mg/kg)的处理在同一天开始，每日口服给药持续21天。对于pk(药代动力学)分析，在最后剂量(n＝4-5/组/时间点)后的1、2、4、8、和23小时收集血浆。
[2148]
动物监测
[2149]
在整个研究中，对每个动物，每周测量2至3次或更多次sc肿瘤体积。
[2150]
计算
[2151]
使用下式计算肿瘤体积：
[2152]
肿瘤体积(mm3)＝(d
×
d2/2)；其中
‘
d’表示如通过卡尺测量确定的肿瘤的较大直径且
‘
d’表示较小直径。以平均肿瘤体积
±
sem绘制肿瘤体积。
[2153]
％δtgi被定义为处理和对照组之间的平均肿瘤负荷差异，计算为％δtgi＝([(tvctvc0)(tv
t
tv
t0
)]/(tvctvc0))
×
100，其中
‘
tv
c’是给出的对照组的平均肿瘤负荷，
‘
tvc0’
是给出的对照组的平均初始肿瘤负荷，
‘
tv
t’是处理组的平均肿瘤负荷，并且
‘
tv
t0’是处理组的平均初始肿瘤负荷。％tgi被定义为
[2154]
处理和对照组的平均肿瘤体积之间的差异，计算为
[2155]
％tgi＝((tvctv
t
)/tvc)
×
100，其中
‘
tv
c’是对照组的平均肿瘤体积并且
‘
tv
t’是处理组的平均肿瘤体积。如国家癌症研究所标准定义的，≥60％tgi被认为是生物学显著的。
[2156]
将％肿瘤消退(tr)(量化以反映与基线相比独立于对照组的与处理相关的肿瘤体积减少)计算为％tr＝(1-平均(tv
t
i/tv
t0
i))x100，其中
‘
tv
t
i’是处理组中单独动物的肿瘤负荷，并且
‘
tv
t0
i’是动物的起始肿瘤负荷。
[2157]
数据分析
[2158]
使用prism software(graphpad 7或8版)绘制肿瘤体积。在研究的最后一天，当每个组剩余2/3或更多的小鼠时，评估与hpβcd媒介物处理的对照相比，化合物70处理组的大部分研究的统计显著性。当p≤0.05时，组之间的差异被认为是显著的。
[2159]
使用r软件3.4.2版(使用杨森公司(janssen)内部开发的shiny应用程序4.0版)中的线性混合效应(lme)分析来计算动物肿瘤体积的统计显著性，其中处理和时间为固定效应，动物为随机效应。如果单个纵向应答轨迹不是线性的，则进行对数转换。
[2160]
源自此模型的信息被用于对照组或所有处理组之间的肿瘤体积的成对处理比较。
[2161]
图1中的结果。
[2162]
7)使用ca
2+
荧光测定(ctcm人)，测试化合物在同步跳动的源于人多能干细胞的心肌细胞(hsc-cm)中的心-电生理效应。
[2163]
方案
[2164]
在96孔板上测试化合物
[2165]
在-心肌细胞或心肌细胞2中，化合物在0.1μm、0.2μm、0.5μm、1μm、2.5μm和5μm下测试(n＝4每剂量)。
[2166]
可替代地，在心肌细胞2中，化合物在0.1μm、0.3μm；1μm、3μm、10μm和30μm下测试(n＝4每剂量)。
[2167]
阳性对照和阴性对照
[2168][2169]
媒介物对照：
[2170]
二甲基亚砜(dmso)。化合物在dmso或其溶剂中的溶液(0.1％dmso的最终浓度；n＝8)
[2171]
测试品和对照的制备
[2172]
将测试化合物以预期浓度的1000倍溶解在dmso中。制备含有最终浓度的1000倍的测试化合物以及阳性对照和阴性对照的化合物“母板”。在实验当天，将这些储备溶液用tyrode(西格玛公司)稀释，用10mm hepes(博科公司)补充至预期浓度的2倍(在圆底化合物板中)。测试溶液和媒介物对照中的最终dmso浓度是0.1％。
[2173]
细胞
[2174]
hsc-cm(心肌细胞)获得自cdi(ncardia，德国)。根据细胞提供者的说明书，将细胞以适于形成单层密度预铺板并接种在纤连蛋白包被的96孔板上并在阶段培养箱(37℃，5％co2)中的维持培养。
