1-{3-[(3-乙酰基-2,4-二羟基-苯基)-(2,4-二羟基-苯基)-甲基]-2,6-二羟基-苯基}-乙 ...的制作方法
【技术领域】
[0001] 本发明涉及1-{3-[(3-乙酰基_2,4_二羟基-苯基）-(2,4_二羟基-苯基）-甲 基]-2,6-二羟基-苯基}-乙酮的合成方法及其用途，属于食品、化妆品和医药领域。
【背景技术】
[0002] 褐变和病原体感染导致的腐败是引起果蔬采后损失的两个重要因素。在果蔬加工 和贮藏过程中，由酪氨酸酶（EC 1. 14. 18. 1)引起的酶促褐变不仅影响产品的色泽、外观， 而且会破坏必需产品的氨基酸、降低其营养和消化吸收，并最终严重影响产品的营养价值 和市场价值。许多果蔬由于受到真菌疾病、机械损伤以及老化等因素影响而导致保质期很 短。通常情况下，天然菌群常常存在于果蔬产品中，也可能会存在于人类食用过程中，它们 一般对人类没什么毒性；但是，在生产、收割、运输、以及进一步加工处理过程中，都可能导 致果蔬产品受到微生物污染。机械损伤和破坏更会加重褐变和微生物的污染。使用酪氨酸 酶抑制剂和杀菌剂可以控制果蔬米后褐变和病害。
[0003] 天然的查尔酮广泛存在于水果、蔬菜、香料、茶、大豆食品和一些中草药中。目前查 尔酮合成的主要方法是芳香醛和苯乙酮在碱性条件下通过Clasein-Schmidt缩合反应。在 过去几十年中，来自世界各地的研宄人员开发了不少合成查尔酮的方法。然而，这些方法 有很多缺陷，如苛刻的反应条件、有毒试剂和金属催化剂、强酸强碱、油状产物、过长反应时 间、低产率、低选择性以及繁琐的后处理程序。另外，在大部分情况下，合成羟基查尔酮衍生 物需要保护和去保护羟基，不仅增加反应步数和时间，同时也增加使用有毒或有害试剂的 机会。目前虽然也有一些绿色合成方法，如使用氢氧化钙做催化剂，用乙二醇作为反应溶剂 等，但这些绿色合成方法同样存在着低产率、油状产物和繁琐后处理等问题。
[0004] 本发明提供一种新的具备酪氨酸酶抑制活性的化合物及其合成方法，采用无毒无 害原料、无毒的固体酸/碱催化剂和绿色溶剂，使用温和的条件，合成具有较高酪氨酸酶抑 制活性的一种羟基查尔酮类衍生物。
【发明内容】
[0005] 本发明的目的在于提供一种具酪氨酸酶抑制活性的化合物，通过2, 4-二羟基苯 甲醛和2,6_二羟基苯乙酮在硼酸和维生素 C的催化制备得到，命名为1-{3-[(3-&(：的71- 2, 4-dihydroxy-phenyl)-(2, 4-dihydroxy-phenyl)-methyl]-2, 6-dihydroxy-phenyl}-e th anone，其中文名为l-{3-[(3-乙酰基-2,4-二羟基-苯基）-(2,4-二羟基-苯基）-甲 基]-2,6-二羟基-苯基}-乙酮，其结构如式（1)所示：
[0006]
[0007] 本发明的另外一个目的是提供所述I-{3-[(3-乙酰基-2,4-二羟基-苯基）-(2， 4-二羟基-苯基）_甲基]-2,6-二羟基-苯基}_乙酮的绿色合成方法，通过以下步骤实 现：
[0008] (1)2,4_二羟基苯甲醛和2,6_二羟基苯乙酮在硼酸和维生素 C的催化下，以 PEG400或乙二醇或乙醇或甲醇等为溶剂，于100~130°C反应3~6小时；2,4-二羟基苯 甲醛与2,6-二羟基苯乙酮的摩尔比为2 :1 ;
[0009] (2)反应液用乙酸乙酯、二氯甲烷、乙醚或三氯甲烷等萃取3-5次，有机相浓缩得 干燥样品；
[0010] ⑶干燥样品上硅胶柱，洗脱剂是以体积比10 :1混合的二氯甲烷：甲醇；
[0011] (4)步骤（3)收集的含目的物的洗脱液样品浓缩得干燥样品，再经Sephadex LH-20凝胶柱层析分离得到目的物。
[0012] 本发明的一种实施方式，主要包括以下步骤：
[0013] (1)2,4-二羟基苯甲醛和2-羟基苯乙酮在硼酸和维生素 C的催化下，以PEG400为 溶剂130°C反应6小时；2,4-二羟基苯甲醛与2,6-二羟基苯乙酮的摩尔比为2 :1 ;
[0014] (2)反应液用乙酸乙酯萃取3次，有机相减压浓缩至干燥，得干燥样品；
