5] 1)包被；将能够捕获纤维蛋白原的物质，如抗纤维蛋白原抗体包被于固相载体 上；用稀释缓冲液稀释抗纤维蛋白原抗体至1000-8000倍，加入化ISA板微孔中，4°C过夜 16-18小时，或37°C水浴1-3小时，储存冰箱；
[0106] 2)封闭；移去稀释缓冲液，并用洗漆缓冲液进行洗漆，待洗漆完成后，加入封闭 液，37°C放置1小时，移去封闭液，并用相应洗漆缓冲液进行洗漆，洗漆完成后，ELISA板于 37 °C放置1小时；
[0107]扣加待测样本，并且温育；从循环系统中取样，作待测样本；W已知含量的铅-纤 维蛋白原馨合物作标准品；用稀释缓冲液稀释至20-80倍，加至微孔中，37°C作用1-2小 时；
[0108] 4)洗脱；移去待测样本，洗漆，加入洗脱液，在37°C下洗脱1-3小时；
[0109] 5)检测；从ELISA微孔中取样，于原子吸收光谱仪检测馨合于纤维蛋白原上的铅， 读出相应数值；
[0110] 该实施例利用ELISA原理对纤维蛋白原进行捕获，并结合原子吸收光谱（AA巧仪 检测馨合于纤维蛋白原上的铅；由于溶液中仅含有纤维蛋白原，且所用试剂中不含任何重 金属（阴性对照组结果为阴性），不会对结果造成干扰，因而当所读取的结果显示为阳性 时，即可证明检测出纤维蛋白原上馨合的金属铅。
[0111] 立法三^酶联免疫与电感禪合等离子体质谱结合法巧LISA法+ICP-MS法）检测 铅-纤维蛋白原馨合物按照如下步骤检测：
[0112] 1)包被；将能够捕获纤维蛋白原的物质，如抗纤维蛋白原抗体包被于固相载体 上，用稀释缓冲液稀释抗纤维蛋白原抗体至1000-8000倍，加入化ISA板微孔中，4°C过夜 16-18小时，或37°C水浴1-3小时，储存冰箱；
[0113] 2)封闭；移去稀释缓冲液，并用洗漆缓冲液进行洗漆，待洗漆完成后，加入封闭 液，37°C放置1小时，移去封闭液，并用相应洗漆缓冲液进行洗漆，洗漆完成后，ELISA板于 37 °C放置1小时；
[0114]扣加待测样本，并且温育；从循环系统取样，作待测样本；W已知含量的铅-纤维 蛋白原馨合物作标准品；用稀释缓冲液稀释至20-80倍，加至微孔中，37°C作用1-2小时；
[0115] 4)洗脱；移去待测样本，并用相应洗漆缓冲液进行洗漆，待洗漆完成后，加入洗脱 液，在37°C下洗脱1-3小时；
[0116] 5)酸化；在步骤4)中的溶液中加入酸化剂对溶液进行酸化，封口过夜，彻底酸 化；
[0117] 6)检测；加入过氧化氨，并且加热赶酸，并从化ISA试剂板中洗脱的溶液中取 0.5mL液体，于电感禪合等离子体质谱仪下检测馨合于纤维蛋白原的铅，读出相应数值。
[011引该方法在利用ELISA原理的基础上，结合感禪合等离子体质谱（ICP-M巧原理，用 电感禪合等离子体质谱仪检测馨合于纤维蛋白原上的铅；即先采用化ISA原理将铅-纤维 蛋白原馨合物提取出来，再采用感禪合等离子体质谱仪对馨合于纤维蛋白原上的铅进行定 量检测；由于溶液中仅含有纤维蛋白原，且所用试剂中不含任何重金属（阴性对照组结果 为阴性），不会对结果造成干扰，因而当所读取的结果显示为阳性时，即可证明检测出纤维 蛋白原上馨合的金属铅。
[0119]方法四：提纯铅-纤维蛋白原莖合物与酶联免疫结合法(提纯法+ELISA法）检测 铅-纤维蛋白原馨合物，按照如下步骤检测：
