0MHz) δ :13. 33(2H，s，0H-2, 2'），9. 53(2H，s，0H-4,4'）， 7. 94(1H，s，0H-2"），7· 92(1H，s，0H-4"），6· 82(2H，d，J = 8· 4Hz，H-6,6'），6· 54(1H，d，J = 8. 4Hz，H-6"），6. 39(1H，d，J = 2. 0Hz，H-3"），6. 34(2H，d，J = 8. 4Hz，H-5,5'），6. 22(1H， dd，J = 8·0,2·4Ηζ，H-5'，），6.21(1H，s，H-7)，2.69(6H，s，H-9,9'）；13C NMR(Acetone-d6， 100MHz) δ :206. 4(C = 0, C-8,8'），162. 7(C，C-2,2'），159. 5(C，C-4,4'），157. 7(C，C-2"）， 156. 7(C，C-4"），137. 0(CH，C-6,6'），130. 8(C，C-6"），124. 3(C，C-l，Γ )，121. 9(C，C-l"）， 110. 8 (C，C-3, 3,），106. 9 (CH，C-5"），106. 0 (CH，C-5, 5,），103. 7 (CH，C-3"），36. I (CH，C-7)， 33. 6(CH3, C-9,9'）。
[0032] ESI-MS :m/z 423. I [M-HF(C23H19O8)。结合二维谱 HSQC 和 HMBC 解析表明该化合物 为1- {3-[ (3-乙酰基-2,4-二羟基-苯基）-(2,4-二羟基-苯基）-甲基]-2,6-二羟基-苯 基}-乙酮。
[0033] 高效液相色谱-质谱联用检测条件：
[0034] (1)仪器：Waters UPLC-质谱仪。
[0035] (2)色谱柱：Acquity BEH C18 (50 X 2. lmm, 1. 7 μ m) 〇
[0036] (3)流动相：A相：含0.2%甲酸的去离子水；B相：乙腈。线性洗脱梯度：0min，10% B ;0· lmin，10% B ;18min，70% B ;20min，100% B ;20. lmin，10% B。流速：0· 3mL/min。
[0037] (4)进样量：1 μ L。
[0038] (5)质谱条件：负离子模式；喷涂电压：2.8V;离子源温度：120°C ;脱溶剂温度： 350。。。
[0039] 实施例2酪氨酸酶抑制活性评价方法
[0040] 将1-{3-[(3_乙酰基_2,4_二羟基-苯基）-(2,4_二羟基-苯基）-甲基]-2， 6-二羟基-苯基}-乙酮用01^0溶解分别配成50、10、5、2.5、0.5 48/111匕阳性对照曲酸配 成50、25、10、5、2.5 μ g/mL浓度的溶液。取五种浓度的溶液各300 μ L，用700 yL pH6. 8的 磷酸盐缓冲溶液配成lmL，加进0. lmg/mL的酪氨酸lmL，然后加入由pH值6. 8的磷酸盐缓 冲溶液配成的ImL酪氨酸酶（400U/mL)，在37°C下孵育20min，于492nm处测定吸光值，计算 化合物抑制酪氨酸酶活性的能力。
[0041] 酶活性抑制率=[(A2-A1)-(B2-B1)V(A 2-A1) X 100%
[0042] A1S Omin时候未加抑制剂的吸收值；A 2为20min后未加抑制剂的吸收值；
[0043] B1S Omin时候加抑制剂的吸收值；B 2为20min后加了抑制剂的吸收值。
[0044] 实施例3化合物酪氨酸酶抑制活性评价
[0045] 1- {3-[ (3-乙酰基-2,4-二羟基-苯基）-(2,4-二羟基-苯基）-甲基]-2,6-二 羟基-苯基}-乙酮抑制酪氨酸酶的IC5tl为5. 60 μ M，曲酸的IC 5(|为50. 6 μ M，2,4-二羟基 苯甲醛的IC5Q>200 yM，2,6-二羟基苯乙酮的IC5Q>300 yM。化合物1-{3-[(3-乙酰基-2， 4-二羟基-苯基）-(2,4-二羟基-苯基）-甲基]-2,6-二羟基-苯基}-乙酮的酪氨酸酶 抑制活性远远大于阳性对照物曲酸，以及反应原料2,6_二羟基苯乙酮和2,4_二羟基苯甲 醛。