[0015] (3)干燥样品上硅胶柱，洗脱剂是以体积比10 :1混合的二氯甲烷：甲醇；
[0016] (4)步骤（3)收集的含目的物的洗脱液样品经浓缩干燥得干燥样品，经S^hadex LH-20凝胶柱层析，洗脱剂是以体积比7 :3混合的甲醇-水，收集洗脱液，薄层板检测，相同 流分合并得到产物。
[0017] 本发明的一种实施方式，步骤（3)所述硅胶柱是颗粒度为200-300目的硅胶。
[0018] 本发明所提供的1-{3-[(3-乙酰基_2,4_二羟基-苯基）-(2,4_二羟基-苯 基）_甲基]-2,6-二羟基-苯基}-乙酮可应用于制备抗果蔬酶促褐变抑制剂、化妆品美白 剂、预防和治疗黑色素异常导致的人体色素沉着性疾病、黑色素瘤以及其他需要抑制酪氨 酸酶活性的病症的药物中，可以作为活性成分，不加或加入食品添加剂辅料、化妆品辅料或 药剂上接受的辅料，按照相应剂型的制备方法制成制剂。
[0019] 所述的剂型包括固体粉末、水溶液、醇溶液、乳液、面膜、巴布剂、注射液、滴注液、 粉针剂、颗粒剂、片剂、冲剂、散剂、口服液、糖衣剂、薄膜衣片剂、肠溶衣片剂、胶囊剂、硬胶 囊剂、软胶囊剂、口含剂、颗粒剂、丸剂、膏剂、丹剂、喷雾剂、滴丸剂、崩解剂、口崩剂、微丸 等。
[0020] 本发明的有益之处在于：提供一种具有酪氨酸酶抑制活性的化合物，它具有比阳 性对照物曲酸、2,6_二羟基苯乙酮和2,4_二羟基苯甲醛更强的活性，制成相应制剂易于质 量控制，可应用在抗果蔬酶促褐变抑制剂、化妆品美白剂、预防和治疗黑色素异常导致的人 体色素沉着性疾病、黑色素瘤以及其他需要抑制酪氨酸酶活性的病症的药物中。
【附图说明】
[0021] 图1为化合物1- {3- [ (3-乙酰基-2，4-二羟基-苯基）-(2，4-二羟基-苯基）-甲 基]-2,6-二羟基-苯基}-乙酮的1H NMR谱
[0022] 图2为化合物1- {3- [ (3-乙酰基-2,4-二羟基-苯基）-(2,4-二羟基-苯基）-甲 基]-2,6-二羟基-苯基}-乙酮的13C NMR谱
[0023] 图3为化合物1- {3- [ (3-乙酰基-2,4-二羟基-苯基）-(2,4-二羟基-苯基）-甲 基]-2,6-二羟基-苯基}-乙酮的HSQC谱
[0024] 图4为化合物1- {3- [ (3-乙酰基-2,4-二羟基-苯基）-(2,4-二羟基-苯基）-甲 基]-2,6-二羟基-苯基}-乙酮的HMBC谱
[0025] 图5为化合物1- {3- [ (3-乙酰基-2,4-二羟基-苯基）-(2,4-二羟基-苯基）-甲 基]-2,6-二羟基-苯基}-乙酮的ESI-MS谱
【具体实施方式】
[0026] 实施例1 1-{3-[(3_乙酰基_2,4_二羟基-苯基）-(2,4_二羟基-苯基）_甲 基]-2,6-二羟基-苯基}-乙酮的制备
[0027] 称取0· 06mol 2,4-二羟基苯甲醛、0· 03mol 2,6-二羟基苯乙酮、2. Og硼酸、0· 5g 抗坏血酸于50mL圆底烧瓶中，加入25mL的PEG400搅拌溶解，置于130°C油浴中搅拌回流 6h，TLC跟踪反应进程。反应液用乙酸乙酯萃取三次，有机相减压浓缩至干燥；干燥后的样 品上硅胶柱（颗粒度：200~300目），采用二氯甲烷：甲醇=10 :l(v/v)洗脱，收集洗脱液， 薄层板检测，相同流分合并，浓缩干燥，得干燥样品；通过液质联用技术，确定分子量为424 的流分为含有目标物的流分；以上流分干燥样品甲醇溶解后再用凝胶柱层析（Sephadex LH-20)进行分离，甲醇-水（v/v，7 :3)洗脱；收集洗脱液，薄层板检测，相同流分合并，即得 I-{3- [ (3-acetyl-2, 4-dihydroxy-phenyl)-(2, 4-dihydroxy-phenyl)-methyl]-2, 6-dihy droxy-phenyl}_ethanone 纯品。
[0028] 反应通式为：
[0029]
[0030] I- {3-[ (3-乙酰基-2,4-二羟基-苯基）-(2,4-二羟基-苯基）-甲基]-2,6-二 羟基-苯基}-乙酮的核磁共振光谱数据如下：
[0031] 1H MMR(Acetone-d6,40