技术特征：
1.一种dna甲基化修饰的检测方法，其特征在于，所述检测方法包括如下步骤：对待测样本的dna进行酶切；酶切后的待测样本在可视化标签反应液中发生可视化标签反应，在酶切末端添加荧光标记；对可视化的所述荧光标记的信号进行检测；其中，酶切采用甲基化限制性内切酶，所述甲基化限制性内切酶选自甲基化敏感性限制性内切酶和甲基化依赖性限制性内切酶中的一种或者多种；所述可视化标签反应液包含：荧光标记的dntp和荧光标记的ddntp中的一种或者多种，以及，dna连接酶和dna聚合酶中的一种或者多种。2.根据权利要求1所述的dna甲基化修饰的检测方法，其特征在于，所述甲基化敏感性限制性内切酶选自acii、hpaii、hinp1i、hpychiv和clai中的一种或者多种；或/和，所述甲基化依赖性限制性内切酶选自abasi、fspei、lpnpi、和mspji中的一种或者多种。3.根据权利要求1所述的dna甲基化修饰的检测方法，其特征在于，所述dna聚合酶为末端脱氧核苷酸转移酶。4.根据权利要求1至3任一项所述的dna甲基化修饰的检测方法，其特征在于，荧光标记采用间接显色的显色剂。5.根据权利要求4所述的dna甲基化修饰的检测方法，其特征在于，所述间接显色的显色剂为生物素。6.根据权利要求1至3任一项所述的dna甲基化修饰的检测方法，其特征在于，荧光标记采用直接显色的显色剂。7.根据权利要求6所述的dna甲基化修饰的检测方法，其特征在于，所述直接显色的显色剂为荧光素。8.根据权利要求7所述的dna甲基化修饰的检测方法，其特征在于，所述荧光素选自tmr red和fluorescein中的一种或者几种。9.根据权利要求1至3、5、7以及8任一项所述的dna甲基化修饰的检测方法，其特征在于，所述检测方法还包括：酶切之前，还对所述待测样本进行固定和透化。10.根据权利要求9所述的dna甲基化修饰的检测方法，其特征在于，固定采用的固定液为含多聚甲醛的pbs缓冲液；或/和，透化采用的透化液为含triton x-100的柠檬酸钠溶液。
技术总结
本发明涉及一种DNA甲基化修饰的检测方法，包括如下步骤：对待测样本的DNA进行酶切；酶切后的待测样本在可视化标签反应液中发生可视化标签反应，在酶切末端添加荧光标记；对可视化的所述荧光标记的信号进行检测。本发明巧妙地将甲基化限制性内切酶和DNA聚合酶/DNA连接酶结合应用于DNA甲基化修饰的检测中，先通过甲基化限制性内切酶在样本DNA中引入切口，再利用DNA聚合酶/DNA连接酶在该切口处加入荧光标记的核苷酸，从而实现样本DNA的C位点的可视化，这样以来，通过检测待测样本的荧光强度并将其与对应的已知甲基化修饰水平的荧光强度作比较，就能够可视化地判断甲基化修饰C位点的水平。C位点的水平。C位点的水平。
技术研发人员：肖莉 袁梦兮 罗晶晶 廖端芳 殷宇芳 张佳 李凯
受保护的技术使用者：湖南中医药大学
技术研发日：2021.12.31
技术公布日：2022/4/22