一种不褪色的红曲霉发酵中药保健酒制备方法_4

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用由以下技术措施构成的技术方案来实现的,其中所述份数除特别说明外,均以重量份数计。
[0128]1、红曲霉种子的制备
[0129]称量市购紫色红曲霉发酵制得的500kg红曲米,除去红曲米菌种中的少量杂物,加入1300kg蒸汽灭菌后的35°C温水中,浸泡2小时,即可使用。或可采用常规红曲米培养方法制得,制作步骤简略如下:
[0130]将保存的紫色红曲霉种子接入固体斜面培养基中活化,在34°C温度下培养15天,活化后,根据需要接入若干斜面培养基中扩大培养,将制好的红曲霉斜面孢子用无菌水清洗后,倒入装有事先经过灭菌的生理盐水的三角瓶中,三角瓶中预先装有数十粒玻璃珠,在摇床上震荡,充分打散孢子,制成孢子浓度为I X 15个/mL的孢子悬液,即为红曲霉种子液;
[0131]将840kg糯米经淘洗、浸泡,蒸饭,摊凉放置在曲盒中,待温度冷却至40-45 V时,接入170L红曲霉种子液,放入25-28°C曲室内堆积培养,当品温升至45°C,有曲香味时,摊开散热,起初饭粒堆积2-3cm左右,随着温度上升,逐渐摊薄至1cm,保持品温30_35°C,待曲粒表面发红,较干燥时,落下时伴随有沙沙响声,用蒸馏水或干净的井水浸泡1-2分钟,淋干后摊开,在30-35°C生长,期间每天洒水一次,洒水量控制在10%以内,至糯米表面呈紫红色,内无白心结束发酵,烘干,即制得红曲米。
[0132]所述的斜面培养基为麦芽汁培养基,配方为麦芽膏粉130g,琼脂1.5%,PH6.0±0.2,加水至 ILo
[0133]2、甜酒曲的准备
[0134]接入9kg市售甜酒曲,加入400kg经蒸汽灭菌后的2 %浓度的蔗糖溶液中,约10-20min后使用。
[0135]3、酵母
[0136]接入3kg活性干酵母,加入200kg蒸汽灭菌后的2 %浓度的蔗糖溶液中,在28-32 °C活化3min,即可使用。
[0137]4、中药的准备和粗提
[0138]配方:,黄苗70kg,制首乌25kg,枸丰己15kg,杜仲10kg,当归15kg,熟地8kg,菌陈20kg,泽湾10kg,桃仁20kg,红花10kg,赤苟18kg,虎杖10kg,川穹25kg,山楂400kg,红率600kg,红曲 500kg。
[0139]取256kg中药(除红枣,红曲、山楂以外的中药),除去中药中的杂质和部分有霉斑的中药,用清水清洗干净,淋干水分后晾干,按照上述配方配制中药,粉碎(山楂单独粉碎),混合均勾后,加入1300kg, 90% vol食用优质酒精;浸泡15天,期间每天搅拌或晃动一次。浸渍完成后,将药酒过滤,放入适当容器中备用,提取后中药渣,加入1300kg,90% vol食用优质酒精;浸泡10天,期间每天搅拌或晃动一次。浸渍完成后,将药酒过滤,合并2次药液,提取后药渣用500kg蒸馏水浸泡3小时,期间搅动3次,过滤,将药渣和浸泡水分别存放。
[0140]5、红枣的准备和粗提
[0141]称量600kg红枣,除去红枣中的杂质和部分有虫蛀、霉斑、残缺的红枣,将红枣用清水清洗干净,加入3倍蒸馏水浸泡8小时,淋水,晾干,用打核器去除枣核,放入粉碎机中粉碎,去除枣皮,然后放入适当的容器内,加入1200kg,90% vol食用优质酒精浸泡15天,将白酒过滤,过滤后的枣渣加入1200kg,90% vol食用优质酒精浸泡10天,将白酒过滤,合并2次提取液,放入适当的容器中密封保存,提取后的红枣渣用1200kg水浸泡3小时,期间搅动3次,过滤,将枣渣和浸泡水分别存放。
[0142]6、香米准备
