序列为SEQ ID NO: 3的序列表示。
[0024] 在一个实施方案中，PITX3蛋白为SEQ ID N0:2的序列表示，突变的PITX3蛋白为 SEQ ID NO:4的序列表示。
[0025] 在一个实施方案中，本发明的突变PITX3基因的筛选系统包括如下引物：
[0026] SEQ ID NO:5 和 SEQ ID NO:6。
[0027] 在一个实施方案中，本发明的检测突变PITX3基因的方法中检测突变位点通过选 自如下的技术进行：测序、电泳、核酸杂交、PCR、逆转录酶链反应和变性高效液相色谱，基 于荧光标记技术的DNA测序。
[0028] 在第四方面，本发明涉及通过PCR检测突变PITX3基因中使用的引物对，所述突变 是PITX3基因的突变c. 608delC(即蛋白的突变p. A203fs)。
[0029] 其中所述引物对分别基于选自如下的位置在基因组序列或cDNA编码区序列上前 后设计，使得扩增该位置：PITX3基因 cDNA编码区序列第608位。
[0030] 在第五方面，本发明涉及与突变PITX3基因互补的核酸探针，所述突变是PITX3基 因的突变c. 608delC。
[0031] 所述探针与突变PITX3基因的互补区包括选自如下的基因组序列或cDNA编码区 序列上的位置：PITX3基因 cDNA编码区序列第608位。
[0032] 在第六方面，本发明涉及检测突变ΡΙΤΧ3基因的试剂盒，包含一组或多组引物对， 其中所述突变是ΡΙΤΧ3基因的突变c. 608delC(即蛋白的突变ρ. A203fs)。
[0033] 其中所述引物对分别基于选自如下的位置在基因组序列或cDNA编码区序列上设 计，使得其扩增产物涵盖该位置：PITX3基因 cDNA编码区序列第608位。
[0034] 在一个实施方案中，所述检测突变PITX3基因的试剂盒包括如下引物：
[0035] SEQ ID NO:5 和 SEQ ID NO:6。
[0036] 在第七方面，本发明涉及检测突变PITX3基因的试剂盒，包含一个或多个核酸探 针，所述突变是PITX3基因的突变c. 608delC。
[0037] 所述探针与突变PITX3基因上包含选自如下位置的基因组序列或cDNA编码区序 列上的区域互补：PITX3基因 cDNA编码区序列第608位。
[0038] 本发明的PITX3基因中的突变，可以用于先天性白内障的检测和诊断。本发明发 现了先天性白内障相关基因的突变，对这些基因突变的检测可能用于先天性白内障患者的 辅助诊断，并且可能有利于明确先天性白内障患者的分子诊断。因此，本发明的检测突变 PITX3基因（蛋白）的方法可以用于诊断先天性白内障的目的，例如产前诊断、植入前遗传 学诊断（PGD)、患者筛查。然而，本发明的方法并不仅限于用于诊断疾病的目的。
[0039] 因此，本研宄丰富了 PITX3基因的致病突变谱，对开展先天性白内障的分子诊断 具有重要意义。
【附图说明】
[0040] 图1.先天性白内障家系图。空白圆形：正常女性；空白方形：正常男性；实心圆 形：女性患者；实心方形：男性患者；实心带斜线：已过世患者；箭头所指为家系内先证者。
[0041] 图2. CC家系患者与正常对照测序峰图。
【具体实施方式】
[0042] 下面结合具体实施例对本发明做详细说明，所述的实施例是对本发明的解释而不 是限定。
[0043] 实施例1
[0044] 本实施例采用新一代的全外显子组测序技术，针对一个中国汉族常染色体显性遗 传的先天性白内障患病家系进行了全部外显子区域的高通量测序，结合生物信息分析发现 PITX3基因上的c.608delC(p.A203fS)突变与先天性白内障（CC)有关，并通过共分离实验 等方法验证了这一变异。
[0045] 1.样本采集
[0046] 先天性白内障家系包含30个成员，其中先天性白内障患者9名（图1)。在家系 中选取3位先天性白内障患者和1位正常对照作为外显子测序样本（表1)，每个样本采集 外周血样品2ml，加入EDTA抗凝，-80摄氏度保存。后又收集家系内4位患者和4位正常对 照个体作为二次验证样本（表2)，每位采集外周血样品2ml,加入EDTA抗凝，-80摄氏度保 存。