[2175]
称为心肌细胞2的第二行hsc衍生的心肌细胞购买自富士细胞动力学公司(fujifilm cellular dynamics)(美国)。测试药物的实验在将细胞铺板在板上以具有活的，跳动的源自hipsc的心肌细胞单层后的5至7天进行。96孔板上的跳动单层通常取自2个小瓶冷冻的心肌细胞2(约5百万个细胞/小瓶)，这些心肌细胞2将被接种在三个96孔板(约50k/孔)上。
[2176]
在实验开始前
[2177]
在实验开始前至少一小时，用具有钙染料的tyrode溶液(参见以下)替代正常细胞培养基。
[2178]
将cal 520染料(aat bioquest)溶解在补充10mm hepes的11ml tyrode中并在添加至细胞前温热升至37c。
[2179]
从每个孔中除去35μl细胞培养基并用35μl预温热的cal 520染料溶液替代，并将细胞板在37℃/5％co2下孵育45min。将细胞在37℃下孵育5min。
[2180]
实验
[2181]
使用cal520
tm
(aat bioquest)钙荧光染料信号记录自发性电活动。此染料整合整个孔中总的细胞内钙活性。将一瓶cal520染料(50μg，mw：1103/mol)用50μl 0.9mm的dmso(作为储备溶液)溶解。将染料的50μl储备溶液添加至10ml tryodes溶液，以具有4.5μm生物染料浓度。随后，将35μl的此染料溶液添加至每个孔，以具有1.58μm的最终染料浓度。最近，在这种ctcm人测定中建立了目前的染料方案(ivan kopljar等人,journal of pharmacological and toxicological methods[药理学和毒理学方法杂志]2018.91:80-86；lu等人,tox sci[毒理学]2019.170(2):345-356)。
[2182]
使用功能性药物筛选系统(fdss/μcell，滨松，日本)测量荧光信号(ca
2+
瞬时形态)
并且随后使用适当的软件(例如notocord)离线分析记录。
[2183]
将细胞板装载到fdss/μcell上，以用于测试运行：测量ca
2+
瞬态4分钟以检查在每个孔中心肌细胞的同步跳动。同时测量所有的96个孔(取样间隔：0.06s，短的暴露时间：10ms；激发波长480nm；发射波长540nm；将fdss/μcell温热至37℃)。当所有显示同步跳动时，将96孔板重复测量3次(以验证在基线上，在所有的96个孔中的同步跳动，不符合预设标准的孔被排除在研究之外，并且不使用化合物处理)：
[2184]
t＝0：对照期(-5至-1min)+添加化合物，之后3min。
[2185]
t＝30：在化合物添加后29至34min测量
[2186]
在化合物添加步骤期间，同时将100μl相应的双倍浓缩测试溶液吸移入每个孔中。
[2187]
使用合适的软件例如notocord-hem(4.3版)离线分析数据。
[2188]
测量ca
2+
瞬时形态的以下参数：
[2189]-跳动速率(br)
[2190]-ca
2+
瞬态的振幅(amp)，
[2191]-ctd
90
：90％处的ca
2+
瞬态持续时间(达到初始基础值的90％的时间)。
[2192]
实验期间还注意到各种“心律失常样”活动的存在。这些包括：
[2193]
·
‘
早期后去极化样’(ead样)事件(定义为“在瞬态的初始峰后的瞬态波形的额外小峰”)，
[2194]
·
‘
室性心动过速样’(vt样)事件(定义为非常快的跳动速率)或
[2195]
·
‘
心室颤动样’(vf-样)事件(定义为“具有不规则和不可测量的瞬态电位的小振幅，快速的ca
2+
波形)
[2196]
·
细胞
‘
跳动停止’(未观察到ca
2+
瞬态)。
[2197]