[0046] 虽然本发明已以较佳实施例公开如上，但其并非用以限定本发明，任何熟悉此技 术的人，在不脱离本发明的精神和范围内，都可做各种的改动与修饰，因此本发明的保护范 围应该以权利要求书所界定的为准。
【主权项】
1. 一种化合物，其特征在于，是1-{3-[(3-乙酰基-2,4-二羟基-苯基）-(2,4-二羟 基-苯基）-甲基]-2,6-二羟基-苯基}-乙酮，其结构式为：2. -种制备权利要求1所述化合物的方法，其特征在于，主要包括以下步骤： (1) 2,4-二羟基苯甲醛和2,6-二羟基苯乙酮在硼酸和维生素C的催化下，以PEG400或 乙二醇或乙醇或甲醇等为溶剂，于100~130°C反应3~6小时；2,4-二羟基苯甲醛与2， 6-二羟基苯乙酮的摩尔比为2:1 ; (2) 反应液用乙酸乙酯、二氯甲烷、乙醚或三氯甲烷等萃取3次，有机相浓缩得干燥样 品； (3) 干燥样品上硅胶柱，洗脱剂是以体积比10 :1混合的二氯甲烷：甲醇； (4) 步骤（3)收集的含目的物的洗脱液样品浓缩得到干燥样品，再经SephadexLH-20 凝胶柱层析分离得到所述化合物。3. 根据权利要求2所述的方法，其特征在于，步骤⑷洗脱剂为以体积比7 :1混合的 甲醇-水。4. 根据权利要求2所述的方法，其特征在于，主要包括以下步骤： (1) 2,4-二羟基苯甲醛和2,6-二羟基苯乙酮在硼酸和维生素C的催化下，以PEG400为 溶剂130°C反应6小时；2,4-二羟基苯甲醛与2,6-二羟基苯乙酮的摩尔比为2 :1 ; (2) 反应液用乙酸乙酯萃取3次，有机相减压浓缩至干燥，得干燥样品； (3) 干燥样品上硅胶柱，洗脱剂是以体积比10 :1混合的二氯甲烷：甲醇； (4) 步骤（3)收集的含目的物的洗脱液样品经浓缩干燥得干燥样品，经Sephadex LH-20凝胶柱层析，洗脱剂是以体积比7 :1混合的甲醇-水，收集洗脱液，薄层板检测，相同 流分合并得到产物。5. 根据权利要求2-4任一所述的方法，其特征在于，步骤（3)所述硅胶柱是装填了颗粒 度为200~300目的硅胶的柱子。6. 权利要求1所述化合物的应用方法。7. 权利要求1所述化合物在果蔬的抗酶促褐变、制备化妆品，及制备用于预防和治疗 黑色素过多导致的需要抑制酪氨酸酶活性的病症的药物中的应用方法。8. 根据权利要求7所述的方法，其特征在于，不加抗酶促褐变辅料、化妆品配方、药物 制剂辅料。9. 根据权利要求7所述的方法，其特征在于，加入抗酶促褐变辅料、化妆品配方、药物 制剂辅料中的一种或多种。10. 根据权利要求8或9所述的方法，其特征在于，所述的制剂的剂型包括固体粉末、水 溶液、醇溶液、乳液、面膜、巴布剂、注射液、滴注液、粉针剂、颗粒剂、片剂、冲剂、散剂、口服 液、糖衣剂、薄膜衣片剂、肠溶衣片剂、胶囊剂、硬胶囊剂、软胶囊剂、口含剂、颗粒剂、丸剂、 膏剂、丹剂、喷雾剂、滴丸剂、崩解剂、口崩剂、微丸。
【专利摘要】本发明公开了1-{3-[(3-乙酰基-2，4-二羟基-苯基)-(2，4-二羟基-苯基)-甲基]-2，6-二羟基-苯基}-乙酮合成方法及其用途，属于食品、化妆品和医药领域。本发明通过2，4-二羟基苯甲醛和2，6-二羟基苯乙酮在硼酸和维生素C的催化下于PEG400为溶剂反应6小时，绿色合成一种高效的酪氨酸酶抑制剂，再经过硅胶柱层析和凝胶柱层析分离，得到该高效酪氨酸酶抑制剂的纯品。经质谱和核磁解析，确定该物质为1-{3-[(3-乙酰基-2，4-二羟基-苯基)-(2，4-二羟基-苯基)-甲基]-2，6-二羟基-苯基}-乙酮。本发明提供的化合物能够有效用于果蔬的酶促褐变的抑制、美白化妆品以及制备用于预防和治疗黑色素过多导致的人体色素沉着性疾病、黑色素瘤以及其他需要抑制酪氨酸酶活性的药物制剂。
【IPC分类】A23B7/154, A61P35/00, A61P43/00, A61P17/00, A61K31/12, C07C45/72, C07C49/83, A61Q19/02, A61K8/35, C07C45/78
【公开号】CN104987286
【申请号】CN201510338762
【发明人】郑宗平, 陈洁, 顾小红
【申请人】江南大学
【公开日】2015年10月21日
【申请日】2015年6月17日