1.一种制备腺病毒表达载体的方法,包括:基于黑猩猩型腺病毒adc68基因组序列,完全删除其e1序列,改造其e3序列和e4序列,所述改造包括:
(1)改造其e3序列,保留其orf9、较佳地保留其orf9和orf1,部分或全部删除其它e3的orf序列;和
(2)改造其e4序列,以c亚型人腺病毒基因组e4序列中orf6和/或orf6/7替换其e4序列中orf6和/或orf6/7;可选地,还以c亚型人腺病毒基因组e4序列中orf4和/或orf3替换其e4序列中orf4和/或orf3;较佳地还删除其e4序列中orf1、orf2和/或orf3。
2.一种重组腺病毒载体,包括以黑猩猩型腺病毒adc68基因组为基础的序列,其中e1序列被完全删除,e3序列和e4序列被改造;所述改造包括:
(1)e3序列中,其orf9被保留、较佳地其orf9和orf1被保留,其它orf序列部分或全部被删除;和
(2)e4序列中,以c亚型人腺病毒基因组e4序列中orf6和/或orf6/7替换其e4序列中orf6和/或orf6/7;可选地,还以c亚型人腺病毒基因组e4序列中orf4和/或orf3替换其e4序列中orf4和/或orf3;较佳地其e4序列中orf1、orf2和/或orf3被删除。
3.如权利要求1所述的方法或权利要求2所述的重组腺病毒载体,其特征在于,(2)中,所述c亚型人腺病毒包括(但不限于):人血清5型腺病毒adhu5,adhu1,adhu2,adhu6;较佳地为adhu5。
4.如权利要求1所述的方法或权利要求2所述的重组腺病毒载体,其特征在于,(2)中,e4序列改造包括选自:
(a)以c亚型人腺病毒基因组e4序列中orf6/7和orf6替换其e4序列中orf6/7和orf6;删除其e4序列中orf1、orf2和orf3;
(b)以c亚型人腺病毒基因组e4序列中orf6、orf4和orf3替换其e4序列中orf6、orf4和orf3的序列;删除其e4序列中orf1、orf2、orf6/7;
(c)以c亚型人腺病毒基因组e4序列中orf6/7和orf6替换其e4序列中orf6/7和orf6的序列;
(d)以c亚型人腺病毒基因组e4序列中orf6、orf4替换其e4序列中orf6、orf4;删除其e4序列中orf1、orf2和orf3、orf6/7。
5.如权利要求1所述的方法或权利要求2所述的重组腺病毒载体,其特征在于,所述改造包括选自:
(i)删除其e3序列中orf2~orf8;且以c亚型人腺病毒基因组e4序列中orf6/7和orf6替换其e4序列中orf6/7和orf6,删除其e4序列中orf1、orf2和orf3;
(ii)删除其e3序列中orf2~orf8;且以c亚型人腺病毒基因组e4序列中orf6、orf4和orf3替换其e4序列中orf6、orf4和orf3的序列;删除其e4序列中orf1、orf2、orf6/7;
(iii)删除其e3序列中orf2~orf8;且以c亚型人腺病毒基因组e4序列中orf6/7和orf6替换其e4序列中orf6/7和orf6的序列;
(iv)删除其e3序列中orf1~orf8;且以c亚型人腺病毒基因组e4序列中orf6、orf4和orf3替换其e4序列中orf6、orf4和orf3的序列;删除其e4序列中orf1、orf2、orf6/7;
(v)删除其e3序列中orf1~orf8;且以c亚型人腺病毒基因组e4序列中orf6/7和orf6替换其e4序列中orf6/7和orf6的序列;
(vi)删除其e3序列中orf2~orf8;且以c亚型人腺病毒基因组e4序列中orf6、orf4替换其e4序列中orf6、orf4;删除其e4序列中orf1、orf2和orf3、orf6/7。
6.如权利要求1、2或5所述,其特征在于,所述删除其e1序列为删除其基因组序列中第459-3402位序列;或
(i)中,删除其e3序列中第27446-31423位;且以人血清5型腺病毒adhu5基因组e4序列中第32914-34077位替换其e4序列中第33518-34671位,删除其e4序列中第34943-36105位;
(ii)删除其e3序列中第27446-31423位;且以人血清5型腺病毒adhu5基因组e4序列中第33193-34703位替换其e4序列中第33518-36105位的序列;
(iii)删除其e3序列中第27446-31423位;且以人血清5型腺病毒adhu5基因组e4序列中第32914-34077位替换其e4序列中第33518-34671位的序列;
(iv)删除其e3序列中第27125-31423位;且以人血清5型腺病毒adhu5基因组e4序列中第33193-34703替换其e4序列中第33518-36105位的序列;
(v)删除其e3序列中第27125-31423位;且以人血清5型腺病毒adhu5基因组e4序列中第32914-34077位替换其e4序列中第33518-34671位的序列;
(vi)删除其e3序列中第27446-31423位;且以人血清5型腺病毒adhu5基因组e4序列中第33193-34342替换其e4序列中第33518-36105位。
7.如权利要求1所述的方法或权利要求2所述的重组腺病毒载体,其特征在于,该载体中还包括选自以下操作性相连的元件或基因:
外源基因表达盒;
报告基因的表达盒;
反向末端重复序列;和/或
酶切位点;较佳地包括:i-ceui,pi-scei,swai,paci。
8.如权利要求1所述的方法或权利要求2所述的重组腺病毒载体,其特征在于,所述重组腺病毒载体具有seqidno:1所示的核苷酸序列,但,
其中e3序列被替换为seqidno:2或seqidno:3所示的核苷酸序列;或
其中e4序列被替换为seqidno:4、seqidno:5、seqidno:6或seqidno:7所示的核苷酸序列;或
其中e1序列被删除。
9.权利要求2~8任一所述的重组腺病毒载体的用途,用于制备重组腺病毒;或,用于插入外源基因、从而表达外源基因。
10.一种重组腺病毒,其由权利要求2~8任一所述的重组腺病毒载体包装获得。
11.一种制备权利要求10所述的重组腺病毒的方法,其特征在于,所述方法包括:
(a)制备权利要求2~8任一所述的重组腺病毒载体;
(b)将(a)的重组腺病毒载体转染病毒生产细胞,从而包装获得重组腺病毒。
12.权利要求10所述的重组腺病毒的用途,其特征在于,用于:表达外源基因,从而获得目的蛋白;较佳地,所述的目的蛋白包括:具有免疫原性的蛋白,具有药学活性的蛋白,具有诊断活性的蛋白,结构蛋白,酶,融合肽,报告蛋白。
13.一种试剂盒,包括:
权利要求2~8任一所述的重组腺病毒载体;
权利要求10所述的重组腺病毒;和/或
病毒生产细胞。