如果软件不能分析化合物诱导的钙瞬态信号变化，则然后将这些信号鉴定为bql(低于质量分析水平)。
[2198]
数据分析
[2199]
将数据(从fdss-μcell测得)复制以进行离线分析，并分析和上传到spec-ii(我们的操作管理系统)中以进一步分析。收集化合物施用前后的变量值，并将其转移到excel工作簿中。
[2200]
所有值(相对于基线值的实际单位和百分比变化)均表示为中值(最小和最大)。使用wilcoxon-mann-whitney检验，将化合物组中观察到的相对于相应的基线值(实际单位)的变化与溶剂对照组中的那些变化进行比较。进行用邦弗朗尼校正(bonferroni correction)的用于多重调整的双尾检验。由于有10个处理组(每个与溶剂组相比)，因此0.05/1.0(0.005)的α水平被认为反映了与溶剂组的统计学显著差异。所有的统计分析使用适当的软件例如r软件3.5.2版进行。
[2201]
板中的hipsc-cm的质量对照：
[2202]
如果板不符合以下标准，则拒绝该板：
[2203]-稳定规律的跳动
[2204]-振幅》500相对单位
[2205]-跳动速率在25与80跳动/分钟之间
[2206]-ctd
90
在300与800ms之间
[2207]
在本研究中，板中的hipsc-cm符合以上标准。
[2208]
与心律不齐或跳动停止的发生率结合的这些参数被用于使用加权评分法计算潜在危害水平(基于kopljar等人,stem cell reports[干细胞报告]2018.11,1365-1377)。通过基于ctd
90
、跳动速率和振幅(δδ％)、以及跳动停止和早期后去极化(ead)发生率的变化的公差区间(ti)，加上加权点，计算每浓度的此危害得分。因此，对于每个浓度，将产生四个不同危害水平中的一个。这在与化合物孵育30分钟后进行。危害水平：
[2209]
无危害：在媒介物效应水平或小的不相关的变化内。
[2210]
低危害：相关效应，但心脏不利的风险可能较低。
[2211]
高危害：相对较高的心脏不利风险。
[2212]
非常高危害：由于心律失常样事件(ead)的非常高的风险。
[2213]“危害得分”结果提供了在游离药物当量下(由于未向孔中添加血浆蛋白)潜在的急性心脏药物诱发的效应的鉴定。使用称为ctcm评分1版的“评分参考书”(kopljar等人,stem cell reports[干细胞报告]2018.11:1365-1377)进行危害鉴定的评估，并根据以下颜色方案指明水平：
[2214][2215][2216]
根据上述在hipsc-cm中测量的ca
2+
瞬态测定中的危害评分严重程度对测试化合物排序，如上以不同的颜色和在相关的表中列出。
[2217]
结果
[2218]
使用心肌细胞2作为细胞系
[2219]
阳性对照和阴性对照：
[2220]
阳性对照和阴性对照均在此测定中具有预期的药理学效应
[2221]
化合物：
[2222]
[2223][2224]
对于化合物70a：在30mpk(mg/kg)的小鼠异种移植模型中的有效剂量下，将如下估计ctcm人浓度相比于游离cmax
[2225]
边缘ctcm人10μm相比于游离cmax》16(小鼠，人)
[2226]
边缘ctcm人30μm相比于游离cmax》45(小鼠，人)
[2227]
使用心肌细胞作为细胞系
[2228][2229]
8)对herg转染细胞系中膜钾电流i
kr
的效应
[2230]
方案1：
[2231]
缩略语列表
[2232]
缩写
[2233]
cho中国仓鼠卵巢细胞系
[2234]
dmso二甲亚砜
[2235]
herg人ether
‑à‑
go-go-相关基因
[2236]ikr
快速激活的延迟整流k
+
电流
[2237]
方法
[2238]