[0120] 1)从全血中提取非特异性纤维蛋白原；采用超速离屯、法、高压液相层析法、凝胶 过滤层析法、凝胶电泳法等方法，从全血中提取纤维蛋白原，并将提取出的纤维蛋白原复 溶，得纤维蛋白原的溶液；
[0121] 2)包被；将抗铅抗体包被于固相载体上，用稀释缓冲液稀释抗铅抗体至 50000-400000倍，加入化ISA板微孔中，4°C过夜16-18小时，或37°C水浴1-3小时，储存冰 箱；
[0122] 3)封闭；移去稀释缓冲液，并用洗漆缓冲液进行洗漆，待洗漆完成后，加入封闭 液，37°C放置1小时，移去封闭液，并用相应洗漆缓冲液进行洗漆，洗漆完成后，ELISA板于 37 °C放置1小时；
[012引 4)加待测样本，并且温育；从步骤1)的溶液中取样，作待测样本；W已知含量的 铅-纤维蛋白原馨合物作标准品；用稀释缓冲液稀释至20-80倍，加至微孔中，37°C作用 1-2小时；
[0124] 5)酶结合物温育；移去待测样本，并用洗漆缓冲液进行洗漆，待洗漆完成后，加入 用稀释缓冲液稀释的酶标抗体，37°C作用1-2小时，使其与酶标抗体反应；
[0125] 6)底物温育；移去酶标抗体，并用相应洗漆缓冲液进行洗漆，待洗漆完成后，加入 底物，37°C避光作用30分钟；
[0126] 7)终止反应；加入终止液至每一微孔；
[0127] 8)取波长450nm，加完终止液后，在酶标仪上分别读取待测样本和标准品的0D值， 绘制标准曲线，求得待测样本的含量。
[012引本方法中，也可不使用酶标仪，直接通过显色情况进行定性检测。
[0129]方法五；提纯铅-纤维蛋白原馨合物与原子吸收光谱结合法（提纯法+AAS法）检 测血样中铅-纤维蛋白原馨合物，按照如下步骤检测：
[0130] 1)从全血中提取非特异性纤维蛋白原；采用超速离屯、法、高压液相层析法、凝胶 过滤层析法、凝胶电泳法等方法，从全血中提取纤维蛋白原，并将提取出的纤维蛋白原复 溶，得到纤维蛋白原溶液；
[0131] 2)检测；从步骤1)的溶液中取样，于原子吸收光谱仪检测馨合于纤维蛋白原上的 铅，读出相应数值。
[0132]方法六：提纯铅-纤维蛋白原莖合物与电感禪合等离子体质谱结合法（提纯法 +ICP-MS法）检测铅-纤维蛋白原馨合物，按照如下步骤检测：
[0133] 1)从全血中提取非特异性纤维蛋白原；采用超速离屯、法、高压液相层析法、凝胶 过滤层析法、凝胶电泳法等方法，从全血中提取纤维蛋白原，并将提取出的纤维蛋白原复 溶，得纤维蛋白原的溶液；
[0134] 2)酸化；从步骤1)的溶液中取样，在溶液中加入硝酸对溶液进行酸化，封口过夜， 彻底酸化；
[013引如检测；加入过氧化氨，并且加热赶酸后取0. 5血溶液，于电感禪合等离子体质谱 仪下检测馨合于纤维蛋白原上的铅，读出相应数值。
[0136] 方法四、方法五和方法六均是通过全血提取法分离出纤维蛋白原，再采用特异性 检测方法，测定纤维蛋白原中铅-纤维蛋白原馨合物上铅的含量；即先采用物理分离手段， 如超速离屯、法、高压液相层析法、凝胶过滤层析法等，将纤维蛋白原从待测血浆样本中分离 出来并复溶于生理盐水中，再利用ELISA原理、原子吸收光谱检测或进行检测电感禪合等 离子体质谱法检测铅-纤维蛋白原馨合物上的铅含量。