[0143]称量3000kg香米,将香米用清水淘洗2-4次,直至水清,加入上述中药、红枣浸泡水,充分浸泡,浸泡水不足加井水替代,使香米将枣澄、中药澄浸泡过程中溶解的部分水溶性成份充分吸收,以手掰开可碾成粉末为止,约5小时后滤出,此时香米重量约为4500kg,将泡好的大米放入底部铺有纱布的蒸笼中,大火加热至蒸笼冒出白汽,保持约15分钟,夕卜硬内软,透而不烂,指捻无白心即可,揭开笼盖,把香米移出,压碎结块,冷却至40-45°C左右。
[0144]二、中药发酵药酒的制备
[0145]1、香米发酵
[0146]将山楂、红枣渣、中药渣,香米混合,组成发酵基质,装入发酵池或陶瓷大缸中,甜酒曲和红曲米带水加入基质中,充分搅拌均匀,容器的大小约为发酵基质的3-4倍容量,搭成上大下小的倒立喇叭状,表面撒少许红曲米和甜酒药,在24-30°C条件下发酵40-60小时,15-24小时后,缸中小洞会集聚发酵液,每天将发酵液重新淋入周围香米中,发酵液将越聚越多,至香米发软、不成形或聚集发酵液达窝容量的4/5左右,发酵完成,此时的发酵液呈酸甜,稍有苦味,如果呈苦辣味,说明发酵已过,不能使用。
[0147]2、加入蒸馏水或深井水共3600kg,加水后发酵液不超过容器容量的3/4,加入上述活性干酵母,15-28°C密封发酵15-40天,从第二天开始,每天压帽一次,连续压帽5天。5天后,减少压帽次数或不压帽,增加缸口的密封度,尽量不开盖子,减少杂菌污染,待缸中香米90%以上沉入坛底,气泡很少,酒液澄清,酒香浓郁。表明发酵完成,此时酿出的酒度约为10-15 度。
[0148]3、将发酵后的红曲酒过滤,将余料残渣压榨取汁,沉淀,过滤,将红曲酒滤液和压榨液合并,得到发酵原液,约7000kg。
[0149]4、配制。按照中药提取药酒,红枣提取液,发酵原液1:1: 3的比例混合均匀,此时红曲酒度数约为40度,装坛密闭陈酿30-90天,然后过滤即成。
[0150]实验部分
[0151]实验例I红曲药酒预防和治疗大鼠高脂血症实验报告
[0152]1.材料和方法
[0153]1.1动物及环境
[0154]Wistar大鼠,清洁级,体重180±20g,10_12周龄,由河南省实验动物中心提供,许可证号SCXK(豫)2005-0001,实验期间环境温度23±2°C,湿度60±5%,
[0155]1.2主要仪器,器材与试剂
[0156]0LYMPUSAU400全自动生化分析仪,TGL-18R型台式低温离心机:珠海黑马公司;胆固醇、甘油三酯购自上海复星长征仪器公司,高密度脂蛋白,低密度脂蛋白试剂盒购自伊利康生物技术有限公司。
[0157]1.3 药物
[0158]基础饲料:玉米:55%,麦麸16%,豆柏22 %,鱼粉5 %,食盐0.9%,微量元素0.1%,氨基酸1%,多维适量。
[0159]高脂饲料:2%胆固醇,10%猪油,甲基硫氧嘧啶0.2%,胆酸钠0.5%,基础饲料87.3%
[0160]1.4预防大鼠高脂血症试验方法
[0161]取45只Wistar大鼠,随机分成5组,每组9只大鼠,分别为正常对照组,高脂对照组、红曲中药酒低剂量组、中剂量组和高剂量组,红曲中药酒低、中、高剂量组在饲喂高脂饲料同时按照1.04mL/kg,2.08mL/kg,3.12mL/kg用量(按照动物体表面积法折算,约相当于60kg成人每天服用20、40、60mL红曲中药酒),用蒸饱水适当稀释至llmL/kg,每天灌胃红曲中药酒;高脂对照组,饲喂高脂饲料同时灌胃和红曲中药酒组等剂量的蒸馏水;正常对照组饲喂基础饲料,并灌服等剂量的蒸馏水。连续饲喂30天,每周称重一次,实验结束禁食16小时,眼球采血测量各组大鼠血脂各项指标,采用酶法测定血清中总胆固醇(TC)、甘油三脂(TG)、高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)、低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)的含量。