使用稳定表达herg钾通道的cho细胞进行实验。在培养烧瓶中在补充有10％热灭活的胎牛血清、潮霉素b(100μg/ml)、和遗传霉素(100μg/ml)的汉姆f12(ham’sf12)培养基中，在37℃和5％co2下生长细胞。为了在自动膜片钳系统qpatch(索菲恩公司(sophion))中使用，收获细胞以获得单细胞的细胞悬浮液。
[2239]
溶液：浴溶液含有(mm)145nacl、4kcl、10葡萄糖、10hepes((4-(2-羟基乙基)-1-哌嗪乙磺酸)、2cacl2和1mgcl2(ph7.4，具有naoh)。电极溶液含有(以mm)120kcl、10egta(乙二醇-双(2-氨基乙醚)-n,n,n',n'-四乙酸)、10hepes、5.374cacl2和1.75mgcl2(ph7.2，具有koh)。
[2240]
在电压钳模式中进行膜片钳实验，并利用qpatch系统(索菲恩公司)使用自动膜片钳测定记录全细胞电流。通过使用qpatch测定软件将电流信号放大并数字化，存储并分析。
[2241]
保持电位是-80mv。将herg电流(k
+
选择性外向电流)确定为2秒去极化至+60mv后在-40mv下的最大尾电流。脉冲循环速率是15s。将短脉冲(90ms)至-40mv用作基线步骤以计
算尾电流振幅。建立全细胞模式和稳定时期后，应用溶剂对照(0.3％dmso)5分钟，随后是3x10-7
m、3x10-6
m、10-5
m、和3x10-5
m的4个增加浓度的测试物质。将每种浓度的测试物质应用两次。5min后，将每个浓度的效应确定为3个连续电压脉冲的平均电流。为了确定阻断程度，比较剩余电流与媒介物预处理。
[2242]
通过对各个数据点的非线性最小二乘方拟合来计算浓度/应答关系。通过拟合程序计算半数最大抑制浓度(ic50)。
[2243]
方案2：
[2244]
细胞
[2245]
在herg转染hek293细胞上测试化合物、媒介物对照和阳性对照。使用稳定转染herg的人胚胎肾细胞系(hek293)(zhouz等人biophysicaljournal[生物物理学杂志]1998.74,230-241；mcdonaldt.v等人,nature[自然]1997.388,289-292)(威斯康星大学，麦迪逊，美国)。使用t175烧瓶，将细胞在mem(最低基础培养基，(博科公司(gibco)))中保持培养，该mem补充有(指示添加至500mlmem中的量)：5mll-谷氨酰胺-青霉素-链霉素(西格玛公司)、50ml胎牛血清(博威科公司(bio-whittaker))、5ml非必须氨基酸100x(博科公司)、5ml丙酮酸钠100mm(博科公司)和4ml遗传霉素50mg/ml(博科公司)。在37℃下在5％co2气氛(在空气中)中孵育细胞。
[2246]
收获细胞，用于测定
[2247]
使用作为解离试剂的accumax
tm
(西格玛公司)如下所述收获细胞。然后将细胞重悬于33％dmem/f12(杜氏改良培养基/营养混合物f-12-西格玛公司)介质/67％细胞外生理溶液的混合物中。
[2248]
将烧瓶用含有2mmedta(乙二胺四乙酸)(西格玛公司)的约5-10ml的磷酸盐缓冲盐水(pbs)(gibco
tm
)小心洗涤两次。将细胞用约3ml的accumax
tm
(细胞分离溶液)解离并在37℃下孵育约5至10min。添加冷的外部生理溶液(2-5ml)并将烧瓶在约4℃下孵育5-10min。然后，将每个烧瓶中的细胞悬浮液用5ml的移液管轻轻解离。将细胞悬浮液转移至低结合性皮氏培养皿(直径约10mm)。将每个烧瓶用另外的约5ml冷的外部生理溶液洗涤，并将此溶液也添加至皮氏培养皿。然后将皮氏培养皿在约4℃下再孵育5至10分钟。在皮氏培养皿中，在细胞悬浮液再次温和解离后，将细胞转移至保持在定轨振荡器(在16℃下200rpm)上的储存器中。在进行实验之间，回收细胞约20min。
[2249]
化合物
[2250]