[0047] 表1.先天性白内障家系外显子测序样本基本情况表
[0048]
【主权项】
1. 先天性白内障的生物标记物，即突变的PITX3基因，所述生物标记物是具有如下的 突变 PITX3 基因：c. 608delC。
2. 先天性白内障的生物标记物，即突变的PITX3蛋白，所述生物标记物是具有如下的 突变 PITX3 蛋白：P. A203fs。
3. 权利要求1的生物标记物，所述突变PITX3基因为具有以下突变的SEQ ID N0:3: c. 608delC，即所述突变的PITX3基因的cDNA编码区序列为SEQ ID N0:3的序列表示。
4. 权利要求2的生物标记物，所述突变PITX3蛋白为具有以下突变的SEQ ID N0:4: р. A203fs，即所述突变的PITX3蛋白为SEQ ID N0:4的序列表示。
5. -种突变PITX3基因的筛选系统，所述筛选系统包括检测受试者的PITX3基因中是 否存在PITX3基因的突变c. 608delC即p. A203fs。
6. 权利要求4的筛选系统，其中所述PITX3基因为SEQ ID NO: 1的序列表示，即所述突 变的PITX3基因的cDNA编码区序列为SEQ ID NO: 3的序列表示。
7. 权利要求4的筛选系统，其中所述PITX3蛋白为SEQ ID N0:2的序列表示，即所述突 变的PITX3蛋白为SEQ ID N0:4的序列表示。
8. 权利要求5-7任一项的筛选系统，包括如下的引物： SEQ ID NO:5 和 SEQ ID NO:6。
9. 通过PCR检测突变PITX3基因中使用的引物对，所述突变是PITX3基因的突变 с. 608delC或PITX3蛋白的突变p. A203fs，所述引物对分别基于选自如下的位置在基因组 序列或cDNA编码区序列上前后设计，使得扩增该位置：PITX3基因 cDNA编码区序列第608 位。
10. 与突变PITX3基因互补的核酸探针，所述突变是PITX3基因的突变c. 608delC，所 述探针与突变PITX3基因的互补区包括选自如下的基因组序列或cDNA编码区序列上的位 置：PITX3基因 cDNA编码区序列第608位。
11. 检测突变PITX3基因的试剂盒，包含一组或多组引物对，其中所述突变是PITX3基 因的突变c. 608delC或PITX3蛋白的突变p. A203fs，其中所述引物对分别基于选自如下 的位置在基因组序列或cDNA编码区序列上设计，使得其扩增产物涵盖该位置：PITX3基因 cDNA编码区序列第608位。在一个实施方案中，所述检测突变PITX3基因的试剂盒包括如 下引物： SEQ ID NO:5 和 SEQ ID NO:6。
12. 检测突变PITX3基因的试剂盒，包含一个或多个核酸探针，所述突变是PITX3基因 的突变c. 608delC，所述探针与突变PITX3基因上包含选自如下位置的基因组序列或cDNA 编码区序列上的区域互补：PITX3基因 cDNA编码区序列第608位。
13. 包含突变PITX3基因的构建体或重组细胞，所述突变是：c. 608delC，例如所述突变 PITX3 基因为 SEQ ID N0:3。
【专利摘要】本发明涉及疾病相关突变基因领域，特别是遗传疾病基因突变，先天性白内障相关基因突变，更特别是先天性白内障相关PITX3基因突变、其检测方法及其用途。具体而言，本发明公开了具有如下的突变PITX3基因或蛋白：c.608delC/p.A203fs。
【IPC分类】C12Q1-68, G01N33-68, C07K14-47, C12N15-12, C12N15-11
【公开号】CN104561016
【申请号】CN201410842834
【发明人】周青, 刘辉, 谌于蓝, 朱健生, 管李萍, 姚登攀
【申请人】深圳华大基因科技有限公司, 安徽省妇幼保健院
【公开日】2015年4月29日
【申请日】2014年12月29日