一种抗新型冠状病毒药物筛选与评价模型的建立方法及应用

技术特征：
1.一种抗新型冠状病毒药物筛选与评价模型的建立方法，其特征在于：以新型冠状病毒spike蛋白与ace2受体相互作用为靶点构建的体外的药物筛选与评价模型。2.根据权利要求1所述的一种抗新型冠状病毒药物筛选与评价模型的建立方法，其特征在于：所用的载体构建方法为双分子荧光互补技术。3.根据权利要求2所述的一种抗新型冠状病毒药物筛选与评价模型的建立方法，其特征在于：将新型冠状病毒的spike蛋白基因，人ace2基因，以及荧光蛋白venus的两个非荧光互补片段构建在单一载体或不同载体上转染细胞。4.根据权利要求3所述的一种抗新型冠状病毒药物筛选与评价模型的建立方法，其特征在于：1)采用pcdna4
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to质粒，利用2a多肽的自我切割特性，并以mrfp作为表达对照，将人ace2基因、新型冠状病毒的spike蛋白基因，以及荧光蛋白venus的两个非荧光互补片段vn155和vc155，构建在单一载体上，构建载体pcdna
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ace2
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vn155
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p2a
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mrfp
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t2a
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spike
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vc155，基因序列如seq id no.1所示；2)培养的vero
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e6细胞贴壁后，将构建的野生型和突变型载体分别转染细胞，根据待测药物的性质及作用机制采用转染前预防给药或转染后药物干预的给药方式处理细胞，同时设立空载体对照、溶剂对照和未处理细胞对照；3)处理后不同时间，分别用荧光显微镜分析各组细胞的荧光信号强度及蛋白相互作用的亚细胞定位；4)完成荧光信号强度及蛋白相互作用的亚细胞定位分析后，收集转染细胞检测ace2和spike的基因和蛋白表达水平，分析药物干预对转染细胞ace2和spike表达的影响。5.根据权利要求4所述的一种抗新型冠状病毒药物筛选与评价模型的建立方法，其特征在于：用rt
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pcr法检测ace2和spike mrna表达水平；用western blotting法检测ace2和spike蛋白表达水平。6.权利要求1
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5所述的任意一种抗新型冠状病毒药物筛选与评价模型的建立方法，在抗新型冠状病毒药物筛选与评价中的应用。

技术总结
本发明公开了一种抗新型冠状病毒药物筛选与评价模型的建立方法及应用，基于荧光蛋白Venus的两个非荧光互补片段VN155和VC155重新组合形成荧光蛋白发出荧光信号，并利用2A多肽自我切割特性实现多基因同时表达，来检测新型冠状病毒Spike蛋白与ACE2受体的结合效应，可用于能切断新型冠状病毒吸附并感染人体细胞的抗SARS


技术研发人员：伍义行 周彦铸 廉润通 叶子弘 俞晓平
受保护的技术使用者：中国计量大学
技术研发日：2021.07.19
技术公布日：2021/10/26