使用10mm的化合物溶液并将其铺板在384孔板中。使用自动化液体处理(biomek fxp；最终的dmso浓度：0.03％至0.3％)，用记录溶液(参见第3节)稀释储备溶液的等分试样。使用范围从1μm至30μm的筛选浓度的标准范围。
[2251]
每次运行中均包括阳性对照(e-4031)以评估测定的灵敏度。
[2252]
实验中使用的外部和细胞内溶液
[2253]
在下表中，细胞内和外部缓冲溶液的组成以[mm]显示(“nmdg”意指n-甲基-d-葡糖胺)
[2254][2255]
研究设计
[2256]
转染细胞上的全细胞膜片钳技术允许离子通道的研究(无-或有限的来自其他离子通道的干扰)。用自动平面膜片钳系统，syncropatch384pe研究了化合物对herg电流的影响(obergrussberger等人,journal of laboratory automation[实验室自动化杂志]2016.21(6),779-793)。以膜片钳技术的全细胞模式记录所有细胞。将该模块并入液体处理移液机器人系统，biomek fxp中，用于细胞和化合物、媒介物对照和阳性对照的应用。
[2257]
对于化合物，以两个累积增加的浓度(分别为1μm和10μm，和3μm和30μm)应用不同浓度的化合物。将herg电流确定为-30mv时的最大尾电流并报道了化合物或媒介物和阳性对照添加的抑制百分数。
[2258]
在使用芯片填充溶液将细胞捕获至记录芯片的各个孔上之后，用密封增强溶液(增加的[ca
2+
])增加密封性；然后在使用压力方案进入全细胞模式之前，将细胞用记录溶液洗涤两次。
[2259]
在完成全细胞模式之后，给予测试脉冲约10分钟以定量对照条件下的herg电流。在此对照期间，向各个孔中添加媒介物对照溶液(含有0.03％dmso的记录溶液)三次。在继续脉冲方案的同时，添加累计增加浓度的媒介物对照、化合物或阳性对照。在药物施用5分钟后测量媒介物、化合物和阳性对照的效应。每个细胞测试两个浓度的化合物。
[2260]
内部和记录溶液的使用将导致约10mv的液体接界电位且指令电压步骤将考虑这一点。
[2261]
电生理测量：用膜片钳技术通过自动膜片钳系统在不同的膜电位下测量细胞的膜电流。保持电位是-70mv。将herg电流(k
+
选择性外向电流)确定为2秒去极化至+70mv后在-30mv下的最大尾电流(参考1，4)。脉冲循环速率是15s。
[2262]
数据分析
[2263]
将泄露的矫正的herg电流(k
+
选择性外向电流)确定为2秒去极化至+70mv后在-30mv下的最大尾电流(在2336.3ms与3083.6ms之间测量)。在对照时期结束时和在每次添加
化合物、媒介物和阳性对照结束时取三个电流振幅的中值以计算抑制百分比。
[2264]
在syncropatch 384pe patchcontrol384软件中设置了qc参数，以在值落入范围之外时自动从分析中排除孔。qc标准取决于记录板(芯片)的类型。典型地，使用4xchip(中等尺寸的孔)记录herg转染的hek293细胞。在首次添加化合物之前设置qc标准4-6；还在每次化合物添加的最后设置qc标准4和5。
[2265]
qc标准和可接受的范围：
[2266]
1.板检查：-500pa-500pa
[2267]
2.接触密封抗性：-100kohm-10mohm
[2268]
3.接点电位偏移：0-100mv
[2269]
4.r密封≥100mohm
[2270]
5.r连续(rseries)：1-25mohm之间
[2271]
6.herg尾电流≥0.2na(在化合物添加之前)
[2272]
每个化合物在相同板上至少重复5个孔。每个浓度的至少2-3个重复的百分比抑制将报道为中值。
[2273]
结果：
[2274]
方案1
[2275]
[2276][2277]
方案2：
[2278][2279]
[2280]
