技术特征：
1.一种重组多表位融合蛋白，所述重组多表位融合蛋白由asfv结构蛋白p72的4个抗原表位和pe248r的n段氨基酸序列通过连接肽(linker)融合而成，具有以下通式：p72抗原表位1-(linker)
n-p72抗原表位2-(linker)
n-p72抗原表位3-(linker)
n-p72抗原表位4-(linker)
n-pe248r 的n段氨基酸序列；其中，所述p72抗原表位1的氨基酸序列如seq id no：3所示，所述p72抗原表位2的氨基酸序列如seq id no：4所示，所述p72抗原表位3的氨基酸序列如seq id no：5所示，所述p72抗原表位4的氨基酸序列如seq id no：6所示；所述连接肽序列为ggggs，n为1、2、3或4。2.根据权利要求1所述的融合蛋白，其特征在于：所述连接肽序列为ggggs，n为3。3.根据权利要求2所述的融合蛋白，其特征在于：所述asfv结构蛋白pe248r的n段的氨基酸序列为seq id no：7所示。4.根据权利要求3所述的融合蛋白，其特征在于：所述重组多抗原表位融合蛋白的氨基酸序列如seq id no：2所示。5.根据权利要求4所述的融合蛋白，其特征在于：编码所述融合蛋白的核苷酸序列为seq id no：1。6.一种表达载体，所述表达载体由骨架质粒可修饰地连接编码权利要求1所述融合蛋白的核苷酸序列形成。7.一种重组多表位融合蛋白的制备方法，其特征在于：所述制备方法包括以下步骤：(1) 载体构建：构建如权利要求6所述的表达载体；(2) 转化及阳性克隆的筛选：将步骤(1)中的表达载体转化至宿主菌，经诱导和sds-page鉴定得到能够表达目的蛋白的菌株；(3) 诱导表达：将步骤(2)中的阳性菌株转接生长到一定浓度时加入iptg对重组蛋白进行诱导表达；(4) 蛋白纯化：收集步骤(3)中的菌体，经超声破碎、包涵体洗涤及溶解、ni螯合亲和层析纯化和透析复性得到目的蛋白；（5）重组蛋白的鉴定：采用sds-page和western blotting 对步骤(4)中获得的重组蛋白进行鉴定。8.如权利要求1-5任意一种所述的融合蛋白在asf疫苗制备中的应用。9.一种asf亚单位疫苗，包含如权利要求1-5任意一种所述的融合蛋白。10.根据权利要求9所述的asf亚单位疫苗，是将所述融合蛋白与isa 206佐剂配伍后所得。
技术总结
本发明涉及一种重组非洲猪瘟病毒多表位融合蛋白、制备及其应用，属于生物技术制药领域，该重组蛋白是将编码非洲猪瘟病毒p72的4个抗原表位和pE248R的N段氨基酸序列的重组表达质粒转入大肠杆菌，经诱导表达和纯化后获得。所述重组非洲猪瘟病毒多抗原表位融合蛋白具有通式：p72抗原表位1-(Linker)n-p72抗原表位2-(Linker)n-p72抗原表位3-(Linker)n-p72抗原表位4-(Linker)n-pE248R的N段氨基酸序列。该重组蛋白表达量高且能够被非洲猪瘟病毒阳性血清识别。利用该重组蛋白制备的疫苗免疫动物可激发机体产生高水平的特异性抗体以及细胞免疫应答，可用于非洲猪瘟亚单位疫苗的制备。备。备。
技术研发人员：邵军军 张光磊 刘伟 杨思成 常惠芸
受保护的技术使用者：中国农业科学院兰州兽医研究所
技术研发日：2022.01.11
技术公布日：2022/5/6