所示的氨基酸序列中缺失、置换或添加了1~20个氨基酸而成 的氨基酸序列构成,且具有栊牛儿基二磷酸合成酶活性的蛋白质、
[0058] (c)具有与序列号2所示的氨基酸序列显示60%以上的同源性的氨基酸序列,且 具有栊牛儿基二磷酸合成酶活性的蛋白质。
[0059] 需要说明的是,关于(c)中氨基酸序列的同源性,更优选为80%以上,进一步优选 为90%以上,特别优选为95%以上。
[0060] 作为NPP合成酶的具体例,可以举出源自于西红柿(Solanumlycopersicum)的酶 (基因银行注册编号:(GenBankAccessionNo.):FJ797956)等。
[0061] 序列号3中示出与编码上述源自于西红柿的NPP合成酶的核酸(DNA)的碱基序列 对应的氨基酸序列,序列号4中仅示出氨基酸序列。具有序列号3所示的碱基序列的DNA 为编码NPP合成酶的核酸的一个例子。
[0062]并且,编码NPP合成酶的核酸中至少含有对下述(d)、(e)或(f)的蛋白质进行编 码的核酸。
[0063] (d)由序列号4所示的氨基酸序列构成的蛋白质、
[0064] (e)由在序列号4所示的氨基酸序列中缺失、置换或添加了 1~20个氨基酸而成 的氨基酸序列构成,且具有橙花基二磷酸合成酶活性的蛋白质、
[0065] (f)具有与序列号4所示的氨基酸序列显示60%以上的同源性的氨基酸序列,且 具有橙花基二磷酸合成酶活性的蛋白质。
[0066] 关于需要说明的是(f)中的氨基酸序列的同源性,更优选为80%以上,进一步优 选为90%以上,特别优选为95%以上。
[0067] 在本发明的重组细胞中,关于"编码栊牛儿基二磷酸(GPP)合成酶的核酸"和"编 码橙花基二磷酸(NPP)合成酶的核酸",可以仅导入其中一种核酸,也可以导入两种核酸。
[0068] 作为0 -水芹烯合成酶及对其进行编码的核酸的具体例,可以举 出:源自于西红柿(Solanumlycopersicum)的酶(基因银行注册编号: (GenBankAccessionNo.):FJ797957 ;Schilmiller,A.L. ,etal. ,ProcNatlAcad SciUSA. ,2009, 106, 10865-70.)、源自于薰衣草(Lavandulaangustifolia)的 酶(基因银行注册编号:(GenBankAccessionNo.) :HQ404305;Demissie,Z.A.,et al. ,Planta, 2011, ? 233, 685-96)等。
[0069] 序列号5中示出与上述源自于西红柿的编码0 -水芹烯合成酶的核酸(DNA)的碱 基序列对应的氨基酸序列,序列号6中仅示出氨基酸序列。
[0070] 序列号7中示出与上述源自于薰衣草的编码0 -水芹烯合成酶的核酸(DNA)的碱 基序列对应的氨基酸序列,序列号8中仅示出氨基酸序列。
[0071] 具有序列号5或序列号7所示的碱基序列的DNA为编码0 -水芹烯合成酶的核酸 的一个例子。
[0072] 并且,在编码0 _水芹烯合成酶的核酸中至少含有对下述(g)、(h)或(i)的蛋白 质进行编码的核酸。
[0073] (g)由序列号6或8所示的氨基酸序列构成的蛋白质、
[0074] (h)由在序列号6或8所示的氨基酸序列中缺失、置换或添加了1~20个氨基酸 而成的氨基酸序列构成,且具有0-水芹烯合成酶活性的蛋白质、
[0075] (i)具有与序列号6或8所示的氨基酸序列显示60%以上的同源性的氨基酸序 列,且具有水芹烯合成酶活性的蛋白质。
[0076] 需要说明的是,关于(i)中的氨基酸序列的同源性,更优选为80%以上,进一步优 选为90%以上,特别优选为95%以上。
[0077] 作为本发明的重组细胞中的宿主细胞没有特别限定,可以为原核细胞、真核细胞 中的任一种。作为原核细胞的例子,可以举出:细菌、放线菌。作为细菌的例子,可以举 出:大肠杆菌等埃希氏菌(Escherichia)属细菌、枯草菌等芽孢杆菌(Bacillus)属、假 单胞菌(Pseudomonas)属细菌、蓝细菌(蓝藻)、梭菌(Clostridium)属细菌、棒状杆菌 (Corynebacterium)属细菌、罗尔斯通氏菌(Ralstonia)属细菌等。其中,特别优选容易大 量培养的大肠杆菌。
[0078] 作为真核细胞的例子,可以举出:酵母、丝状菌、真核微藻类、植物细胞、动物细胞。