9)弥散性oci-aml3模型中的功效研究
[2281]
测试试剂和对照
[2282]
将化合物70配制在20％羟基丙基-β-环糊精(hp-β-cd)中，并制备为对于20g动物，接近0.2ml(10ml/kg)/剂量的总体积。每天通过个体体重调整剂量。每周为每次研究准备一次化合物70的工作储备溶液，并在25℃下保存。
[2283]
动物
[2284]
使用约6至8周龄且重约25g的雌性scid米色小鼠(cb17.cg-prkdcscidlystbg-j/crl/-)。在实验使用前最少7天，所有动物都可以适应运输相关的压力并恢复。提供任意量的高压蒸汽处理的水和经辐射的食物，并将动物维持在12小时昼夜循环下。在使用之前将笼、垫料、和水瓶高压灭菌并每周更换。
[2285][2286]
肿瘤模型和细胞培养方法
[2287]
将人aml细胞系oci-aml3，在37℃，5％co2下，在指定的完全培养基(memα+20％hi-fbs(热灭活的胎牛血清)+2mm l-谷氨酰胺+50ug/ml庆大霉素)中培养。将细胞从对数生长期中收获并在冷的(4℃)mem(最低基础培养基)α中在无血清培养基中重悬。
[2288]
对于弥散性oci-aml3模型，每只小鼠使用26号针头以0.2ml的总体积经iv注射接受5x105个细胞。
[2289]
研究设计
[2290]
每天口服(po)施用化合物70。
[2291]
第0天是肿瘤细胞植入和研究起始的一天。
[2292]
在功效研究中，将具有iv oci-aml3异种移植肿瘤的小鼠在肿瘤细胞移植后3天随机分配到治疗组。用媒介物或化合物70(30、50、100mg/kg)的处理在同一天开始，每日给药持续28天。
[2293]
动物监测
[2294]
每日监测动物的与化合物毒性或肿瘤负荷有关的临床体征(即后肢麻痹，嗜睡症等)。
[2295]
计算
[2296]
对于存活率评估，将结果绘制为相对于肿瘤植入后天数的存活百分比。消极临床体征和/或≥20％体重损失被用作死亡的替代终点。利用kaplan-meier存活分析确定中位
存活期。延长的生命周期(ils)的百分比计算为：((处理组的中位存活天数-对照组的中位存活天数)/对照组的中位存活天数)
×
100。对由于不良临床体征(如溃烂的肿瘤，体重损失等)或与处理无关的死亡而未能达到替代终点的动物进行检查以评估生存率。如nci标准定义的，≥25％ils被认为是生物学显著的。(johnson ji等人br j cancer.[英国癌症杂志]2001.84(10),1424-1431)。
[2297]
数据分析
[2298]
将存活和体重数据以图形表示(利用prism(7版))。如上所述评估体重的统计显著性。使用r软件3.4.2版中的对数秩(mantel-cox)检验，评估比较治疗处理组相对于适当的媒介物处理对照的kaplan-meier生存图的统计学显著性。当p值≤0.05时，组之间的差异被认为是显著的。
[2299]
存活
[2300]
以下数据显示kaplan-meier存活曲线。具有患建立的oci-aml3肿瘤的小鼠每日口服化合物70(以30、50、100mg/kg，20％hp-β-cd配制品中，共28天(n＝9-10/组))。对于化合物70处理的组，与媒介物处理的对照组的38.5天的中值存活相比，存活的中值天数达到以下天数：对于30mg/kg，天数75.5，对于50mg/kg，天数58.5和对于100mg/kg，天数75。与对照小鼠相比，化合物70处理导致具有oci-aml3肿瘤的小鼠的寿命统计学显著增加96.1％、51.9％和94.8％(在30、50和100mg/kg剂量水平)(p≤0.001)。根据≥25％ils的nci标准阈值，这生物学显著的ils(johnson ji等人br j cancer.[英国癌症杂志]2001.84(10),1424-1431)。
[2301]
图2中的结果。