1.35~1.87,比旋度为+70° ~+85°，适用于口服 制药，而且工艺控制简单、可靠，适合规模化生产。尤其是提纯精制步骤与现有的提纯和精 制步骤相比，一是采用盐酸法去除蛋白质，使用质量百分含量为20%的盐酸溶液，可保持提 取的多糖有较高的生物活性，同时有效去除蛋白质，二是，醇沉、水溶解及酸除蛋白阶段采 用不同的温度控制，通过不同温度及溶剂的协调配合，经过较少的提取次数，就可以实现较 高的提纯效率，而且比现有提纯效率提高10. 2~15. 7%，产品的纯度达到93. 8%-99. 2%。所得 甘露聚糖肽原料药的质量达到国家标准WS1-XG-053-200-2005的规定。
[0025] ②本发明所得甘露聚糖肽原料药用于配制甘露聚糖肽口服液，配方中添加氯化 钠，同时辅以碳酸钠调节PH，使得所得口服液产品的酸度适中，比现有的胶囊剂吸收效果更 好，比现有的注射制剂服用更加方便，不用进行特殊护理，受众更广泛。
[0026] ③本发明制备甘露聚糖肽口服液的方法，工艺控制简单，安全可靠，质量达到国 家WS1-XG-053-2000-2005标准的规定；应用于治疗免疫功能低下，辅助治疗反复呼吸道感 染、白细胞减少症、再生障碍性贫血及肿瘤，减轻放、化疗对造血系统的不良反应和胃肠道 反应，效果明显。
【具体实施方式】
[0027] 为了更详细地进一步阐明而不是限制本发明，给出下列实施例。
[0028] 实施例一 本发明甘露聚糖肽原料药的制备工艺，可按以下步骤来实施： 第一步，制备发酵产物：以a-溶血链球菌为生产菌种，经发酵、高温灭活、离心过滤、滤 液浓缩，得到含有甘露聚糖肽发酵产物的浓缩液，具体过程如下： 所述a_溶血链球菌为a_溶血链球菌HiS-33号菌（Hemolytic Streptococcus)。
[0029] A、发酵过程 (1) 菌种培养 1. 1、血斜面培养：将种子冷冻管取出，在无菌的条件下取菌种接至血斜面培养基上，于 生化培养箱（35~37°C)培养22小时；其中，血斜面培养基由厂家直接购进； 1. 2、肉汤管培养：将上述血斜面培养物接入肉汤试管内，于生化培养箱（35~37°C)培 养20~24小时，无菌检查和形态鉴定合格备用； 1. 3、种子小瓶培养：挑选生长旺盛、活力强、形态特征符合要求的菌种，在无菌条件下 以3~5%的接种量，将肉汤试管中的菌种接入种子小瓶，于生化培养箱中培养（3 5~3 7 °C ) 22~24小时，备用； 1. 4、种子大瓶培养：从种子小瓶中挑选合格菌种，在无菌条件下以10%的接种量接入 种子大瓶中，放置生化培养箱（35~37°C)培养22~24小时，备用； (2) 发酵 1. 1、一级种子液培养：将种子大瓶培养所得菌种在无菌条件下接种至一级种子罐中， 罐压保持在0. 02~0. 04Mpa，罐温保持在37°C ( ± 1°C )，培养18~24小时。
[0030] 1. 2、二级种子液培养：将一级种子罐中的种子液在无菌条件下接种至二级种子罐 中，罐温保持在37°C (±1°C)，罐压为0. 02~0. 04Mpa，培养时间为18~24小时。
[0031] 1. 3、三级发酵：将二级种子罐中的种子液在无菌条件下接种至三级发酵罐，罐内 温度保持在37°C ( ± 1°C )，罐压为0. 02-0. 04Mpa，培养68-72小时，得到发酵液。
[0032] B、高温灭菌：发酵结束后，从发酵罐夹层通入蒸汽对发酵罐预热、升温至 100±5°C，保温10分钟，实现对发酵液的高温灭活； C、 离心过滤：利用沉降离心机对高温灭活后的发酵液进行离心过滤，得到滤液； D、 滤液浓缩：对离心过滤所得滤液通过双效外循环蒸发器进行浓缩，控制温度为 80°C，表压力为0. 02Mpa，真空度为-0. 02,浓缩至比重为1. 12,得到含有甘露聚糖肽发酵产 物的浓缩液。
[0033] 本实施例一的第一步中，各培养基的重量份配比，如表1所示。
[0034] 表1各培养基的重量份配比
【主权项】