[0079] 作为酵母的例子,可以举出:发面酵母(Saccharomycescerevisiae)、裂殖 酵母(Schizosaccharomycespombe)、葡萄汁酵母(Saccharomycesuvarum)、卡尔酵 母(Saccharomycescarlsbergensis)、糖化酵母(Saccharomycesdiastaticus)、热带 假丝酵母(Candidatropicalis)、麦芽糖假丝酵母(Candidamaltosa)、近平滑假丝 酵母(Candidaparapsilosis)、毕赤酵母(Pichiapastoris)、粉状毕赤酵母(Pichia farinosa)、Pichiapinus、Pichiavarijii、发酵毕赤酵母(Pichiafermentans)、季也蒙 毕赤酵母(Pichiaguilliermondii)、树干毕赤酵母(Pichiastipitis)、Saccharomyces elluris、产|元假丝酵母(Candidautilis)、季力蒙假丝酵母(Candidaguilliermondii)、 亨利汉逊酵母(Hansenulahenricii)、M碎囊汉逊酵母(Hansenulacapsulata)、多形 汉逊酵母(Hansenulapolymorpha)、土星汉逊酵母(Hansenulasaturnus)、桔林油脂酵 母(Lypomyceskononenkoae)、马克斯克鲁维酵母(Kluyveromycesmarxianus)、溶脂假 丝酵母(Candidalipolytica)、扣囊复膜酵母(Saccaromycopsisfibuligera)、路德类 酵母(Saccharomycodesludwigii)、克鲁弗酵母(Saccharomyceskluyveri)、黄金银耳 (Tremellamesenterica)、产酸结合酵母(Zygosaccharomycesacidofaciens)、发酵结合 酵母(Zygosaccharomycesfermentati)、解脂耶罗维亚酵母(Yarrowialipolytica)及大 豆结合酵母(Zygosaccharomycessoja)等。其中,特别优选选择容易大量培养的酵母。
[0080] 另外,宿主细胞优选不具有甲烷单加氧酶(EC1. 14. 13. 25)。
[0081] 作为将编码GPP合成酶、NPP合成酶、0-水芹烯合成酶的各核酸导入宿主细胞的 方法没有特别限定,只要根据宿主细胞的种类等适宜选择即可。例如可以使用可导入宿主 细胞且可表达插入的核酸的载体。
[0082] 例如在宿主细胞为细菌等原核生物的情况下,作为该载体,可以使用可在宿主细 胞中自主复制的载体、或者可整合至染色体中的并在能够对所插入的上述核酸(DNA)进行 转录的位置含有启动子的载体。例如优选使用该载体在宿主细胞内构建由启动子、核糖体 结合序列、上述核酸0>NA)及转录终结序列构成的一系列的结构。
[0083] 作为可在宿主细胞为大肠杆菌的情况下使用的载体,优选所谓的多拷贝型的载 体,可以举出:具有源自于ColEl的复制开始点的质粒、例如pUC系的质粒及pBR322系的质 粒或者其衍生物。更具体而言,例如可以使用pUC19[Gene,33, 103(1985)]、pUC18、pBR322、 pHelixl(RocheDiagnostics株式会社制造)、pKK233_2(AmershamPharmaciaBiotech株 式会社制造)、pSE280 (Invitrogen株式会社制造)、pGEMEX-1 (Promega株式会社制造)、 pQE-8(Qiagen株式会社制造)、pET-3(Novagen株式会社制造)、pBluescriptllSK(+)、 pBluescriptIIKS(+)(Stratagene株式会社制造)、pSTV28(Takarabio株式会社制造)、 pUC118(Takarabio株式会社制造)等。作为载体上的启动子,只要可在大肠杆菌等宿主细 胞中启动就可以为任一启动子。例如也可以使用trp启动子(Ptrp)、lac启动子(Plac)、 PL启动子、PR启动子等以17启动子等源自于大肠杆菌及噬菌体等的启动子及如tac启动 子、lac!7启动子的人为设计改变的启动子等。
[0084] 在宿主细胞为酵母的情况下也基本上相同,作为该载体的结构,优选具有用于在 宿主酵母内稳定地维持的复制体系、可转录所插入的上述核酸(DNA)的启动子及终止子序 列。例如该载体可以为可在宿主酵母中复制或可整合至宿主染色体内的质粒。另外,该载 体可以为各自可通过选择性的切割部位进行分离的、可对期望的DNA序列的重复复制的表 达进行编码的载体。
[0085] 能够在酵母中启动的启动子的种类没有特别限定,例如可以使用异柠檬酸裂合酶 基因的启动子、A0X1启动子、GAPDH启动子、PH05启动子、甘油醛-3-磷酸脱氢酶(TDH3)启 动子、ADHI启动子、MFa1启动子及GAL10启动子等。
[0086] 在使用载体将各核酸导入宿主细胞的情况下,可以将各核酸整合到1个载体,也 可以整合到分别的载体。并且,在1个载体中整合多个核酸的情况下,可以使各核酸在通用 的启动子下表达,也可以使其在分别的启动子下表达。
[0087] 在宿主细胞具有a_水芹烯合成酶的情