[0137] 方法^;：;电泳法+ELISA/AAS^CP-MS法检测铅-纤维蛋白原馨合物，具体如下；
[0138] 1)从全血中提取非特异性纤维蛋白原；采用超速离屯、法、高压液相层析法、凝胶 过滤层析法、凝胶电泳法等方法，从全血中提取纤维蛋白原，将提取出来的纤维蛋白原复溶 于生理盐水中，得纤维蛋白原的溶液；
[0139] 2)制备胶床；根据需要选择合适的介质（如琼脂糖凝胶、聚丙締酷胺凝胶等），按 照相应要求制备好相应胶床；
[0140]扣加样；从步骤1)的溶液中取8化溶液，W已知含量的铅-纤维蛋白原馨合物 作标准品，加入2UL上样缓冲液，并混匀，然后加样于样品槽中；
[0141] 4)电泳；连接电泳板，加电泳缓冲液，进行电泳，并根据需求将蛋白按照分子量、 等电点等参数的不同进行分离；
[0142] 5)检测；在胶床上找出含有铅的蛋白条带，将该条带取出，将该蛋白条带溶解，然 后再分别利用化ISA或ICP-MS或AAS等原理检测的铅含量。
[0143] 此外，还可W利用此方法检测铅-纤维蛋白原馨合物的等电点、分子量及含量等。
[0144] 在方法走中，将纤维蛋白原从全血中提取出来，再采用凝胶电泳法对所提取的纤 维蛋白原进行分离，再找出富含铅的相应条带，再检测相关纤维蛋白原的含量；即纤维蛋白 原可W用多种方法提纯出来（例如超速离屯、法、高压液相层析法、凝胶过滤层析法、凝胶电 泳法，ELISA方法等），将提纯出来的纤维蛋白原复溶于溶液中，取一定量的纤维蛋白原，利 用电荷移动原理，进行电泳（electro地oresis，E巧，在凝胶板（可根据需要采用不同介质） 上可根据分子量、等电点等不同跑出不同的条带，寻找出富含铅的相应条带，将凝胶中的蛋 白质复溶于溶液中，即可W在特定波长下检测相关纤维蛋白原的含量，也可W利用ELISA、 AAS、ICP-MS等原理检测出馨合于纤维蛋白原上的铅含量，由于溶液中仅含有纤维蛋白原， 且所用试剂中不含任何重金属（阴性对照组结果为阴性），不会对结果造成干扰，因而当所 读取的结果显示为阳性时，即可证明检测出纤维蛋白原上馨合的金属铅。
[0145]连施例1;合成法合成铅-纤维軍白原馨合物，巧巧W下巧骤:
[0146] 本实施例所制备的铅-纤维蛋白原塞合物，通过凝胶电泳进一步分离，并通过电 感禪合等离子体质谱或原子吸收光谱进行检测定性鉴定。
[0147] 本实施例使用的试剂的配制方法示例如下：
[014引1)棚酸盐缓冲液，其摩尔浓度为0.01M，其制备方法示例如下：称取0.31g棚酸溶 于400血d地20中，用0.Imol/L的化0H调节抑至9. 0,定容至500血。
[0149] 2化DTA-NaHC〇3溶液，其制备方法如下；取 1. 86g邸TA? 2H2〇 和 16. 8gNaHC〇3,溶 于900血d地2〇中，用1. 0M化OH调整抑至8. 0定容至1000血，高压灭菌，室温保存；
[0150] 3HTCBE购买自日本同仁化学研究所，货号M030;
[015。 4)纤维蛋白原溶液；称取4.Omg纤维蛋白原溶于4. 0血0. 01MpH9. 0棚酸盐缓冲 液中，充分振荡溶解，配制成1.Omg/mL的纤维蛋白原溶液；
[0152] 5)透析袋的截留分子量14000,购买自Biosho