1. 甘露聚糖肽原料药的制备工艺，其特征在于，包括以下步骤： 第一步，制备发酵产物：以a-溶血链球菌为生产菌种，经发酵、高温灭活、离心过滤、滤 液浓缩，得到含有甘露聚糖肽发酵产物的浓缩液； 第-步，提纯精制： A、 在第一步所得浓缩液中，加入体积量为浓缩液1~3倍的95%的乙醇，充分搅拌，降温， 保持温度< KTC，静置18~22小时进行沉淀，离心，收集沉淀物； B、 加入体积量为沉淀物2~4倍量的纯化水，搅拌溶解，并升温至45~50°C，停止搅拌，静 置10~14小时，离心，弃去沉淀物，收集清液； C、 将清液加盐酸溶液调PH值至I. 5~1. 7,降温，保持温度为3~5°C，静置10~14小时，离 心，弃去沉淀物，收集清液； D、 将步骤C所得清液按照步骤A、B、C反复操作数次至中间检测合格为止，得到甘露聚 糖肽清液； E、 加入体积量为步骤D所得清液1~3倍的95%的乙醇，充分搅拌，降温，保持温度 < KTC，静置18~22小时进行沉淀，离心，收集沉淀物，即得甘露聚糖肽湿品； 第三步，真空干燥：将第二步所得甘露聚糖肽湿品进行真空干燥，即得甘露聚糖肽干 品； 第四步，粉碎：将第三步所得甘露聚糖肽干品加入粉碎机中进行粉碎，即得甘露聚糖肽 原料药。
2. 如权利要求1所述的甘露聚糖肽原料药的制备工艺，其特征在于：所述第一步的所 述高温灭活为发酵结束后，发酵罐夹层通入蒸汽对发酵罐预热、升温至l〇〇±5°C，保温10 分钟。
3. 如权利要求1所述的甘露聚糖肽原料药的制备工艺，其特征在于：所述第一步的所 述滤液浓缩是对离心过滤所得滤液通过双效外循环蒸发器进行浓缩，控制温度为80~90°C， 表压力为〇· 02Mpa~0. 04Mpa，真空度为-0· 02~-0· 08Mpa，浓缩至比重为I. 12~1· 14。
4. 如权利要求1所述的甘露聚糖肽原料药的制备工艺，其特征在于：所述第二步的C 步骤中，所述盐酸溶液的质量百分含量为20%。
5. 如权利要求1所述的甘露聚糖肽原料药的制备工艺，其特征在于：所述第三步的所 述真空干燥的温度为65~70°C，真空度为-0. 05~-0. 08Mpa，干燥时间为2~3小时，控制水分 的质量百分含量< 4. 8%。
6. 如权利要求1所述的甘露聚糖肽原料药的制备工艺，其特征在于：所述第二步的D 步骤中，按照步骤A、B、C反复操作两次，得到甘露聚糖肽清液。
7. 如权利要求1~6任一项所述甘露聚糖肽原料药的制备工艺，其特征在于：所述甘露 聚糖肽原料药用于治疗免疫功能低下，辅助治疗反复呼吸道感染、白细胞减少症、再生障碍 性贫血及肿瘤。
8. 如权利要求1~6任一项所述甘露聚糖肽原料药的制备工艺，其特征在于：所述甘露 聚糖肽原料药用于制备甘露聚糖肽口服液。
9. 一种使用权利要求1~6任一项所述甘露聚糖肽原料药制备权利要求8所述甘露聚 糖肽口服液的工艺，其特征在于：所述甘露聚糖肽口服液，包括重量份的下述原料，甘露聚 糖肽原料药1份、氯化钠4~6份、纯化水1000份、碳酸氢钠适量。
10. 如权利要求9所述甘露聚糖肽口服液的制备工艺，其特征在于：包括以下步骤： 第一步：配液： 量取纯化水置配制罐中，加入上述重量份的甘露聚糖肽原料药和氯化钠，开启搅拌使 其完全溶解，将溶液经板框过滤器过滤至贮罐； 经配制罐加纯化水至工艺配制量，开启卫生泵使药液在贮罐中循环30分钟； 取样检验，合格后经板框过滤器过滤至中转桶，传至灌封间； 若PH值不符合工艺要求，用5% (wt%)的碳酸氢钠溶液调节PH值至工艺要求，再开启 卫生泵使药液在贮罐循环30分钟，重复步骤c ;所述PH值的工艺要求为5. 5~7. 5 ; 第二步：灌封轧盖：每支装量10. 〇~l〇. 5ml ; 第三步：灭菌：控制温度为115°C，时间30分钟； 第四步：灯检、包装：灯检合格后进行包装。
11. 如权利要求10所述甘露聚糖肽口服液的制备工艺，其特征在于：所述步骤d中的 PH 值为 6. 0-7. 0。
12. 如权利要求9所述甘露聚糖肽口服液的制备工艺，其特征在于：所述碳酸氢钠的含 量根据调节权利要求10所述配液步骤的PH值所消耗的量进行控制，且最大添加量不超过 15g/kg甘露聚糖肽原料药。
【专利摘要】本发明提供了一种甘露聚糖肽原料药的制备工艺及其应用，涉及药物领域。本发明的技术方案是：甘露聚糖肽原料药的制备工艺及其应用，以a-溶血链球菌为生产菌种，通过发酵、高温灭活、离心过滤、滤液浓缩，以及提纯精制、真空干燥和粉碎这些工艺步骤，制备出甘露聚糖肽原料药。本发明的制备工艺控制简单，提纯精制效率高，产量高，安全可靠，适合工业化生产。
【IPC分类】C07K1-14, A61P7-00, A61P7-06, A61P37-04, C12P21-02, A61K38-16, A61K9-08, A61P11-00, A61P35-00
【公开号】CN104651433
【申请号】CN201510109596
【发明人】李健, 王峰, 周小旭, 朱俊丽, 李合青
【申请人】河南全宇制药股份有限公司
【公开日】2015年5月27日
【申请日】2015年3月13日