一种纯化特拉万星粗品的方法
【技术领域】
[0001]本发明属于抗生素提取技术领域，特别是涉及一种纯化特拉万星粗品的方法。
【背景技术】
[0002]特拉万星为亲水性的万古霉素衍生物，对MRSA，MRSE和VanA型肠球菌的活力均高于万古霉素和替考拉宁，在第二代糖肽类抗生素中活力中等，但其作用机制有显著特性:通过干扰细菌脂合成，同时使细胞膜破裂，破坏细胞膜的完整性来提高其对金葡菌、肺炎链球菌以及VanA型金葡菌或肠球菌的杀菌能力。
[0003]目前，国内有关于万古霉素的提取、纯化的的文献报道，但没有纯化特拉万星的文献报道。
【发明内容】
[0004]本发明的目的就在于提供一种有效、安全纯化特拉万星粗品的方法。
[0005]为实现上述目的所采取的技术方案为:
一种纯化特拉万星粗品的方法，其特征在于所述工艺步骤为:首先将特拉万星粗品酸化溶解，过滤，所得滤液用有机溶媒萃取，盐酸溶液反萃取，之后采用离子交换法分离提取得到盐酸特拉万星溶液，然后将该盐酸特拉万星溶液超滤，结晶，水洗，干燥即可。
[0006]所述酸化溶解后的特拉万星溶液，其pH5?6，浓度控制在60?70%。
[0007]所述酸化溶解采用体积浓度为20?30%的盐酸溶液实现。
[0008]所述有机溶媒萃取过程为:首先将滤液和有机溶媒按照V#e75S:Ymmm =1:3?4的体积比混合，然后温度降至5?15°C，再用15?25%的氨水调节pH9?10，充分搅拌20?30min，静置60?lOOmin，静置结束，进行液液分离，得到特拉万星有机溶媒溶液，所述有机溶媒为甲基异丁基甲酮和航空煤油的混合物，其中航空煤油的比例控制在5?10%。
[0009]所述萃取次数至少2次，萃取总收率达到95%以上，停止萃取。
[0010]所述反萃取过程为:在特拉万星萃取液中按照=1:4?5的体积比加入去离子水，温度控制在10?15°C，在搅拌状态下缓慢匀速加入20?30%盐酸溶液，调节pH至4.5?5.5后继续搅拌20?30min，静置60?10min，静置结束，进行液液分离，得到盐酸特拉万星溶液。
[0011]所述反萃取次数至少2次以上，反萃取总收率达到93%以上，停止反萃取。
[0012]所述离子交换法是采用聚苯乙烯型强酸性阳离子树脂实现，盐酸特拉万星溶液温度控制在30?40°C，以40?50ml/min的速度进入填充柱；以50?60%盐酸为解吸剂，以20?30ml/min的速度将特拉万星解吸下来，得到盐酸特拉万星溶液。
[0013]所述超滤采用多通道式陶瓷膜设备实现，膜孔径控制在0.01或0.02 μ m，其过滤方式是错流过滤，过滤过程中，温度控制在40?50°C，压力控制在0.2?0.3MPa。
[0014]所述结晶过程为:起晶温度控制在40?45°C，然后在搅拌状态下，以10?12°C /h的降温速度进行冷却结晶，至最终温度O?5°C，之后养晶陈化180?360min ； 结晶过程中，采用20?30%氨水调节pH至9?10，其调节速度与冷却降温速度一致；连续慢速恒流导入反溶剂去离子水，加量为盐酸特拉万星溶液体积的5?10%，时间控制在120 ?180min。
[0015]所述干燥温度控制在50?60°C，当水分含量低于6%，停止干燥。
[0016]所述聚苯乙烯型强酸性阳离子树脂用量为特拉万星粗品重量的3?5倍；所述填充柱高径比为6?6.5:1。
[0017]所述陶瓷膜材质为氧化铝或氧化钛或氧化锆。
[0018]本发明的技术优势:
I本发明提供了一种有效纯化特拉万星的方法，并且其提取、纯化的收率达到80%以上。
[0019]2本发明可以有效去除特拉万星的热源。
[0020]3本发明生产成本低，有利于增强产品的国内外市场的竞争力。
[0021]4本发明工艺简单，省时省力。
[0022]5本发明可提高了成品质量，特拉万星含量达到了 99%。
[0023]具体实施方法
下面用实例予以说明本发明，应该理解的是，实例是用于说明本发明而不是对本发明的限制。本发明的范围与核心内容依据权利要求书加以确定。
[0024]下述实施例中的粗品来源:
新型脂糖肽类抗生素特拉万星的合成方法:以癸胺、乙二醛二甲基缩醛为原料经还原胺化反应，用氯甲酸?9?芴甲酯保护亚氨基、盐酸水解缩醛制得N?(9?芴基甲氧羰基)?癸基氨基乙醛(9)。盐酸万古霉素与9发生还原胺化反应、再脱9?芴甲氧羰基保护基、与氨甲基膦酸进行曼尼希反应合成目标产物特拉万星粗品。
[0025]树脂来源为河北利江生物科技有限公司。
[0026]下述实施例中有机溶媒为甲基异丁基甲酮和航空煤油的混合物，其中航空煤油的比例控制在5?10%。