[0162]1.5治疗大鼠高脂血症试验方法
[0163]取45只Wistar大鼠,随机分成5组,每组9只,分别为正常对照组,模型对照组,红曲中药酒低、中、高剂量组,正常组每天饲喂基础饲料,模型对照组和红曲中药酒各剂量组每天饲喂高脂饲料,40天后称重,测定血脂水平。造模成功后,各组均改换基础饲料,红曲药酒低、中、高剂量组分别按照1.04mL/kg,2.08mL/kg,3.12mL/kg用量(按照动物体表面积法折算,约相当于60kg成人每天服用20、40、60mL红曲中药酒),用蒸饱水适当稀释至IlmL/kg,每天灌胃红曲中药酒;高脂对照组,灌胃和红曲药酒组等剂量的蒸馏水;正常对照组灌服等剂量的蒸馏水。连续饲喂30天,每周称重一次,实验结束禁食16小时,眼球采血,采用酶法测定血清中总胆固醇(TC)、甘油三脂(TG)、高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)、低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)的含量。
[0164]2、实验结果
[0165]2.1红曲药酒对高脂血症大鼠的预防作用,参照图4。
[0166]红曲药酒低、中、高各组给药后与高脂对照组比较,大鼠TC、TG、LDL-C均明显降低(P<0.05),说明服用红曲中药酒能有效降低大鼠血脂含量,对大鼠高脂血症具有明显的预防作用;红曲中药酒TC、LDL-C、HDL-C中剂量组(相当于人40mL/120kg)、高剂量组、正常对照组之间无显著差异性(P > 0.05),故最适人用饮用剂量推荐为40mL/天。
[0167]2.2、红曲药酒对高脂血症大鼠的治疗作用,参照图5。
[0168]高脂对照组和红曲中药酒各组饲喂高脂饲料后与正常对照组相比,血清TC、LDL-C, TG明显升高(P < 0.05),HDL-C显著降低(P < 0.05),说明本实验模型建立成功;红曲中药酒低剂量组与高脂对照组及给药酒前相比较,TC含量显著降低(P<0.05),其它指标没有表现出显著差异性;红曲中药酒中、高剂量组给药后与高脂对照组及给药前相比较,大鼠TC、LDL-C明显降低(P < 0.05),TG含量降低,而HDL-C含量升高,但均没有表现出显著差异性(P > 0.05);红曲药酒高剂量组和中剂量组实验各指标均没有表现出显著差异(P > 0.05),该实验说明2.03mL/kg和3.12ml/kg用量(相当于人用量40mL/120kg和60mL/120kg)的红曲中药酒对大鼠高脂血症具有一定的治疗作用,相比较预防实验,红曲中药酒对高脂血症疾病的预防效果优于治疗效果。
[0169]试验例2红曲中药酒对高脂血症患者的治疗效果
[0170]1、材料与方法
[0171]1.1主要仪器,器材与试剂
[0172]0LYMPUSAU400全自动生化分析仪,TGL-18R型台式低温离心机:珠海黑马公司。
[0173]1.2志愿者选择
[0174]1.2.1志愿者选择标准
[0175]受试者选自孟津县,城乡、性别不限,根据中华心血管病防治对策专题组《血脂异常防治建议》,在正常饮食情况下,检测禁食12?14小时后的血脂水平,凡血清总胆圃醇彡5.72mmol/L,血清甘油三酯彡1.70mmol/L。低密度脂蛋白胆固醇彡3.64mmol/L或高密度脂蛋自胆固醇< 0.91mmol/L,四
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