[0027]实施例1
特拉万星粗品1kg用20%的盐酸溶液溶解，pH至5，特拉万星浓度控制在60%，然后过滤，得到特拉万星溶液16.9L。加入有机溶媒50L，温度降至5°C，再用15%的氨水调节pH9。搅拌20min，静置60min。静置结束，进行液液分离。萃取2次，得到特拉万星有机溶媒溶液99.5L，萃取总收率达到95.8%。
[0028]特拉万星萃取液加入去离子水400L，温度控制在10°C，启动搅拌系统，搅拌过程中缓慢匀速加入20%盐酸溶液，调节pH至4.5后继续搅拌20min，静置60min。静置结束，进行液液分离。反萃取2次，特拉万星溶液体积为800L，反萃取总收率达到93.5%，停止反萃取。
[0029]树脂柱中加入60kg聚苯乙烯型强酸性阳离子树脂，盐酸特拉万星溶液温度控制在30°C，以40ml/min的速度进入树脂柱；以50%盐酸为解吸剂，20ml/min的速度将特拉万星解吸下来，得到盐酸特拉万星溶液276L。
[0030]选用多通道式陶瓷膜设备过滤盐酸特拉万星溶液，膜的孔径控制在0.01 μπι，其过滤方式是错流过滤。过滤过程中，温度控制在40?50°C，压力控制在0.2?0.3MPa。膜材质为氧化铝。
[0031]盐酸特拉万星溶液起晶温度控制在40 °C。结晶过程中，采用20%氨水调节pH至
9;其调节速度与冷却降温速度一致；连续慢速恒流导入反溶剂去离子水，加量为14L，时间控制在120min ;搅拌转速控制在20r/min ;降温速度为10°C /h。冷却结晶的最终温度控制在0°C ;冷却结晶结束，养晶陈化时间控制在180min。
[0032]结晶结束后，用纯化水淋洗特拉万星固体，淋洗时间控制在5min。淋洗结束后进行干燥，温度控制在50?60°C。干燥结束，水分含量为5.7%，得到纯品特拉万星8.1kg，收率为81%，含量为99.0%。
[0033]实施例2
特拉万星粗品1kg用22%的盐酸溶液溶解，pH至5.3，特拉万星浓度控制在62%，然后过滤，得到特拉万星溶液16.1L。加入有机溶媒53L，温度降至7.5°C，再用18%的氨水调节PH9.3。搅拌23min，静置70min。静置结束，进行液液分离。萃取2次，得到特拉万星有机溶媒溶液105.8L，萃取总收率达到96.0%。
[0034]特拉万星萃取液加入去离子水455L，温度控制在11°C，启动搅拌系统，搅拌过程中缓慢匀速加入22%盐酸溶液，调节pH至4.8后继续搅拌22min，静置70min。静置结束，进行液液分离。反萃取2次，特拉万星溶液体积为905L，反萃取总收率达到93.9%，停止反萃取。
[0035]树脂柱中加入70kg聚苯乙烯型强酸性阳离子树脂，盐酸特拉万星溶液温度控制在33°C，以42ml/min的速度进入树脂柱；以53%盐酸为解吸剂，23ml/min的速度将特拉万星解吸下来，得到盐酸特拉万星溶液265L。
[0036]选用多通道式陶瓷膜设备过滤盐酸特拉万星溶液，膜的孔径控制在0.02 μ m，其过滤方式是错流过滤。过滤过程中，温度控制在40?50°C，压力控制在0.2?0.3MPa。膜材质为氧化锆。
[0037]盐酸特拉万星溶液起晶温度控制在42°C。结晶过程中，采用25%氨水调节pH至9.5 ;其调节速度与冷却降温速度一致；连续慢速恒流导入反溶剂去离子水，加量为16L，时间控制在135min ;搅拌转速控制在22r/min ;降温速度为11°C /h。冷却结晶的最终温度控制在1°C ;冷却结晶结束，养晶陈化时间控制在230min。
[0038]结晶结束后，用纯化水淋洗特拉万星固体，淋洗时间控制在6min。淋洗结束后进行干燥，温度控制在50?60°C。干燥结束，水分含量为5%，得到纯品特拉万星8.2kg，收率为82%，含量为 99.1%。
[0039]实施例3
特拉万星粗品1kg用25%的盐酸溶液溶解，pH至5.5，特拉万星浓度控制在65%，然后过滤，得到特拉万星溶液15.4L。加入有机溶媒54L，温度降至10°C，再用20%的氨水调节PH9.5。搅拌25min，静置80min。静置结束，进行液液分离。萃取2次，得到特拉万星有机溶媒溶液107.7L，萃取总收率达到96.2%。
[0040]特拉万星萃取液加入去离子水484L，温度控制在12°C，启动搅拌系统，搅拌过程中缓慢匀速加入25%盐酸溶液，调节pH至5后继续搅拌25min，静置80min。静置结束，进行液液分离。反萃取2次，特拉万星溶液体积为967L，反萃